KR101449557B1

KR101449557B1 - 미세조류 클로렐라를 주성분으로 하는 해삼용 사료 조성물

Info

Publication number: KR101449557B1
Application number: KR1020130026596A
Authority: KR
Inventors: 이혜현; 이승협; 이상종; 김미희; 최도영
Original assignee: 농업회사법인 주식회사 엘바이오텍
Priority date: 2013-03-13
Filing date: 2013-03-13
Publication date: 2014-10-14
Also published as: KR20140113769A

Abstract

본 발명은 미세조류, 다시마, 미역, 파래, 미강, 맥강, 율무 및 미네랄을 혼합한 혼합물에 미생물을 첨가하여 발효한 미세조류 클로렐라를 주성분으로 하는 해삼용 사료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 해삼용 사료 조성물은 발효로 인해 유효성분이 해삼 체내에 좀 더 용이하게 흡수할 수 있고, 해삼의 생존율 및 성장률을 더욱 향상시킬 수 있다.

Description

미세조류 클로렐라를 주성분으로 하는 해삼용 사료 조성물{Feed composition for sea cucumber containing microalgae chlorella as main component}

본 발명은 미세조류, 다시마, 미역, 파래, 미강, 맥강, 율무 및 미네랄을 혼합한 혼합물에 미생물을 첨가하여 발효한 미세조류 클로렐라를 주성분으로 하는 해삼용 사료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

해삼(Stichopus Japonicus)은 우리나라 전 연안에 서식하며, 분포범위가 넓고 양도 많아 산업 경제적으로 매우 중요한 종이며, 우리나라 해삼 생산량은 1983년 3,966톤을 정점으로 계속 감소하여 1992년에 1,581톤이 어획되었으며, 2002년에는 836톤으로 급격히 감소하고 있어 자원관리가 시급한 품종이다. 전세계적으로 식용으로 가능한 종이 약 80종으로 알려져 있으며, 돌기가 튀어나온 해삼이 품질이 좋다고 알려져 있다.

고대로부터 중국은 해삼을 여덟 가지 귀한 것 중 하나로 여겼으며 해삼 100 g당 수분함유량이 76%, 단백질 21.5%, 지방 0.3%, 탄수화물 1%, 회분 1.2%가 함유되어 있다. 그외 해삼은 다량의 점성단백 아미노산, 특히 노화방지에 효과가 있는 산성점성다당(황산연골소)이 함유되어 있다. 연구에 의하면 산성점성다당이 항암 및 항혈액응고작용, 유기체 면역기능 작용이 있어 보건 건강식품 또는 약용식품으로 알려져 있다.

해삼 종묘생산은 1980년대부터 국립수산과학원 포항 및 강릉수산종묘시험장에서 기술이 개발되어 연안어장에 씨뿌림하는 소극적인 증산방안을 시도한 적이 있으나 2003년에는 완도지역 민간 종묘업체 2곳에서 종묘생산을 하여 마리당(전장 3 cm) 250원 내외에 일반에게 분양되었으나 아직은 수요에 비해 생산이 미미한 실정이다.

2003년 11월 중국의 해삼양식 실태를 파악한 결과, 해삼양식 면적은 전년에 비해 38%가 증가해 17,000 ha에 이르고 있으며 해삼종묘 생산량도 전년에 비해 2003년에는 320%가 증가한 약 3억 마리로 추산돼 올해 생산량은 약 2,250톤에 달할 것으로 예상된다. 산동성에서 해삼 생산량이 이처럼 증가하고 있는 것은 최근까지 주생산 어종이였던 새우가 1993년부터 바이러스 질병으로부터 심각한 타격을 받으면서 그 대체 어종으로 해삼을 양식하고 있기 때문이다. 또한 축제식양식도 성행하여 40,000평 호지에서 약 10톤을 생산하고 있으며 사육기질은 자갈과 폐그물을 넣어서 양식하고 있다.

중국 위해 천원실업유한공사는 해삼, 전복, 조개류를 주요 취급품목으로 하고 있으나 이중 해삼이 80%를 차지하고 있으며, 2003년도 생해삼의 중국산지 가격이 kg당 120원(위엔화, 한화 약 18,000원)의 높은 가격으로 거래되고 있으며 중국에서 해삼 가격이 이렇게 높게 거래되고 있는 것은 이시진이 지은‘본초강목’에 해삼이 인체 내에 병에 대한 저항력을 강화, 정력적인 식품, 찰과상에 효과가 좋다고 기록되어 있어 건강식품으로 인식되어 있기 때문이며, 2003년 중국대륙을 휩쓴 샤스도 영향을 미쳤다고 한다.

해삼은 낮에는 활동성과 먹이 섭취량이 적다. 해삼의 성장 최적수온은 19~20℃, 19℃일 때 새끼 해삼의 섭취율은 18~30%이고, 수온이 20℃가 넘지 않을 때 하류 섭취량과 흡수율이 크고 성장도 빠르다. 해삼의 생물학적 최소형은 39 g이며 평균 58~60 g으로 어떤 종이던 종묘생산에서 중요한 것은 우량어미와 양질의 수정난이라고 하겠다. 해삼의 경우도 어미 선택이 중요하며 크기는 25 cm, 무게는 250 g 이상으로 상처가 없고 활력이 좋은 어미여야 한다. 해삼은 암수로 구별되며, 암컷의 생식선은 오렌지색, 수컷은 젖빛색, 혹은 옅은 황색이다. 생식선은 식도막 양쪽에 있으며 여러 갈래로 갈라진 파이프 형태를 갖추고 있다.

우리 나라에서 해삼의 산란기는 수온이 15~17℃로 5월 말에서 6월 초이며 산란 성수기는 수온 17~22℃이다. 어미의 산란유발 방법은 수온을 3~5℃ 정도 상승시키는 방법과 간출법으로 그늘에서 30~60분 간출시키는 방법을 사용하고 있다. 해삼의 산란은 보통 저녁 9시부터 12시 사이이며 보통 수컷이 먼저 사정하고 암컷이 뒤이어 산란한다. 그 간격은 10분에서 60분 사이이며, 산란하기 전에는 암수컷의 머리부분을 올리고 좌우로 흔들어댄다. 이런 행동이 나타난 후 얼마 지나지 않아 배란이 이루어진다. 해삼의 방정, 방란시 꼬리부분을 먼저 부착물에 흡착하며 머리부분을 쳐들고 천천히 좌우로 흔들어대는데 이때 정자가 생식기로부터 한 갈래 하얀 안개형태로 분출되면서 천천히 흩어진다. 이때 주위는 유백색으로 물든다. 사정시간은 대략 5~15분 정도, 암컷은 생식기로부터 한 갈래 오렌지색 실모양 난자를 배출하는데 배출된 후 물에 천천히 가라앉는다. 일반적으로 1~3번 좌우 산란하며 시간은 대략 5~15분 정도 된다. 자료에 의하면 몸체가 큰 해삼은 평균 660~700만 개를 방란한다. 그러나 인공으로 어미 관리한 해삼은 자연산 어미에 비해 한 번에 200~300만개 정도로 적게 산란하는 것으로 나타났다.

산란된 난은 공 모양의 오렌지색으로 직경이 106~134 ㎛ 정도이며 수정한 다음 17~20시간이 지나면 부화하고 약 3일이 지나면 아우리쿨라리아(Auricularia)로 되어 먹이를 먹게 된다. 약 10~15일 지나면 돌리오라리아(Doliolaria) 또는 번데기로 변태하며 변태 전에는 크기가 약 0.9~1.0 mm이던 것이 변태 후에는 0.45 mm 정도로 작아진다. 수정 후 13일 만에 섬모가 소실되고 촉수를 가지는 펜타쿨라(pentactula)로 변태 후 저서 생활로 들어가고 이때 식성도 바뀌어 부착 규조나 유기 침전물을 먹게 된다. 저서생활 약 4일이 지나면 5개의 촉수를 가진 백색 반투명한 새끼 해삼이 되는데 15~23일이 소요되고 이후 체장이 4~5 mm로 되면 등 쪽 일부에 색소가 나타나고 10 mm 이상으로 되면 전면이 착색되어 외관상 어미와 비슷하게 된다. 부화한 지 50일이 되면 체장이 4~7 mm, 5개월이 되면 15 mm로 성장한다.

우리나라에서 해삼양식이 활성화되지 못하고 있는 이유는 아직은 대량 종묘생산이 이루어지지 못하고 있다는 점과 또한 종묘생산기간이 7월에서 12월까지 길다는 점, 개체간의 성장 차가 크다는 점이겠다. 이는 종묘생산기술이 아직은 초보단계이며 무엇보다도 해삼 유생단계의 먹이인 식물성플랑크톤과 적정배합사료의 먹이개발이 이루어지지 않았기 때문으로 사료된다. 또한 우리나라는 해삼 유생을 전복 파판에 부착시켜 사육하고 있으나 중국의 경우 고스천으로 된 파판과 전복용 파판을 병행하여 사용하고 있었으나 전복용 파판은 성장이나 생존율에서 현저히 떨어진다.

중국 현지견학 결과 중국의 수산양식은 일부 품종(해삼, 꽃게 부세, 쥐치 등)에서 분명 우리나라보다 앞선 기술을 가지고 있었다. 수산양식을 잘하기 위해서는 물, 시설, 경험, 수많은 시행착오 등 여러 가지 요소가 작용하겠으나 중국 해삼종묘생산의 경우 300평 규모에서 전장 5 cm 내외의 종묘를 약 600만 마리를 생산할 수 있었던 것은 배합사료의 자체개발에서 기인한 것으로 사료되었다.

생물은 종에 따라 영양요구량이 다르고 입의 크기나, 소화능력, 소화관 길이 등에 따라 사료의 영양이나, 크기, 물성이 다르므로 품종의 특성에 따라 최적의 사료를 자체 개발함으로써 선도나 영양을 유지하여 바이러스감염을 예방하고, 성장이나 생존율을 높이고 기형어를 예방하여 우량종묘를 대량으로 생산하고 있지 않나 생각 되었다.

우리나라도 기존 제품의 배합사료를 구입해서 사용할 것이 아니라 품종의 생리, 생태에 따라 자체 사료개발이 이루어져야 할 것으로 사료되었다. 따라서 해삼은 종묘생산 기간이 길기 때문에 먹이 공급에 따른 효율성이 좋고, 자체 규조배양이 잘 되는 부착기질 개발과 배합사료를 개발하여 성장 및 생존율을 향상시킴은 물론 개체간의 성장차이를 줄여야만 대량 종묘생산이 가능할 것으로 사료된다.

한국공개특허 제2013-0009425호에는 다시마, 모자반, 산말, 도박 및 사료점착제를 이용한 해삼 사료용 조성물이 개시되어 있으나, 본 발명의 해삼 사료용 조성물과는 상이하다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 사료 영양성분의 흡수를 높이고 성장률이 개선된 해삼용 사료 조성물을 제공하기 위해, 미세조류가 함유된 혼합물에 유용 미생물을 접종한 후 발효한 미세조류 클로렐라를 주성분으로 사용함으로써, 사료의 유효성분의 흡수율을 높여 해삼의 성장이 개선되고, 양식장에 사료를 투입하여 해삼이 먹지 않고 남을 경우 사료의 부패가 일어나지 않은 해삼용 사료 조성물을 제공하는 데 그 목적이 있다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 미세조류, 다시마, 미역, 파래, 미강, 맥강, 율무 및 미네랄을 혼합한 혼합물에 미생물을 첨가하여 발효한 미세조류 클로렐라를 주성분으로 함유하는 해삼용 사료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 해삼용 사료 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 해삼용 사료 조성물은 사료의 적정한 영양원소, 각종 필수 미량 미네랄의 공급과 소화흡수율을 대폭 향상시키고, 기호성 및 충분한 영양소를 공급하여 폐사율을 낮추고 증체율을 크게 증진시켜, 해삼양식장의 소득을 향상시킬 수 있는 이점이 있다.

도 1은 12종의 미생물을 염 농도를 달리한 배지에 넣고 일정시간 배양한 후 흡광도 값을 측정한 그래프이다.
도 2는 12종의 미생물을 염 농도를 달리한 배지에 넣고 일정시간 배양한 후 균 성장상태를 사진으로 나타낸 것이다.
도 3은 12종의 미생물을 염 농도를 달리한 배지에 넣고 일정시간 배양한 후 배지 초기의 pH로부터 강하되는 결과를 백분율로 환산하여 표시한 그래프이다.
도 4는 클로렐라 발효 전과 후의 전자현미경 사진을 비교한 것이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 미세조류가 포함된 혼합물에 미생물을 첨가하여 발효한 미세조류 클로렐라를 주성분으로 하는 해삼용 사료 조성물을 제공한다.

본 발명의 해삼용 사료 조성물에서, 상기 혼합물은 다시마, 미역, 파래, 미강, 맥강, 율무 및 미네랄로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있는데, 보다 구체적으로는 혼합물 100 중량부 기준으로 미세조류 24~32 중량부, 다시마 10~14 중량부, 미역 10~14 중량부, 파래 8~12 중량부, 미강 10~16 중량부, 맥강 13~17 중량부, 율무 4~6 중량부 및 미네랄 4~6 중량부를 혼합한 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 미세조류 28 중량부, 다시마 12 중량부, 미역 12 중량부, 파래 10 중량부, 미강 13 중량부, 맥강 15 중량부, 율무 5 중량부 및 미네랄 5 중량부를 혼합한 것일 수 있다. 상기 미네랄(염기성 치환용량 96.9 meg/100 g)은 규소, 마그네슘, 카리, 나트륨, 바륨, 셀레늄, 알루미늄, 갈륨, 동, 지르코늄, 코발트, 아연, 인, 유황, 철, 칼슘, 망간, 티타늄, 붕소, 바나듐 및 니켈로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 해삼용 사료 조성물에서, 상기 미세조류는 클로렐라(Chlorella), 세네데스무스(Scenedesmus), 두날리엘라(Dunaliella), 스피룰리나(Spirulina), 난노클로롭시스(Nannochloropsis), 테트라셀미스(Tetraselmis), 케토세로스(Chaetoceros), 안키스트로데스무스(Ankistrodesmus), 파에도닥틸룸 트리코르누툼(Phaeodactylum tricornutum), 아이소크라이시스 갈바나(Isochrysis galbana) 및 헤마토코커스 플루비아리스(Heamatococcus pluvialis)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 클로렐라(Chlorella)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 클로렐라는 클로렐라 엘립소이데아(Chlorella ellipsoidea), 클로렐라 피레노이도사(Chlorella pyrenoidosa), 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris) 또는 클로렐라 레귤라리스(Chlorella regularis)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 해삼용 사료 조성물에서, 상기 미생물은

락토바실러스 파라파라기니스(Lactobacillus parafarraginis), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 하비넨시스(Lactobacillus harbinensis), 락토바실러스 페로렌스(Lactobacillus perolens ), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 바시노스테르쿠스(Lactobacillus vaccinostercus), 락토바실러스 락티스(Lactobacillus lactis), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 서브틸러스(Lactobacillus subtilus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 커바투스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 로도슈도모나스(Rhodopseudomonas), 바실러스 코아귤란스(Bacillus coagulans), 바실러스 폴리퍼멘티쿠스(Bacillus polyfermenticus), 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus), 비티도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 서모필러스(Bifidobacterium thermophilus), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 엔테로코커스 락티스(Enterococcus lactis), 엔테로코커스 훼시엄(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 서모필러스(Enterococcus thermophilus), 아세토박터 로바니엔시스(Acetobacter lovaniensis), 아세토박터 퍼옥시단스(Acetobacter peroxydans), 피키아 퍼멘탄스(Pichia fermentans), 캔디다 에타놀리카(Candida ethanolica), 사카로마이콥시스 스코에니(Saccharomycopsis schoenii), 아스퍼질러스(Aspergillus), 토룰라효모(Torula yeast) 및 사카로미세스(Saccharomyces)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 락토바실러스 파라파라기니스(Lactobacillus parafarraginis), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 하비넨시스(Lactobacillus harbinensis), 락토바실러스 페로렌스(Lactobacillus perolens ), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 바시노스테르쿠스(Lactobacillus vaccinostercus), 아세토박터 로바니엔시스(Acetobacter lovaniensis), 아세토박터 퍼옥시단스(Acetobacter peroxydans), 피키아 퍼멘탄스(Pichia fermentans), 캔디다 에타놀리카(Candida ethanolica) 및 사카로마이콥시스 스코에니(Saccharomycopsis schoenii)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 해삼용 사료 조성물은 해삼 양식시 바로 투여될 수도 있고, 또한 다른 사료 및 사료첨가제와 일정부분 혼합하여 투여될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명은 또한,

(a) 건조한 후 분쇄한 미세조류, 다시마, 미역, 파래, 미강, 맥강, 율무 및 미네랄을 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계;

(b) 상기 (a)단계의 준비한 혼합물에 미생물을 첨가한 후 발효하여 발효물을 제조하는 단계; 및

(c) 상기 (b)단계의 제조한 발효물을 동결건조한 후 분쇄하는 단계를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 해삼용 사료 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 해삼용 사료 조성물의 제조방법은 보다 구체적으로는

(a) 건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄한 미세조류 24~32 중량부, 다시마 10~14 중량부, 미역 10~14 중량부, 파래 8~12 중량부, 미강 10~16 중량부, 맥강 13~17 중량부, 율무 4~6 중량부 및 미네랄 4~6 중량부를 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계;

(b) 상기 (a)단계의 준비한 혼합물에 미생물을 첨가한 후 25~28℃에서 60~90 동안 발효하여 발효물을 제조하는 단계; 및

(c) 상기 (b)단계의 제조한 발효물을 -60~-80℃에서 동결건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄하는 단계를 포함할 수 있으며,

더욱 구체적으로는

(a) 건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄한 미세조류 28 중량부, 다시마 12 중량부, 미역 12 중량부, 파래 10 중량부, 미강 13 중량부, 맥강 15 중량부, 율무 5 중량부 및 미네랄 5 중량부를 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계;

(c) 상기 (b)단계의 제조한 발효물을 -70℃에서 동결건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄하는 단계를 포함할 수 있다.

이하, 본 발명의 실시예를 들어 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 해삼발효사료 제조

(a) 건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄한 클로렐라 28%, 다시마 12%, 미역 12%, 파래 10%, 미강 13%, 맥강 15%, 율무 5% 및 미네랄(염기성 치환용량 96.9 meg/100 g) 5%를 중량비율로 혼합하여 혼합물을 준비하였다.

(b) 상기 (a)단계의 준비한 혼합물에 12종의 미생물인 락토바실러스 파라파라기니스(Lactobacillus parafarraginis), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 하비넨시스(Lactobacillus harbinensis), 락토바실러스 페로렌스(Lactobacillus perolens), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 바시노스테르쿠스(Lactobacillus vaccinostercus), 아세토박터 로바니엔시스(Acetobacter lovaniensis), 아세토박터 퍼옥시단스(Acetobacter peroxydans), 피키아 퍼멘탄스(Pichia fermentans), 캔디다 에타놀리카(Candida ethanolica) 및 사카로마이콥시스 스코에니(Saccharomycopsis schoenii) 배양액을 첨가한 후 밀폐된 공간의 25~28℃에서 60~90 동안 발효하였다. 상기 미생물 중 효모를 제외한 배양액의 미생물 농도는 2.2 × 10⁸ cfu/㎖, 효모 배양액 내의 효모의 농도는 2.4 × 10⁴ cfu/㎖였다.

(c) 상기 (b)단계의 발효한 발효물을 -70℃에서 동결건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄하였다.

상기 (a)단계의 미네랄(염기성 치환용량 96.9 meg/100 g)의 종류는 하기 표 1과 같다.

미네랄의 종류

성 분	성 분	성 분
규소	갈륨	철
마그네슘	동	칼슘
카리	지르코늄	망간
나트륨	코발트	티타늄
바륨	아연	붕소
셀레늄	인	바나듐
알루미늄	유황	니켈

비교예 1: 해삼사료 제조

상기 제조예 1에서, (b) 및 (c) 단계를 생략하고 (a)단계만을 이용하여 사료를 제조하였는데, 구체적으로 건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄한 클로렐라 28%, 다시마 12%, 미역 12%, 파래 10%, 미강 13%, 맥강 15%, 율무 5% 및 미네랄(염기성 치환용량 96.9 meg/100 g) 5%를 중량비율로 혼합하여 사료를 제조하였다.

실시예 1: 클로렐라의 성분 함량

본 발명의 해삼 발효사료에 첨가되는 건조 클로렐라의 성분은 하기 표 2 및 3에 나타내었다. 클로렐라는 다양한 비타민류, 미네랄류 및 아미노산류가 골고루 포함되어 있을 뿐만 아니라 단백질 및 탄수화물 등을 함유하고 있어 그 질과 양이 다른 식물보다 월등하게 우수하다. 클로렐라는 또한 성장촉진인자라는 특수 물질이 함유되어 있어 공해를 이겨내는 식품이므로 건강의 태양이라고 극찬하기도 한다.

클로렐라의 일반성분

항목	함량(%)
조단백질	77.34%
조섬유	0.70%
조지방	0.52%
조회분	4.26%

클로렐라의 비타민, 미네랄 및 아미노산 함량

비타민류
성분	함량(100 g당)	성분	함량(100 g당)
비타민 C	35.7 ㎎	니코틴산	0.9 ㎎
엽산	72.8 ㎍	비타민 E	120.1 ㎎
비타민 A	791.6 re	비타민 B₁	5.0 ㎎
비타민 B₂	2.6 ㎎	비타민 B₆	0.3 ㎎
판토텐산	0.2 ㎎	비타민 K	2.3 ㎍
미네랄류
성분	함량(100 g당)	성분	함량(100 g당)
칼슘	965 ㎎	철	15.6 ㎎
아연	3.6 ㎎	나트륨	24.4 ㎎
칼륨	1,051 ㎎	마그네슘	259.9 ㎎
구리	0.1㎎	망간	2.7 ㎎
요오드	1.0 ㎎	크롬	28.0 ㎎
아미노산류
성분	함량(100 g당)	성분	함량(100 g당)
단백질	62 g	히스티딘	1,007 ㎎
라이신	2,235 ㎎	트레오닌	1,059 ㎎
페닐알라닌	1,078 ㎎	알라닌	2,024 ㎎
시스틴	2,330 ㎎	프롤린	1,136 ㎎
이소로이신	2,262 ㎎	티로신	820 ㎎
트립토판	295 ㎎	발린	821 ㎎
아스파틱산	1,806 ㎎	로이신	213 ㎎
세린	864 ㎎	메티오닌	77 ㎎
글리신	1,384 ㎎	알기닌	3,017 ㎎

실시예 2: 12종 유용 미생물의 내염성

염(NaCl) 농도별 균 성장 정도, 즉 균의 내염성을 확인하기 위하여 배지에 염 농도(‰)를 달리하여 제작하고 12종의 유용 미생물(제조예 1의 (b))을 주입하고 일정시간 배양한 후 흡광도(600 nm) 측정을 이용한 생균수 계수(counting), pH 측정, 시험관으로 옮겨 시각적으로 보이는 균 성장 상태를 사진 촬영하였다. 내염성 실험에 사용한 12종의 미생물의 종류와 우점도는 하기 표 4와 같다.

실험방법은 염(NaCl) 농도별 균 성장 정도를 확인하기 위하여 LB broth(Yeast extract 0.5%, Tryptone 1%) 100 ㎖에 3, 3.5, 4, 5, 10%에 해당하는 NaCl을 첨가하고 실험 하루 전 증폭되어진 12균주-혼합형 500 ㎕를 첨가하여 총 3일 배양한 후 흡광도(600 nm) 측정을 이용한 생균수 계수, pH 측정, 시험관으로 옮겨 시각적으로 보이는 균성장 상태를 사진 촬영하였다.

균주	우점도(%)
Lactobacillus parafarraginis	50
Lactobacillus paracasei subsp. Tolerans	20
Lactobacillus buchneri	7
Lactobacillus harbinensis	7
Lactobacillus perolens	2
Lactobacillus rhamnosus	2
Lactobacillus vaccinostercus	2
Acetobacter lovaniensis	7
Acetobacter peroxydans	3
Pichia fermentans	45
Candida ethanolica	45
Saccharomycopsis schoenii	10

각기 다른 염 농도구성의 배지에 12종의 미생물을 접종하고, 일정시간 배양시킨 후 측정된 생균수 계수 결과, 해수의 염 농도에 가까워질수록 높은 흡광도값을 나타내어 살아있는 미생물이 많다는 것을 확인하였다(도 1 및 2). 또한, 일정시간 배양시킨 후 생장환경 즉 배지의 pH 변화를 측정한 결과, 3%(pH 6.11), 3.5%(pH 5.98), 4%(pH 5.69), 5%(pH 6.04), 10%(pH 6.76) 염 농도변화에 따른 배지 초기의 pH 6.90으로부터 강하되는 결과를 백분율로 환산하여 표시한 결과, 정상적 성장이이뤄지고 호흡이 원활하다는 사실을 확인하였다(도 3). 상기와 같은 결과, 본 발명의 해삼용 사료 조성물의 제조에 첨가되는 12종의 유용 미생물은 해수의 염도에서도 생장이 원활하기 때문에, 해삼에 급여하기 위해 양식장에 투여하여도 유용 미생물이 살아있는 형태로 해삼이 급여할 수 있을 것이라 판단된다.

실시예 3: 클로렐라 전자현미경 사진 비교

클로렐라에 상기 제조예 1에서 (b)단계의 12종의 미생물을 접종하여 60~90일 동안 발효한 클로렐라와 발효 전 클로렐라의 상태를 전자현미경으로 비교 분석한 사진은 도 4와 같다. 발효 전 클로렐라는 세포질 벽이 단단하여 분쇄하여도 파괴되지 않아 섭취하여도 체내에 흡수가 잘 되지 않는다. 그러나 발효한 클로렐라는 발효 전 클로렐라와 같은 배율(100배, 200배 및 400배)로 똑같이 찍었을 때 입자가 10배 정도 크게 확대되어 보이는 것을 확인할 수 있는데, 이것은 클로렐라의 세포질이 파괴되어 확대된 것이다. 따라서 본 발명의 유용 미생물들을 이용하여 발효한 클로렐라는 발효하지 않은 클로렐라에 비해 섭취하였을 때 흡수가 더 용이하다는 것을 확인할 수 있었다(도 4).

실시예 4: 해삼 발효사료의 발효기간에 따른 성분분석

본 발명의 제조예 1의 (b)단계에서 준비한 혼합물에 12종의 미생물을 접종한 후 발효기간에 따른 pH, 염도 및 미생물 수는 하기 표 5와 같다. 그 결과, pH 및 염도는 발효기간이 길어질수록 낮아지는 경향을 나타내었고, 세균수는 발효 중간에 감소하다가 다시 증가하였고, 효모수는 발효 초기와 발효 말기에는 큰 차이를 나타내지 않았다.

해삼 발효사료의 발효기간에 따른 pH, 염도 및 미생물 수

수분함수율 35%	발효기간(일수)
수분함수율 35%	10(일)	20(일)	30(일)	40(일)	50(일)	60(일)
세균수	2.2 × 10⁸cfu/㎖	1.1 × 10⁸cfu/㎖	2.8 × 10⁴cfu/㎖	3.2 × 10⁴cfu/㎖	1.1 × 10⁷cfu/㎖	2.1 × 10⁷cfu/㎖
효 모	2.4 × 10⁴cfu/㎖	2.2 × 10⁴cfu/㎖	1.3× 10⁴cfu/㎖	1.4 × 10⁴cfu/㎖	1.6 × 10⁴cfu/㎖	2.1 × 10⁴cfu/㎖
pH	6.5	5.6	5.1	4.8	4.5	4.1
염 도(%)	10.6(%)	8.5(%)	6.5(%)	5.5(%)	5.3(%)	5.12(%)

실시예 5: 본 발명의 해삼 발효사료의 성분분석

본 발명의 제조예 1의 방법으로 제조된 해삼 발효사료의 성분을 분석한 결과는 하기 표 6과 같다. 그 결과 단백질 함량이 40%가 넘는 높은 함량을 나타내었고, 락토바실러스 속도 함유되어 있는 것을 확인할 수 있었다.

해삼 발효사료의 성분분석

성분	결과
수분	9.28%
조단백질	41.98%
조지방	6.43%
조섬유	2.07%
조회분	5.50%
락토바실러스속	2.1×10⁷ cfu/g

실시예 6: 해삼의 증체율 분석

평균 3 cm 이상의 해삼 10마리가 각각 넣어진 수조 3개를 준비하였다. 그 다음 상기 제조예 1 및 비교예 1의 사료를 4주간 투여하였고, 4주 후 수조의 해삼 평균 증체율(%), 평균 전장증가율(%)을 확인하였다. 그 결과 본 발명의 제조예 1의 방법으로 제조된 사료를 섭취한 해삼이 성장률이 비교예 1의 사료를 섭취한 해삼에 비해 더욱 향상되는 것을 확인할 수 있었다. 이것은 본 발명의 유용 미생물을 이용하여 발효한 해삼 사료 조성물은 섬유질로 싸여있어 흡수율이 낮은 클로렐라의 섬유질을 파쇄하여 흡수율을 높여 영양가치를 충분히 발휘하여 증체율이 향상된 것으로 판단된다(표 7).

해삼의 증체율

	평균증체율(%)	평균전장 증가율(%)
제조예 1	54	98
비교예 1	40	80

증체율 = (사료투여 후 무게 - 사료투여 전 무게)/(사료투여 전 무게)×100

전장증가율 = (사료투여 후 전장 - 사료투여 전 전장)/(사료투여 전 전장)×100

Claims

미세조류 24~32 중량부, 다시마 10~14 중량부, 미역 10~14 중량부, 파래 8~12 중량부, 미강 10~16 중량부, 맥강 13~17 중량부, 율무 4~6 중량부 및 미네랄 4~6 중량부가 혼합된 혼합물에 락토바실러스 파라파라기니스(Lactobacillus parafarraginis), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 하비넨시스(Lactobacillus harbinensis), 락토바실러스 페로렌스(Lactobacillus perolens), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 바시노스테르쿠스(Lactobacillus vaccinostercus), 아세토박터 로바니엔시스(Acetobacter lovaniensis), 아세토박터 퍼옥시단스(Acetobacter peroxydans), 피키아 퍼멘탄스(Pichia fermentans), 캔디다 에타놀리카(Candida ethanolica) 및 사카로마이콥시스 스코에니(Saccharomycopsis schoenii)의 미생물을 첨가하여 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하는 해삼용 사료 조성물.
삭제
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제1항에 있어서, 상기 미세조류는 클로렐라(Chlorella), 세네데스무스(Scenedesmus), 두날리엘라(Dunaliella), 스피룰리나(Spirulina), 난노클로롭시스(Nannochloropsis), 테트라셀미스(Tetraselmis), 케토세로스(Chaetoceros), 안키스트로데스무스(Ankistrodesmus), 파에도닥틸룸 트리코르누툼(Phaeodactylum tricornutum), 아이소크라이시스 갈바나(Isochrysis galbana) 및 헤마토코커스 플루비아리스(Heamatococcus pluvialis)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 해삼용 사료 조성물.
삭제
(a) 건조한 후 분쇄한 미세조류 24~32 중량부, 다시마 10~14 중량부, 미역 10~14 중량부, 파래 8~12 중량부, 미강 10~16 중량부, 맥강 13~17 중량부, 율무 4~6 중량부 및 미네랄 4~6 중량부를 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계;
(b) 상기 (a)단계의 준비한 혼합물에 락토바실러스 파라파라기니스(Lactobacillus parafarraginis), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 하비넨시스(Lactobacillus harbinensis), 락토바실러스 페로렌스(Lactobacillus perolens), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 바시노스테르쿠스(Lactobacillus vaccinostercus), 아세토박터 로바니엔시스(Acetobacter lovaniensis), 아세토박터 퍼옥시단스(Acetobacter peroxydans), 피키아 퍼멘탄스(Pichia fermentans), 캔디다 에타놀리카(Candida ethanolica) 및 사카로마이콥시스 스코에니(Saccharomycopsis schoenii)의 미생물을 첨가한 후 발효하여 발효물을 제조하는 단계; 및
(c) 상기 (b)단계의 제조한 발효물을 동결건조한 후 분쇄하는 단계를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 해삼용 사료 조성물의 제조방법.
제6항에 있어서,
(a) 건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄한 미세조류 24~32 중량부, 다시마 10~14 중량부, 미역 10~14 중량부, 파래 8~12 중량부, 미강 10~16 중량부, 맥강 13~17 중량부, 율무 4~6 중량부 및 미네랄 4~6 중량부를 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계;
(b) 상기 (a)단계의 준비한 혼합물에 락토바실러스 파라파라기니스(Lactobacillus parafarraginis), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 하비넨시스(Lactobacillus harbinensis), 락토바실러스 페로렌스(Lactobacillus perolens), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 바시노스테르쿠스(Lactobacillus vaccinostercus), 아세토박터 로바니엔시스(Acetobacter lovaniensis), 아세토박터 퍼옥시단스(Acetobacter peroxydans), 피키아 퍼멘탄스(Pichia fermentans), 캔디다 에타놀리카(Candida ethanolica) 및 사카로마이콥시스 스코에니(Saccharomycopsis schoenii)의 미생물을 첨가한 후 25~28℃에서 60~90분 동안 발효하여 발효물을 제조하는 단계; 및
(c) 상기 (b)단계의 제조한 발효물을 -60~-80℃에서 동결건조한 후 0.5~2 mm 크기로 분쇄하는 단계를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 해삼용 사료 조성물의 제조방법.