CN107904275A - 一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水产品加工技术领域，具体涉及一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法。包括下述步骤：（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入2‑3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8‑9，超声波处理20‑40min，作用温度50‑55℃，功率为200‑350W；（3）采用复合蛋白酶进行酶解；（4）超滤分离，（5）Sephadex G‑25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；（6）反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。该方法提高了酶解程度，从而提高了蛋白质的提取率和水解率，进而提高了蛋白小肽的产量。
Description
技术领域
本发明涉及水产品加工技术领域，具体涉及一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法。
背景技术
鱿鱼，也称柔鱼、枪乌贼，是软体动物门头足纲鞘亚纲十腕总目管鱿目开眼亚目的动物。体圆锥形，体色苍白，有淡褐色斑，头大，前方生有触足10条，尾端的肉鳍呈三角形，常成群游弋于深约20米的海洋中。目前市场看到的鱿鱼有两种：一种是躯干部较肥大的鱿鱼，它的名称叫“枪乌贼”；一种是躯干部细长的鱿鱼，它的名称叫“柔鱼”，小的柔鱼俗名叫“小管仔”。鱿鱼是可以食用的，我们经常见到铁板鱿鱼，而且味道鲜美，是一种非常可口的美味。
鱿鱼和墨鱼、章鱼等软体腕足类海产品在营养功用方面基本相同，都是富含蛋白质、钙、磷、铁、钾等，并含有十分丰富的诸如硒、碘、锰、铜等微量元素的食物。
小肽又叫纳米胶原蛋白（Nano Oligopeptide Collagen，简写OCO，即纳米活性寡肽胶原，或简称纳米胶原），也称寡肽、微肽、短肽。小肽一般是指由2－3个氨基酸组成的寡肽，平均分子量约300道尔顿。蛋白质（胶原蛋白）在消化道中的消化终产物往往大部分是小肽而非游离氨基酸，小肽能完整地被吸收并以二、三肽形式进入血液循环，小肽在蛋白质营养中有着重要的作用。
目前通常采用的是酶解的方法制备，在该制备过程中，蛋白质的提取率较低，只有30%不到，水解率较低，这严重影响了蛋白小肽的产量。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述问题，提供一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法。
为了达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，包括下述步骤：
（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；
（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入2-3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8-9，超声波处理20-40min，作用温度50-55℃，功率为200-350W；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解；
（4）超滤分离，将酶灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。
优选的，所述步骤（3）具体为：在步骤（2）的中产产物中加入复合蛋白酶，每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1000-1500U，在58-63℃下反应2.5-3小时。
优选的，所述步骤（4）中将酶解液在110℃下灭活。
优选的，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶。
优选的，所述步骤（2）中超声处理时，将所述鱿鱼水的混合物处于高压状态，压强为0.15-0.2MPa，持续10-20min。
本发明与现有技术相比，有益效果是：提高了酶解程度，从而提高了蛋白质的提取率和水解率，进而提高了蛋白小肽的产量。
附图说明
图1是鱿鱼酶解液的蛋白质提取率对比图；
图2是各实施例和对比例中各单一蛋白酶的水解度对比图；
图3是各酶解液对对DPPH自由基的半抑制浓度（IC50）对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步描述说明。
如果无特殊说明，本发明的实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
实施例1：
一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，包括下述步骤：
（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；
（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入2L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8，超声波处理20min，作用温度50-55℃，功率为200W；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解；复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，二者比例为1:2；每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1000U，在58-63℃下反应2.5-3小时；
（4）超滤分离，将酶灭活，酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。
实施例2：
一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，包括下述步骤：
（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；
（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为9，超声波处理min，作用温度50-55℃，功率为350W；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解；复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，二者比例为1:2；每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1500U，在58-63℃下反应2.5-3小时；
（4）超滤分离，将酶灭活，酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。
实施例3：
一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，包括下述步骤：
（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；
（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为9，超声波处理20min，作用温度50-55℃，功率为200W；所述鱿鱼水的混合物处于高压状态，压强为0.15MPa，持续10-20min；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解；复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，二者比例为1:2；每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1500U，在58-63℃下反应2.5-3小时；
（4）超滤分离，将酶灭活，酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。
实施例4：
一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，包括下述步骤：
（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；
（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入2L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为9，超声波处理40min，作用温度50-55℃，功率为200-350W；所述鱿鱼水的混合物处于高压状态，压强为0.2MPa，持续10-20min；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解；复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，二者比例为1:2；每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1000U，在58-63℃下反应2.5-3小时；
（4）超滤分离，将酶灭活，酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。
对比例1-6：
一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，包括下述步骤：
（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；
（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入2-3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，超声波处理20-40min，作用温度50℃，功率为250W；
（3）采用单一蛋白酶进行酶解；每克鱿鱼肉的蛋白酶加入量为1000-1500U，在58-63℃下反应2.5-3小时；
（4）超滤分离，将酶灭活，酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。
将上述各实施例和对比1中的产物进行对比，其中对比例中分别采用了中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中的单一一种进行处理。
如图1所示，图1是鱿鱼酶解液的蛋白质提取率对比图；
如图2所示，图2是各实施例和对比例中各单一蛋白酶的水解度对比图；
如图3所示，图3是各酶解液对对DPPH自由基的半抑制浓度（IC50）对比图；单位是mg/ml。
由图1所示，实施例1-4中的方法所得到的蛋白质提取率明显高于对比例中各单一蛋白酶的蛋白质提取率；同时，实施例3-4中的提取率又比实施例1-2的蛋白质提取率高；
如图2所示，实施例1-4实施例1-4中的方法所得到的水解度明显高于对比例中各单一蛋白酶的水解度；同时，实施例3-4中的水解度又比实施例1-2的蛋白质提取率高；
如图3所示，采用实施例1-4的方法制备的酶解液的DPPH自由基半抑制浓度比对比例中的大部分要低，即，说明本发明的各实施例的酶解液对DPPH自由基的清除能力要比对比例大部分要好。
Claims (5)
1.一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，其特征在于，包括下述步骤：
（1）将新鲜鱿鱼宰杀洗净，然后绞碎；
（2）在绞碎的鱿鱼中加入纯净水，每千克鱿鱼肉加入2-3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8-9，超声波处理20-40min，作用温度50-55℃，功率为200-350W；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解；
（4）超滤分离，将酶灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到北太鱿鱼蛋白小肽。
2.根据权利要求1所述的一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，其特征在于，所述步骤（3）具体为：在步骤（2）的中产产物中加入复合蛋白酶，每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1000-1500U，在58-63℃下反应2.5-3小时。
3.根据权利要求1所述的一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，其特征在于，所述步骤（4）中将酶解液在110℃下灭活。
4.根据权利要求1所述的一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，其特征在于，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶。
5.根据权利要求1所述的一种利用北太鱿鱼生产蛋白小肽的方法，其特征在于，所述步骤（2）中超声处理时，将所述鱿鱼水的混合物处于高压状态，压强为0.15-0.2MPa，持续10-20min。
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