CN102590424A - 一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种复方鱼腥草合剂指纹图谱的质量检测方法。该方法用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱。通过本发明方法可以检测到复方鱼腥草合剂中的四味中药鱼腥草、黄芩、连翘和金银花的相关特征成分在指纹图谱中均有体现。所以本方法对复方鱼腥草合剂的质量控制意义重大。

Description

一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药合剂的质量检测方法，特别涉及一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法。

背景技术

上呼吸道感染为常见病、多发病。近年来，由于流动人员频繁，各个流动环节方位不力，发病率有上升趋势。上呼吸道感染四季均可发生，尤以春、冬季多见，随着季节性的传播，发病率集中在人群稠密的地区，且因上呼吸道感染具有一定的传染性，在易感季节发病率最高，来试较猛，对儿童、老人及机体免疫力不强的人威胁很大，对人民健康和工作也往往带来较大影响。复方鱼腥草合剂由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花五味药经加工制成的复方制剂。具有清热解毒之功效，用于外感风热引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃腺炎有风热证候者。为了严格控制复方鱼腥草合剂的质量，有必要研究一套复方鱼腥草合剂的质量检测方法。

发明内容

本发明的目的在于公开一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法，该方法包括如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂30～70体积份，用0.10μm～5.0μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加0～100％甲醇、水、乙醇或乙腈制成每1体积份含千分之0.04-0.08重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3150×4.6mm，5μm，柱温：10～40℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.02～1.0％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟0.5～2.0ml，检测波长为220～360nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.001～0.1体积份，注入液相色谱议，测定，记录30～120分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；

S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法，该方法优选如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂50体积份，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：35℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟1.0ml，检测波长为320nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.01体积份，注入液相色谱议，测定，记录66分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；

S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法，该方法优选如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂60体积份，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1体积份含千分之0.05重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：40℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.05％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟1.5ml，检测波长为250nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08体积份，注入液相色谱议，测定，记录65分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；

S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法，该方法优选如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂40体积份，用3um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1体积份含千分之0.04重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：20℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.3％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟0.8ml，检测波长为350nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.04体积份，注入液相色谱议，测定，记录90分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；

S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

鱼腥草合剂的原料及制备方法如下：

原料药组成：

鱼腥草80-120重量份 黄芩15-30重量份 板蓝根15-30重量份

连翘7-12重量份 金银花7-12重量份

制法：以上五味药材，加水煎煮1-3次，每次1-2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏，加乙醇至含醇量为65-80％，搅匀，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量；另取蔗糖50-70重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

鱼腥草合剂的原料及制备方法优选如下：

原料药组成：

鱼腥草100重量份 黄芩25重量份 板蓝根25重量份

连翘10重量份 金银花10重量份

制法：以上五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏，加乙醇至含醇量为70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

上述发明重量份与体积份的关系为g/ml的关系。

附图说明：

图1、参照品图谱

图2、对照指纹图谱

图3、样品1图谱

图4、样品2图谱

图5、样品3图谱

图6、样品4图谱

图7、样品5图谱

图8、样品6图谱

图9、样品7图谱

图10、样品8图谱

图11、样品9图谱

图12、样品10图谱

图13、样品11图谱

图14、样品12图谱

图15、鱼腥草图谱

图16、黄芩图谱

图17、连翘图谱

图18、金银花图谱

图19、板蓝根图谱

复方鱼腥草合剂由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花五味中药制备而成，从图15-图19与对照指纹图谱比较可知，其中四味中药鱼腥草、黄芩、连翘和金银花的相关特征成分在指纹图谱中均有体现。所以本方法对复方鱼腥草合剂的质量控制意义重大。

下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例一：流动相的筛选试验

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂(实施例1制备)50ml，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、流动相的筛选

条件1：以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为60％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由60％变为25％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由25％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度。

条件2：以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度。

条件3：以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由90％变为80％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由80％变为45％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由45％变为90％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度。

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3150×4.6mm，5μm，柱温：25℃。

D、测定方法与结果：

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08ml，注入液相色谱议，测定，记录65分钟的色谱图，观察色谱峰的分离情况，结果显示条件2分离最佳。

即为：以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度。

实验例二：色谱柱的筛选试验

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂(实施例1制备)50ml，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱柱的筛选

条件1：色谱柱：Alltech C18 150×4.6mm，5μm

条件2：色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm

条件3：色谱柱：Waters C18 150×4.6mm，5μm

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，柱温：25℃，以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度。

D、测定方法与结果：

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08ml，注入液相色谱议，测定，记录65分钟的色谱图，观察色谱峰的分离情况，结果显示条件2分离最佳。

即为：色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm。

实验例三：12批样品的测定和对照指纹图谱的确定

取复方鱼腥草合剂(实施例1制备，共有12个批号样品)，依照本发明实施例1所述的方法测定，12批样品中均有共有的色谱峰9个；由样品1～12的指纹图谱，拟定生成对照指纹图谱，见附图2。将其他样品的指纹图谱与对照指纹图谱进行比较，在供试品色谱图中，均有9个与对照指纹图谱对应的特征峰，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.90。见表一和附图3～附图14。

表一12个批号样品的相似度数据

实验例四：药材指纹图谱测定

①色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm

柱温：35℃

流动相：A、0.1％磷酸溶液

B、甲醇

按如下程序进行梯度洗脱：

流速：1.0ml/min

②、药材供试品溶液制备

鱼腥草供试品溶液：取鱼腥草粗粉2.5g，加甲醇30ml超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，并定容至10ml量瓶中，混匀，作为供试品溶液。

黄芩供试品溶液：取黄芩粗粉0.6g，加甲醇10ml超声30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

连翘供试品溶液：取连翘粗粉0.2g，加甲醇10ml超声30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

金银花供试品溶液：取金银花粗粉0.2g，加甲醇10ml超声30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

板蓝根供试品溶液：取板蓝根粗粉0.6g，加甲醇10ml超声30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

③、测定法：分别取上述药材的供试品溶液各10μl，注入液相色谱议，紫外检测器检测，测定波长为320nm，记录色谱图。见附图15-附图19。

结论：复方鱼腥草合剂由五味中药制备而成，从图15-图19与对照指纹图谱比较可知，其中四味中药鱼腥草、黄芩、连翘和金银花的相关特征成分在指纹图谱中均有体现。所以本方法对复方鱼腥草合剂的质量控制意义重大。

下述实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实施例一：

鱼腥草100g    黄芩25g    板蓝根25g

连翘10g       金银花10g

制法：以上五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏，加乙醇至含醇量为70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂50ml，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：35℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：

从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；流速为每分钟1.0ml，检测波长为320nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000。

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.01体积份，注入液相色谱议，测定，记录66分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

实施例二：

鱼腥草100g    黄芩25g    板蓝根25g

连翘10g       金银花10g

制法：以上五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏，加乙醇至含醇量为70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂60ml，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1体积份含千分之0.05g的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：40℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.05％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟1.5ml，检测波长为250nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08ml，注入液相色谱议，测定，记录65分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；

S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

实施例三：

鱼腥草100g    黄芩25g    板蓝根25g

连翘10g       金银花10g

制法：以上五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏，加乙醇至含醇量为70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂40ml，用3um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1体积份含千分之0.04重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：20℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.3％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟0.8ml，检测波长为350nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.04体积份，注入液相色谱议，测定，记录90分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；

S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

Claims (7)

1.一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂30～70体积份，用0.10μm～5.0μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加0～100％甲醇、水、乙醇或乙腈制成每1体积份含千分之0.04-0.08重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：10～40℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.02～1.0％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟0.5～2.0ml，检测波长为220～360nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.001～0.1体积份，注入液相色谱议，测定，记录30～120分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％；

复方鱼腥草合剂由如下方法制成：

鱼腥草80-120重量份 黄芩15-30重量份 板蓝根15-30重量份

连翘7-12重量份 金银花7-12重量份

制法：以上五味药材，加水煎煮1-3次，每次1-2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为60-80℃1.18-1.20的清膏，加乙醇至含醇量为65-80％，搅匀，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量；另取蔗糖50-70重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

2.如权利要求1所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂50体积份，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：35℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.1％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟1.0ml，检测波长为320nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.01体积份，注入液相色谱议，测定，记录66分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

3.如权利要求1所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂60体积份，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1体积份含千分之0.05重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：40℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.05％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟1.5ml，检测波长为250nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08体积份，注入液相色谱议，测定，记录65分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

4.如权利要求1所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

A、供试品溶液制备

取复方鱼腥草合剂40体积份，用3um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

B、参照品溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1体积份含千分之0.04重量份的溶液，作为参照品溶液；

C、色谱条件

色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪，色谱柱：Inertsil ODS-3 150×4.6mm，5μm，柱温：20℃，以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂；以0.3％磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：从0分钟开始至10分钟，流动相A由80％变为70％，并维持10分钟，从20分钟开始至50分钟，流动相A由70％变为35％，并维持5分钟，从55分钟开始至56分钟，流动相A由35％变为80％，并维持10分钟，梯度均为线性梯度；

流速为每分钟0.8ml，检测波长为350nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000；

D、测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.04体积份，注入液相色谱议，测定，记录90分钟的色谱图；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，除S峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；

复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个，1号峰：相对保留时间0.129-0.158，占参照峰的面积比1.75％-15.73％；2号峰：相对保留时间0.223-0.273，占参照峰的面积比5.38％-30.46％；3号峰：相对保留时间0.589-0.720，占参照峰的面积比0.38％-7.23％；4号峰：相对保留时间0.620-0.757，占参照峰的面积比0.21％-3.98％；5号峰：相对保留时间0.663-0.810，占参照峰的面积比0.48％-9.07％；6号峰：相对保留时间0.784-0.958，占参照峰的面积比0.51％-9.74％；S峰：为参照峰；7号峰：相对保留时间1.001-1.224，占参照峰的面积比0.40％-7.56％；8号峰：相对保留时间1.017-1.243，占参照峰的面积比0.47％-9.02％。

5.如权利要求1-4任一所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法，其特征在于该方法中的鱼腥草合剂的原料组成为：

鱼腥草100重量份 黄芩25重量份 板蓝根25重量份

连翘10重量份 金银花10重量份。

6.如权利要求1-4任一所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法，其特征在于该方法中的鱼腥草合剂由如下方法制成：

以上五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液在60-80℃下浓缩至相对密度为1.18-1.20的清膏，加乙醇至含醇量为70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

7.如权利要求5所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法，其特征在于该方法中的鱼腥草合剂由如下方法制成：

以上五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液在60-80℃下浓缩至相对密度为1.18-1.20的清膏，加乙醇至含醇量为70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份，制成单糖浆，加入上述药液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

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