CN105981582A - 一种富硒北冬虫夏草的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富硒北冬虫夏草的培育方法，包括菌种分离、固体培养、转接、液体培养和栽培五个步骤。本发明所述富硒北冬虫夏草的培育方法培育富硒北冬虫夏草生长周期短、产量高、成活率高，得到的富硒北冬虫夏草硒含量高，具有较高的营养和药用价值。
Description
技术领域
本发明涉及栽培技术领域，尤其涉及一种富硒北冬虫夏草的培育方法。
背景技术
硒是人体必需的微量元素之一，它具有防癌、抗癌、抗氧化，保护机体免受活性氧自由基的损害，保护心脏，抗肝坏死，提高免疫力，延缓衰老等多种药理作用，被誉为“抗癌之王”。现代医学研究表明，人体多种疾病都与缺硒有关。随着人们对硒与免疫功能，心脑血管病以及防癌抗癌认识的普及，富硒保健食品的需求日益增多，为富硒保健食品的开发提供了广阔的市场。
北冬虫夏草是我国一种名贵的药用真菌，具有与天然冬虫夏草相似的药用的滋补功效。富硒北冬虫夏草是在培养基中添加微量元素硒，通过对菌丝在生长过程中的吸收，转化，结合将无机硒转化为有机硒富集在子实体中，生产出富硒北冬虫夏草。现有技术中的培育方法存在产量低、成活率低、硒含量低的缺点，培育出的富硒北冬虫夏草未能充分体现防癌、抗癌、增强免疫力、抗衰老等的作用。
发明内容
本发明提出了一种富硒北冬虫夏草的培育方法，培育富硒北冬虫夏草生长周期短、产量高、成活率高，得到的富硒北冬虫夏草硒含量高，具有较高的营养和药用价值。
本发明提出了一种富硒北冬虫夏草的培育方法，包括以下步骤：
第一步：将北冬虫夏草子实体用75％酒精灭菌2-5min，然后用灭菌水清洗后获得菌种；
第二步：按重量份将50-100份马铃薯切成片后加入300-500份水中煮沸20-50min，然后用多层纱布过滤，在滤液中加入5-10份琼脂、3-5份蛋白胨、3-5份葡萄糖、2-3份蔗糖、1-4份红糖、1-2份蚕蛹粉、0.1-0.3份磷酸二氢钾、0.05-0.1份硫酸镁、0.02-0.05份硫酸锌、3-5份甘草、1-3份五味子、5-10份硒酵母，其中，硒酵母中硒的质量分数为3-5‰，加热至琼脂完全熔化后，加入热水补足300-500份，然后分装在试管内，并用棉塞塞紧试管口，然后放入灭菌锅中，在121-125℃下灭菌25-28min，灭菌结束后趁热将试管倾斜，冷却后获得固体培养基；
第三步、将第一步中获得的菌种接种在第二步中获得的固体培养基中，在20-22℃恒温箱中培养15-20天，移出恒温箱，在22-25℃的室内散射光照4-5天，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草获得母种；
第四步：按重量份在1000份水中加入20-25份葡萄糖、1-3份果胶、2-5份淀粉、12-15份蛋白胨、0.3-1份磷酸二氢钾、0.3-1份硫酸镁、16-20份硒酵母、1-4份红糖、1-2份蚕蛹粉、0.05-0.1份硫酸铁、0.05-0.1份硫酸锌、0.01-0.05份硫酸铁、3-5份甘草、1-3份五味子、2-5份刺五加、0.01-0.03份维生素，其中，硒酵母中硒的含量为3-5‰，煮沸15-20min，冷却至室温后用多层纱布过滤，将滤液装入盐水瓶中，用棉塞塞紧后在120℃保持灭菌40min，冷却至室温后获得液体培养基；将第三步中获得的母种转接到液体培养基中，然后将液体培养基放入往复式摇床上，在112-118r/min、20-22℃下震动培养3-7天后即成液体菌种；
第五步：按重量份在培养瓶中加入30-45份水、20-35份大米、5-8份土豆、3-8份豆饼粉、5-10份蚕蛹粉、2-5份胡萝卜、0.02-0.05份维生素B1、0.01-0.03份硝酸钠，搅拌均匀后得到培养基，将培养基放入灭菌锅中，在120-122℃条件下灭菌35-38min，然后在接种箱中将液体菌种接种在培养基中，然后送入培养室中，在18-20℃下避光培养10天，在培养瓶的封口处扎孔透气，然后调节温度为22-25℃培育50-60天后得到所述富硒北冬虫夏草。
优选地，在第二步中，按重量份将100份马铃薯切成片后加入400份水中煮沸35min，然后用多层纱布过滤，在滤液中加入7份琼脂、3.5份蛋白胨、4份葡萄糖、2.6份蔗糖、2.5份红糖、1.2份蚕蛹粉、0.18份磷酸二氢钾、0.07份硫酸镁、0.03份硫酸锌、3.7份甘草、2.2份五味子、8份硒酵母，其中，硒酵母中硒的质量分数为4‰，加热至琼脂完全熔化后，加入热水补足400份，然后分装在试管内，并用棉塞塞紧试管口，然后放入灭菌锅中，在121℃下灭菌26min，灭菌结束后趁热将试管倾斜，冷却后获得固体培养基。
优选地，在第四步中，按重量份在1000份水中加入23份葡萄糖、1.8份果胶、3份淀粉、13.6份蛋白胨、0.7份磷酸二氢钾、0.6份硫酸镁、17份硒酵母、1.8份红糖、1.4份蚕蛹粉、0.06份硫酸铁、0.07份硫酸锌、0.03份硫酸铁、3.8份甘草、2.2份五味子、4.3份刺五加、0.017份维生素，其中，硒酵母中硒的含量为3‰，煮沸20min，冷却至室温后用多层纱布过滤，将滤液装入盐水瓶中，用棉塞塞紧后在120℃保持灭菌40min，冷却至室温后获得液体培养基；将第三步中获得的母种转接到液体培养基中，然后将液体培养基放入往复式摇床上，在115r/min、21℃下震动培养6天后即成液体菌种。
优选地，在第五步中，按重量份在培养瓶中加入36份水、25份大米、6份土豆、7份豆饼粉、6份蚕蛹粉、3.4份胡萝卜、0.036份维生素B1、0.02份硝酸钠，搅拌均匀后得到培养基，将培养基放入灭菌锅中，在121℃条件下灭菌36min，然后在接种箱中将液体菌种接种在培养基中，然后送入培养室中，在19℃下避光培养10天，在培养瓶的封口处扎孔透气，然后调节温度为25℃培育55天后得到所述富硒北冬虫夏草。
本发明所述富硒北冬虫夏草的培育方法培育富硒北冬虫夏草生长周期短、产量高、成活率高，得到的富硒北冬虫夏草硒含量高，具有较高的营养和药用价值。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明所述技术方案做出详细说明。
实施例1
一种富硒北冬虫夏草的培育方法，包括以下步骤：
第一步：将北冬虫夏草子实体用75％酒精灭菌2min，然后用灭菌水清洗后获得菌种；
第二步：按重量份将100份马铃薯切成片后加入300份水中煮沸50min，然后用多层纱布过滤，在滤液中加入5份琼脂、5份蛋白胨、3份葡萄糖、3份蔗糖、1份红糖、2份蚕蛹粉、0.1份磷酸二氢钾、0.1份硫酸镁、0.02份硫酸锌、5份甘草、1份五味子、10份硒酵母，其中，硒酵母中硒的质量分数为3‰，加热至琼脂完全熔化后，加入热水补足300份，然后分装在试管内，并用棉塞塞紧试管口，然后放入灭菌锅中，在121℃下灭菌28min，灭菌结束后趁热将试管倾斜，冷却后获得固体培养基；
第三步、将第一步中获得的菌种接种在第二步中获得的固体培养基中，在20℃恒温箱中培养20天，移出恒温箱，在22℃的室内散射光照5天，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草获得母种；
第四步：按重量份在1000份水中加入20份葡萄糖、3份果胶、2份淀粉、15份蛋白胨、0.3份磷酸二氢钾、1份硫酸镁、16份硒酵母、4份红糖、1份蚕蛹粉、0.1份硫酸铁、0.05份硫酸锌、0.05份硫酸铁、3份甘草、3份五味子、2份刺五加、0.03份维生素，其中，硒酵母中硒的含量为3‰，煮沸20min，冷却至室温后用多层纱布过滤，将滤液装入盐水瓶中，用棉塞塞紧后在120℃保持灭菌40min，冷却至室温后获得液体培养基；将第三步中获得的母种转接到液体培养基中，然后将液体培养基放入往复式摇床上，在112r/min、22℃下震动培养7天后即成液体菌种；
第五步：按重量份在培养瓶中加入30份水、35份大米、5份土豆、3-8份豆饼粉、10份蚕蛹粉、2份胡萝卜、0.05份维生素B1、0.01份硝酸钠，搅拌均匀后得到培养基，将培养基放入灭菌锅中，在122℃条件下灭菌35min，然后在接种箱中将液体菌种接种在培养基中，然后送入培养室中，在18℃下避光培养10天，在培养瓶的封口处扎孔透气，然后调节温度为25℃培育50天后得到所述富硒北冬虫夏草。
实施例2
一种富硒北冬虫夏草的培育方法，包括以下步骤：
第一步：将北冬虫夏草子实体用75％酒精灭菌5min，然后用灭菌水清洗后获得菌种；
第二步：按重量份将50份马铃薯切成片后加入500份水中煮沸20min，然后用多层纱布过滤，在滤液中加入10份琼脂、3份蛋白胨、5份葡萄糖、2份蔗糖、4份红糖、1份蚕蛹粉、0.3份磷酸二氢钾、0.05份硫酸镁、0.05份硫酸锌、3份甘草、3份五味子、5份硒酵母，其中，硒酵母中硒的质量分数为5‰，加热至琼脂完全熔化后，加入热水补足500份，然后分装在试管内，并用棉塞塞紧试管口，然后放入灭菌锅中，在125℃下灭菌25min，灭菌结束后趁热将试管倾斜，冷却后获得固体培养基；
第三步、将第一步中获得的菌种接种在第二步中获得的固体培养基中，在22℃恒温箱中培养15天，移出恒温箱，在25℃的室内散射光照4天，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草获得母种；
第四步：按重量份在1000份水中加入25份葡萄糖、1份果胶、5份淀粉、12份蛋白胨、1份磷酸二氢钾、0.3份硫酸镁、20份硒酵母、1份红糖、2份蚕蛹粉、0.05份硫酸铁、0.1份硫酸锌、0.01份硫酸铁、5份甘草、1份五味子、5份刺五加、0.01份维生素，其中，硒酵母中硒的含量为5‰，煮沸15min，冷却至室温后用多层纱布过滤，将滤液装入盐水瓶中，用棉塞塞紧后在120℃保持灭菌40min，冷却至室温后获得液体培养基；将第三步中获得的母种转接到液体培养基中，然后将液体培养基放入往复式摇床上，在118r/min、20℃下震动培养3天后即成液体菌种；
第五步：按重量份在培养瓶中加入45份水、20份大米、5-8份土豆、8份豆饼粉、5份蚕蛹粉、5份胡萝卜、0.02份维生素B1、0.03份硝酸钠，搅拌均匀后得到培养基，将培养基放入灭菌锅中，在120℃条件下灭菌38min，然后在接种箱中将液体菌种接种在培养基中，然后送入培养室中，在20℃下避光培养10天，在培养瓶的封口处扎孔透气，然后调节温度为22℃培育60天后得到所述富硒北冬虫夏草。
实施例3
一种富硒北冬虫夏草的培育方法，包括以下步骤：
第一步：将北冬虫夏草子实体用75％酒精灭菌4min，然后用灭菌水清洗后获得菌种；
第二步：按重量份将100份马铃薯切成片后加入400份水中煮沸35min，然后用多层纱布过滤，在滤液中加入7份琼脂、3.5份蛋白胨、4份葡萄糖、2.6份蔗糖、2.5份红糖、1.2份蚕蛹粉、0.18份磷酸二氢钾、0.07份硫酸镁、0.03份硫酸锌、3.7份甘草、2.2份五味子、8份硒酵母，其中，硒酵母中硒的质量分数为4‰，加热至琼脂完全熔化后，加入热水补足400份，然后分装在试管内，并用棉塞塞紧试管口，然后放入灭菌锅中，在121℃下灭菌26min，灭菌结束后趁热将试管倾斜，冷却后获得固体培养基；
第三步、将第一步中获得的菌种接种在第二步中获得的固体培养基中，在21℃恒温箱中培养18天，移出恒温箱，在23℃的室内散射光照4天，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草获得母种；
第四步：按重量份在1000份水中加入23份葡萄糖、1.8份果胶、3份淀粉、13.6份蛋白胨、0.7份磷酸二氢钾、0.6份硫酸镁、17份硒酵母、1.8份红糖、1.4份蚕蛹粉、0.06份硫酸铁、0.07份硫酸锌、0.03份硫酸铁、3.8份甘草、2.2份五味子、4.3份刺五加、0.017份维生素，其中，硒酵母中硒的含量为3‰，煮沸20min，冷却至室温后用多层纱布过滤，将滤液装入盐水瓶中，用棉塞塞紧后在120℃保持灭菌40min，冷却至室温后获得液体培养基；将第三步中获得的母种转接到液体培养基中，然后将液体培养基放入往复式摇床上，在115r/min、21℃下震动培养6天后即成液体菌种；
第五步：按重量份在培养瓶中加入36份水、25份大米、6份土豆、7份豆饼粉、6份蚕蛹粉、3.4份胡萝卜、0.036份维生素B1、0.02份硝酸钠，搅拌均匀后得到培养基，将培养基放入灭菌锅中，在121℃条件下灭菌36min，然后在接种箱中将液体菌种接种在培养基中，然后送入培养室中，在19℃下避光培养10天，在培养瓶的封口处扎孔透气，然后调节温度为25℃培育55天后得到所述富硒北冬虫夏草。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步：将北冬虫夏草子实体用75％酒精灭菌2-5min，然后用灭菌水清洗后获得菌种；
第二步：按重量份将50-100份马铃薯切成片后加入300-500份水中煮沸20-50min，然后用多层纱布过滤，在滤液中加入5-10份琼脂、3-5份蛋白胨、3-5份葡萄糖、2-3份蔗糖、1-4份红糖、1-2份蚕蛹粉、0.1-0.3份磷酸二氢钾、0.05-0.1份硫酸镁、0.02-0.05份硫酸锌、3-5份甘草、1-3份五味子、5-10份硒酵母，其中，硒酵母中硒的质量分数为3-5‰，加热至琼脂完全熔化后，加入热水补足300-500份，然后分装在试管内，并用棉塞塞紧试管口，然后放入灭菌锅中，在121-125℃下灭菌25-28min，灭菌结束后趁热将试管倾斜，冷却后获得固体培养基；
第三步、将第一步中获得的菌种接种在第二步中获得的固体培养基中，在20-22℃恒温箱中培养15-20天，移出恒温箱，在22-25℃的室内散射光照4-5天，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草获得母种；
第四步：按重量份在1000份水中加入20-25份葡萄糖、1-3份果胶、2-5份淀粉、12-15份蛋白胨、0.3-1份磷酸二氢钾、0.3-1份硫酸镁、16-20份硒酵母、1-4份红糖、1-2份蚕蛹粉、0.05-0.1份硫酸铁、0.05-0.1份硫酸锌、0.01-0.05份硫酸铁、3-5份甘草、1-3份五味子、2-5份刺五加、0.01-0.03份维生素，其中，硒酵母中硒的含量为3-5‰，煮沸15-20min，冷却至室温后用多层纱布过滤，将滤液装入盐水瓶中，用棉塞塞紧后在120℃保持灭菌40min，冷却至室温后获得液体培养基；将第三步中获得的母种转接到液体培养基中，然后将液体培养基放入往复式摇床上，在112-118r/min、20-22℃下震动培养3-7天后即成液体菌种；
第五步：按重量份在培养瓶中加入30-45份水、20-35份大米、5-8份土豆、3-8份豆饼粉、5-10份蚕蛹粉、2-5份胡萝卜、0.02-0.05份维生素B1、0.01-0.03份硝酸钠，搅拌均匀后得到培养基，将培养基放入灭菌锅中，在120-122℃条件下灭菌35-38min，然后在接种箱中将液体菌种接种在培养基中，然后送入培养室中，在18-20℃下避光培养10天，在培养瓶的封口处扎孔透气，然后调节温度为22-25℃培育50-60天后得到所述富硒北冬虫夏草。
2.根据权利要求1所述富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征在于，在第二步中，按重量份将100份马铃薯切成片后加入400份水中煮沸35min，然后用多层纱布过滤，在滤液中加入7份琼脂、3.5份蛋白胨、4份葡萄糖、2.6份蔗糖、2.5份红糖、1.2份蚕蛹粉、0.18份磷酸二氢钾、0.07份硫酸镁、0.03份硫酸锌、3.7份甘草、2.2份五味子、8份硒酵母，其中，硒酵母中硒的质量分数为4‰，加热至琼脂完全熔化后，加入热水补足400份，然后分装在试管内，并用棉塞塞紧试管口，然后放入灭菌锅中，在121℃下灭菌26min，灭菌结束后趁热将试管倾斜，冷却后获得固体培养基。
3.根据权利要求1所述富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征在于，在第四步中，按重量份在1000份水中加入23份葡萄糖、1.8份果胶、3份淀粉、13.6份蛋白胨、0.7份磷酸二氢钾、0.6份硫酸镁、17份硒酵母、1.8份红糖、1.4份蚕蛹粉、0.06份硫酸铁、0.07份硫酸锌、0.03份硫酸铁、3.8份甘草、2.2份五味子、4.3份刺五加、0.017份维生素，其中，硒酵母中硒的含量为3‰，煮沸20min，冷却至室温后用多层纱布过滤，将滤液装入盐水瓶中，用棉塞塞紧后在120℃保持灭菌40min，冷却至室温后获得液体培养基；将第三步中获得的母种转接到液体培养基中，然后将液体培养基放入往复式摇床上，在115r/min、21℃下震动培养6天后即成液体菌种。
4.根据权利要求1-3中任一项所述富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征在于，在第五步中，按重量份在培养瓶中加入36份水、25份大米、6份土豆、7份豆饼粉、6份蚕蛹粉、3.4份胡萝卜、0.036份维生素B1、0.02份硝酸钠，搅拌均匀后得到培养基，将培养基放入灭菌锅中，在121℃条件下灭菌36min，然后在接种箱中将液体菌种接种在培养基中，然后送入培养室中，在19℃下避光培养10天，在培养瓶的封口处扎孔透气，然后调节温度为25℃培育55天后得到所述富硒北冬虫夏草。
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