CN1584044A - 鹿角多肽或龟板多肽的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鹿角多肽或龟板多肽的制备方法，主要解决鹿角胶或龟板胶这类胶原蛋白存在消化吸收难和加工性能差的缺陷。该方法是先用水将鹿角胶或龟板胶溶解，煮沸，冷却后置于45～58℃的恒温中调节其pH值至7.5～8；然后加入胰酶进行第一次酶解，所得酶解液灭胰酶活性，重新置于45～58℃的恒温中；再加入中性蛋白酶进行第二次酶解，所得第二次酶解液灭中性蛋白酶活性；接着将其过滤、浓缩、真空干燥，最后研磨成为鹿角多肽粉末或龟板多肽粉末。该方法利用定向酶切技术，成功地将鹿角胶或龟板胶加工成了容易消化吸收的小分子量鹿角多肽或龟板多肽，大幅提高了其药用价值。酶解所得产物可广泛应用于食品、饮料或酒水中。

Description

鹿角多肽或龟板多肽的制备方法

                      技术领域

本发明涉及鹿角或龟板的深加工技术，具体的指是一种利用酶解技术将鹿角胶或龟板胶制备成鹿角多肽或龟板多肽的方法。

                      背景技术

目前，人们对于鹿角或龟板这类具有药用价值的动物角、骨、壳的利用，不外乎局限于以下三种方式：一是将其浸泡在酒中以制成滋补性质的药酒；二是将其与其他中药组份配伍在一起煎煮以治疗某些疾病；三是将其熬成鹿角胶或龟板胶入以药用或作为补品。前二种方式中鹿角或龟板所溶出的有效成份太低，浪费极大。后一种方式中鹿角胶或龟板胶的有效成份以胶原蛋白的形式存在，而这种胶原蛋白普遍存在着消化、吸收率低的缺陷，人体无法对其充分利用；同时，这种胶原蛋白的加工性能也较差，如市面上所销售的鹿龟酒常常会产生一些沉淀物，这就是鹿角胶或龟板胶在酒中的溶解度受温度影响所致，这些不利因素大大限制了鹿角胶或龟板胶这种优良资源的充分利用。

                      发明内容

本发明的目的就是要解决鹿角胶或龟板胶这类胶原蛋白存在的消化、吸收难和加工性能差的问题，提供一种利用酶解技术将鹿角胶或龟板胶制备成消化、吸收率高的鹿角多肽或龟板多肽的方法，更好地发挥其药用价值。

为实现上述目的，本发明所设计的鹿角多肽或龟板多肽的制备方法，依次包括如下步骤：

1)用水将鹿角胶或龟板胶溶解成质量百分比浓度为8～10％的鹿角胶或龟板胶水溶液；

2)将鹿角胶或龟板胶水溶液煮沸3～5分钟，使其充分溶解、变性，待其温度冷却至45～58℃时，调节其pH值至7.5～8；

3)按鹿角胶或龟板胶质量的5～6％加入胰酶进行酶解，酶解时间为6～8小时，得到第一次酶解液；

4)将第一次酶解液煮沸3～5分钟灭胰酶的活性，然后将其温度降低至45℃～58℃；

5)再按鹿角胶或龟板胶质量的5～6％加入中性蛋白酶进行酶解，酶解时间为3～4小时，得到第二次酶解液；

6)将第二次酶解液煮沸3～5分钟灭中性蛋白酶的活性；

7)将经过酶灭活处理的第二次酶解液过滤、浓缩、真空干燥，最后研磨成为鹿角多肽粉末或龟板多肽粉末。

上述步骤2)中优选质量百分比浓度为10～35％的氢氧化钙溶液来调节鹿角胶或龟板胶水溶液的pH值。一方面氢氧化钙溶液中的钙离子是胰酶的激活剂，有利于酶活性的充分发挥，可进一步促进鹿角胶或龟板胶的酶解；另一方面氢氧化钙溶液没有其他碱性溶液所具有的咸味，无须以后脱盐处理；同时氢氧化钙溶液呈弱碱性，对pH值的调节可操作性好，且成本十分低廉。

上述步骤3)和步骤5)中酶解的最适宜温度应该始终维持在45℃～58℃。一方面胰酶或中性蛋白酶在此温度下酶解活力较强，另一方面鹿角胶或龟板胶在此温度下溶解性能较好，易于将其酶解成小分子量的鹿角多肽或龟板多肽。

本发明的酶解机理为：鹿角胶或龟板胶水溶液经过煮沸后，鹿角胶或龟板胶中的胶原蛋白原来稳定的三级分子结构被破坏掉，变成性状不稳定的二级或一级分子结构，这样有利于胰酶或中性蛋白酶与之发生反应。胰酶是内肽酶，可以定点酶切精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸，而中性蛋白酶可以定点酶切一些疏水性氨基酸，这样在不同的时间段双重酶切，可以把鹿角胶或龟板胶等大分子量的胶原蛋白酶切成小分子量的多肽片段。

本发明的优点在于：选用两种不同性质的酶分阶段对鹿角胶或龟板胶中不同性质的大分子胶原蛋白进行定向酶切，可增加酶切位点和酶的利用效率，将鹿角胶或龟板胶充分酶切成为小分子量的鹿角多肽或龟板多肽。通过Sephadex G-25凝胶层析图的峰形和SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳图也可以清晰地印证，大分子量的鹿角胶或龟板胶胶原蛋白经过酶解作用后，得到了小分子量较集中的鹿角多肽或龟板多肽产物。这种多肽产物不仅保留了原有的生物活性物质，而且较蛋白质、氨基酸更易被人体消化吸收，更能发挥其药用价值。另外，鹿角多肽或龟板多肽产物具有很好溶解性，其加工性能与鹿角胶或龟板胶相比有了很大的改善，将其添加到功能酒中，不仅可以增强其滋补、营养、抗疲劳的功效，而且可以提高功能酒的理化指标，如使酒色美观、澄清等。并且，本发明的制备方法工艺及其生产设备简单，适合规模化生产，产品得率高。

                      附图说明

图1为鹿角胶的Sephadex G-25凝胶层析图；

图2为鹿角肽的Sephadex G-25凝胶层析图；

图3为龟板胶的Sephadex G-25凝胶层析图；

图4为龟板肽的Sephadex G-25凝胶层析图；

图5为鹿角肽、龟板肽、鹿角胶、龟板胶的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳图。图中：1.鹿角肽5μl  2.鹿角肽10μl  3.鹿角肽15μl  4.龟板肽10μl  5.龟板肽15μl  6.分子量标准  7.鹿角胶5μl  8.鹿角胶10μl  9.鹿角胶15μl  10.龟板胶5μl  11.龟板胶10μl  12.龟板胶15μl。

                    具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明所提供的鹿角多肽或龟板多肽的制备方法作进一步的详细描述：

从图1～4中鹿角胶、鹿角肽、龟板胶、龟板肽实验的Sephadex G-25凝胶层析图对比可以看出：经酶解所得的鹿角肽、龟板肽与原料鹿角胶、龟板胶相比，其峰的数量有所增加，并且从其出峰时间上可断定比原料的分子量小。故此可以说明经过酶解后，大分子量的鹿角胶或龟板胶变成了小分子量的鹿角多肽或龟板多肽。

从图5中鹿角肽、龟板肽、鹿角胶、龟板胶实验的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳图中的条带可见：鹿角肽分子量主要分布在1000以下，在6560～14200之间也有一定的分布；龟板肽分子量在20000、17000、10000、5000、3000、1000左右都有条带显示。而鹿角胶分子量主要在14200～30000之间，龟板胶分子量主要分布在20000以上。故此可以说明，经过酶解后大分子量的鹿角胶或龟板胶变成了小分子量的鹿角多肽或龟板多肽。

实施例1：用蒸馏水将鹿角胶溶解成质量百分比浓度为10％的鹿角胶水溶液，煮沸5分钟，待其温度冷却至45～58℃时，置于55℃的恒温水浴锅中；温度平衡后，先用质量百分比浓度为25％的氢氧化钙溶液调节其pH值至7.8；然后按鹿角胶质量的6％加入胰酶进行酶解，酶解温度维持在55℃，酶解时间为8小时，得到第一次酶解液，并将第一次酶解液煮沸5分钟灭胰酶的活性，待其温度降低至45℃～58℃时，重新置于55℃的恒温水浴锅中；再按鹿角胶质量的6％加入标号为A.S1398的中性蛋白酶进行酶解，酶解温度维持在55℃，酶解时间为3小时，得到第二次酶解液，并将第二次酶解液煮沸5分钟灭中性蛋白酶的活性；接着将经过酶灭活处理的第二次酶解液过滤、浓缩、75～80℃条件下真空干燥，最后将其研磨成为褐色的鹿角多肽粉末。该鹿角多肽粉末配以其它辅料，即可灌制成保健胶囊。也可以将该鹿角多肽粉末直接添加到牛奶、果汁等饮料中，或面包、火腿等食品中，制成鹿角多肽功能性食品。

实施例2：用蒸馏水将龟板胶溶解成质量百分比浓度为8％的龟板胶水溶液，煮沸3分钟，待其温度冷却至45～58℃时，置于55℃的恒温水浴锅中；温度平衡后，先用质量百分比浓度为30％的氢氧化钙溶液调节其pH值至8；然后按龟板胶质量的5％加入胰酶进行酶解，酶解温度维持在55℃，酶解时间为6小时，得到第一次酶解液，并将第一次酶解液煮沸3分钟灭胰酶的活性，待其温度降低至45℃～58℃时，重新置于55℃的恒温水浴锅中；再按龟板胶质量的5％加入标号为A.S1398的中性蛋白酶进行酶解，酶解温度维持在55℃，酶解时间为4小时，得到第二次酶解液，并将第二次酶解液煮沸4分钟灭中性蛋白酶的活性；接着将经过酶灭活处理的第二次酶解液过滤、浓缩、75～80℃条件下真空干燥，最后将其研磨成为浅黄色的龟板多肽粉末。该龟板多肽粉同样也可以制成保健胶囊或作为其他食品的功能性添加剂。

当然，也可以将经过上述酶灭活处理的第二次酶解液过滤后直接勾对到酒中，配制成含鹿角多肽或龟板多肽的功能酒。

Claims (3)

1.一种鹿角多肽或龟板多肽的制备方法，其特征在于：该方法依次包括如下步骤：

1)用水将鹿角胶或龟板胶溶解成质量百分比浓度为8～10％的鹿角胶或龟板胶水溶液；

2)将鹿角胶或龟板胶水溶液煮沸3～5分钟，使其充分溶解、变性，待其温度冷却至45～58℃时，调节其pH值至7.5～8；

3)按鹿角胶或龟板胶质量的5～6％加入胰酶进行酶解，酶解时间为6～8小时，得到第一次酶解液；

4)将第一次酶解液煮沸3～5分钟灭胰酶的活性，然后将其温度降低至45℃～58℃；

5)再按鹿角胶或龟板胶质量的5～6％加入中性蛋白酶进行酶解，酶解时间为3～4小时，得到第二次酶解液；

6)将第二次酶解液煮沸3～5分钟灭中性蛋白酶的活性；

7)将经过酶灭活处理的第二次酶解液过滤、浓缩、真空干燥，最后研磨成为鹿角多肽粉末或龟板多肽粉末。

2.根据权利要求1所述的鹿角多肽或龟板多肽的制备方法，其特征在于：所说的步骤2)中采用质量百分比浓度为10～35％的氢氧化钙溶液来调节鹿角胶或龟板胶水溶液的pH值。

3.根据权利要求1或2所述的鹿角多肽或龟板多肽的制备方法，其特征在于：所说的步骤3)和步骤5)中酶解的温度始终维持45～58℃。

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