CN107912577A - 一种具有防治糖尿病功效的保健茶及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有防治糖尿病功效的保健茶及其制备方法与应用,它由苦荞麦3份、铁皮石斛1份、灵芝孢子粉1份制成。本发明根据中医药理论,通过大量实验筛选原料组成及其重量配比,实验结果表明,本发明以重量比为3:1:1的苦荞麦、铁皮石斛、灵芝孢子粉作为最佳的组合物,可提高活性多糖和柚皮素等活性成分的溶出率,具有很好的降血糖功效,且绿色安全,长期服用无毒副作用。本发明提供制备方法,工艺设计合理,可实现工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种保健茶,具体涉及一种具有防治糖尿病功效的保健茶及其制备方法与应用。
背景技术
糖尿病是一种全球性的常见病和多发病,已成为继肿瘤和心血管疾病之后的第三大疾病。糖尿病合并瘀热病症是糖尿病主要的并发病症,临床上常见的有糖尿病性心脏病,糖尿病性心脏病包括糖尿病特异性心肌病变,与糖尿病有关的心脏微血管病变、大血管病变、心脏植物神经病变等,同时常伴有非特异性的冠状动脉粥样硬化性心脏病和(或)高血压心脏病,在患有糖尿病的基础上,可以统称为糖尿病性心脏病。糖尿病性心脏病与非糖尿病人发生的冠状动脉粥样硬化性心脏病和心肌病相比,有病情重、矛盾多、治疗难度大、预后差及病死率高的特点。
目前治疗糖尿病及其并发症的药物较多,临床上使用的西药,虽具有一定的疗效,但多数存在较大的不良反应,如出现停药后反弹,患者肝肾损害、横纹肌融解症等副作用,治标不治本,而中医药在治疗糖尿病方面具有其独特的优势,具有疗效持久,无明显毒副作用的优点,但目前针对糖尿病的中药多偏于单方、验方,缺乏系统完善的临床药效研究,且中药组方依据各有不同,治则不统一。
因此,积极寻找和努力探索研究出具有安全性好,不良反应低,具有很好的防治糖尿病功效的保健茶具有重要意义。
发明内容
发明目的:本发明的目的是解决现有技术的不足,提供一种配比科学合理,安全性好,具有很好辅助降血糖功效的保健茶。本发明另一个目的是提供该保健茶的制备方法与其应用。
技术方案:为了实现以上目的,本发明采取的技术方案为:
一种具有防治糖尿病功效的保健茶,其特征在于,它包括下列原料:
苦荞麦、铁皮石斛和灵芝孢子粉。
作为优选方案,以上所述的具有防治糖尿病功效的保健茶,其特征在于,它由下列重量份数的原料制成:
苦荞麦1~3份、铁皮石斛1~2份、灵芝孢子粉1~2份。
作为优选方案,以上所述的具有防治糖尿病功效的保健茶,它由下列重量份数的原料制成:
苦荞麦3份、铁皮石斛1份、灵芝孢子粉1份。
保健茶中各组份的筛选实验
单因素试验:苦荞麦添加量过大,袋泡茶浸泡液苦味较重;苦荞麦添加量过少,袋泡茶浸泡液没有苦荞麦特征风味。经单因素试验,袋泡茶以3g苦荞麦为基础,分别选取不同添加量的铁皮石斛、灵芝破壁孢子粉,制成袋泡茶后,用300ml 85-90℃热水浸泡15分钟后品尝,进行感官评定。
正交试验:在单因素试验的基础上,分别筛选出不同添加量的铁皮石斛和灵芝破壁孢子粉的三个较佳水平,进行正交试验及分析,并最终确定枫灵苦荞茶的最佳因素组合,感官评分标准参照国家标准GB/T 23776-2009《袋泡茶感官审评方法》执行。正交因素表如下:
正交因素表如下:
表1正交因素表
水平 | 苦荞麦含量(g) | 铁皮石斛含量(g) | 灵芝孢子粉含量(g) |
1 | 2.5 | 0.5 | 0.5 |
2 | 3 | 1 | 1 |
3 | 3.5 | 1.5 | 1.5 |
综合考虑枫灵苦荞茶感官影响因素,最终确定正交评价水平分为外在评分和内质评分,权重分别为30%和70%,外在评分包括粉末均匀度、色泽、是否结块等,内质评价包括口感、气味等,具体评分等级如下:
表2外在评分表(30%)
序号 | 外观 | 评分 |
1 | 混合均匀,深棕黄色 | 10 |
2 | 混合较均匀,未见硬结、团块,呈棕黄色 | 8 |
3 | 混合不均匀,少量硬结、团块,呈棕色 | 6 |
4 | 大量硬结、团块,呈深棕色 | 4 |
表3内质评分表(70%)
表4L9(34)表
通过分析可知,苦荞麦含量对枫灵苦荞茶感官影响最大,其次是铁皮石斛含量,最后是灵芝孢子粉含量。
表5方差分析表
因素 | 偏差平方和 | 自由度 | F比 | F临界值 | 显著性 |
苦荞麦 | 13.502 | 2 | 15.664 | 19.000 | 显著性 |
铁皮石斛 | 3.049 | 2 | 3.537 | 19.000 | 无显著性 |
灵芝孢子粉 | 1.236 | 2 | 1.434 | 19.000 | 无显著性 |
误差 | 0.86 | 2 |
由方差分析可知,苦荞麦含量影响较大最终确定苦荞麦、铁皮石斛、灵芝孢子粉这三味药的最佳配比是3:1:1。
并且通过临床降血压实验表明,当苦荞麦、铁皮石斛、灵芝孢子粉重量配比为3:1:1时,具有最好的降血糖功效,相比其它重量配比(1:1:1,1:2:1,1:2:2,2:1:1,2:2:1,2:1:3,3:2:1,3:1:2)具有显著性差异(P<0.05)。
并且通过检测分析,当苦荞麦、铁皮石斛、灵芝孢子粉重量配比为3:1:1时保健茶中的活性多糖和柚皮素溶出的检测含量最高。相比其它重量配比(1:1:1,1:2:1,1:2:2,2:1:1,2:2:1,2:1:3,3:2:1,3:1:2)具有显著性差异(P<0.05)。
本发明所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将鲜品铁皮石斛浸泡去薄膜衣,洗净,剪成小段,置60℃烘箱烘干,取出用干磨机粉碎成细小颗粒,继续置60℃烘箱中烘48小时以上,干燥后用粉碎机粉碎,过筛,得铁皮石斛细粉,备用;
(2)取苦荞麦,除杂、漂洗、脱水、干燥、粉碎过筛,得苦荞麦细粉,备用;
(3)将步骤(1)制得的铁皮石斛细粉和步骤(2)制得的苦荞麦细粉与灵芝破壁孢子粉混匀,装袋,密封。
本发明所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:其包括以下步骤:
(1)定性研究
(1.1)灵芝破壁孢子粉的显微鉴别
显微鉴别:灵芝破壁孢子粉为棕褐色粉状物,外观极其细腻,无成陀结块,用母指和食指轻轻磋摸,有光滑细腻感,无粘连、无沙砾等异物的感觉;在1500倍的放大倍数下观察,不破壁孢子完整、丰满、双壁结构清晰,外壁无色,内壁有小刺,淡褐色;个体形态一致,呈椭圆形;顶端平截,大小约为8.5~11×5.2~6.9μm;而破壁孢子则有几种形态,依破壁程序不同可分为轻度破壁---孢子形态完整、壁上有小孔、中度破壁---孢子形态不完整、有缺损、重度破壁---破碎孢子壳和孢子内容物;
(1.2)苦荞麦中谷甾醇薄层鉴别:
分别称取苦荞麦对照药材和保健茶粉末各3g,加入25mL氯仿溶液,超声提取30min,过滤,取10mL滤液,蒸发皿上蒸干,用氯仿溶解并定容至2mL;吸取保健茶供试液、苦荞麦对照药材溶液l0μL分别点于同一含0.3%羧甲基纤维素钠为粘贴剂的硅胶G板上,以体积比为7:3的石油醚-乙醚为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸溶液,105℃烘干至斑点显色,日光检视,保健茶粉末应该含有与苦荞麦对照药材相同的斑点。
(2)定量研究
(2.1)枫灵苦荞茶中总多糖含量的测定
取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含90μg的溶液,即得对照品溶液;精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml,分别置10ml具塞试管中,各加水补至1.0ml,精密加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,再精密加硫酸5ml,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,置冰浴中冷却5分钟,以相应试剂为空白,照2015年版中国药典附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;
取保健茶粉末5g,精密称定,加水200ml,加热回流2小时,放冷,转移至250ml量瓶中,用少量水分次洗涤容器,洗液并入同一量瓶中,加水至刻度,摇匀,取适量离心,精密量取续滤液2ml,置15ml离心管中,精密加入无水乙醇10ml,摇匀,冷藏1小时,取出,离心,弃去上清液,沉淀加体积浓度80%乙醇洗涤2次,每次8ml,离心,弃去上清液,沉淀加沸水溶解,转移至25ml量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,稀释4倍,制得供试品溶液;
精密量取供试品溶液1ml,置10ml具塞试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“精密加入5%苯酚溶液1ml”起,依次测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算总多糖含量;
(2.2)铁皮石斛中柚皮素含量测定
采用高效液相色谱法测定保健茶中铁皮石斛有效成分柚皮素含量;色谱条件为:XB C18色谱柱,规格为4.6mm×250mm,5μm;柱温30℃;流动相0.2%磷酸为A相-甲醇为B相,梯度洗脱;检测波长290nm;流速1.0mL/min;
取柚皮素对照品适量,精密称定,置50mL棕色量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀,制成每1mL含26μg的对照品溶液,备用;
取保健茶0.5g,精密称定,置50mL的圆底烧瓶中,精密加入体积比为4∶1的甲醇和20%盐酸的混合溶液25mL,称重,置水浴中加热回流,放冷,再称重,用甲醇补足减失重,摇匀,静置,取上清液经0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液,进样10μL,制成供试品溶液备用;
精密吸取对照品溶液和保健茶供试品溶液注入液相色谱仪,按上述柚皮素含量测定的色谱条件进行测定,按外标一点法,或以柚皮素对照品制作标准曲线测定保健茶供试品溶液中的柚皮素含量。
作为优选方案,以上所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:枫灵苦荞茶中总多糖含量的测定的标准曲线方程为Y=135.57X+2.0092,r=0.9996,表明铁皮石斛多糖在18.74至93.5ug/ml具有良好的线性。
作为优选方案,以上所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:步骤(2.2)铁皮石斛中柚皮素含量测定的梯度洗脱程序为0~5min,25%B;5~10min,25%~30%B;10~25min,30~40%B;25~45min,40%~55%B;4~50min,55%~60%B。
本发明提供的具有防治糖尿病功效的保健茶具有很好的辅助降血糖功效,可以用于辅助降血糖。
有益效果:本发明提供的具有防治糖尿病功效的保健茶具有以下优点:
1、本发明根据中医药理论,通过大量实验筛选原料组成及其重量配比,实验结果表明,本发明以重量比为3:1:1的苦荞麦、铁皮石斛、灵芝孢子粉作为最佳的组合物,具有很好的降血糖功效,绿色安全性,长期服用无毒副作用。
2、动物实验结果表明:本发明提供的保健茶具有非常好的降血糖,降血脂,改善糖耐量,增加胰岛素生成等功效。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明,应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围,在阅读了本发明之后,本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1
1、具有防治糖尿病功效的保健茶,它由下列重量份数的原料制成:
苦荞麦3份、铁皮石斛1份、灵芝孢子粉1份。
2、具有防治糖尿病功效的保健茶的制备方法,其包括以下步骤:
(1)将鲜品铁皮石斛浸泡去薄膜衣,洗净,剪成小段,置60℃烘箱烘干,取出用干磨机粉碎成细小颗粒,继续置60℃烘箱中烘48小时以上,干燥后用粉碎机粉碎,过筛,得铁皮石斛细粉,备用;
(2)取苦荞麦,除杂、漂洗、脱水、干燥、粉碎过筛,得苦荞麦细粉,备用;
(3)将步骤(1)制得的铁皮石斛细粉3份和步骤(2)制得的苦荞麦细粉1份与灵芝破壁孢子粉1份混匀,装袋,密封。
具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:其包括以下步骤:
(1)定性研究
(1.1)灵芝破壁孢子粉的显微鉴别
显微鉴别实施例1制备得到的保健茶,其中灵芝破壁孢子粉为棕褐色粉状物,外观极其细腻,无成陀结块,用母指和食指轻轻磋摸,有光滑细腻感,无粘连、无沙砾等异物的感觉;在1500倍的放大倍数下观察,不破壁孢子完整、丰满、双壁结构清晰,外壁无色,内壁有小刺,淡褐色;个体形态一致,呈椭圆形;顶端平截,大小约为8.5~11×5.2~6.9μm;而破壁孢子则有几种形态,依破壁程序不同可分为轻度破壁---孢子形态完整、壁上有小孔、中度破壁---孢子形态不完整、有缺损、重度破壁---破碎孢子壳和孢子内容物;
(1.2)苦荞麦中谷甾醇薄层鉴别:
分别称取苦荞麦对照药材和取实施例1制备得到的各3g,加入25mL氯仿溶液,超声提取30min,过滤,取10mL滤液,蒸发皿上蒸干,用氯仿溶解并定容至2mL;吸取保健茶供试液、苦荞麦对照药材溶液l0μL分别点于同一含0.3%羧甲基纤维素钠为粘贴剂的硅胶G板上,以体积比为7:3的石油醚-乙醚为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸溶液,105℃烘干至斑点显色,日光检视,保健茶粉末含有与苦荞麦对照药材相同的斑点。
(2)定量研究
(2.1)枫灵苦荞茶中总多糖含量的测定
取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含90μg的溶液,即得对照品溶液;精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml,分别置10ml具塞试管中,各加水补至1.0ml,精密加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,再精密加硫酸5ml,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,置冰浴中冷却5分钟,以相应试剂为空白,照2015年版中国药典附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;以吸光度值X为横坐标、无水葡萄糖配制溶液浓度Y(μg/ml)为纵坐标作标准曲线,得标准曲线方程Y=135.57X+2.0092,r=0.9996,表明铁皮石斛多糖在18.74-93.5ug/ml具有良好的线性。
取实施例1制备得到的保健茶粉末5g,精密称定,加水200ml,加热回流2小时,放冷,转移至250ml量瓶中,用少量水分次洗涤容器,洗液并入同一量瓶中,加水至刻度,摇匀,取适量离心,精密量取续滤液2ml,置15ml离心管中,精密加入无水乙醇10ml,摇匀,冷藏1小时,取出,离心,弃去上清液,沉淀加体积浓度80%乙醇洗涤2次,每次8ml,离心,弃去上清液,沉淀加沸水溶解,转移至25ml量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,稀释4倍,制得供试品溶液;
精密量取供试品溶液1ml,置10ml具塞试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“精密加入5%苯酚溶液1ml”起,依次测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算总多糖含量;检测实施例1制备得到的保健茶中多糖含量为13.37%。
(2.2)铁皮石斛中柚皮素含量测定
采用高效液相色谱法测定保健茶中铁皮石斛有效成分柚皮素含量;色谱条件为:XB C18色谱柱,规格为4.6mm×250mm,5μm;柱温30℃;流动相0.2%磷酸为A相-甲醇为B相,梯度洗脱(0~5min,25%B;5~10min,25%~30%B;10~25min,30~40%B;25~45min,40%~55%B;4~50min,55%~60%B);检测波长290nm;流速1.0mL/min;
取柚皮素对照品适量,精密称定,置50mL棕色量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀,制成每1mL含26μg的对照品溶液,备用;
取保健茶0.5g,精密称定,置50mL的圆底烧瓶中,精密加入体积比为4∶1的甲醇和20%盐酸的混合溶液25mL,称重,置水浴中加热回流,放冷,再称重,用甲醇补足减失重,摇匀,静置,取上清液经0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液,进样10μL,制成供试品溶液备用;
精密吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,按上述柚皮素含量测定的色谱条件进行测定,按外标二点法,测定供试品中柚皮素含量为286.95ug/g。相比现有技术具有更高的柚皮素含量,具有很好的防治高血糖的功效。
实施例2
1、具有防治糖尿病功效的保健茶,它由下列重量份数的原料制成:
苦荞麦1份、铁皮石斛1份、灵芝孢子粉1份。
2、具有防治糖尿病功效的保健茶的制备方法,其包括以下步骤:
(1)将鲜品铁皮石斛浸泡去薄膜衣,洗净,剪成小段,置60℃烘箱烘干,取出用干磨机粉碎成细小颗粒,继续置60℃烘箱中烘48小时以上,干燥后用粉碎机粉碎,过筛,得铁皮石斛细粉,备用;
(2)取苦荞麦,除杂、漂洗、脱水、干燥、粉碎过筛,得苦荞麦细粉,备用;
(3)将步骤(1)制得的铁皮石斛细粉1份和步骤(2)制得的苦荞麦细粉1份与灵芝破壁孢子粉1份混匀,装袋,密封。
具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:其包括以下步骤:
(1)定性研究
(1.1)灵芝破壁孢子粉的显微鉴别
显微鉴别实施例1制备得到的保健茶,其中灵芝破壁孢子粉为棕褐色粉状物,外观极其细腻,无成陀结块,用母指和食指轻轻磋摸,有光滑细腻感,无粘连、无沙砾等异物的感觉;在1500倍的放大倍数下观察,不破壁孢子完整、丰满、双壁结构清晰,外壁无色,内壁有小刺,淡褐色;个体形态一致,呈椭圆形;顶端平截,大小约为8.5~11×5.2~6.9μm;而破壁孢子则有几种形态,依破壁程序不同可分为轻度破壁---孢子形态完整、壁上有小孔、中度破壁---孢子形态不完整、有缺损、重度破壁---破碎孢子壳和孢子内容物;
(1.2)苦荞麦中谷甾醇薄层鉴别:
分别称取苦荞麦对照药材和取实施例1制备得到的各3g,加入25mL氯仿溶液,超声提取30min,过滤,取10mL滤液,蒸发皿上蒸干,用氯仿溶解并定容至2mL;吸取保健茶供试液、苦荞麦对照药材溶液l0μL分别点于同一含0.3%羧甲基纤维素钠为粘贴剂的硅胶G板上,以体积比为7:3的石油醚-乙醚为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸溶液,105℃烘干至斑点显色,日光检视,保健茶粉末含有与苦荞麦对照药材相同的斑点。
(2)定量研究
(2.1)枫灵苦荞茶中总多糖含量的测定
取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含90μg的溶液,即得对照品溶液;精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml,分别置10ml具塞试管中,各加水补至1.0ml,精密加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,再精密加硫酸5ml,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,置冰浴中冷却5分钟,以相应试剂为空白,照2015年版中国药典附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;以吸光度值X为横坐标、无水葡萄糖配制溶液浓度Y(μg/ml)为纵坐标作标准曲线,得标准曲线方程Y=135.57X+2.0092,r=0.9996,表明铁皮石斛多糖在18.74-93.5ug/ml具有良好的线性。
取实施例2制备得到的保健茶粉末5g,精密称定,加水200ml,加热回流2小时,放冷,转移至250ml量瓶中,用少量水分次洗涤容器,洗液并入同一量瓶中,加水至刻度,摇匀,取适量离心,精密量取续滤液2ml,置15ml离心管中,精密加入无水乙醇10ml,摇匀,冷藏1小时,取出,离心,弃去上清液,沉淀加体积浓度80%乙醇洗涤2次,每次8ml,离心,弃去上清液,沉淀加沸水溶解,转移至25ml量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,稀释4倍,制得供试品溶液;
精密量取供试品溶液1ml,置10ml具塞试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“精密加入5%苯酚溶液1ml”起,依次测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算总多糖含量;检测实施例2制备得到的保健茶中多糖含量为11.63%。
(2.2)铁皮石斛中柚皮素含量测定
采用高效液相色谱法测定保健茶中铁皮石斛有效成分柚皮素含量;色谱条件为:XB C18色谱柱,规格为4.6mm×250mm,5μm;柱温30℃;流动相0.2%磷酸为A相-甲醇为B相,梯度洗脱(0~5min,25%B;5~10min,25%~30%B;10~25min,30~40%B;25~45min,40%~55%B;4~50min,55%~60%B);检测波长290nm;流速1.0mL/min;
取柚皮素对照品适量,精密称定,置50mL棕色量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀,制成每1mL含26μg的对照品溶液,备用;
取保健茶0.5g,精密称定,置50mL的圆底烧瓶中,精密加入体积比为4∶1的甲醇和20%盐酸的混合溶液25mL,称重,置水浴中加热回流,放冷,再称重,用甲醇补足减失重,摇匀,静置,取上清液经0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液,进样10μL,制成供试品溶液备用;
精密吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,按上述柚皮素含量测定的色谱条件进行测定,按外标二点法,测定供试品中柚皮素含量为222.15ug/g。相比现有技术具有更高的柚皮素含量,具有很好的防治高血糖的功效。
实施例3
1、具有防治糖尿病功效的保健茶,它由下列重量份数的原料制成:
苦荞麦2份、铁皮石斛1份、灵芝孢子粉1份。
2、制备方法同实施例2。
3、质量鉴定方法同实施例2。检测实施例3制备得到的保健茶中多糖含量为11.89%。测定供试品中柚皮素含量为228.30ug/g
实施例4保健功效研究
1、采用随机、对照的研究方案。
(1)病例数量:按1:1对照原则,糖尿病前期对照组(简称对照组)、糖尿病前期治疗组(简称治疗组)各30例,共60例,均来自南京中医药大学附属医院内分泌科门诊。
(2)对照设计:分为对照组和治疗组。
2、治疗方案
(1)对照组:健康教育、饮食指导、有规律的运动。
(2)治疗组:本发明实施例1制备得到的保健茶,温开水冲泡,一次1袋,一日1次。
两组均以4周为1个疗程,观察3个疗程。
3、诊断标准
3.1糖尿病前期诊断标准
依据2010年中华医学会糖尿病学分会《中国2型糖尿病防治指南》和2010年美国糖尿病学会(ADA)诊断标准。
糖尿病前期包括空腹血糖受损、糖耐量受损,二者可单独或合并出现。
(1)空腹血糖受损:指空腹血糖(FBG)升高,未达到糖尿病的诊断标准,空腹血糖在6.1-7.0mmol/L之间。
(2)糖耐量受损:OGTT试验2小时后的血糖(PBG)水平升高,超过正常的7.8mmol/L,但仍未达到11.1mmol/L的糖尿病诊断标准。
(3)糖化血红蛋白:5.7%~6.4%。
3.2中医气阴两虚证候诊断标准
参考2002年国家药品监督管理局组织制定的《中药新药临床研究指导原则》理论内容设定气阴亏虚证:
主症:a.咽干口燥b.倦怠乏力
次症:a.多食易饥b.口渴喜饮c.气短懒言d.五心烦热e.心悸失眠.f.溲赤便秘
舌脉:舌红少津,苔薄或花剥,脉细数无力,或细而弦。
以上具备主症2项,并同时具备次症2项或以上,参照舌脉即可诊断。
3.3病例入选标准
3.3.1纳入标准
(1)符合西医糖尿病前期的诊断标准;
(2)年龄在20-70岁之间,性别不限;
(3)知情同意者。
3.3.2排除标准
(1)不符合西医诊断标准者;
(2)年龄在20岁以下或70岁以上者;
(3)妊娠或哺乳期妇女;
(4)合并有心、脑、肝和造血系统等严重的原发性疾病,精神病患者;
(5)过敏体质或对多种药物过敏者;
(6)不能配合饮食控制或不按规定用药而影响疗效者;
(7)未满规定观察期而中断治疗,无法判定疗效或资料不全者。
3.3.3剔除病例和脱落病例
(1)纳入后发现不符合纳入标准的病例,需予以剔除。
(2)受试者未按规定用药、资料不全、发生严重不良事件或特殊生理变化不宜继续受试、自动退出者等均为脱落病例。
3.4观察指标
3.4.1疗效观察指标
疗效观察指标包括临床表现、糖代谢指标、免疫功能指标和抗衰老指标。糖代谢指标包括空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白的测定。
(1)临床主要相关表现:咽干口燥、倦怠乏力、多食易饥、口渴喜饮、气短懒言、五心烦热、心悸、失眠、溲赤、便秘等气阴两虚症状。
(2)空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2hBG):每2周观察记录1次。
(3)糖化血红蛋白测定:治疗前后各检查记录1次。
3.4.2安全性观察
(1)一般体格检查。
(2)血、尿、粪常规检查。
(3)心、肝、肾功能检查。
(4)全身反应(随时记录)。
3.5安全性评价标准
1级:安全,无任何不良反应。
2级:比较安全,如有不良反应,不需要做任何处理可继续给药。
3级:有安全性问题,有中等程度的不良反应,做处理后可继续给药。
4级:因不良反应中止服药。
3.6统计方法
(1)统计分析将采用SPSS19.0统计分析软件进行计算。
(2)所有的统计检验均采用双侧检验,P≤0.05将被认为所检验的差别有统计意义。
(3)不同治疗组定量资料将采用进行统计描述。采用配对t检验比较组内前后差异,成组t检验比较组间差异。两组治疗前后的变化,呈正态分布的采用方差分析或t检验,非正态分布的采用秩和检验进行比较。
(4)不同治疗组各次就诊的定性资料采用频数进行统计描述。两组治疗前后的变化采用卡方检验。
知情同意后,依据纳入标准和排除标准要求,纳入符合糖尿病前期诊断的患者60例,1:1对照原则设对照组、治疗组各30例。对照组:采用健康教育、饮食指导、有规律的运动。治疗组:在对照组基础上加枫灵苦荞茶(组成:铁皮石斛、灵芝破壁孢子粉、苦荞麦),白开水冲泡,一次1袋,一日1次。两组均以4周为1个疗程,观察3个疗程。观察并记录治疗前后的血糖、糖化血红蛋白等指标和症状的变化,及有无不良反应等情况。
4.实验结果:
4.1、病例入选及试验完成情况
入选病例均为南京中医药大学附属医院门诊患者,共有符合纳入标准的60例患者入组,最终全部完成试验。
4.2、两组基线比较
两组患者性别、年龄分布、FBG、PBG、HbA1c、中医临床症状、中医证候积分,经方差分析检验,P>0.05,无明显差异,具有可比性。
4.3、疗效指标的比较
4.3.1治疗前后两组FBG、PBG、HbA1c水平的变化
两组与治疗前相比,治疗组FBG、PBG、HbA1c均有显着性改善(p<0.01);组间比较,治疗组FBG、PBG、HbA1c改善较对照组有显著性差异(p<0.05或p<0.01),见表6。
表6治疗前后两组FBG、PBG、HbA1c水平
注:治疗前后组内比较⊿⊿p<0.01;组间比较★p<0.05,★★p<0.01
4.3.2治疗前后两组中医证候积分比较
两组与治疗前相比,治疗组中医证候积分有显著性改善(p<0.01),对照组中医证候积分虽有下降但无统计学意义;组间比较,治疗组中医证候积分改善较对照组有显著性差异(p<0.05),见表7。
表7治疗前后两组中医证候积分
注:治疗前后组内比较⊿⊿p<0.01;组间比较★p<0.05,★★p<0.01
4.4不良事件及安全性分析
两组治疗前后安全性指标血常规、尿常规、大便常规及隐血试验,肝肾功能检查均在正常范围。两组均未见不良反应。
以上临床研究结果表明,本发明研制得到的保健茶,能够安全有效的降低患者血糖水平,改善患者临床症状,具有很好的预防糖尿病的功效。且临床安全性高。
实施例4动物实验
1、实验材料
1.1、实验动物
动物来源:上海杰思捷实验动物有限公司提供,SPF级昆明小鼠,雌雄各半,体质量18-22g,动物许可证号:SCXX(沪)2013-0006。实验地点:南京中医药大学实验动物中心,每笼5只分笼饲养。湿度40%-60%,室温18-22℃。高脂饲料(蛋白质14%、脂肪25%、碳水化合物50%、胆固醇5%、猪油10%)由南京中医药大学动物实验中心提供。普通饲料喂养,自由进食进水,动态观察进大鼠的进食量和饮水量,每周称体重一次,每日更换笼子垫料一次。
1.2实验药物:实施例1和实施例2制备得到,4℃保存备用,灌胃给药前取出放置至室温。高糖高脂饲料由南京中医药大学动物实验中心提供。p H4.2的枸橼酸钠缓冲液:由南京中医药大学动物实验中心配制。
1.3主要试剂
(1)血糖试纸,购自美国雅培公司。
(2)柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液(pH=4.4),由柠檬酸、柠檬酸三钠配制。
配制方法:于室温下,分别配置0.1mol/L柠檬酸溶液和0.1mol/L柠檬酸三钠。
0.1mol/L柠檬酸溶液:取柠檬酸0.4202g溶于20m1蒸馏水中。
0.1mol/L几柠檬酸三钠溶液:取柠檬酸三钠0.5882g,溶于20m1蒸馏水中。
取0.1mol/L几柠檬酸溶液11.4ml,0.1mol/L柠檬酸三钠溶液8.6mol,混匀后,用NaOH调PH值为4.4。过滤灭菌后,4℃冰箱保存。上述试剂均由国药集团化学试剂有限公司提供。
(3)链脲佐菌素:STZ,购自美国Sigma公司。
4℃冰箱避光保存,使用前以pH4.40.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成2%(2gSTZ+100mI柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液)的溶液,冰浴,半小时内使用完毕。
(4)胆固醇测定试剂盒,甘油三酯测定试剂盒,低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒,高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒均购自中生北控生物科技公司。
(5)小鼠胰岛素、C肽ELISA试剂盒,购自上海西塘生物科技有限公司。
1.4主要实验仪器
(1)7600全自动生化分析仪,购自日本日立公司。
(2)雅培安妥血糖仪,购自美国雅培公司。
(3)Enspire型多功能酶标仪,购自美国Perkin Elmer公司。
2实验方法
2.1模型建立、分组及取材
(1)模型建立
所有小鼠适应性喂养1周后,随机分为空白对照组和造模组,空白对照组喂养普通饲料,造模组以高脂饲料喂养2周后禁食12小时。分组后空白对照组尾静脉注射生理盐水10mL/kg,其余各组链脲佐菌素(20g/kg)腹腔注射造模72h后禁食不禁水12h,尾静脉采血测血糖,当空腹血糖>5而<11mmol/L,则提示造模成功。
(2)实验动物分组及给药方法
将成模小鼠随机分为模型组、实施例1和实施例2的高剂量组、中剂量组和低剂量组。分别给予0.2g/ml(最大给药浓度)、0.11g/ml、0.02g/ml三个浓度梯度进行灌胃。每日按20ml·kg-1灌胃,给予相应药物1次,正常组和模型组给等体积生理盐水,共给药45天。给药剂量按陈奇主编的《中药药理研究方法学》剂量折算公式换算;正常组与糖尿病模型组给予等量生理盐水灌胃。
(3)标本收集与处理:
分别于给药第15d、30d、45d尾静脉取血测血糖,分别在实验前一天、给药第45d,禁食不禁水12小时,给予小鼠口服糖耐量实验。给药45d后处死小鼠,取部分胰腺组织称重后,分别用4%多聚甲醛溶液固定及液氮冻存,用于制作胰腺组织切片。采取目内眦取血,将血液以3000r/min离心1min,分离血清、血浆后分装于EP管中,于-80℃冰箱保存待测。用于生化及放免、酶免指标的测定。
2.2观察指标以及实验方法
(1)一般状态观察:包括精神状态、毛色、尿量、体重、体长(从鼻至肛口的长度)及尾长等。
(2)空腹血糖测定:各组大鼠禁食12小时后,于清晨取尾尖血一滴滴于血糖试纸上,用血糖仪检测空腹血清葡萄糖值,单位为mmol/L。
(3)糖耐量实验:实验前小鼠禁食不禁水12h,50%葡萄糖灌胃小鼠,2g/kg。于灌胃葡萄糖前(0min),及灌葡萄糖后30,60,120min,分别测定各时间点血糖,绘制OGTT曲线。采用近似梯形计算糖耐量试验血糖值的曲线下面积(AUC),AUC(mmol.h/1)=0.5X(FBG0+FBG30)/2+0.5x(FBG30+FBG60)/2+1x(FBG60+FBG120)/2。
(4)胰岛素检测:采用双抗体夹心ABC-ELISA法,用抗小鼠胰岛素单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的胰岛素与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠胰岛素,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与光密度值成正比,可通过绘制标准曲线求出胰岛素浓度。
(5)C肽检测:采用双抗体夹心ABC-ELISA法,用抗小鼠C肽单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的C肽与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠C肽,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与光密度值成正比,可通过绘制标准曲线求出C肽浓度。
(6)血脂浓度:按照试剂盒说明,对小鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C进行检测。
(8)胰腺细胞形态学观察。
A实验原理:苏木素中带正电荷的色精可吸附在细胞核中带负电荷的核酸成份上而将细胞核染成蓝紫色。伊红是带负电荷的酸性染料,使细胞浆呈现粉红色或红色。
B试剂准备:
①二甲苯
②100%乙醇,95%乙醇,80%乙醇,75%乙醇
③苏木素,伊红
C操作步骤:
a常规石蜡包埋(同胰腺组织切片免疫组化)。
b切片常规用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗:二甲苯(I)5min二甲苯((II)5min95%的乙醇1min80%乙醇1min75%乙醇1min蒸馏水洗2min。
c苏木素染色5-20min(可以根据染色结果和要求调整时间),玻片用自来水冲洗。
d玻片于分化液中分化30s。
e自来水中浸泡玻片15min。
f玻片于伊红液放置2min。
g自来水冲洗玻片。
h常规脱水,透明,封片:95%乙醇(I)1min95%乙醇(II)1min 100%乙醇(I)1min100%乙醇(II)1min二甲苯石碳酸(3:1)1min二甲苯(I)1min二甲苯(II)1min中性树胶封固。
D镜下观察:
200倍普通光学显微镜下观察胰岛细胞形态,细胞膜完整性,细胞核的大小形态和细胞数量。
3结果分析和数据统计学处理
观察和比较各组不同时段各个观察指标的变化情况,并采用SPSS 19.0统计学软件进行假设检验和相关性分析。所有数据以均数士标准差(x士s)表示,多组间比较采用方差分析,两两比较采用Anova法,以P<0.05具有统计学意义。
3.1一般状态
实验期间正常组小鼠精神状态良好,体重随实验时间稳步增加,反应敏捷,毛色白而光泽。注射STZ后造模小鼠出现多饮多尿多食,体型消瘦,体重增加迟缓甚至下降,精神萎靡,皮毛无光泽,部分出现烂尾。随实验周期延长体重差异进一步加大,在实验结束时枫灵苦荞茶高、中、低剂量组小鼠体重与模型组比较均有显著性差异(P<0.01);给药组精神状况、反应灵敏程度、活动状态均明显优于模型组。。详细体重结果见表8。
表8各时间点小鼠体重变化
组别 | n | 第0周 | 第3周 | 第6周 |
正常组 | 15 | 22.90±1.15 | 38.11±7.91 | 42.77±8.81 |
模型组 | 13 | 22.15±1.69 | 31.18±4.65 | 38±6.48 |
实施例1低剂量组 | 14 | 22.96±1.79 | 34.67±3.82 | 40.71±4.78## |
实施例1中剂量组 | 13 | 22.65±1.61 | 36.88±3.92 | 41.19±5.7## |
实施例1高剂量组 | 13 | 22.93±1.43 | 38.74±3.23 | 42.89±2.96## |
实施例2低剂量组 | 14 | 22.89±1.54 | 33.48±3.35 | 39.12±6.48 |
实施例2中剂量组 | 13 | 22.78±1.68 | 35.39±3.61 | 40.32±4.87 |
实施例2高剂量组 | 14 | 22.44±1.64 | 36.17±3.15 | 41.82±3.16 |
注:与模型组比较,##P<0.01。
3.2治疗前后血糖,如下表9。
表9药物治疗前后血糖情况
治疗前后组内比较,△△P<0.01,△P<0.05;与模型组比较,##P<0.01。
以上表9实验结果表明,造模成功后、治疗前,即实验第3周模型组、实施例1和2保健茶高、中、低剂量组小鼠空腹血糖与正常组相比均显著升高,有显著性差异(P<0.05),组间比较无统计学意(P>0.05)。治疗后实施例1的保健茶低、高剂量组空腹血糖与治疗前比较有显著性差(P<0.01),与模型组比较有显著性差异(P<0.01),并且对比实验结果表明,本发明实施例1的保健茶效果要优于实施例2。
3.3血脂水平
治疗结束后,保健茶的低、高剂量组TC、TG水平明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01),中剂量组TC、TG水平低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后低、中剂量组HDL低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05),低、中、高剂量组LDL与模型组比较均无统计学意义(P>0.05),见表10,表11。
表10保健茶对各组小鼠TC、TG的影响
组别 | n | TC(mmol/L) | TG(mmol/L) |
正常组 | 15 | 3.11±0.48## | 1.06±0.37## |
模型组 | 13 | 4.63±1.56 | 1.10±0.33 |
实施例1低剂量组 | 14 | 4.27±0.94## | 1.12±0.41## |
实施例1中剂量组 | 13 | 4.26±0.74# | 1.01±0.26# |
实施例1高剂量组 | 13 | 4.06±0.63# | 0.94±0.23## |
实施例2低剂量组 | 14 | 4.47±0.84## | 1.15±0.35## |
实施例2中剂量组 | 13 | 4.53±0.76# | 1.11±0.31# |
实施例2高剂量组 | 13 | 4.22±0.69# | 1.04±0.25## |
注:与模型组比较,##P<0.01,#P<0.05。
表11保健茶对各组小鼠HDL、LDL的影响
组别 | n | HDL(mmol/L) | LDL(mmol/L) |
正常组 | 15 | 3.47±0.28 | 0.31±0.07 |
模型组 | 13 | 2.80±0.62 | 0.47±0.12 |
实施例1低剂量组 | 14 | 3.43±0.68# | 0.43±0.16 |
实施例1中剂量组 | 13 | 3.27±0.68# | 0.37±0.13 |
实施例1高剂量组 | 13 | 3.99±0.59# | 0.34±0.12# |
实施例2低剂量组 | 14 | 3.13±0.46# | 0.43±0.14 |
实施例2中剂量组 | 13 | 3.26±0.61# | 0.40±0.13 |
实施例2高剂量组 | 13 | 3.51±0.61 | 0.38±0.13 |
注:与模型组比较,#P<0.05。
3.4胰岛素、C肽水平
治疗后,保健茶的低、高剂量组的胰岛素水平比正常组明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05),见表12。低剂量组的C肽水平较正常组以及模型组有显著差异(P<0.01),中剂量组C肽水平较模型组及正常组水平上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。
表12保健茶对各组小鼠胰岛素、C肽的影响
组别 | n | 胰岛素(ng/ml) | C肽(pg/ml) |
正常组 | 15 | 0.09±0.04 | 69.86±16.67 |
模型组 | 13 | 0.08±0.02 | 61.98±28.34 |
实施例1低剂量组 | 14 | 0.12±0.04△ | 100.46±31.61△△## |
实施例1中剂量组 | 13 | 0.09±0.02 | 87.31±19.79△# |
实施例1高剂量组 | 13 | 0.11±0.02△ | 90.73±19.28 |
实施例2低剂量组 | 14 | 0.08±0.04 | 90.46±31.61△# |
实施例2中剂量组 | 13 | 0.09±0.02 | 87.31±19.79△# |
实施例2高剂量组 | 13 | 0.10±0.02△ | 83.73±12.28 |
注:与正常组比较,△△P<0.01,△P<0.05;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01。
3.4糖化血红蛋白水平
治疗后各组糖化血红蛋白值均在正常范围内,差异无统计学意义(P>0.05),见表13。
表13治疗后各组HbA1c比较
3.5糖耐量实验
正常组小鼠血糖在30分钟显著升高,60分钟血糖值开始下降,模型组各时间点血糖值均较高,与模型组相比,低、中、高剂量组的血糖值在各时间点明显低于模型组(P<0.01或P<0.05),枫灵苦荞茶各剂量组间血糖值无明显差异。低剂量组能减少小鼠的血糖曲线下面积,与模型组相比具有显著性差异(P<0.01),表14。
表14各组小鼠OGTT血糖值及AUC
注:与正常组比较,△△P<0.01,△P<0.05;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01。
以上实验结果表明,本发明提供的保健茶具有很好的调节血脂,调节血糖和改善糖耐量等功效,并且对比实验结果表明,本发明实施例1制备得到的保健茶比实施例2保健茶具有更优越的防治糖尿病的功效,说明实施例1各组份配合取得了非常好的预料不到的技术效果!。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种具有防治糖尿病功效的保健茶,其特征在于,它包括下列原料:
苦荞麦、铁皮石斛和灵芝孢子粉。
2.根据权利要求1所述的具有防治糖尿病功效的保健茶,其特征在于,它由下列重量份数的原料制成:
苦荞麦1~3份、铁皮石斛1~2份、灵芝孢子粉1~2份。
3.根据权利要求2所述的具有防治糖尿病功效的保健茶,其特征在于,它由下列重量份数的原料制成:
苦荞麦3份、铁皮石斛1份、灵芝孢子粉1份。
4.权利要求1至3任一项所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将鲜品铁皮石斛浸泡去薄膜衣,洗净,剪成小段,置60℃烘箱烘干,取出用干磨机粉碎成细小颗粒,继续置60℃烘箱中烘48小时以上,干燥后用粉碎机粉碎,过筛,得铁皮石斛细粉,备用;
(2)取苦荞麦,除杂、漂洗、脱水、干燥、粉碎过筛,得苦荞麦细粉,备用;
(3)将步骤(1)制得的铁皮石斛细粉和步骤(2)制得的苦荞麦细粉与灵芝破壁孢子粉混匀,装袋,密封。
5.权利要求1至3任一项所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:其特征在于包括以下步骤:
(1)定性研究
(1.1)灵芝破壁孢子粉的显微鉴别
显微鉴别:灵芝破壁孢子粉为棕褐色粉状物,外观极其细腻,无成陀结块,用母指和食指轻轻磋摸,有光滑细腻感,无粘连、无沙砾等异物的感觉;在1500倍的放大倍数下观察,不破壁孢子完整、丰满、双壁结构清晰,外壁无色,内壁有小刺,淡褐色;个体形态一致,呈椭圆形;顶端平截,大小约为8.5~11×5.2~6.9μm;而破壁孢子则有几种形态,依破壁程序不同可分为轻度破壁---孢子形态完整、壁上有小孔、中度破壁---孢子形态不完整、有缺损、重度破壁---破碎孢子壳和孢子内容物;
(1.2)苦荞麦中谷甾醇薄层鉴别:
分别称取苦荞麦对照药材和保健茶粉末各3g,加入25mL氯仿溶液,超声提取30min,过滤,取10mL滤液,蒸发皿上蒸干,用氯仿溶解并定容至2mL;吸取保健茶供试液、苦荞麦对照药材溶液l0μL分别点于同一含0.3%羧甲基纤维素钠为粘贴剂的硅胶G板上,以体积比为7:3的石油醚-乙醚为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸溶液,105℃烘干至斑点显色,日光检视;
(2)定量研究
(2.1)枫灵苦荞茶中总多糖含量的测定
取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含90μg的溶液,即得对照品溶液;精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml,分别置10ml具塞试管中,各加水补至1.0ml,精密加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,再精密加硫酸5ml,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,置冰浴中冷却5分钟,以相应试剂为空白,照2015年版中国药典附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;
取保健茶粉末5g,精密称定,加水200ml,加热回流2小时,放冷,转移至250ml量瓶中,用少量水分次洗涤容器,洗液并入同一量瓶中,加水至刻度,摇匀,取适量离心,精密量取续滤液2ml,置15ml离心管中,精密加入无水乙醇10ml,摇匀,冷藏1小时,取出,离心,弃去上清液,沉淀加体积浓度80%乙醇洗涤2次,每次8ml,离心,弃去上清液,沉淀加沸水溶解,转移至25ml量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,稀释4倍,制得供试品溶液;
精密量取供试品溶液1ml,置10ml具塞试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“精密加入5%苯酚溶液1ml”起,依次测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算总多糖含量;
(2.2)铁皮石斛中柚皮素含量测定
采用高效液相色谱法测定保健茶中铁皮石斛有效成分柚皮素含量;色谱条件为:XBC18色谱柱,规格为4.6mm×250mm,5μm;柱温30℃;流动相0.2%磷酸为A相-甲醇为B相,梯度洗脱;检测波长290nm;流速1.0mL/min;
取柚皮素对照品适量,精密称定,置50mL棕色量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀,制成每1mL含26μg的对照品溶液,备用;
取保健茶0.5g,精密称定,置50mL的圆底烧瓶中,精密加入体积比为4∶1的甲醇和20%盐酸的混合溶液25mL,称重,置水浴中加热回流,放冷,再称重,用甲醇补足减失重,摇匀,静置,取上清液经0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液,进样10μL,制成供试品溶液备用;
精密吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,按上述柚皮素含量测定的色谱条件进行测定。
6.根据权利要求5所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:其特征在于
枫灵苦荞茶中总多糖含量的测定的标准曲线方程为Y=135.57X+2.0092,r=0.9996,表明铁皮石斛多糖在18.74至93.5ug/ml具有良好的线性。
7.根据权利要求5所述的具有防治糖尿病功效的保健茶的质量鉴定方法:其特征在于
步骤(2.2)铁皮石斛中柚皮素含量测定的梯度洗脱程序为0~5min,25%B;5~10min,25%~30%B;10~25min,30~40%B;25~45min,40%~55%B;4~50min,55%~60%B。
8.权利要求1至3任一项所述的具有防治糖尿病功效的保健茶在辅助降血糖中的应用。
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