CN106053365A - 一种测定髓过氧化物酶的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定髓过氧化物酶的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分：试剂R1：缓冲液、表面活性剂、螯合剂、加速剂、防腐剂、稳定剂，试剂R2：缓冲液、防腐剂、稳定剂、胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的髓过氧化物酶的浓度。本发明具有操作方便、检测准确度高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定髓过氧化物酶的试剂盒及其制备方法。
背景技术
髓过氧化物酶（MPO）是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一,髓过氧化物酶（MPO）每个酶分子有两个铁素基团，顺磁共振波谱表明血红素中的铁是在甲酰基血红素部分,髓过氧化物酶（MPO）的合成是粒细胞进入循环之前在骨髓内合成并贮存于嗜天青颗粒内，外界刺激可导致中性粒细胞聚集，释放髓过氧化物酶（MPO）,在成熟的粒细胞中，MPO是含量最丰富的糖蛋白，约占外周血多形核中性粒细胞（PMNs）内总蛋白质含量的5%，血液中95%的MPO来源于PMNs,MPO的相对分子质量为150×103，是由2个亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链（α链，相对分子质量约60×103）和一条轻链（β链，相对分子质量约15×103）所构成,2个亚单位在α链处由1个二硫键相连,重链具有亚铁卟啉基团，说明髓过氧化物酶（MPO）是铁依赖性的,MPO以3种亚形存在于髓系细胞中，分别为MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ,3种亚型主要是重链有差异，轻链的差异较小，导致它们在相对分子质量及疏水性等方面不同，3种亚型在功能上的差异还不明确，有待进一步研究。
冠心病是心血管系统中最常见的疾病，而动脉粥样硬化（AS）又是形成冠心病的重要病理基础,AS发病过程中通常出现氧化低密度脂蛋白，进而巨噬细胞吞噬脂质变成泡沫细胞，泡沫细胞的形成在AS的发生机制中起关键作用,研究发现髓过氧化物酶（MPO）有促进AS病变形成的作用，髓过氧化物酶（MPO）通过产生自由基和多种反应性物质，促进斑块形成和不稳定性增加，加速AS进展，进而引起多种并发症如急性冠脉综合征（ACS）,研究发现，MPO缺陷的个体罹患心血管疾病的危险性明显下降,髓过氧化物酶（MPO）水平的升高不仅与患冠状动脉疾病易感性相关，还可以预测早期患心肌梗死的危险性。
髓过氧化物酶（MPO）促进急性冠脉综合征（ACS）病变形成，并影响粥样斑块的稳定性，通过增大氧化应激而引起急性冠脉综合征（ACS）,研究表明，髓过氧化物酶（MPO）是预测急性冠脉综合征（ACS）患者发生不良心血管事件的一个新的预测因子，特别是在肌钙蛋白T（TnT）水平较低的患者，MPO能够识别那些将来发生心血管事件危险性较高的患者。
在肺部受微生物侵袭、职业暴露以及吸烟时，髓过氧化物酶（MPO）会随中性粒细胞的聚集释放到炎症部位,髓过氧化物酶（MPO）可代谢激活多种与肺癌有关的环境致癌物，能将前致癌物如多环芳烃类的苯并芘（BaP）转化成具有高度反应性和致癌性的活性产物二醇环氧化苯并芘（BPDE），BPDE能与DNA形成加合物并导致姐妹染色体互换，从而导致肺癌。
目前，检测髓过氧化物酶（MPO）的常用方法有酶联免疫吸附法、双抗体夹心激光化学发光免疫检测法以及酶法,酶联免疫吸附法操作繁琐，对操作人员有专业的技能要求，且耗时长；双抗体夹心激光化学发光免疫检测法需要用到特殊的仪器，且检测成本较高；酶法的稳定性和特异性均较差,而且测定准确度低，需要进行改进。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术操作复杂、污染环境以及测定准确度低的缺陷，而提供一种测定髓过氧化物酶的试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定髓过氧化物酶的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 60~180 mmol/L
表面活性剂 10~40 mmol/L
螯合剂 20~100 mmol/L
加速剂 5~15 g/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定髓过氧化物酶的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 120 mmol/L
表面活性剂 25 mmol/L
螯合剂 60 mmol/L
加速剂 10 g/L
防腐剂 0.7 g/L
稳定剂 20 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 100 mmol/L
防腐剂 0.7 g/L
稳定剂 20 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种的组合，所述的螯合剂为EDTA·2Na、氨基三乙酸中的一种，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、叠氮钠、咪唑烷基脲中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、叠氮钠、咪唑烷基脲中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体的制备方法如下：
用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为80-500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在20℃-37℃的条件下反应1小时，反应完成后加入2，2’-硫代双镍，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，使用超声分散仪进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，直至溶液中的聚苯乙烯微球的质量浓度为0.5%-3%为止，然后边搅拌边加入抗髓过氧化物酶抗体，直至聚苯乙烯微球的质量浓度为0.5-2.0%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度为20 g/L为止，然后在4℃条件下封闭8-12小时，即可制备得到胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体。
作为优选，本发明还公开了上述测定髓过氧化物酶的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 60~180 mmol/L
表面活性剂 10~40 mmol/L
螯合剂 20~100 mmol/L
加速剂 5~15 g/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的髓过氧化物酶的浓度。
作为优选，步骤（b）中，所述的试剂R1和试剂R2的体积比为3：1。
作为优选，步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1：5到1：30之间。
本发明的检测原理是：本发明主要利用的是抗原抗体反应的原理，样本中的髓过氧化物酶（MPO）与包被胶乳颗粒的特异的抗MPO-抗体结合，形成不溶性免疫复合物，其浊度水平与样本中的MPO浓度成比例，对照6-点定标曲线可以计算出样本中的MPO浓度。
样本中髓过氧化物酶（MPO）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）
式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中MPO的浓度。
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明通过在试剂R2中添加助悬剂和表面活性剂，使胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体可以均匀悬浮于试剂R2液中，在表面活性剂和加速剂的作用下，可迅速发生反应，在较低的样本浓度下也可发生灵敏的反应，因此检测的准确度比较高，而且不会污染环境，另外操作也比较方便。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
Tris缓冲液 120 mmol/L
吐温-20 25 mmol/L
氨基三乙酸 60 mmol/L
聚乙二醇-8000 10 g/L
叠氮钠 0.7 g/L
牛血清白蛋白 20 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 100 mmol/L
叠氮钠 0.7 g/L
牛血清白蛋白 20 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种的组合，所述的螯合剂为EDTA·2Na、氨基三乙酸中的一种，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、叠氮钠、咪唑烷基脲中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、叠氮钠、咪唑烷基脲中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白。
实施例2
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
MES缓冲液 60 mmol/L
吐温-20 40 mmol/L
氨基三乙酸 20 mmol/L
聚乙烯吡咯烷酮 15 g/L
咪唑烷基脲 0.5 g/L
牛血清白蛋白 30 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 50 mmol/L
咪唑烷基脲 1.0 g/L
牛血清白蛋白 10g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 8 g/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体的制备：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在26℃的条件下反应1小时，反应完成后加入2，2’-硫代双镍，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，使用超声分散仪进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，直至溶液中的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%为止，然后边搅拌边加入抗髓过氧化物酶抗体，直至聚苯乙烯微球的质量浓度为1%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度为20 g/L为止，然后在4℃条件下封闭10小时，即可制备得到胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
Tris缓冲液 120 mmol/L
吐温-20 25 mmol/L
氨基三乙酸 60 mmol/L
聚乙二醇-8000 10 g/L
叠氮钠 0.7 g/L
牛血清白蛋白 20 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 100 mmol/L
叠氮钠 0.7 g/L
牛血清白蛋白 20 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 4g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长600nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取180ul试剂R1与15μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入60μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d) 根据样本中髓过氧化物酶（MPO）的活性（ng/mL）= CS × （ng/mL）计算出样本中的髓过氧化物酶的浓度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体的制备：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在26℃的条件下反应1小时，反应完成后加入2，2’-硫代双镍，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，使用超声分散仪进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，直至溶液中的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%为止，然后边搅拌边加入抗髓过氧化物酶抗体，直至聚苯乙烯微球的质量浓度为1%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度为20 g/L为止，然后在4℃条件下封闭10小时，即可制备得到胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
MES缓冲液 60 mmol/L
吐温-20 40 mmol/L
氨基三乙酸 20 mmol/L
聚乙烯吡咯烷酮 15 g/L
咪唑烷基脲 0.5 g/L
牛血清白蛋白 30 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 50 mmol/L
咪唑烷基脲 1.0 g/L
牛血清白蛋白 10g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 8 g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长600nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取180ul试剂R1与15μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入60μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d) 根据样本中髓过氧化物酶（MPO）的活性（ng/mL）= CS × （ng/mL）计算出样本中的髓过氧化物酶的浓度。
表1为实施例1所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒以及实施例2所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的髓过氧化物酶的浓度为 105 ng/mL，测定结果见表1：
表1
| 第1次（ng/mL） | 第2次（ng/mL） | 第3次（ng/mL） | 均值（ng/mL） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 101 | 104 | 104 | 103.0 | 1.57 |
| 实施例2 | 101 | 100 | 104 | 101.7 | 3.14 |
由表1可知，本发明所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒以及实施例2所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的髓过氧化物酶的浓度为710 ng/mL，测定结果见表2：
表2
| 第1次（ng/mL） | 第2次（ng/mL） | 第3次（ng/mL） | 均值（ng/mL） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 705 | 708 | 707 | 706.7 | 0.46 |
| 实施例2 | 705 | 706 | 706 | 705.7 | 0.61 |
由表2可知，本发明所制得的测定全髓过氧化物酶的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例3所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例4所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定髓过氧化物酶的试剂盒的精密度比较好，而且由表3可知，实施例3为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (8)
1.一种测定髓过氧化物酶的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 60~180 mmol/L
表面活性剂 10~40 mmol/L
螯合剂 20~100 mmol/L
加速剂 5~15 g/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定髓过氧化物酶的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 120 mmol/L
表面活性剂 25 mmol/L
螯合剂 60 mmol/L
加速剂 10 g/L
防腐剂 0.7 g/L
稳定剂 20 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 100 mmol/L
防腐剂 0.7 g/L
稳定剂 20 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定髓过氧化物酶的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种的组合，所述的螯合剂为EDTA·2Na、氨基三乙酸中的一种，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、叠氮钠、咪唑烷基脲中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定髓过氧化物酶的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、叠氮钠、咪唑烷基脲中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定髓过氧化物酶的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体的制备方法如下：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为80-500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在20℃-37℃的条件下反应1小时，反应完成后加入2，2’-硫代双镍，使用离心机，在25000rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，使用超声分散仪进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液稀释，直至溶液中的聚苯乙烯微球的质量浓度为0.5%-3%为止，然后边搅拌边加入抗髓过氧化物酶抗体，直至聚苯乙烯微球的质量浓度为0.5-2.0%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度为20 g/L为止，然后在4℃条件下封闭8-12小时，即可制备得到胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体。
6.根据权利要求1或2所述的一种测定髓过氧化物酶的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 60~180 mmol/L
表面活性剂 10~40 mmol/L
螯合剂 20~100 mmol/L
加速剂 5~15 g/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
防腐剂 0.5~1.0 g/L
稳定剂 10~30 g/L
胶乳包被抗髓过氧化物酶抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的髓过氧化物酶的浓度。
7.根据权利要求6所述的一种测定髓过氧化物酶的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的试剂R1和试剂R2的体积比为3：1。
8.根据权利要求6所述的一种测定髓过氧化物酶的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1：5到1：30之间。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106896227A (zh) * | 2017-04-05 | 2017-06-27 | 济南蓄琪生物技术有限公司 | 一种髓过氧化物酶检测试剂盒 |
| CN109884322A (zh) * | 2019-03-26 | 2019-06-14 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法 |
| CN113358869A (zh) * | 2021-06-04 | 2021-09-07 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102680676A (zh) * | 2011-07-29 | 2012-09-19 | 南京诺尔曼生物技术有限公司 | 髓过氧化物酶(myeloperoxidase MPO)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) |
| CN103033612A (zh) * | 2012-12-15 | 2013-04-10 | 北京金豪制药股份有限公司 | TORCH五项IgM抗体检测试剂盒及其制备 |
| CN103323596A (zh) * | 2012-10-31 | 2013-09-25 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 髓过氧化物酶含量检测试剂盒及其制备方法 |
| CN105158473A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-12-16 | 浙江凯成生物科技有限公司 | 髓过氧化物酶测定试剂盒 |
-
2016
- 2016-05-26 CN CN201610358113.8A patent/CN106053365A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102680676A (zh) * | 2011-07-29 | 2012-09-19 | 南京诺尔曼生物技术有限公司 | 髓过氧化物酶(myeloperoxidase MPO)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) |
| CN103323596A (zh) * | 2012-10-31 | 2013-09-25 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 髓过氧化物酶含量检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103033612A (zh) * | 2012-12-15 | 2013-04-10 | 北京金豪制药股份有限公司 | TORCH五项IgM抗体检测试剂盒及其制备 |
| CN105158473A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-12-16 | 浙江凯成生物科技有限公司 | 髓过氧化物酶测定试剂盒 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106896227A (zh) * | 2017-04-05 | 2017-06-27 | 济南蓄琪生物技术有限公司 | 一种髓过氧化物酶检测试剂盒 |
| CN109884322A (zh) * | 2019-03-26 | 2019-06-14 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法 |
| CN109884322B (zh) * | 2019-03-26 | 2022-02-11 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法 |
| CN113358869A (zh) * | 2021-06-04 | 2021-09-07 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒 |
| CN113358869B (zh) * | 2021-06-04 | 2022-10-14 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒 |
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