CN105891481A - 基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒。本发明提供的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒包括试纸条和卡壳：卡壳设置于试纸条的外围，包围试纸条；试纸条包括底衬以及设置于底衬上的包被膜，包被膜上依次设置有样品垫、包被线区和吸水纸；包被线区依次设置为标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线。本发明提供的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒通过AFP与CEA两项联检，对于肿瘤发生的判断起到协同互补作用，可以根据实际检测结果，为肿瘤早期提供辅助判断，缩短检测周期，增加了检测的灵敏度，方便了用户使用。

Description

基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及生命健康技术领域，具体地说，本发明涉及基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
甲胎蛋白(α-fetoprotein AFP)是单一多聚体肽键糖蛋白，含590个氨基酸，分子量约为70KD，与血清白蛋白、维生素结合蛋白属同一基因家族。AFP于胎儿6周开始合成，12-15周达到高峰。出生后1-2年降至成人水平。AFP是诊断肝癌灵敏度高和特异性好的肿瘤标志物，是临床诊断原发性肝细胞癌的主要实验室指标，常用于原发性肝癌临床检查及普查。癌胚抗原(carcino-embryonic antigen CEA)是一种分子量为180-200kDa的多糖蛋白复合物。它存在2-6月龄的胎儿胃肠道组织和直、结肠癌细胞组织中，胃癌、胰腺癌、卵巢癌、食道癌等组织中也有存在。通常CEA被认为是一种广谱的肿瘤标志物。目前市场上的广谱的肿瘤的早期判断仅仅单独依靠单一的肿瘤标志物的检测，常常因为单一的检验周期长，灵敏度低，从而无法确保肿瘤的诊断率以及甚至会影响肿瘤患者后续的治疗和生命健康。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒及其制备方法，同时检测AFP和CEA，对于肿瘤发生的判断起到协同互补作用，可以根据实际检测结果，为肿瘤早期提供辅助判断，缩短检测周期，增加了检测的灵敏度，方便了用户使用。
为实现上述目的，本发明提供了一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒。
所述基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒包括试纸条和卡壳：
所述卡壳设置于所述试纸条的外围，包围所述试纸条；
所述试纸条包括底衬以及设置于所述底衬上的包被膜，所述包被膜上依次设置有样品垫、包被线区和吸水纸；
所述包被线区依次设置有标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线。
在其中一个实施例中，所述AFP检测线包括能与待检测抗原AFP特异性结合的第一AFP单克隆抗体；所述CEA检测线包括能与待检测抗原CEA特异性结合的第一CEA单克隆抗体。
在其中一个实施例中，所述待检测抗原AFP为人源AFP，所述待检测抗原CEA为人源CEA。
在其中一个实施例中，所述标记线包括被荧光胶乳标记的第二AFP单克隆抗体、第二CEA单克隆抗体和兔IgG抗体。
在其中一个实施例中，所述质控线包括羊抗兔IgG抗体。
在其中一个实施例中，所述卡壳包括加样区和视窗区：
所述加样区设置于所述试纸条的样品垫处，用于滴加样品；
所述视窗区设置于所述试纸条的包被线区，用于观测实验结果。
在其中一个实施例中，所述标记线和所述质控线之间、所述质控线和所述AFP检测线之间以及所述AFP检测线和所述CEA检测线之间的间隔设置为2mm-5mm。
此外，为实现上述目的，本发明还提供一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒的制备方法。
所述基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒的制备方法包含以下步骤：
将稀释过的标记有第二AFP单克隆抗体的荧光胶乳、标记有第二CEA单克隆抗体的荧光胶乳和标记有兔IgG抗体的荧光胶乳，划线包被于包被膜上的包被线区，形成标记线；
稀释羊抗兔IgG抗体，并将稀释过的所述羊抗兔IgG抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成质控线；
稀释能与待检测抗原AFP特异结合的第一AFP单克隆抗体，并将稀释过的所述能与待检测抗原AFP特异结合的第一AFP单克隆抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成AFP检测线；
稀释能与待检测抗原CEA特异结合的第一CEA单克隆抗体，并将稀释过的所述能与待检测抗原CEA特异结合的第一CEA单克隆抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成CEA检测线；
将包被有所述标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线的包被膜置于烘箱中，进行干燥平衡；
将样品垫和吸水纸依次搭接并粘贴于干燥平衡后的所述包被膜上，所述样品垫设置于所述标记线的一端，所述吸水纸设置于所述CEA检测线的一端；
将所述包被膜粘贴于底衬上，形成试纸条；
将卡壳设置于所述试纸条的外围，包围所述试纸条。
优选地，所述待检测抗原AFP为人源AFP，所述待检测抗原CEA为人源CEA。
优选地，所述标记线和所述质控线之间、所述质控线和所述AFP检测线之间以及所述AFP检测线和所述CEA检测线之间的间隔设置为2mm-5mm。
本发明采用上述技术方案，带来的技术效果为：本发明实施例提供的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，包括试纸条和卡壳，卡壳设置于试纸条的外围，包围试纸条；试纸条包括底衬以及设置于底衬上的包被膜，包被膜上依次设置有样品垫、包被线区和吸水纸；包被线区依次设置为标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线；标记线包括被荧光胶乳标记的第二AFP单克隆抗体、第二CEA单克隆抗体和兔IgG抗体，质控线包括羊抗兔IgG抗体；AFP检测线和CEA检测线分别包括能与待检测抗原AFP特异性结合的第一AFP单克隆抗体和能与待检测抗原CEA特异性结合的第一CEA单克隆抗体。本发明实施例提供的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒通过AFP与CEA两项联检，对于肿瘤发生的判断起到协同互补作用，可以根据实际检测结果，为肿瘤早期提供辅助判断，缩短检测周期，增加了检测的灵敏度，方便了用户使用。
附图说明
图1为本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒较佳实施例的内部结构示意图；
图2为本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒较佳实施例的包被线区的示意图；
图3为采用本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒与德灵仪器针对相同临床样本测量出的AFP的相关性图；
图4为采用本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒与德灵仪器针对相同临床样本测量出的CEA的相关性图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明的主要目的在于提供一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒及其制备方法，同时检测AFP和CEA，对于肿瘤发生的判断起到协同互补作用，可以根据实际检测结果，为肿瘤早期提供辅助判断，缩短检测周期，增加了检测的灵敏度，方便了用户使用。
为实现上述目的，本发明提供了一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒。
图1为本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒较佳实施例的内部结构示意图；图2为本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒较佳实施例的包被线区的示意图。参照图1和图2，在本实施例中，所述基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒包括试纸条10和卡壳20：
所述卡壳20设置于所述试纸条10的外围，包围所述试纸条10；
所述试纸条10包括底衬101以及设置于所述底衬101上的包被膜102，所述包被膜102上依次设置有样品垫1021、包被线区和吸水纸：
所述包被线区1022依次设置有标记线10221、质控线10222、AFP检测线10223和CEA检测线10224。
在本实施例中，所述基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒包括试纸条10和卡壳20，卡壳20设置于试纸条10的外围，卡壳20的材质可以是塑料的，卡壳20的形状可以是长方体的，也可以设计成别的形状，但是以匹配试纸条10为前提，卡壳20包围试纸条10，起到保护的作用。作为优选的实施例，卡壳20上有两处开孔的地方，一处称为加样区：对应于试纸条10上的样品垫1021处，为了方便使用者加样，卡壳20的加样区可以设置有“小雨点”的加样标识，防止初次使用者混淆加样区，导致实验检测失败；另一处称为视窗区：对应设置于试纸条10上的包被线区1022，为了清晰直观的观测到实验结果。此外，设置卡壳20方便了使用者的实验操作，减少了人为的误差，提高了检测结果的正确率。
所述试纸条10包括底衬101及设在底衬101上的包被膜102，包被膜102上设有样品垫1021、包被线区1022和吸水纸1023。在检测的过程中，吸水纸1023的主要成分是纤维素，用于提供检测所需的毛细作用力，吸水纸的材料可以是自由棉绒，也可以是玻璃纤维，优选自由棉绒的材料。由于纤维素是天然的大分子有机物，纸张中的纤维素交错呈网状，因此纤维素交错形成的网状中有很多空隙，这些空隙可以含住吸水纸1023上的水分，从而产生张力。此外水由于势能，从浓度高的一侧流向浓度低的一侧，因此在实验操作的过程中，如果从一侧吸水，则有利于滴加的检测样品快速的扩散从加样处到硝酸纤维素膜上，利于实验的进行。硝酸纤维素膜(nitrocellulose filtermembrane，简称NC膜)，是免疫反应的发生处。当通过样品垫1021，在吸水纸1023的作用下把样品从起始上样点转移至包被线区，在检测试纸条10下游控制着样品沿着NC膜膜片流动。
所述包被线区1022包括有从靠近所述样品垫1021端至靠近所述吸水纸1023端依次平行设置、且相互间隔的包被有第二AFP单克隆抗体、第二CEA单克隆抗体和兔IgG抗体的标记线10221、包被有羊抗兔IgG抗体的质控线10222、包被有能与待检测抗原AFP特异性结合的第一AFP单克隆抗体的AFP检测线10223、以及包被有能与待检测抗原CEA特异性结合的第一CEA单克隆抗体的CEA检测线10224。所述标记线10221上荧光胶乳标记的抗体采用荧光稀释液进行稀释，所述荧光稀释液包括：1.0％-1.5％BSA，2.5％-5％蔗糖，0.1％-0.5％Tween-20，0.08-0.1％NaN3，余量为0.01-0.02M、pH7.2的PBS；牛血清白蛋白(BSA)，是牛血清中的一种白蛋白，能减轻有些抗体的变性，对于某些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的抗体的变性，起到稳定、减轻的效果，减少外界因素对实验的干扰。此外在本发明实施例中加入BSA，可增强产物的稳定性。Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物，是一种表面活性剂，在本发明实施例中促进抗体与抗体的结合的作用，磷酸盐缓冲液又称PBS，是由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成的溶液，用于样品的稀释。叠氮钠又称NaN3，在本发明实施例中起到防腐的作用；所述质控线10222、AFP检测线10223和CEA检测线10224上包被的抗体均采用包被缓冲液进行稀释，所述包被缓冲液包括：0.08-0.1％NaN3，余量为0.01-0.02M、pH7.2的PBS。所述包被膜102为硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的爬速为95s～135s/4cm。所述荧光胶乳标记的第二AFP单克隆抗体和第二CEA单克隆抗体的浓度均为0.25-1.0mg/ml，在试纸条10上的用量均为0.02-0.1μg/cm 2，按5％～30％的比例进行稀释；所述荧光乳胶标记的兔IgG抗体的浓度为0.25-1.0mg/ml，按5％-15％的比例进行稀释，在试纸条10上的用量为0.001-0.025μg/cm2。所述质控线10222上包被的兔IgG抗体的浓度为0.25-1.0mg/ml，用量为20μl/27-35cm；所述检测线上包被的AFP单克隆抗体和CEA单克隆抗体的浓度均为0.25-1.0mg/ml，用量均为20μl/27-35cm。
所述待检测抗原AFP为人的血液中的甲胎蛋白AFP，所述待检测抗原CEA为人的血液中的癌胚抗原CEA，其中，人的血液中可取全血、血清或血浆。所述标记线10221和所述质控线10222之间、所述质控线10222和所述AFP检测线10223之间以及所述AFP检测线10223和所述CEA检测线10224之间的间隔设置为2mm-5mm。此处，间隔间距的设置考虑匹配荧光信号读取仪器装置在后续检测中的使用，当间隔间距过短时，仪器无法区分出AFP检测线和CEA检测线二者发出的荧光信号强度，影响实验结果，当间隔间距过长时，仪器检测不到相应的荧光信号，同样也会对实验造成干扰。基于此，针对本发明AFP检测线10223和所述CEA检测线10224之间的间隔设置为2mm-5mm为宜。匹配与后续所述荧光胶乳颗粒的直径为0.1μm-1μm，受激发后发射的波长为180nm-800nm。本实验中的第一AFP单克隆抗体与第二AFP单克隆抗体与待测AFP抗原结合时处于不同表位；同样，第一CEA单克隆抗体与第二CEA单克隆抗体与待测CEA抗原结合时处于不同表位。
本发明采用上述技术方案，带来的技术效果为：基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，包括试纸条和卡壳，卡壳设置于试纸条的外围，包围试纸条；试纸条包括底衬以及设置于底衬上的包被膜，包被膜上依次设置有样品垫、包被线区和吸水纸；包被线区依次设置为标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线；标记线包括被荧光胶乳标记的第二AFP单克隆抗体、第二CEA单克隆抗体和兔IgG抗体，质控线包括羊抗兔IgG抗体；AFP检测线和CEA检测线分别包括能与待检测抗原AFP特异性结合的第一AFP单克隆抗体和能与待检测抗原CEA特异性结合的第一CEA单克隆抗体。通过AFP与CEA两项联检，对于肿瘤发生的判断起到协同互补作用，可以根据实际检测结果，为肿瘤早期提供辅助判断，缩短检测周期，方便了用户使用。
此外，为实现上述目的，本发明还提供一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒的制备方法。
所述基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒的制备方法包含以下步骤：
将稀释过的标记有第二AFP单克隆抗体的荧光胶乳、标记有第二CEA单克隆抗体的荧光胶乳和标记有兔IgG抗体的荧光胶乳，划线包被于包被膜上的包被线区，形成标记线；
稀释羊抗兔IgG抗体，并将稀释过的所述兔IgG抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成质控线；
稀释能与待检测抗原AFP特异结合的第一AFP单克隆抗体，并将稀释过的所述能与待检测抗原AFP特异结合的第一AFP单克隆抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成AFP检测线；
稀释能与待检测抗原CEA特异结合的第一CEA单克隆抗体，并将稀释过的所述能与待检测抗原CEA特异结合的第一CEA单克隆抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成CEA检测线；
将包被有所述标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线的包被膜置于烘箱中，进行干燥平衡；
将样品垫和吸水纸依次搭接并粘贴于干燥平衡后的所述包被膜上，所述样品垫设置于所述标记线的一端，所述吸水纸设置于所述CEA检测线的一端；
将所述包被膜粘贴于底衬上，形成试纸条；
将卡壳设置于所述试纸条的外围，包围所述试纸条。
在本实施例中，参照图1和图2，在标记线10221的制备过程中，用荧光稀释液稀释标记有第二AFP单克隆抗体的荧光胶乳、标记有第二CEA单克隆抗体的荧光胶乳和标记有兔IgG抗体的荧光胶乳，划线于包被膜上形成标记线10221；其中荧光胶乳标记的第二AFP单克隆抗体和荧光胶乳标记的第二CEA单克隆抗体的浓度均为0.25-1.0mg/ml，用量均为0.02-0.1μg/cm 2；荧光胶乳标记的兔IgG抗体的浓度为0.25-1.0mg/ml，用量为0.001-0.025μg/cm 2；所述荧光稀释液中含有1.0％-1.5％BSA，2.5％-5％蔗糖，0.1％-0.5％Tween-20，0.08-0.1％NaN3，余量为0.01-0.02M、pH7.2的PBS；质控线10222和检测线的制备过程中，用包被缓冲液稀释兔IgG抗体(购自Hytest公司)、能与待检测抗原AFP特异结合的检测线上的第一AFP单克隆抗体(购自杭州启泰生物技术有限公司)、以及能与待检测抗原CEA特异结合的检测线上的第一CEA单克隆抗体(购自Hytest公司)，并将稀释后的三种抗体分别依次平行地划线于包被膜上形成质控线10222、AFP检测线10223和CEA检测线10224；其中，质控线10222包被的羊抗兔IgG抗体的浓度为0.25-1.0mg/ml，用量为20μl/27-35cm；AFP检测线10223包被的第一AFP单克隆抗体的浓度为0.25-1.0mg/ml，用量为20μl/27-35cm；CEA检测线10224包被的第一CEA单克隆抗体的浓度为0.25-1.0mg/ml，用量为20μl/27-35cm；所述包被缓冲液中含有0.08-0.1％NaN3，余量为0.01-0.02M、pH7.2的PBS；所述标记线10221和所述质控线10222之间、所述质控线10222和所述AFP检测线之间以及所述AFP检测线10223和所述CEA检测线10224之间的间隔设置为2mm-5mm标记线10221、质控线10222、AFP检测线10223、CEA检测线10224在包被膜的制备过程中，将包被好标记线10221、质控线10222、AFP检测线10223、CEA检测线10224的包被膜置于湿度<30％的烘箱，且烘箱的温度设定在35-45℃，干燥24-36h后，于2℃-30℃密封干燥平衡7天以上。在试纸条的制备过程中，将样品垫1021和吸水纸1023依次搭接并粘贴于干燥平衡后的包被膜102上，在包被膜102靠近CEA检测线10224的一端搭接粘贴吸水纸1023，即可制成试纸条10。将得到的试纸条10与预制成的卡壳20相匹配，即可得到试剂盒。
在其中一个实施例中，所述荧光胶乳标记抗体的制备步骤为：将常规方法共价活化后的荧光胶乳超声波200W-400W处理20-30秒后，按照50-200μg标记抗体/100μl荧光胶乳的比例加入第二AFP单克隆抗体(购自杭州启泰生物技术有限公司)、第二CEA单克隆抗体(购自Hytest公司)和兔IgG抗体(购自Hytest公司)，混匀后室温搅拌反应2h，离心洗涤3次，每次10000-15000xg、离心10min，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波100W处理30s，用PBS-TBN恢复离心前体积，4℃保存，备用。
本发明所述基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒原理是双抗夹心法；首先将直径范围0.01um-1.5um的胶乳与AFP抗体以及各类不同的荧光素共价结合形成物质A，然后将直径范围0.01um-1.5um的胶乳与CEA抗体以及各类不同的荧光素共价结合形成物质B，由于胶乳本身具有羧基、氨基等基团，当物质A再与相应的AFP抗原结合，利用荧光素在激发光下发射荧光；同样，当物质B再与相应的CEA抗原结合，利用荧光素在激发光下也可以发射荧光。当荧光胶乳标记的第二AFP抗体与检测样品(例如：血液中的全血、血清或血浆)中的足够的AFP抗原结合形成复合物A1，该复合物A1在层析的作用下转移至AFP检测线处，与第一AFP抗体(该抗体会结合在AFP抗原的另一表位上)结合，从而形成双抗体夹心的复合物A2，该复合物A2聚集在此处后，受到光源激发释放出相应波长的发射光，将该试纸条放于专门的荧光信号读取仪器中，即可读取荧光信号的大小，从而进行定量测定。同样的当荧光胶乳标记的第二CEA抗体与检测样品(例如：血液中的全血、血清或血浆)中的足够的CEA抗原结合形成复合物B1，该复合物B1在层析的作用下转移至CEA检测线处，与第一CEA抗体(该抗体会结合在CEA抗原的另一表位上)结合，从而形成双抗体夹心的复合物B2，该复合物B2聚集在此处后，受到光源激发释放出相应波长的发射光，将该试纸条放于专门的荧光信号读取仪器中，即可读取荧光信号的大小，从而进行定量测定。
荧光信号读取仪器的主要工作原理是该仪器的荧光光源系统能够发出单色激发光，照射在待检测的试纸条AFP检测线和CEA检测线处，此时检测线AFP和CEA通过反应凝集的荧光乳胶在单色激发光的作用下，发出荧光信号，该荧光信号被该仪器的检测系统捕获，检测系统接收荧光信号后，由检测系统中的光电倍增管实现光信号的放大，然后由该仪器的固态检测器进行光电信号的转化，由电信号读出电路将电信号输出，再有自动软件分析控制系统处理，在显示屏处显示结果，从而实现对样品的精确定量。
1、用德灵DN-100特种蛋白测定仪对134例临床AFP和CEA样本(例如：血液中的全血、血清或血浆)作为检测标准，表1采用本发明较佳实施例的试剂盒对10个样本的AFP定量测定结果；表2采用本发明较佳实施例的试剂盒对10个样本的CEA定量测定结果。
表1 采用本发明较佳实施例的试剂盒对10个样本的AFP定量测定结果
表2 采用本发明较佳实施例的试剂盒对10个样本的CEA定量测定结果
从表1和表2可知，采用较佳实施例的试剂盒对样本进行测定时，可以得到与检测标准相当的结果，说明本发明的试剂盒可以实现准确定量测量。
2、对试剂盒进行性能方面的测定---最低检测限度
图3为采用本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒与德灵仪器针对相同临床样本测量出的AFP的相关性图；图4为采用本发明基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒与德灵仪器针对相同临床样本测量出的CEA的相关性图。参照图3和图4，在本实施例中，AFP以德灵公司的特种蛋白分析仪测试60份临床样本(例如：血液中的全血、血清或血浆)，这两种产品的结果相关系数为R2>0.996，且Y＝0.05+0.984X；CEA以德灵公司的特种蛋白分析仪测试60份临床样本(例如：血液中的全血、血清或血浆)，这两种产品的结果相关系数为R2>0.994，，且Y＝0.263+0.983X；因此，该实施例的试剂盒跟对照试剂的相关性好，AFP的最低检测限度为0.05mg/l，CEA的最低检测限度为0.1ng/l。
3、对试剂盒进行性能方面的测定---精密度
采用较佳实施例的试剂盒对含量分别是高值、低值和中值的样本，连续至少检测10次，计算变异系数(CV)。
对于AFP含量的较高值选择为(115.01mg/l)、中值选择为(16.14mg/l)、低值选择为(0.41mg/l)，将上述3个血液样本分别测定10次，根据其测定数据，利用SPSS软件统计得出高值(115.54±9.13mg/l)，CV 2.41％；同样的利用SPSS软件统计得出中值(16.2±0.82mg/l)，CV 3.06％；同样的利用SPSS软件统计得出低值选择为(0.41±0.03mg/l)，CV 2.1％；；检测结果CV值均小于12％。
对于CEA含量的较高值选择为(42.51mg/l)、中值选择为(5.4mg/l)、低值选择为(0.40mg/l)，将上述3个血液样本分别测定10次，根据其测定数据，利用SPSS软件统计得出高值(42.51±4.74mg/l)，CV 3.21％；同样的利用SPSS软件统计得出中值(5.4±0.51mg/l)，CV 3.3％；同样的利用SPSS软件统计得出低值选择为(0.40±0.05mg/l)，CV 2.40％；；检测结果CV值均小于12％。以上结果说明较佳实施例的试剂盒的精密度良好。
本发明实施例基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，包括试纸条和卡壳，卡壳设置于试纸条的外围，包围试纸条；试纸条包括底衬以及设置于底衬上的包被膜，包被膜上依次设置有样品垫、包被线区和吸水纸；包被线区依次设置为标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线；标记线包括被荧光胶乳标记的第二AFP单克隆抗体、第二CEA单克隆抗体和兔IgG抗体，质控线包括羊抗兔IgG抗体；AFP检测线和CEA检测线分别包括能与待检测抗原AFP特异性结合的第一AFP单克隆抗体和能与待检测抗原CEA特异性结合的第一CEA单克隆抗体。通过AFP与CEA两项联检，对于肿瘤发生的判断起到协同互补作用，可以根据实际检测结果，为肿瘤早期提供辅助判断，缩短检测周期，增加了检测的灵敏度，方便了用户使用。
以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，其特征在于，所述基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒包括试纸条和卡壳：
所述卡壳设置于所述试纸条的外围，包围所述试纸条；
所述试纸条包括底衬以及设置于所述底衬上的包被膜，所述包被膜上依次设置有样品垫、包被线区和吸水纸；
所述包被线区依次设置有标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线。
2.如权利要求1所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，其特征在于，所述AFP检测线包括能与待检测抗原AFP特异性结合的第一AFP单克隆抗体；所述CEA检测线包括能与待检测抗原CEA特异性结合的第一CEA单克隆抗体。
3.如权利要求2所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，其特征在于，所述待检测抗原AFP为人源AFP，所述待检测抗原CEA为人源CEA。
4.如权利要求1～3任一项所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，其特征在于，所述标记线包括被荧光胶乳标记的第二AFP单克隆抗体、第二CEA单克隆抗体和兔IgG抗体。
5.如权利要求1～3任一项所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，其特征在于，所述质控线包括羊抗兔IgG抗体。
6.如权利要求1～3任一项所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，其特征在于，所述卡壳包括加样区和视窗区：
所述加样区设置于所述试纸条的样品垫处，用于滴加样品；
所述视窗区设置于所述试纸条的包被线区，用于观测实验结果。
7.如权利要求1～3任一项所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒，其特征在于，所述标记线和所述质控线之间、所述质控线和所述AFP检测线之间以及所述AFP检测线和所述CEA检测线之间的间隔设置为2mm-5mm。
8.一种基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述肿瘤早期检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：
将稀释过的标记有第二AFP单克隆抗体的荧光胶乳、标记有第二CEA单克隆抗体的荧光胶乳和标记有兔IgG抗体的荧光胶乳，划线包被于包被膜上的包被线区，形成标记线；
稀释羊抗兔IgG抗体，并将稀释过的所述羊抗兔IgG抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成质控线；
稀释能与待检测抗原AFP特异结合的第一AFP单克隆抗体，并将稀释过的所述能与待检测抗原AFP特异结合的第一AFP单克隆抗体包被于包被膜上的包被线区，形成AFP检测线；
稀释能与待检测抗原CEA特异结合的第一CEA单克隆抗体，并将稀释过的所述能与待检测抗原CEA特异结合的第一CEA单克隆抗体划线包被于包被膜上的包被线区，形成CEA检测线；
将包被有所述标记线、质控线、AFP检测线和CEA检测线的包被膜置于烘箱中，进行干燥平衡；
将样品垫和吸水纸依次搭接并粘贴于干燥平衡后的所述包被膜上，所述样品垫设置于所述标记线的一端，所述吸水纸设置于所述CEA检测线的一端；
将所述包被膜粘贴于底衬上，形成试纸条；
将卡壳设置于所述试纸条的外围，包围所述试纸条。
9.如权利要求8所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述待检测抗原AFP为人源AFP，所述待检测抗原CEA为人源CEA。
10.如权利要求8或9所述的基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述标记线和所述质控线之间、所述质控线和所述AFP检测线之间以及所述AFP检测线和所述CEA检测线之间的间隔设置为2mm-5mm。
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