CN102590424B - 一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种复方鱼腥草合剂指纹图谱的质量检测方法。该方法用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B进行梯度洗脱。通过本发明方法可以检测到复方鱼腥草合剂中的四味中药鱼腥草、黄芩、连翘和金银花的相关特征成分在指纹图谱中均有体现。所以本方法对复方鱼腥草合剂的质量控制意义重大。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药合剂的质量检测方法,特别涉及一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法。
背景技术
上呼吸道感染为常见病、多发病。近年来,由于流动人员频繁,各个流动环节方位不力,发病率有上升趋势。上呼吸道感染四季均可发生,尤以春、冬季多见,随着季节性的传播,发病率集中在人群稠密的地区,且因上呼吸道感染具有一定的传染性,在易感季节发病率最高,来试较猛,对儿童、老人及机体免疫力不强的人威胁很大,对人民健康和工作也往往带来较大影响。复方鱼腥草合剂由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花五味药经加工制成的复方制剂。具有清热解毒之功效,用于外感风热引起的咽喉疼痛;急性咽炎、扁桃腺炎有风热证候者。为了严格控制复方鱼腥草合剂的质量,有必要研究一套复方鱼腥草合剂的质量检测方法。
发明内容
本发明的目的在于公开一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的:
本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法,该方法包括如下步骤:
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂30~70体积份,用0.10μm~5.0μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加0~100%甲醇、水、乙醇或乙腈制成每1体积份含千分之0.04-0.08重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3150×4.6mm,5μm,柱温:10~40℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.02~1.0%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;
流速为每分钟0.5~2.0ml,检测波长为220~360nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000;
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.001~0.1体积份,注入液相色谱议,测定,记录30~120分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;
S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%。
本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法,该方法优选如下步骤:
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂50体积份,用0.45um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm,柱温:35℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;
流速为每分钟1.0ml,检测波长为320nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000;
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.01体积份,注入液相色谱议,测定,记录66分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;
S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%。
本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法,该方法优选如下步骤:
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂60体积份,用0.45um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加乙醇制成每1体积份含千分之0.05重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm,柱温:40℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.05%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;
流速为每分钟1.5ml,检测波长为250nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000;
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08体积份,注入液相色谱议,测定,记录65分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;
S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%。
本发明复方鱼腥草合剂的指纹图谱质量检测方法,该方法优选如下步骤:
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂40体积份,用3um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加乙腈制成每1体积份含千分之0.04重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm,柱温:20℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.3%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;
流速为每分钟0.8ml,检测波长为350nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000;
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.04体积份,注入液相色谱议,测定,记录90分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;
S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%。
鱼腥草合剂的原料及制备方法如下:
原料药组成:
鱼腥草80-120重量份 黄芩15-30重量份 板蓝根15-30重量份
连翘7-12重量份 金银花7-12重量份
制法:以上五味药材,加水煎煮1-3次,每次1-2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏,加乙醇至含醇量为65-80%,搅匀,静置,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至适量;另取蔗糖50-70重量份,制成单糖浆,加入上述药液,加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯,混匀,调整总量至规定量,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
鱼腥草合剂的原料及制备方法优选如下:
原料药组成:
鱼腥草100重量份 黄芩25重量份 板蓝根25重量份
连翘10重量份 金银花10重量份
制法:以上五味药材,加水煎煮二次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏,加乙醇至含醇量为70%,搅匀,静置24小时,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份,制成单糖浆,加入上述药液,加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯,混匀,调整总量至规定量,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
上述发明重量份与体积份的关系为g/ml的关系。
附图说明:
图1、参照品图谱
图2、对照指纹图谱
图3、样品1图谱
图4、样品2图谱
图5、样品3图谱
图6、样品4图谱
图7、样品5图谱
图8、样品6图谱
图9、样品7图谱
图10、样品8图谱
图11、样品9图谱
图12、样品10图谱
图13、样品11图谱
图14、样品12图谱
图15、鱼腥草图谱
图16、黄芩图谱
图17、连翘图谱
图18、金银花图谱
图19、板蓝根图谱
复方鱼腥草合剂由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花五味中药制备而成,从图15-图19与对照指纹图谱比较可知,其中四味中药鱼腥草、黄芩、连翘和金银花的相关特征成分在指纹图谱中均有体现。所以本方法对复方鱼腥草合剂的质量控制意义重大。
下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例一:流动相的筛选试验
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂(实施例1制备)50ml,用0.45um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、流动相的筛选
条件1:以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为60%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由60%变为25%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由25%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度。
条件2:以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度。
条件3:以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由90%变为80%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由80%变为45%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由45%变为90%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度。
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3150×4.6mm,5μm,柱温:25℃。
D、测定方法与结果:
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08ml,注入液相色谱议,测定,记录65分钟的色谱图,观察色谱峰的分离情况,结果显示条件2分离最佳。
即为:以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度。
实验例二:色谱柱的筛选试验
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂(实施例1制备)50ml,用0.45um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱柱的筛选
条件1:色谱柱:Alltech C18 150×4.6mm,5μm
条件2:色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm
条件3:色谱柱:Waters C18 150×4.6mm,5μm
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,柱温:25℃,以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度。
D、测定方法与结果:
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08ml,注入液相色谱议,测定,记录65分钟的色谱图,观察色谱峰的分离情况,结果显示条件2分离最佳。
即为:色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm。
实验例三:12批样品的测定和对照指纹图谱的确定
取复方鱼腥草合剂(实施例1制备,共有12个批号样品),依照本发明实施例1所述的方法测定,12批样品中均有共有的色谱峰9个;由样品1~12的指纹图谱,拟定生成对照指纹图谱,见附图2。将其他样品的指纹图谱与对照指纹图谱进行比较,在供试品色谱图中,均有9个与对照指纹图谱对应的特征峰,按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.90。见表一和附图3~附图14。
表一12个批号样品的相似度数据
实验例四:药材指纹图谱测定
①色谱条件
色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm
柱温:35℃
流动相:A、0.1%磷酸溶液
B、甲醇
按如下程序进行梯度洗脱:
流速:1.0ml/min
②、药材供试品溶液制备
鱼腥草供试品溶液:取鱼腥草粗粉2.5g,加甲醇30ml超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇溶解,并定容至10ml量瓶中,混匀,作为供试品溶液。
黄芩供试品溶液:取黄芩粗粉0.6g,加甲醇10ml超声30分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。
连翘供试品溶液:取连翘粗粉0.2g,加甲醇10ml超声30分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。
金银花供试品溶液:取金银花粗粉0.2g,加甲醇10ml超声30分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。
板蓝根供试品溶液:取板蓝根粗粉0.6g,加甲醇10ml超声30分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。
③、测定法:分别取上述药材的供试品溶液各10μl,注入液相色谱议,紫外检测器检测,测定波长为320nm,记录色谱图。见附图15-附图19。
结论:复方鱼腥草合剂由五味中药制备而成,从图15-图19与对照指纹图谱比较可知,其中四味中药鱼腥草、黄芩、连翘和金银花的相关特征成分在指纹图谱中均有体现。所以本方法对复方鱼腥草合剂的质量控制意义重大。
下述实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实施例一:
鱼腥草100g 黄芩25g 板蓝根25g
连翘10g 金银花10g
制法:以上五味药材,加水煎煮二次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏,加乙醇至含醇量为70%,搅匀,静置24小时,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份,制成单糖浆,加入上述药液,加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯,混匀,调整总量至规定量,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂50ml,用0.45um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm,柱温:35℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:
从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;流速为每分钟1.0ml,检测波长为320nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000。
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.01体积份,注入液相色谱议,测定,记录66分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%。
实施例二:
鱼腥草100g 黄芩25g 板蓝根25g
连翘10g 金银花10g
制法:以上五味药材,加水煎煮二次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏,加乙醇至含醇量为70%,搅匀,静置24小时,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份,制成单糖浆,加入上述药液,加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯,混匀,调整总量至规定量,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂60ml,用0.45um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加乙醇制成每1体积份含千分之0.05g的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm,柱温:40℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.05%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;
流速为每分钟1.5ml,检测波长为250nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000;
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.08ml,注入液相色谱议,测定,记录65分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;
S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%。
实施例三:
鱼腥草100g 黄芩25g 板蓝根25g
连翘10g 金银花10g
制法:以上五味药材,加水煎煮二次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.18-1.20(60-80℃)的清膏,加乙醇至含醇量为70%,搅匀,静置24小时,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60重量份,制成单糖浆,加入上述药液,加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯,混匀,调整总量至规定量,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂40ml,用3um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加乙腈制成每1体积份含千分之0.04重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3 150×4.6mm,5μm,柱温:20℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.3%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;
流速为每分钟0.8ml,检测波长为350nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于45000;
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.04体积份,注入液相色谱议,测定,记录90分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;
S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%。
Claims (3)
1.一种复方鱼腥草合剂的质量检测方法,其特征在于该方法包括如下步骤:
A、供试品溶液制备
取复方鱼腥草合剂50体积份,用0.45um微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;
B、参照品溶液制备
取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1体积份含千分之0.06重量份的溶液,作为参照品溶液;
C、色谱条件
色谱仪Waters2695-2996高效液相色谱仪,色谱柱:Inertsil ODS-3150×4.6mm,5μm,柱温:35℃,以十八烷基硅烷键合硅胶作填充剂;以0.1%磷酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,按如下程序进行梯度洗脱:从0分钟开始至10分钟,流动相A由80%变为70%,并维持10分钟,从20分钟开始至50分钟,流动相A由70%变为35%,并维持5分钟,从55分钟开始至56分钟,流动相A由35%变为80%,并维持10分钟,梯度均为线性梯度;
流速为每分钟1.0ml,检测波长为320nm;理论板数按黄芩苷峰计算不低于45000;
D、测定法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各0.01体积份,注入液相色谱议,测定,记录66分钟的色谱图;按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,除S峰外,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90;
复方鱼腥草合剂共有色谱峰9个,1号峰:相对保留时间0.129-0.158,占参照峰的面积比1.75%-15.73%;2号峰:相对保留时间0.223-0.273,占参照峰的面积比5.38%-30.46%;3号峰:相对保留时间0.589-0.720,占参照峰的面积比0.38%-7.23%;4号峰:相对保留时间0.620-0.757,占参照峰的面积比0.21%-3.98%;5号峰:相对保留时间0.663-0.810,占参照峰的面积比0.48%-9.07%;6号峰:相对保留时间0.784-0.958,占参照峰的面积比0.51%-9.74%;S峰:为参照峰;7号峰:相对保留时间1.001-1.224,占参照峰的面积比0.40%-7.56%;8号峰:相对保留时间1.017-1.243,占参照峰的面积比0.47%-9.02%;
复方鱼腥草合剂由如下方法制成:
鱼腥草80-120重量份 黄芩15-30重量份 板蓝根15-30重量份
连翘7-12重量份 金银花7-12重量份
制法:以上五味药材,加水煎煮1-3次,每次1-2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为60-80℃1.18-1.20的清膏,加乙醇至含醇量为65-80%,搅匀,静置,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至适量,得到药液;另取蔗糖50-70重量份,制成单糖浆,加入上述药液,加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯,混匀,调整总量至规定量,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
2.如权利要求1所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法,其特征在于该方法中的鱼腥草合剂的原料组成为:
鱼腥草100重量份 黄芩25重量份 板蓝根25重量份
连翘10重量份 金银花10重量份。
3.如权利要求1任一所述的复方鱼腥草合剂的质量检测方法,其特征在于该方法中的鱼腥草合剂由如下方法制成:
以上五味药材,加水煎煮二次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液在60-80℃下浓缩至相对密度为1.18-1.20的清膏,加乙醇至含醇量为70%,搅匀,静置24小时,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至适量,得到药液;另取蔗糖60重量份,制成单糖浆,加入上述药液,加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯,混匀,调整总量至规定量,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
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