CN105943684B - 复方鱼腥草糖浆药物的检测方法 - Google Patents

复方鱼腥草糖浆药物的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105943684B
CN105943684B CN201610297742.4A CN201610297742A CN105943684B CN 105943684 B CN105943684 B CN 105943684B CN 201610297742 A CN201610297742 A CN 201610297742A CN 105943684 B CN105943684 B CN 105943684B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
plus
reference substance
weight portion
medicine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610297742.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105943684A (zh
Inventor
张树乘
赵伟
郑秀娟
耿宝星
程淑云
郭婷婷
孙莉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HEILONGJIANG ZHONGGUI PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
HEILONGJIANG ZHONGGUI PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HEILONGJIANG ZHONGGUI PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical HEILONGJIANG ZHONGGUI PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN201610297742.4A priority Critical patent/CN105943684B/zh
Publication of CN105943684A publication Critical patent/CN105943684A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105943684B publication Critical patent/CN105943684B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/78—Saururaceae (Lizard's-tail family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/19—Acanthaceae (Acanthus family)
    • A61K36/195—Strobilanthes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/31—Brassicaceae or Cruciferae (Mustard family), e.g. broccoli, cabbage or kohlrabi
    • A61K36/315—Isatis, e.g. Dyer's woad
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/35—Caprifoliaceae (Honeysuckle family)
    • A61K36/355—Lonicera (honeysuckle)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A61K36/539—Scutellaria (skullcap)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/63—Oleaceae (Olive family), e.g. jasmine, lilac or ash tree
    • A61K36/634—Forsythia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明涉及中药领域，具体涉及一种复方鱼腥草糖浆。名称为复方鱼腥草糖浆药物及其治疗肾炎的制药用途及检测方法。该药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份。该药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得。所述复方鱼腥草糖浆可用于治疗肾炎和系膜增生性肾小球肾炎。本发明还提供了采用高效液相色谱法和气相色谱法对复方鱼腥草糖浆进行质量检测的方法。

Description

复方鱼腥草糖浆药物的检测方法
技术领域
本发明涉及中药领域，具体涉及复方鱼腥草糖浆药物及其治疗肾炎的制药用途及检测方法。
背景技术
系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis，MsPGN)是根据光镜所见的一种病理形态学诊断的肾炎，是一组以弥漫性肾小球系膜细胞增生及不同程度系膜基质增多为主要特征的肾小球疾病。
系膜增生性肾小球肾炎是根据光镜所见的一种病理形态学诊断的肾炎，是一组以弥漫性肾小球系膜细胞增生及不同程度系膜基质增多为主要特征的肾小球疾病。1977年世界卫生组织正式将其列为一种原发性肾小球肾炎病理类型。
系膜增生性肾炎可发生于任何年龄，年龄较大的儿童和青年发病率较高，高峰年龄为16～30岁。男性病例略高于女性。系膜增生性肾小球肾炎多数起病隐匿，常见上呼吸道感染为前驱症状，其发生率为30.8%～40.3%。系膜增生性肾小球肾炎的特点是临床表现多样化，几乎各种原发性肾小球肾炎的发病形式及临床表现均可见于其中。轻者主要表现为无症状性血尿和（或）蛋白尿及慢性肾小球肾炎，重者可表现为肾病综合征。患者中30%～100%的病例有镜下血尿，20%～30%有反复发作的肉眼血尿；蛋白尿从微量到大量或肾病综合征表现者均有，多数患者表现为中等量选择性蛋白尿；30%病例出现轻度高血压，发病初期绝大多数肾功能正常，后期有10%～25%的病例出现肾功能减退。此外，部分病人有腰痛，可能与肉眼血尿有关。系膜增生性肾小球肾炎的临床表现与病理改变有明显关系，如显著弥漫性系膜增生和典型的肾病综合征病例，其发展倾向于持续性蛋白尿和进行性肾功能不全。系膜增生伴局灶节段性硬化者，临床上也易发生肾功能不全。而部分系膜增生不明显的病人，其病变进展缓慢预后较好。
MsPGN是根据光镜所见的一种病理形态学诊断的肾炎，是以弥漫性肾小球系膜细胞增生及不同程度系膜基质增多为主要特征，是一种危害人类健康的多发性、难治性疾病。目前现代医学对MsPGN尚无特效药物。
现有文献报道，采用中医药疗法，对系膜增生性肾小球肾炎的治疗，取得了一定的效果，比如采用升降散、益肾饮合雷公藤多苷、祛风通络方、芪益强肾饮、以及黄芪、丹参等，对系膜增生性肾小球肾炎均具有一定的疗效。
本发明提供的复方鱼腥草糖浆药物可以用于治疗系膜增生性肾小球肾炎。经研究表明，本发明药物对系膜增生性肾小球肾炎具有较好的治疗效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种复方鱼腥草糖浆的药物。
本发明的另一目的是提供该复方鱼腥草糖浆药物的制备方法。
本发明还提供了该复方鱼腥草糖浆药物的制药新用途。
本发明还提供了该复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法。
本发明的目的是由以下方式实现的：
一种复方鱼腥草糖浆药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份。
所述的复方鱼腥草糖浆药物，采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得。
所述的复方鱼腥草糖浆药物可用于治疗肾炎。
所述的复方鱼腥草糖浆药物也可用于治疗系膜增生性肾小球肾炎。
一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得，采用如下质量检测方法中的任意一种或两种对复方鱼腥草糖浆药物进行质量检测：采用高效液相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的7-甲氧基黄芩素进行含量测定或/和采用气相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定。
一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得，采用高效液相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的7-甲氧基黄芩素进行含量测定：
（1）色谱条件：采用Hypersil Ds色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的乙腈-水；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min-1；进样量：5～20μL；
（2）对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
上述采用高效液谱法对7-甲氧基黄芩素进行含量测定的方法，优选方法和步骤如下：
（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得，还可以采用气相色谱法对棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，0.5～1.5mL·min-1；氢气，30～50mL·min-1；空气，300～500mL·min-1；分流比：5～15：1；进样口温度：240～260℃，检测器温度：290～310℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为内标溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取，置容量瓶中，精密加入内标溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
（4）对照品溶液的制备：精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯及反-反金合欢醇的对照品储备溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入气相色谱仪，进行检测。
所述的复方鱼腥草糖浆药物，采用气相色谱法对棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定，优选方法和步骤如下：
（1）色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·min-1；氢气，40mL·min-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
（4）对照品溶液的制备：精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯0.301mg·mL-1及反-反金合欢醇0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
为了更好地理解本发明，发明人提供以下研究资料，说明本发明的技术效果，但下述实验用于进一步说明但不限于本发明。
实验一：本发明药物治疗系膜增生性肾小球肾炎的实验研究
系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）是根据光镜所见的一种病理形态学诊断的肾炎，以系膜细胞增殖、细胞外基质的积聚为主的病理改变为特征。
MsPGN的这种病理改变是多种肾小球疾病共同的病理改变，也是导致肾小球硬化，最终使疾病向肾功能衰竭转化的重要环节。因此，有效抑制系膜细胞增生和基质的积聚成为治疗MsPGN最重要的环节。
本研究拟建立MsPGN大鼠模型通过观察本发明药物对肾组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和转化生长因子β1（TGF-β1）的表达水平的影响来探索其作用机制。
1材料与方法
1.1实验动物
清洁级7周龄Wistar大鼠80只，雌雄各半，体重（180±20）g。由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。
1.2实验药物
本发明药物：处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。制备方法：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
对比药物A：处方：黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。制备方法：取黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
对比药物B：处方：鱼腥草100g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。制备方法：取鱼腥草、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
对比药物C：处方：鱼腥草100g、黄芩25g、连翘10g、金银花10g。制备方法：取鱼腥草、黄芩、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
对比药物D：处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、金银花10g。制备方法：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
对比药物E：处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g。制备方法：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
弗氏完全佐剂（CFA）、牛血清白蛋白（BSA）、大肠杆菌内毒素（LPS），均由sigma公司提供。
1.3实验试剂
24h尿蛋白定量试剂盒（CBB法）、尿素氮（BUN）试剂盒（二乙酰一肟法）、血肌酐（Scr）试剂盒（苦味酸除蛋白法），均由南京建成生物工程研究所提供。α-SMA试剂盒、TGF-β1试剂盒、即用型SABC免疫组化试剂盒、DAB显色剂，均由武汉博士德公司提供。
2实验方法
2.1分组方法大鼠购进后，80只Wistar大鼠雌雄分笼适应性饲养1周后，随机分为8组，每组10只，雌雄各半，每笼5只，雌雄分开。即空白对照组10只、病理模型组10只、对比药物A组10只、对比药物B组10只、对比药物C组10只、对比药物D组10只、对比药物E组10只、本发明药物组10只。
2.2造模方法
本实验采用张五星等改进型慢性血清病肾炎模型（张五星，陈香美，魏日胞，等.大鼠慢性血清病肾炎模型的改进研究[J].中国比较医学杂志.2003.13（3）：138-142）。病理模型组、对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组、对比药物D组、对比药物E组、本发明药物组，按照文献方法造模。用10%水合氯醛腹腔麻醉切除左侧肾脏后缝合。1周后3mgBSA与完全弗氏佐剂混匀双后足垫注射，然后每隔2周重复皮下多点注射1次。足垫注射BSA后2周开始隔日饮饲含0.1%BSA的6mmol/L盐酸酸化水。BSA免疫注射3次后目内眦取血，双向免疫扩散法测血清抗BSA抗体滴度。抗体滴度达到1∶16后，开始每日腹腔注射3mg的BSA，3周后，腹腔注射100μg的LPS1次。空白对照组麻醉后切开背部暴露左肾并缝合，但不切除肾脏，之后用与造模大鼠相同方法，从足垫、腹腔、皮下分点注射相应量的生理盐水。全部大鼠于正式免疫10周后处死取肾组织。
2.3给药方法
采用直接灌胃方法，于实验第7周开始为期4周的治疗，每日1次。对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组、对比药物D组、对比药物E组、本发明药物组分别予相应药物，人与大鼠用药剂量按人临床每公斤体重常用量的6倍换算，灌药量10mL/（kg·d）。空白对照组、病理模型组予相应生理盐水。
2.4标本采集与制备
2.4.1尿液标本于治疗结束前1d将各组大鼠分别单独置于代谢笼中，收集24h全部尿液。
2.4.2血清标本于治疗结束次日上午将大鼠用10%水合氯醛腹腔麻醉，腹主动脉取血6mL，置4℃冰箱约3h，血液凝固后3000r/min，离心15min，取上层血清，置于-20℃冰箱备测。
2.4.3肾组织标本于治疗结束次日腹主动脉取血后立刻处死大鼠，剖取右侧肾组织，大体观察后，从肾门将肾脏组织切成两半，用10%中性甲醛溶液固定，75%～100%乙醇逐步脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，切片（厚度4μm）。
2.5观测指标及方法
2.5.1尿液标本
①尿红细胞的检测：采用显微镜法检测光镜下红细胞数量。每个标本选取3个不同视野，取其平均值；
②24h尿蛋白的检测：用考马斯亮蓝（CBB）法测定24h尿蛋白含量。
2.5.2血液标本肾功能指标检测：取血清，按试剂盒说明书，分别用苦味酸除蛋白法测定血肌酐（Scr）含量，用二乙酰一肟法测定血尿素氮（BUN）含量。
2.6免疫组织化学染色半定量分析
采用Motic Med6.0数码医学图像分析系统，在400倍光镜下测量每个肾小球的面积和阳性染色面积。用阳性染色面积和肾小球面积的百分比表示该成分的相对含量。4组大鼠每组选取6只大鼠标本，每个标本测量10个肾小球进行半定量分析。
2.7统计学处理
使用SPSS13.0统计软件包对数据进行统计分析，所有数据均用（ ±s）表示，组间比较采用单因素方差分析。
3实验结果
3.1尿液检测结果
3.1.1红细胞定量测定见表1-1。
表1-1 各组大鼠尿红细胞和24h尿蛋白定量比较（±s）
注：与空白对照组比较，1)P＜0.01；
与病理模型组比较，2)P＜0.01；
与本发明药物比较，3)P＜0.05。
表1提示，本发明药物能明显减少MsPGN大鼠红细胞，对比药物A组至对比药物E组略有减少MsPGN大鼠红细胞的作用，但不明显。
3.1.2 24h尿蛋白定量测定见表1-1。
表1提示，本发明药物能明显减少MsPGN大鼠尿蛋白，对比药物A至对比药物E略有减少MsPGN大鼠尿蛋白的作用，但不明显。
3.2尿素氮和血肌酐检测见表1-2。
表1-2各组大鼠尿素氮和血肌酐比较（±s）mmol/L
注：与空白对照组比较，1)P＜0.01；
与病理模型组比较，2)P＜0.01；
与本发明药物比较，3)P＜0.05。
表1-2提示，本发明药物对MsPGN大鼠肾功能有明显的保护作用，对比药物A组至对比药物E组对MsPGN大鼠肾功能略有保护作用，但不明显。
3.3免疫组化检测结果
3.3.1对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达的影响
结果显示：
空白对照组：α-SMA主要在小动脉壁表达，肾小球无明显阳性表达（见图1）。
病理模型组：肾小球系膜区内可见大量α-SMA阳性表达，尤其以肾小球血管极多见，同时在肾间质也有表达（见图2）。
对比药物A组：肾小球系膜区内可见大量α-SMA阳性表达，尤其以肾小球血管极多见，同时在肾间质也有表达（见图3）
对比药物B组：肾小球系膜区内可见大量α-SMA阳性表达，尤其以肾小球血管极多见，同时在肾间质也有表达（见图4）
对比药物C组：肾小球系膜区内可见大量α-SMA阳性表达，尤其以肾小球血管极多见，同时在肾间质也有表达（见图5）
对比药物D组：肾小球系膜区内可见大量α-SMA阳性表达，尤其以肾小球血管极多见，同时在肾间质也有表达（见图6）
对比药物E组：肾小球系膜区内可见大量α-SMA阳性表达，尤其以肾小球血管极多见，同时在肾间质也有表达（见图7）
本发明药物组：α-SMA在肾小球的表达较病理模型组有明显减少（见图8）。
免疫组化半定量分析（见表1-3）表明，与空白对照组比较，病理模型组的肾小球α-SMA相对含量显著增高（P＜0.01）。与病理模型组比较，本发明药物组的肾小球α-SMA相对含量显著降低（P＜0.01）。对比药物A组至对比药物E组的肾小球α-SMA相对含量没有明显降低。
3.3.2对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达的影响
结果显示：
空白对照组：TGF-β1肾小球有微弱的表达，而在肾间质的表达较在肾小球内为多（见图9）。
病理模型组：可见到TGF-β1大量表达在毛细血管袢及系膜区，同时在肾间质的表达亦明显增多，部分呈团块状（见图10）。
对比药物A组：可见到TGF-β1大量表达在毛细血管袢及系膜区，同时在肾间质的表达亦明显增多，部分呈团块状（见图11）。
对比药物B组：可见到TGF-β1大量表达在毛细血管袢及系膜区，同时在肾间质的表达亦明显增多，部分呈团块状（见图12）。
对比药物C组：可见到TGF-β1大量表达在毛细血管袢及系膜区，同时在肾间质的表达亦明显增多，部分呈团块状（见图13）。
对比药物D组：可见到TGF-β1大量表达在毛细血管袢及系膜区，同时在肾间质的表达亦明显增多，部分呈团块状（见图14）。
对比药物E组：可见到TGF-β1大量表达在毛细血管袢及系膜区，同时在肾间质的表达亦明显增多，部分呈团块状（见图15）。
本发明药物组：TGF-β1在肾小球的表达与病理模型组相比明显减少（见图16）。
免疫组化半定量分析（见表1-3）表明，与空白对照组比较，病理模型组的肾小球TGF-β1相对含量显著增高（P＜0.01）。与病理模型组比较，本发明药物组的肾小球TGF-β1相对含量均显著降低（P＜0.01），对比药物A组至对比药物E组肾小球TGF-β1相对含量没有明显降低。
表1-3半定量分析各组大鼠肾组织中α-SMA和TGF-β1的相对含量比较（±s，％）
注：与空白对照组比较，1)P＜0.01；
与病理模型组比较，2)P＜0.01；
与本发明药物比较，3)P＜0.05。
4讨论
本实验研究选用尿红细胞、尿蛋白作为反映MsPGN大鼠模型肾脏损害程度的指标；血肌酐、尿素氮作为评价肾功能的指标。结果显示，对本发明药物能有效抑制肾小球系膜细胞增生，减轻尿红细胞、尿蛋白，降低血肌酐、尿素氮，减缓肾功能的损害，而对比药物A组至对比药物E组的作用效果则不明显，有的几乎无效。
α-SMA是肌成纤维细胞的标志物，其表达可反应系膜细胞的异常活化。目前有报道在人类肾小球肾炎中，肾小球周围α-SMA的表达与病变严重程度密切相关。α-SMA是肌成纤维细胞的主要标志物之一，其表达可反应系膜细胞的异常活化。这些发现提示炎症硬化因子可能在肾小球疾病的进展过程中起了重要的作用。TGF-β1是体内最强和最广泛的影响纤维产生的介质之一，对细胞的生长、分化、细胞外基质的聚集和免疫反应有着广泛、潜在的影响。同时，TGF-β1也是一种纤维化因子，它的过度表达在肾小球疾病细胞外基质的聚集中起关键作用，它通过自分泌与旁分泌途径，诱导肾小球及肾小管细胞肥大，促进细胞外基质（ECM）积聚。有人研究发现，慢性肾小球肾炎患者肾组织中TGF-β1的表达明显增高，认为其参与了肾脏纤维化、硬化的发生和发展。因此，调节TGF-β1在肾脏的表达可有效地控制进行性系膜增生性肾小球病变。
本实验结果显示，空白对照组大鼠肾小球内未见明显α-SMA的表达，模型组大鼠肾小球系膜区内可见大量α-SMA阳性表达，尤其以肾小球血管极多见，同时在肾间质也有表达。本发明药物治疗后α-SMA在肾小球的表达与模型组相比明显减少（P＜0.01）。提示本发明药物可明显抑制肾小球系膜细胞的表型转化，抑制系膜细胞的增殖和细胞外基质的增多，从而减轻肾小球炎症反应。模型组大鼠肾组织中TGF-β1的表达较空白对照组明显增加（P＜0.01）。本发明药物治疗后，能明显减少TGF-β1在肾小球尤其是在肾小管间质部位的分布，其表达水平与模型组比较显著下降（P＜0.01）。提示本发明药物可以明显抑制MsPGN模型动物肾小球系膜区TGF-β1的表达，减轻系膜基质增殖，进而阻断肾小球疾病的进展。
本实验研究提示本发明药物可以抑制MsPGN大鼠肾组织α-SMA和肾小球系膜区TGF-β1的表达，具有抑制肾小球系膜细胞的增殖，减轻系膜基质积聚，进而阻断肾小球疾病的进展的作用，这可能是其治疗MsPGN的作用机理之一。
实验二：本发明药物高效液相色谱法质量检测方法研究
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪（Agilent110高效液相色谱仪及工作站，G1311Aquat泵，G1314紫外检测器）。
1.2试药
7-甲氧基黄芩素对照品（中国药品生物制品检定研究院）；甲醇（色谱醇，上海生化工助剂厂）；其他试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1处方
鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。
2.2制备
取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
2.3 7-甲氧基黄芩素的含量测定
2.3.1 HPLC色谱条件
采用HypersilDs（4.0mm×125mm，5μm）色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；在该色谱条件下，对照品及样品色谱峰良好，无金银花阴性对照对测定无干扰。
2.3.2对照品溶液的制备
精密称取80℃干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。
2.3.3供试品溶液与阴性对照液的制备
精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得；另按处方比例制备不含黄芩的阴性对照品，同法制成阴性对照液。
2.3.4标准曲线的绘制
精密称取80℃干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，用甲醇制成10.4，20.8，41.6，83.2，166.4μgmL-1系列浓度的溶液，分别精密量取上述5种浓度溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行测定。
以峰面积比值与浓度进行线性回归，得回归方程为：A=21.2763C-0.1392，r=0.9999。表明7-甲氧基黄芩素在10.2～166.8μgmL-1浓度范围内呈良好的线性关系。
2.3.5稳定性试验
精密吸取供试品溶液10μL，分别于0，1，2，4，8h进样，并计算7-甲氧基黄芩素含量。结果8h内RSD为0.45%（n=5）。表明样品溶液在8h内稳定。
2.3.6重复性试验
按供试品溶液制备方法平行处理样品5份，依法测定7-甲氧基黄芩素含量并计算。结果测得7-甲氧基黄芩素平均含量为0.12mg·g-1，RSD为1.3%。
2.3.7精密度实验
精密吸取7-甲氧基黄芩素对照品溶液，重复进样5次，依法测定峰面积。结果RSD为0.24%（n=5）。表明精密度较好。
2.3.8回收率实验
精密称取已知7-甲氧基黄芩素含量的同一批号的样品6份，按高、中、低浓度分别精密加入适量的7-甲氧基黄芩素对照品溶液，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率。结果平均回收率为100.3%，RSD为0.45%（n=5）。
2.3.9样品含量测定
分别量取对照品溶液和供试品溶液适量，用微孔滤膜滤过，各进样10μL，按上述色谱条件测定3批样品，平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶液7-甲氧基黄芩素的含量。本品含7-甲氧基黄芩素应为标示含量的95%～105%，以每1g本品含7-甲氧基黄芩素计，不得少于0.12mg。3批样品含量分别为100.8%（RSD=1.2%），101.7%（RSD=1.3%），99.2%（RSD=1.1%）。
实验三：本发明药物气相色谱法同步测定棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇的含量
1仪器与试药
Agilent7890N气相色谱仪：FID检测器，A.01.12.1色谱工作站；SGH－300高纯氢气发生器（北京东方精华科技苑科技有限公司）；色谱柱弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；梅特勒－托利多十万分之一电子分析天平；棕榈酸乙酯对照品（含量99.9%，中国食品药品检定研究院）；反-反金合欢醇对照品（含量99.9%，中国食品药品检定研究院）；本发明药物（参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备），试剂：环己酮，无水乙醇均为色谱纯。
2色谱条件
色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；载气：N2，1.0mL·min-1；氢气，40mL·min-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法。
3试验方法与结果
3.1内标溶液的制备
取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1g含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。
3.2供试品溶液的制备
精密量取本品1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。
3.3对照品储备溶液的制备
精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯0.301mg·mL-1及反-反金合欢醇0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
3.4阴性对照溶液的制备
取按处方中未加棕榈酸乙酯与反-反金合欢醇的空白溶液，按“3.2”项下制备方法，制成阴性对照溶液。
3.5线性关系的考察
分别精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5mL对照品储备液于10mL容量瓶中，加内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别取1μL进样，记录色谱图，以棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇与内标的峰面积比值为纵坐标（Y），浓度（C）为横坐标（X），分别绘制标准曲线，得回归方程分别为：Y（棕榈酸乙酯）=1.1148X－0.0016，R2=0.9999，棕榈酸乙酯浓度在0.144～2.552mg·mL-1范围内，线性关系良好；Y（反-反金合欢醇）=1.1347X+0.0035，R2=0.9999，反-反金合欢醇浓度在0.195～3.466mg·mL-1范围内，线性关系良好。
3.6精密度试验
取棕榈酸乙酯浓度为0.230mg·mL-1和反-反金合欢醇浓度为0.290mg·mL-1的对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，分别计算2种成分与内标的峰面积比值（A/A内标），棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇的RSD分别为0.22%和1.3%（n=6）。
3.7重复性试验
取同一批样品，按样品测定项下的方法重复测定6次，结果棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇的RSD分别为0.33%、1.6%（n=6）。
3.8稳定性试验
取同一批样品溶液，分别在室温下放置0、2、4、6、8、12h后测定，结果按棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇的RSD分别为0.38%、1.7%，说明样品溶液在12h内测定，结果稳定。
3.9加样回收率试验
取已知含量的样品溶液9份，并加入适当的低、中、高对照品溶液，按样品测定法测定棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇含量，分别计算回收率，结果见表3-1。
表3-1 回收率测定结果（n=9，%）
结果表明，本方法的回收率较好，棕榈酸乙酯的回收率分别在99.4%～100.2%，反-反金合欢醇的回收率在98.1%～100.7%之间，相对标准偏差分别为0.28%与0.86%，本测定方法能满足本发明药物中棕榈酸乙酯与反-反金合欢醇的含量测定。
3.10定量限与检测限
采用“信噪比法”来确定本研究的定量限和检测限，取线性标准溶液适量，采用加无水乙醇逐步稀释法进行稀释，当进样浓度为6.27、9.90μg·mL-1时，取1μL进样，连续进样3次，得到棕榈酸乙酯、内标、反-反金合欢醇信噪比平均值分别接近10.0，可以以此浓度为定量限；继续稀释进样，当进样浓度为1.044、1.65μg·mL-1，连续进样3次，得到棕榈酸乙酯、内标、反-反金合欢醇信噪比平均值接近3.0，可以以此浓度为检测限。
3.11耐用性试验
经不同色谱柱考察和溶液稳定性考察，以及柱温，进样口温度和检测器温度考察，表明本方法耐用性良好，适用于本发明药物中两组分的含量测定。
3.11.1色谱柱的影响
选用3根不同商品规格的色谱柱，测定同一批样品的含量，计算含量值的RSD%分别为1.3、1.7、1.6。结果表明，样品用不同的PEG色谱柱测定含量，棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇与内标均可有效分离，说明方法耐用性良好。
3.11.2柱温的影响
柱温对分离的影响主要为影响主峰的出峰时间，温度越高，主峰出峰时间越短，在第一阶段为80℃时，棕榈酸乙酯主峰棕榈酸乙酯与杂质峰能保证基线分离，第二阶段120℃时反-反金合欢醇主峰与杂质峰能保证基线分离，且各温度下含量的RSD小于2.0%。
3.11.3进样口温度的影响
进样口温度高于柱温时，棕榈酸乙酯与杂质峰能够保证基线分离，反-反金合欢醇与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0%。
3.11.4检测器温度的影响
检测器温度高于进样口温度时，棕榈酸乙酯与杂质峰能够保证基线分离，反-反金合欢醇与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0%。
3.12样品含量测定结果
经过方法学验证，本含量测定方法操作简便、准确度高、重现性好，能更有效地控制产品质量。因此应用该方法对10批样品，按照前述方法采用内标法进行含量测定，结果见表3-2。
表3-2 样品含量测定结果
4讨论
4.1系统适应性试验
在本试验气相色谱系统下，分别吸取样品测定用混合对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各1μL，记录色谱图。2种组分与内标物均能够较好地分离，阴性无干扰。该系统适应性结果见表3-3。
表3-3系统适应性试验
4.2内标物的选择
曾试用过环己酮、萘、联苯、水杨酸甲酯等，因样品挥发性成分多，结果以环己酮的保留时间及分离效果最合适。
4.3柱温的选择
棕榈酸乙酯、环己酮和反-反金合欢醇的沸点相差比较大，柱温低时，反-反金合欢醇的保留时间过长，柱温高时，棕榈酸乙酯与杂质不能有效分离，经采用两段程序升温方式能满足两种成分的同时分析。
4.4本品的含量限度
由10批次产品测定结果，暂定本品的含量限度为：本品每1mL含棕榈酸乙酯不得少于0.200mg，含反-反金合欢醇不得少于0.200mg。
本方法对2种成分同时进行分离与检测，方法快速、灵敏，分离度好、专属性好，能有效地控制药品质量。
附图说明：
图1：空白对照组对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图2：病理模型组对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图3：对比药物A对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图4：对比药物B对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图5：对比药物C对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图6：对比药物D对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图7：对比药物E对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图8：本发明药物组对MsPGN大鼠肾组织中α-SMA表达
图9：空白对照组对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
图10：病理模型组对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
图11：对比药物A对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
图12：对比药物B对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
图13：对比药物C对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
图14：对比药物D对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
图15：对比药物E对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
图16：本发明药物组对MsPGN大鼠肾组织中TGF-β1表达
具体实施方式：
实施例1：
处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。
制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
含量测定：
采用高效液谱法对7-甲氧基黄芩素进行含量测定：
（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
（5）测定结果：以每1g本品含7-甲氧基黄芩素计，为0.15mg。
采用气相色谱法对棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·min-1；氢气，40mL·min-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
（4）对照品溶液的制备：精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯0.301mg·mL-1及反-反金合欢醇0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
（6）测定结果：本品每1mL含棕榈酸乙酯为0.210mg，含反-反金合欢醇为0.212mg。
实施例2：
处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。
制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
含量测定：
采用高效液谱法对7-甲氧基黄芩素进行含量测定：
（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
（5）测定结果：以每1g本品含7-甲氧基黄芩素计，为0.14mg。
采用气相色谱法对棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·min-1；氢气，40mL·min-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
（4）对照品溶液的制备：精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯0.301mg·mL-1及反-反金合欢醇0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
（6）测定结果：本品每1mL含棕榈酸乙酯为0.211mg，含反-反金合欢醇为0.213mg。
实施例3：
处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。
制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。
含量测定：
采用高效液谱法对7-甲氧基黄芩素进行含量测定：
（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
（5）测定结果：以每1g本品含7-甲氧基黄芩素计，为0.14mg。
采用气相色谱法对棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·min-1；氢气，40mL·min-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
（4）对照品溶液的制备：精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯0.301mg·mL-1及反-反金合欢醇0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
（6）测定结果：本品每1mL含棕榈酸乙酯为0.223mg，含反-反金合欢醇为0.218mg。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得，采用如下质量检测方法中的任意一种或两种对复方鱼腥草糖浆药物进行质量检测： 采用高效液相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的7-甲氧基黄芩素进行含量测定或/和采用气相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定；
其特征在于，采用高效液相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的7-甲氧基黄芩素进行含量测定：
（1）色谱条件：采用Hypersil Ds色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的乙腈-水；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min-1；进样量：5～20μL；
（2）对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取本品，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
2.如权利要求1所述的复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，其特征在于，采用高效液谱法对7-甲氧基黄芩素进行含量测定：
（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的7-甲氧基黄芩素对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取本品10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
3.如权利要求1所述的复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得，其特征在于，采用气相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，0.5～1.5mL·min-1；氢气，30～50mL·min-1；空气，300～500mL·min-1；分流比：5～15：1；进样口温度：240～260℃，检测器温度：290～310℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为内标溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取，置容量瓶中，精密加入内标溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
（4）对照品溶液的制备：精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯及反-反金合欢醇的对照品储备溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入气相色谱仪，进行检测。
4.如权利要求3所述的复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，其特征在于，采用气相色谱法对棕榈酸乙酯、反-反金合欢醇进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·min-1；氢气，40mL·min-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
（4）对照品溶液的制备：精密称取棕榈酸乙酯对照品、反-反金合欢醇对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含棕榈酸乙酯0.301mg·mL-1及反-反金合欢醇0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
CN201610297742.4A 2016-05-09 2016-05-09 复方鱼腥草糖浆药物的检测方法 Active CN105943684B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610297742.4A CN105943684B (zh) 2016-05-09 2016-05-09 复方鱼腥草糖浆药物的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610297742.4A CN105943684B (zh) 2016-05-09 2016-05-09 复方鱼腥草糖浆药物的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105943684A CN105943684A (zh) 2016-09-21
CN105943684B true CN105943684B (zh) 2017-04-05

Family

ID=56914207

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610297742.4A Active CN105943684B (zh) 2016-05-09 2016-05-09 复方鱼腥草糖浆药物的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105943684B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102429995A (zh) * 2011-12-29 2012-05-02 浙江康恩贝中药有限公司 一种复方鱼腥草合剂的制备方法
CN102590424A (zh) * 2012-03-06 2012-07-18 浙江国镜药业有限公司 一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102429995A (zh) * 2011-12-29 2012-05-02 浙江康恩贝中药有限公司 一种复方鱼腥草合剂的制备方法
CN102590424A (zh) * 2012-03-06 2012-07-18 浙江国镜药业有限公司 一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
史耀勋.复方鱼腥草滴丸治疗慢性肾炎合并急性咽炎、扁桃体炎.《中国民间疗法》.2014,第22卷(第8期),48-49. *
复方鱼腥草合剂的HPLC指纹图谱研究;李转花；等;《药学与临床研究》;20120831;第20卷(第4期);369-371 *
复方鱼腥草滴丸中黄芩苷的HPLC含量测定;余星云；等;《今日药学》;20110731;第21卷(第7期);437-439 *
黄芩化学成分及炮制学研究;温华珍；等;《天然产物研究与开发》;20041231;第16卷(第6期);575-580 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105943684A (zh) 2016-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103926351B (zh) 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法
CN102323371B (zh) 一种止血药物致康胶囊的检测方法
CN117233306B (zh) 一种金丹附延颗粒指纹图谱建立及其成分含量测定方法
CN108143825B (zh) 一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法
CN104155383B (zh) 青蒲颗粒的检测方法
CN110441407A (zh) 一种泽术片质量控制方法
CN102091297A (zh) 一种肝保健药品的质量控制方法
CN104940599A (zh) 一种中药组合物在制备改善脂质代谢药物中的应用
CN116808147A (zh) 一种治疗糖尿病肾病的中药复方组合物及其质量检测方法
CN105943684B (zh) 复方鱼腥草糖浆药物的检测方法
CN102138963B (zh) 一种当归黄芪提取物及其制备方法和用途
CN103675135B (zh) 一种中药组合物的含量测定方法
CN101391070B (zh) 一种具有抗癌作用的中药组合物的检测方法
CN104991022A (zh) 康肾口服液质量控制方法
CN115266975A (zh) 一种鸡内金及其炮制品饮片、标准汤剂、配方颗粒中染料木苷的含量测定方法
CN104288238B (zh) 一种治疗肠易激综合症的药物及其制备方法与检测方法
CN108310226A (zh) 一种具有防治糖尿病功效的组合物及其制备方法与应用
CN108403706A (zh) 一种孕甾烷糖苷类化合物的新用途
CN107884489A (zh) 一种妇科再造丸的检测方法
CN106018594A (zh) 一种理气舒心片hplc特征图谱的构建方法
CN107894466B (zh) 一种金桑芪抗毒制剂hplc指纹图谱的测定方法及金桑芪抗毒制剂质量控制方法
CN105548426B (zh) 一种治疗慢性肾功能衰竭的中药组合物的检测方法
CN106109673B (zh) 一种复方鱼腥草糖浆的制药用途
CN107912577A (zh) 一种具有防治糖尿病功效的保健茶及其制备方法与应用
CN108558978A (zh) 孕甾烷糖苷类化合物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant