CN105994947A - 一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，此饲料由鱼粉、豆粕、酵母粉、β‑葡聚糖、芽孢杆菌M001、含硒酵母提取物、含铬酵母提取物、复合维生素和复合无机盐组成；其制备工艺包括预处理、静态发酵和制粒。本发明的有益效果在于：饲料转化率高，成本低，营养均衡；绿色安全抗病害，提高鱼体免疫力，改善水体环境。

Description

一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用
技术领域
本发明涉及水产饲料领域，特别是涉及一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用。
背景技术
2013年中国近海海水养殖1551万吨，是世界主要渔业生产国中，海水养殖产量超过海洋捕捞的唯一国家。其中，海水养殖占全国海水产品总产量的53.35%，占世界海水养殖总量的80%。数据显示，当前国家耕地资源日益紧缺，粮食安全面临严重威胁，大力开发海洋生物资源，提供更多更好的海洋水产品，有利于改善食品结构，保证国家食品安全。海水产品在居民膳食结构中的比重也显著增加。近海捕捞渔业高速增长下的隐患。各类污染物通过食物链富集到海洋生物体内，难降解，高毒性物质在海产品体内的积累会对食用者的健康造成严重损害。同时，部分养殖者盲目追求经济效益，大量投饵，滥用抗生素，也造成了严重的食品安全隐患。
我国水产养殖产量连续十多年居世界首位，成为大农业中发展最快的产业之一。我国水产病害的防治手段主要依赖抗生素等化学药物，由于抗生素带来的生态、环境以及食品安全等的不良影响，其在水产养殖的应用在国内外受到很多限制。益生菌是一类能够抑制病原微生物、改善养殖生态环境、调节动物体内生态平衡、增强肌体免疫功能、提高饲料利用效率等作用的有益微生物，许多商品化的益生菌制剂已在畜牧养殖业中广泛应用，以达到减少抗生素使用、控制疾病发生、促进动物生长的目的。目前用于水产养殖的益生菌多数来源于陆生环境或陆生动物，这些益生菌多数不适合在水生环境特别是海洋环境中生长和繁殖，导致其益生效应难以有效发挥。因此，从海洋环境或海洋动物中分离筛选土著菌作为益生菌来源，对保证海洋益生菌制剂的高效性和安全性特别关键。
浙江省淡水所的《饲料中添加枯草芽孢杆菌对青鱼生长、消化酶活性和鱼体组成的影响》中表明，饲料中添加芽孢杆菌能促进青鱼鱼种的生长和降低饲料系数，并且对鱼体组成没有影响。
发明内容
为了解决水产养殖中抗生素使用过多，水产病害控制和水产成长难以兼顾的问题，我们提出了一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，采用本发明可以达到安全控制水产病害并促进水产成长的目的。
本发明是通过以下技术方案实现的：
为实现上述目的，本发明提供一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，此饲料由以下质量份数的原料组成：
鱼粉：20-40份；豆粕：20-40份；鱼粉和豆粕是水产养殖饲料基料，适口性好，可以进行成本控制。酵母粉：5-10份；酵母粉富含丰富的氨基酸，小分子肽和B族维生素，摄入后易于转化，利用率高，可以强壮体质。β-葡聚糖：5-10份；β-葡聚糖可以显著提高鱼体免疫能力。芽孢杆菌M001：0.03-0.18份。含硒酵母提取物：0.01-0.1份；含铬酵母提取物：0.01-0.1份；提高饲料转化率。复合维生素：0.1-0.5份；复合无机盐：0.1-0.5份；补充酵母粉无法补给的其他生长因子。
其中上述芽孢杆菌为中国水产科学研究院黄海水产研究所研发的M001海洋解淀粉芽孢杆菌。该菌株分离自健康牙鲆(Paralichthys olivaceus) 消化道，经高剂量注射和投喂确定对养殖大菱鲆、牙鲆、舌鳎、小白鼠等安全，无致病性。革兰氏染色阳性，在Zobell2216E 海水固体培养基上、28℃培养2 天的菌落形态直径大小为2-3mm，圆形，凸起，乳白色，表面粗糙，边缘不整。具有荚膜和芽孢，芽孢呈椭圆形。氧化酶反应阴性，过氧化氢酶反应阳性，鸟氨酸脱羧酶反应阴性，精氨酸双水解酶阳性，赖氨酸脱羧酶反应阳性，脲酶反应阴性，L-阿拉伯糖醇反应阴性，半乳糖酸盐反应阴性，5-酮基- 葡萄糖酸钠反应阴性，脂肪酶反应阳性，酚红反应阴性，β-葡萄糖苷反应阳性，甘露醇反应阳性，麦芽糖反应阳性，吲哚产生阴性，N-乙酰-β-葡萄糖反应阴性，β-半乳糖苷酶反应阴性，葡萄糖反应阳性，蔗糖反应阳性，L-阿拉伯糖反应阴性，α-葡萄糖反应阳性，α-半乳糖苷酶反应阳性，海藻糖反应阳性，鼠李糖反应阳性，肌醇反应阳性，侧金盏花醇反应阴性，帕拉金糖反应阴性，β-葡萄糖酸酶反应阳性，纤维二糖反应阴性，山梨醇反应阳性，α-麦芽糖苷反应阳性，丙二酸利用阳性，L-天门冬素芳胺酶反应阳性。
优选地，上述饲料制备工艺如下：
（1）预处理：将鱼粉，豆粕粉碎过筛，干燥备用；向粉碎物中加入β-葡聚糖，酵母粉，含硒酵母提取物，含铬酵母提取物，混合均匀；
（2）静态发酵：在步骤（1）中混合物中加入总质量10-20%的去离子水至混合物湿润状态，置于密闭环境中静态发酵，设置温度为25-35℃，溶胀5-20小时；
（3）制粒：向溶胀后的混合物中加入芽孢杆菌M001，复合维生素，复合无机盐，搅拌均匀，烘焙提香，机器制粒。
优选地，上述含硒酵母提取物中硒含量为0.05-0.5%。
优选地，上述含铬酵母提取物中铬含量为0.05-0.5%。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1、饲料转化率高，成本低，营养均衡；
2、绿色安全抗病害，提高鱼体免疫力，改善水体环境。
附图说明
图1，图2和图3为本发明使用的芽孢杆菌M001显微镜下照片；
图4为本发明制作的带有M001的饲料对于石斑鱼存活率的影响图；
图5为本发明制作的带有M001的饲料对于石斑鱼攻毒后存活率的影响图。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通或改变都落入本发明保护范围；且下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1：
一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，此饲料由以下质量份数的原料组成：鱼粉：42份；豆粕：42份；酵母粉：7份；β-葡聚糖：7份；含硒酵母提取物：0.05份；含铬酵母提取物：0.05份；复合维生素：0.2份；复合无机盐：0.2份；芽孢杆菌M001：0.03份。
饲料制备工艺如下：（1）预处理：将鱼粉，豆粕粉碎过筛，干燥备用；向粉碎物中加入β-葡聚糖，酵母粉，含硒酵母提取物，含铬酵母提取物，混合均匀；（2）静态发酵：在步骤（1）中混合物中加入总质量15%的去离子水至混合物湿润状态，置于密闭环境中静态发酵，设置温度为27℃，溶胀10小时；（3）制粒：向溶胀后的混合物中加入芽孢杆菌M001，复合维生素，复合无机盐，搅拌均匀，烘焙提香，机器制粒。
实施例2：
饲料制作工艺与实施例1相同，配料基本与实施例1相同，其中芽孢杆菌M001添加量为0.06份。
实施例3：
饲料制作工艺与实施例1相同，配料基本与实施例1相同，其中芽孢杆菌M001添加量为0.09份。
实施例4：
饲料制作工艺与实施例1相同，配料基本与实施例1相同，其中芽孢杆菌M001添加量为0.12份。
实施例5：
饲料制作工艺与实施例1相同，配料基本与实施例1相同，其中芽孢杆菌M001添加量为0.15份。
实施例6：
饲料制作工艺与实施例1相同，配料基本与实施例1相同，其中芽孢杆菌M001添加量为0.18份。
对比例1：
饲料制作工艺与实施例1相同，配料基本与实施例1相同，其中芽孢杆菌M001添加量为0份。
对比例2：
饲料制作工艺与实施例1相同，配料基本与实施例1相同，其中芽孢杆菌为市购枯草芽孢杆菌，添加量为0.18份。
（1）发病率——自然养殖长期实验
①试验饲料，参照石斑鱼的营养需求，以进口鱼粉，豆粕，酵母粉等为原料，配置芽孢杆菌M001，添加量分别为0、0.03%、0.06%、0.09%、0.12%、0.15%、0.18%（对应的实际活菌数分别为0.20×102、0.69×1010、1.38×1010、2.05×1010、2.82×1010、3.55×1010、4.23×1010cfu/kg）的7组试验饲料，并记为1（对比例1）、2、3、4、5、6、7组（实施例1-6）。第8组选用市购水产用枯草芽孢杆菌，添加量为0.18%（对比例2），对应的实际活菌数为4.23×1010 cfu/kg。使用前将条状饲料破碎，经10和2目筛网2级过筛后分成3种不同规格的小颗粒饲料待用。
②试验用石斑鱼由浙江某水产养殖公司提供，选取当年新孵仔鱼，规格均匀，平均体长（2.80±0.03）cm，平均体重（0.43±0.02）g的仔鱼6000尾，同缸驯养7d后随机分为8组，每组设3个重复，每个重复250尾，以重复为单位分养到24个室外水泥池中，试验周期为1y。
水源为30米深海水，换水之前在室内暂存新鲜海水2h以上，养殖过程中每日保持换水2次，分别为9:00和17:00，换水之后进行投喂饲料，投饲量为鱼体重的5-7%。换水前后记录水温。试验期间水温为10-25℃，平均水温17.6℃。
③每日出现鱼状况不佳及时捞出暂养于病鱼缸，若鱼出现死亡，则捞出解剖，记录死亡鱼数量和死亡原因；若鱼状况回复，则回放于原水泥池中。
数据记录如表1和图4所示：
表1 饲料中添加M001对石斑鱼存活率的影响
其中：养殖至130d左右时期出现一波鱼病爆发，组1和组8出现大量死鱼。
（2）发病率——人工攻毒试验
①试验饲料，参照石斑鱼的营养需求，以进口鱼粉，豆粕，酵母粉等为原料，配置芽孢杆菌M001，添加量分别为0、0.03%、0.06%、0.09%、0.12%、0.15%、0.18%（对应的实际活菌数分别为0.20×102、0.69×1010、1.38×1010、2.05×1010、2.82×1010、3.55×1010、4.23×1010cfu/kg）的7组试验饲料，并记为1（对比例1）、2、3、4、5、6、7组（实施例1-6）。第8组选用市购水产用枯草芽孢杆菌，添加量为0.18%（对比例2），对应的实际活菌数为4.23×1010 cfu/kg。使用前将条状饲料破碎，经10和2目筛网2级过筛后分成3种不同规格的小颗粒饲料待用。
②试验用石斑鱼由浙江某水产养殖公司提供，选取当年新孵仔鱼，规格均匀，平均体长（2.80±0.03）cm，平均体重（0.43±0.02）g的仔鱼1200尾，同缸驯养7d后随机分为8组，每组设3个重复，每个重复50尾，以重复为单位分养到24个室内水泥池中，试验周期为56d。
水源为30米深海水，换水之前在室内暂存新鲜海水2h以上，养殖过程中每日保持换水2次，分别为9:00和17:00，换水之后进行投喂饲料，投饲量为鱼体重的5-7%。换水前后记录水温。试验期间水温为10-25℃，平均水温17.6℃。
③每日出现鱼状况不佳及时捞出暂养于病鱼缸，若鱼出现死亡，则捞出解剖，记录死亡鱼数量和死亡原因；若鱼状况回复，则回放于原水泥池中。
④所用的病原为嗜水气单胞菌。将嗜水气单胞菌接种在FWA培养基（蛋白胨5g/L、牛肉膏2.5g/L、酵母膏2.5g/L、葡萄糖1g/L、NaCl 15g/L、MgSO4 0.05g/L、K2HPO4 0.2g/L、琼脂15g/L、pH7.2-7.4）上，30℃培养36h后，用0.85%的无菌生理盐水洗脱菌体，调整菌液浓度为4.96×107 cfu/mL。在56d的养殖试验结束后，每池随机取10尾鱼，经胸鳍基部注射0.3mL嗜水气单胞菌活菌悬液，进行攻毒试验，分别记录攻毒后1、24、48、72、96、120、144、168h的死亡情况，计算累计存活率。数据记录如表2和图5所示：
表2 饲料中添加M001对嗜水气单胞菌攻毒后石斑鱼存活率的影响
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，其特征在于，此饲料由以下质量份数的原料组成：
鱼粉：20-50份；
豆粕：20-50份；
酵母粉：5-10份；
β-葡聚糖：5-10份；
芽孢杆菌M001：0.03-0.18份；
含硒酵母提取物：0.01-0.1份；
含铬酵母提取物：0.01-0.1份；
复合维生素：0.1-0.5份；
复合无机盐：0.1-0.5份；
其中上述芽孢杆菌为中国水产科学研究院黄海水产研究所研发的M001海洋解淀粉芽孢杆菌。
2.如权利要求1所述的一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，其特征在于，所述饲料制备工艺如下：
（1）预处理：将鱼粉，豆粕粉碎过筛，干燥备用；向粉碎物中加入β-葡聚糖，酵母粉，含硒酵母提取物，含铬酵母提取物，混合均匀；
（2）静态发酵：在步骤（1）中混合物中加入总质量10-20%的去离子水至混合物湿润状态，置于密闭环境中静态发酵，设置温度为25-35℃，溶胀5-20小时；
（3）制粒：向溶胀后的混合物中加入芽孢杆菌M001，复合维生素，复合无机盐，搅拌均匀，烘焙提香，机器制粒。
3.如权利要求l所述的一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，其特征在于，所述含硒酵母提取物中硒含量为0.05-0.5%。
4.如权利要求l所述的一种芽孢杆菌在石斑鱼饲料中的应用，其特征在于，所述含铬酵母提取物中铬含量为0.05-0.5%。
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