JP4972161B2 - タクロリムス標準物質及びそれを使用する方法 - Google Patents
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Description
て販売されているタクロリムスのEMIT(R)イムノアッセイにおいて有用な公知の誘導体である。
(1)タクロリムスを含有すると推測される試料を用意すること;
(2)試料を
(a)タクロリムスに対する抗体;及び
(b)場合により、タクロリムス類似体
と反応させること、ここで抗体の1つ又はタクロリムス類似体は、検出可能なシグナルを生成する標識で標識される;並びに
(3)(a)抗体に結合したタクロリムスに関連するシグナル;
(b)抗体に結合していないタクロリムスに関連するシグナル;又は
(c)試料中のタクロリムスの存在又は濃度を検出又は測定するための存在するシグナル全体:
のうちの1つを観察又は測定すること、
の工程を含む。
タクロリムス標準溶液の調製
脂肪酸を含まないウシ血清アルブミン(Sigma-Aldrich-Fluka製)14gを100mLの精製水と混合して、溶液を作った。コントロールとして、メタノールと水との50:50質量%溶液を調製した。各溶液に、タクロリムス1.00mgを添加し、室温で24時間撹拌するにまかせた。乳化剤として作用するよう、Cremophor(R) EL(CAS番号61791-12-6)250μLを各溶液に添加した。次に、各溶液を水で1:25に希釈した後、最終的な希釈比が1:250になるよう、水で再度1:10に希釈した。アフィニティカラムイムアッセイを使用するDimension(R) RxL Max(R)統合型化学分析装置で各試料を試験した。Bioresources of Fort Lauderdale, Floridaによって供給されるタクロリムスマスタープールを使用して、分析装置をまず較正した。ウシ血清溶液及びコントロール溶液は、実質的に同等の結果を与えた(それぞれ6150ng/mL及び5985ng/mL)。
タクロリムスの回収に及ぼすタンパク質及び乳化剤の効果
タクロリムスの回収に及ぼすタンパク質及び乳化剤の効果を研究するために、表1において特定された試料に対して、実施例1の検査手法を反復した。各試料を100mLの水に溶解した後、水で1:500に希釈した。結果は、脂肪酸を含まないBSA及び乳化剤の両者が、タクロリムスの回収に寄与することを示した。
タクロリムスの回収に及ぼすタンパク質からの脂肪酸除去の効果
タクロリムスの回収に及ぼすタンパク質からの脂肪酸除去の効果を研究するために、表2において特定された試料に対して、実施例1の検査手法を反復した。各試料を100mLの水に溶解した後、水で1:500に希釈した。結果は、BSAを脂肪酸不含とすることで、タクロリムスの回収が有意に増大することを示した。
タクロリムスの回収に関する脂肪酸不含ウシ血清アルブミン濃度の比較
タクロリムスの回収に及ぼすタンパク質の濃度の効果を研究するために、表3において特定された試料に対して、実施例1の検査手法を反復した。各試料を100mLの水に溶解した後、水で1:500に希釈した。結果は、タクロリムスの回収が、BSA濃度の関数であることを示した。
Claims (21)
- アッセイにおいて標準物質として使用するのに適した組成物であって、
タクロリムス又はその誘導体の既知の量、及びタクロリムスに非特異的であり、かつタクロリムス又はその誘導体と可溶性複合体を形成できるタンパク質を有する溶液
を含み、該タンパク質が少なくとも95%脂肪酸不含であり、タンパク質:タクロリムスの比が重量ベースで25,000:1〜1,000:1の範囲である、組成物。 - 溶液が水溶液を含み、かつ複合体が水溶性である、請求項1に記載の組成物。
- 溶液が、アルカノール溶媒を含まない、請求項1に記載の組成物。
- 溶液が、メタノールを含まない、請求項1に記載の組成物。
- 溶液が、タクロリムスに特異的に結合できるタンパク質を含まない、請求項1に記載の組成物。
- タンパク質がアルブミンを含む、請求項1に記載の組成物。
- アルブミンが、脂肪酸を含まないウシ血清アルブミンを含む、請求項1に記載の組成物。
- 溶血血液をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 乳化剤をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 抗体と複合体を形成でき、かつ検出可能なシグナルを生成させるのに適した標識をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- アッセイにおいて標準物質として使用するのに適した組成物であって、
タクロリムス又はその誘導体の既知の量、及び
タクロリムスに非特異的であり、少なくとも95%脂肪酸不含であり、かつタクロリムス又はその誘導体と可溶性複合体を形成できるタンパク質を有する溶液
を含み、溶液が有機溶媒、及びタクロリムス又はその誘導体に特異的なタンパク質を含まない、組成物。 - 溶液が水溶液を含み、かつ複合体が水溶性である、請求項11に記載の組成物。
- アルブミンが、脂肪酸を含まないウシ血清アルブミンを含む、請求項11に記載の組成物。
- 溶血血液をさらに含む、請求項11に記載の組成物。
- 乳化剤をさらに含む、請求項11に記載の組成物。
- 抗体と複合体を形成でき、かつ検出可能なシグナルを生成させるのに適した標識をさらに含む、請求項11に記載の組成物。
- タクロリムスについてのアッセイにおいて使用するための方法であって、
タクロリムス又はその誘導体の既知の量、及びタクロリムス又はその誘導体と水溶性複合体を形成できるタンパク質を含み、タンパク質が少なくとも95%脂肪酸不含であり、タンパク質:タクロリムスの比が重量ベースで25,000:1〜1,000:1の範囲である、標準溶液を用意すること;及び
タクロリムス又はその誘導体の既知の量に対応する測定結果を測定するために、標準溶液に関してアッセイを行うこと
を含む、方法。 - 標準溶液が、乳化剤をさらに含む、請求項17に記載の方法。
- 標準溶液が、溶血血液をさらに含む、請求項17に記載の方法。
- 溶液が、脂肪酸を含まないウシ血清アルブミンを含む、請求項17に記載の方法。
- 標準溶液が、アルカノール溶媒を含まない、請求項17に記載の方法。
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