CN105797134A - 一种难溶亮丙瑞林缓释制剂 - Google Patents

一种难溶亮丙瑞林缓释制剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，采用将亮丙瑞林醋酸盐先制成难溶性盐，然后采用单乳法乳化，液中干燥工艺来制备亮丙瑞林微球，本发明简化了生产工艺，微球表面孔隙少，药物包封率高，产品收率高，药物突释情况显著降低。

Description

一种难溶亮丙瑞林缓释制剂
技术领域
本发明涉及亮丙瑞林缓释制剂生产技术领域，特别涉及一种难溶亮丙瑞林缓释制剂。
背景技术
黄体生成激素释放激素(LHRH)是以脉冲方式由下丘脑分泌的。其作用于垂体，使垂体释放黄体激素(LH)和促卵泡素(FSH)，LH和FSH再作用于性器官，从而调节生殖系统的功能。LHRH于1997年鉴定为十肽,其化学结构式如下：pyroGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
所有哺乳类动物下丘脑分泌的LHRH都是这一结构。但LHRH在体内失活极快，因为Gly6-Leu7和Pro9-Gly10。之间的肽键极易被肽裂解酶分解而失活。为了寻找高效且作用持久的LHRH类似物，现已合成了上千种LHRH类似物。最初的合成是向着有效的激动剂能作为抗生育剂有效地用于节育这一方向发展的。以后研究发现，LHRH激动剂类似物急性给药后是刺激促性腺激素的释放，而长期给药则可引起垂体腺的快速减敏或脱敏作用，使LH和FSH的分泌受到抑制。这一发现导致了某些强效激动剂在治疗激素依赖性肿瘤方面的运用，这一类激动剂能有效地促进性腺激素的释放，由于它们可被胃肠肽酶降解，因而口服无效，常需皮下注射。连续每天使用此类激动剂，通过对垂体膜上LH-RH受体位点的持续占有而成功地达到选择性药物去势的疗效。临床上已广泛应用于治疗前列腺癌、乳癌、子宫内膜异位症、性早熟等。
醋酸亮丙瑞林(LeuprorelinAcetate)为人工合成的九肽，为黄体生成激素释放激素的高活性衍生物，广泛用于治疗性早熟、子宫内膜异位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌以及前列腺癌的姑息疗法。由美国Abbott制药公司及日本武田药厂开发研制，于1985年由美国TAP公司上市，至今已有20年的应用。
目前亮丙瑞林微球均采用水溶性醋酸盐以复乳法的工艺制备微球，由于该盐在水中的溶解性极强，因此醋酸亮丙瑞林微球在制备过程中活性物质极易从内水相溶出至外水相造成微球包封率下降，使得在制备过程中不得不过量投料，并且活性物质的溶出使得微球表面出现孔洞，使得药物的突释情况严重。因此不得不在内水相加入明胶通过降温使内水相凝聚来减少活性物质的溶出来提高包封率，通过洗涤微球来去除表面附着的醋酸亮丙瑞林，并且干燥后升温至高于玻璃化温度5℃以上使微球表面孔隙闭合来减少突释。整个过程工艺复杂，步骤多，生产周期长，产品收率低。并且明胶为动物来源的蛋白质，存在致敏性的问题，这些问题长期制约着我国亮丙瑞林微球产业发展。
发明内容
本发明的目的在于解决目前亮丙瑞林微球制备时存在的表面孔隙多，包封率下降，药物的突释情况严重的问题，提供一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，先制得亮丙瑞林难溶盐，再采用单乳法乳化，液中干燥工艺生产，简化了生产工艺，微球表面孔隙少，药物包封率高，产品收率高，药物突释情况显著降低。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，通过以下步骤制备而得：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和酸盐为原料合成亮丙瑞林难溶盐，然后对亮丙瑞林难溶盐进行纯化；
(2)配制油水相
油相：将PLGA或PLA与亮丙瑞林难溶盐混合，加入二氯甲烷溶解，制成油相；所述油相中各成分的质量百分比组成为：PLGA或PLA10-50％，亮丙瑞林难溶盐2-25％，二氯甲烷余量；
水相：10～90℃下配制质量浓度0.05-0.5％的PVA水溶液为水相，将水相冷却到0-10℃备用；
水油比：水相与油相体积配比控制为10-1000:1；
(3)乳化
将油相和部分水相泵入静态混合器混合得到平均粒径在1-500μm初乳，随后剪切机剪切，获得平均粒径为10-200μm的乳滴得乳化液；
水油乳化比：水相与油相体积配比控制为5-100：1；
(4)液中干燥
先将剩余水相在干燥罐内加热至20-40℃，将步骤(3)所得乳化液直接加入水相中，低速搅拌得乳液，停止搅拌，将乳液从干燥罐底吸入再从顶部喷淋，同时对乳液液面吹压缩空气(液面上方10-20cm处吹气，以10-45度角吹向液面)，持续1-5h，含有二氯甲烷的空气从干燥罐顶部排出至精馏塔，以回收二氯甲烷；
(5)过滤收集：液中干燥后的微球悬浊液倒入筛分机中，筛分获得平均粒径1-500μm的微球，对微球加水清洗后，干燥后得产品。
本发明针对常规的亮丙瑞林微球制备均以水溶性醋酸盐为原料采用复乳法制备存在的缺陷进行改进，本发明首次采用将亮丙瑞林醋酸盐先制成难溶性盐，然后采用单乳法乳化，特定的液中干燥工艺来制备亮丙瑞林微球，简化了生产工艺，微球表面孔隙少，药物包封率高，产品收率高，药物突释情况显著降低。
本发明的核心创造点如下：
一、先制成难溶性盐：
1、提高包封率，醋酸亮丙瑞林在水中极易溶解，在2次乳化和液中干燥的时候药物会从内水相迁移至外水相中，从而降低了包封率。而难溶性盐不会迁移现象，因此会提高包封率。
2、提高收率，醋酸亮丙瑞林微球为了解决包封率的问题，在内水相中加入明胶，同时提高油相中生物可降解材料的浓度，来提高初乳体系的粘度，其粘度大于2000cp。但由此带来一个新的问题，高粘度带来了很大的挂壁现象，罐内残留较高，再加上2次乳化，因而收率不高。使用难溶性盐，不会有迁移现象，因此也就不用提高粘度，残留情况得到了很大的改善。
二、单乳法生产微球：
1、药物分布均匀，药物溶解在溶剂中能够与生物可降解材料形成真溶液达到分子级混合，而复乳法药物是将药物与明胶在水相中形成的初乳悬浮在生物可降解材料中。
2、无需致敏性辅料明胶，单乳法直接将药物溶解在生物可降解材料中，不需要使用明胶来提高包封率。
3、简化工艺、提高生产效率，复乳法制备微球，需要8步，配制油水相外水相、乳化、淬冷硬化、初乳与外水相再次乳化、液中干燥、过滤收集、配液冻干、孵化。单乳法只需5步，配制油水相、乳化、液中干燥、过滤收集、干燥，减少了3步生产工艺，无需冻干，收集后粉末罐装。
本发明的产品无突释情况，醋酸亮丙瑞林微球由于药物本身的高水溶性，在干燥的过程中有致孔的情况，因此必须要在冻干后孵化，即将微球至于高于玻璃化温度5℃以上环境放置较长时间，使生物可降解材料处于玻璃态，孔隙闭合，来消除突释。而使用难溶性盐制备微球则完全无须担心此情况发生，药物必须先在体内水解脱去酸根，才会被体内吸收代谢，因此不会产生突释现象。
三、液中干燥
传统干燥大多是夹层保温罐，以机械搅拌的形式通过敞口或者上部吹气的形式挥发微球中的有机溶剂(二氯甲烷等)。这种形式气液交接面小(接近于罐体的直径)，而本发明采用这种类似于沸腾干燥切线喷的方式，液体以液滴从上部喷淋下来，气液接触面积扩大上百倍，有机溶剂的挥发速度将大幅加快。同时没有传统的搅拌，也避免了微球在桨、桨杆部位的团聚现象。本发明的液中干燥采用低速搅拌、慢速喷淋，快速吹气，使得溶剂快速挥发，避免微球团聚，搅拌速度过快，微球容易变形、团聚、粒径分布改变。
作为优选，步骤(1)中的酸盐为双羟萘酸盐、单宁酸盐、硬脂酸盐或棕榈酸盐。
作为优选，步骤(1)中成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度5-90％的溶液，过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；酸盐用超纯水溶解，配制成质量浓度5-90％的溶液，过滤除去水不溶杂质得酸盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、酸盐溶液分别输送至除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及酸盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-4～-15℃保持10-15min，然后加入酸盐除菌液，控制温度0～-10℃，调节pH至6.5-7.5，反应1-2h；
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林难溶盐。
本发明特定开发了上述成盐工艺，反应效率高，杂质少，产率收率高。
作为优选，步骤c中反应时，控制原料醋酸亮丙瑞林与酸盐的摩尔比为1:1-1.5。
作为优选，步骤(1)中纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林难溶盐用乙腈溶解，稀释至30-40g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：WatersPrep150LC，
色谱柱：Symmetry300TMC18，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝(92-95)：(2-5)：(2-4)：(1-2)，检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
优选，纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林难溶盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：WatersPrep150LC，
色谱柱：Symmetry300TMC18，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
主峰的确定是按照常规工艺先制亮丙瑞林难溶盐的标准图谱，然后，检测结果与标准图谱对比即可确定主峰(亮丙瑞林难溶盐)的位置。
流动相组成：乙腈为；良溶剂。三氟乙酸和三乙胺用于调节色谱体系的酸碱度，此外三乙胺还作为扫尾剂，减少峰拖尾。水在体系中用于调节流动相的溶解性，亮丙瑞林粗品的杂志多为短肽、未成盐的醋酸亮丙瑞林和其他一些在醋酸亮丙瑞林多肽合成过程中的有机酸等，通过水比例调节来改善对杂质的分离。
本发明开发的上述特定纯化工艺，纯化效果好。
作为优选，所述PLGA的丙交酯和乙交酯的摩尔比为90:10-40:60或75:25-40:60或60:40-40:60或50:50。
作为优选，所述PLGA或PLA的重均分子量为5000～50000道尔顿。优选7500～30000道尔顿，更优选10000～25000。作为优选，所述PLGA在30℃下质量浓度0.5％的氯仿溶液中的特性粘度为0.05～0.50dL/g。优选0.15～0.25dL/g。
作为优选，步骤(4)中液中干燥的条件如下：
压缩空气温度：10～40℃，
压缩空气水分含量：≤20％，优选≤10％，更优选≤5％，
压缩空气流量：每分钟流量相当于干燥罐内总体积的0.1～10倍(例如：50L罐，流速：5～500L/min)，优选每分钟流量相当于干燥罐内总体积的0.5～5倍，压缩空气流速：≤50m/s，优选5～15m/s；
喷液速度：乳液总体积的0.1-10倍/min(例如：50L罐，装30L乳液，那3～300L/min的喷液速度)，优选乳液总体积的0.5-5倍/min，更优选乳液总体积的1倍/min；
液中干燥乳液温度：5～45℃。
作为优选，步骤(3)中水油乳化比：水相与油相体积配比控制为5-50：1。作为优选，步骤(4)中低速搅拌的转速为50～150rpm，时间5～10min。
本发明的有益效果是：简化了生产工艺，提高了生产效率，微球表面孔隙少，药物包封率高，产品收率高，药物突释情况显著降低。
附图说明
图1是本发明实施例3-6的产品的体内释放曲线。
图2是双羟萘酸亮丙瑞林药物动力学曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
难溶盐是指，在室温20℃时某种物质溶解度在0.01g以下；本发明所述微球是广义的微球，是指药物溶解/分散于高分子材料中形成的微小粒子，其形式不限于球形，可以是不规则状、多面体、椭圆、棒形、丸状等。本发明载药量为实际载药量，按照以下方式计算：载药量＝[微球中药物量/(微球中药物量+高分子量)]X100％。本发明的产品的载药量为5-45％。
本发明的高分子材料PLA(市售)、PLGA(市售)的丙交酯和乙交酯的摩尔比为90:10-40:60或75:25-40:60或60:40-40:60或50:50。所述PLGA或PLA的重均分子量为5000～50000道尔顿。优选7500～30000道尔顿，更优选10000～25000。所述PLGA在30℃下质量浓度0.5％的氯仿溶液中的特性粘度为0.05～0.50dL/g。优选0.15～0.25dL/g。
实施例1：
一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，通过以下步骤制备而得：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸二钠盐(4,4'-亚甲双(3-羟基-2-萘酸)二钠盐，CAS：6640-22-8，市售)为原料合成亮丙瑞林难溶盐，然后对亮丙瑞林难溶盐进行纯化；
成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度5％的溶液，1μm膜堆过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；双羟萘酸二钠盐用超纯水溶解，配制成质量浓度5％的溶液，1μm膜过滤除去水不溶杂质得双羟萘酸二钠盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、双羟萘酸二钠盐溶液分别输送至0.2μm的除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及双羟萘酸二钠盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-4℃保持15min，然后加入双羟萘酸二钠盐除菌液，控制温度0℃，调节pH至6.5，反应1h；控制原料醋酸亮丙瑞林与双羟萘酸二钠盐的摩尔比为1:1。
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林难溶盐。
纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林难溶盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：WatersPrep150LC，
色谱柱：Symmetry300TMC18(规格：5μm，50×300mm)，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
(2)配制油水相
油相：将PLGA和亮丙瑞林难溶盐混合，加入二氯甲烷溶解，制成油相；所述油相中各成分的质量百分比组成为：PLGA10％，亮丙瑞林难溶盐，2％二氯甲烷88％(以88％二氯甲烷为160g计算其它原料用量)；
水相：10℃下配制质量浓度0.05％的PVA水溶液为水相，将水相冷却到0℃备用；
水油比：水相与油相体积配比控制为10:1；
(3)乳化
将油相和部分水相分别以配200ml/min和1L/min的速度泵入静态混合器得到平均粒径在1-500μm初乳，随后在线剪切机以4000rpm的转速剪切，获得平均粒径为10-200μm的乳滴得乳化液；
水油乳化比：水相与油相体积配比控制为5：1；
(4)液中干燥
先将剩余水相在干燥罐内加热至20℃，将步骤(3)所得乳化液直接加入水相中，低速(50rpm)搅拌10min得乳液，停止搅拌，将乳液从干燥罐底吸入再从顶部喷淋，同时对乳液液面吹压缩空气，持续1h，含有二氯甲烷的空气从干燥罐顶部排出至精馏塔，以回收二氯甲烷；
干燥条件如下：
压缩空气温度：40℃，
压缩空气水分含量：5％，
压缩空气流量：每分钟流量相当于干燥罐内总体积的2倍，
压缩空气流速：10m/s，
喷液速度：乳液总体积的1倍/min，
液中干燥乳液温度：45℃。
(5)干燥过滤收集：液中干燥后的微球悬浊液倒入筛分机中，通过120目筛网去除较大的微球或颗粒，选用900目筛板震荡去除水相和小微球，筛分获得120-900目大小的微球，对微球加水清洗后，5～50℃梯度升温真空干燥后得产品。
实施例2：
一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，通过以下步骤制备而得：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸二钠盐(4,4'-亚甲双(3-羟基-2-萘酸)二钠盐，CAS：6640-22-8，市售)为原料合成亮丙瑞林难溶盐，然后对亮丙瑞林难溶盐进行纯化；
成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度90％的溶液，1μm膜过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；双羟萘酸二钠盐用超纯水溶解，配制成质量浓度90％的溶液，1μm膜过滤除去水不溶杂质得双羟萘酸二钠盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、双羟萘酸二钠盐溶液分别输送至0.2μm的除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及双羟萘酸二钠盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-15℃保持10min，然后加入双羟萘酸二钠盐除菌液，控制温度-10℃，调节pH至7.5，反应2h；控制原料醋酸亮丙瑞林与双羟萘酸二钠盐的摩尔比为1:1.5。
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林难溶盐。
纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林难溶盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：WatersPrep150LC，
色谱柱：Symmetry300TMC18(规格：5μm，50×300mm)，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
(2)配制油水相
油相：将PLGA和亮丙瑞林难溶盐混合，加入二氯甲烷溶解，制成油相；所述油相中各成分的质量百分比组成为：PLGA35％，亮丙瑞林难溶盐25％，二氯甲烷40％(以40％二氯甲烷为100g计算其它原料用量)；
水相：90℃下配制质量浓度0.5％的PVA水溶液为水相，将水相冷却到10℃备用；
水油比：水相与油相体积配比控制为1000:1；
(3)乳化
将油相和部分水相分别以100mL/min和10L/min的速度泵入静态混合器得到平均粒径在1-500μm初乳，随后在线剪切机以15000rpm的转速剪切，获得平均粒径为10-200μm的乳滴得乳化液；
水油乳化比：水相与油相体积配比控制为100：1；
(4)液中干燥
先将剩余水相在干燥罐内加热至40℃，将步骤(3)所得乳化液直接加入水相中，低速(150rpm)搅拌5min得乳液，停止搅拌，将乳液从干燥罐底吸入再从顶部喷淋，同时对乳液液面吹压缩空气，持续5h，含有二氯甲烷的空气从干燥罐顶部排出至精馏塔，以回收二氯甲烷；
干燥条件如下：
压缩空气温度：10℃，
压缩空气水分含量：2％，
压缩空气流量：每分钟流量相当于干燥罐内总体积的5倍，
压缩空气流速：15m/s，
喷液速度：乳液总体积的5倍/min，
液中干燥乳液温度：5℃。
(5)过滤收集：液中干燥后的微球悬浊液倒入筛分机中，通过120目筛网去除较大的微球或颗粒，选用900目筛板震荡去除水相和小微球，筛分获得120-900目大小的微球，对微球加水清洗后，10～50℃梯度升温真空干燥后得产品。
实施例3：
一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，通过以下步骤制备而得：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸二钠盐(4,4'-亚甲双(3-羟基-2-萘酸)二钠盐，CAS：6640-22-8，市售)为原料合成亮丙瑞林难溶盐，然后对亮丙瑞林难溶盐进行纯化；
成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度50％的溶液，1μm膜过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；双羟萘酸二钠盐用超纯水溶解，配制成质量浓度50％的溶液，1μm膜过滤除去水不溶杂质得双羟萘酸二钠盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、双羟萘酸二钠盐溶液分别输送至0.2μm的除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及双羟萘酸二钠盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-8℃保持12min，然后加入双羟萘酸二钠盐除菌液，控制温度-5℃，调节pH至7，反应1.5h；控制原料醋酸亮丙瑞林与双羟萘酸二钠盐的摩尔比为1:1。
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林难溶盐。
纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林难溶盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：WatersPrep150LC，
色谱柱：Symmetry300TMC18(规格：5μm，50×300mm)，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
(2)配制油水相
油相：将PLGA和亮丙瑞林难溶盐混合，加入二氯甲烷溶解，制成油相；所述油相中各成分的质量百分比组成为：PLGA50％，亮丙瑞林难溶盐7％，二氯甲烷43％(以43％二氯甲烷为500g计算其它原料用量)；
水相：50℃下配制质量浓度0.1％的PVA水溶液为水相，将水相冷却到5℃备用；
水油比：水相与油相体积配比控制为100:1；
(3)乳化
将油相和部分水相分别以1000ml/min和5L/min的速度泵入静态混合器得到平均粒径在80μm初乳，随后在线剪切机以10000rpm的转速剪切，获得平均粒径为20-30μm的乳滴得乳化液；
水油乳化比：水相与油相体积配比控制为5：1；
(4)液中干燥
先将剩余水相在干燥罐内加热至30℃，将步骤(3)所得乳化液直接加入水相中，低速(100rpm)搅拌8min得乳液，停止搅拌，将乳液从干燥罐底吸入再从顶部喷淋，同时对乳液液面吹压缩空气，持续3h，含有二氯甲烷的空气从干燥罐顶部排出至精馏塔，以回收二氯甲烷；
干燥条件如下：
压缩空气温度：25℃，
压缩空气水分含量：2％，
压缩空气流量：每分钟流量相当于干燥罐内总体积的1倍，
压缩空气流速：10m/s，
喷口雾化压力：使喷出液滴粒径在30～40目，
喷液速度：乳液总体积的1倍/min，
液中干燥乳液温度：20℃；
(5)过滤收集：液中干燥后的微球悬浊液倒入筛分机中，通过120目筛网去除较大的微球或颗粒，选用900目筛板震荡去除水相和小微球，筛分获得120-900目大小的微球，对微球加水清洗后，15～40℃逐渐升温真空干燥后得产品。
实施例4
以硬脂酸钠盐替换双羟萘酸二钠盐，其它同实施例3。
实施例5
以棕榈酸钠盐替换双羟萘酸二钠盐，其它同实施例3。
实施例6
以单宁酸钠盐替换双羟萘酸二钠盐，其它同实施例3。
本发明生产的微球载药量5-45％，收率可达80％，产品质量稳定，产业化程度高。
实施例1-6的工艺制备的产品结果见表1：
表1
从表1的对比结果可以看出，采用难溶性盐和本发明工艺制备的微球包封率、收率和突释情况明显优于常规复乳法生产的醋酸亮丙瑞林微球。
将含有3.75mg(以亮丙瑞林计)的实施例3-6制备的微球分散到1ml专用溶剂中(甘露醇50mg、羧甲基纤维素钠5mg、Tween801mg于蒸馏水的溶液)，使用22G针在10周的雄性SD鼠背部上皮下注射(微球剂量为60mg/kg)。连续给药后杀死鼠，从给药部位取出微球残余物，测量微球中过性物质的量(结果见表2和图1)，从大鼠的体内释放可以看出，本发明所述制剂与市售品有着很高的相似度。
表2
实施例3 实施例4 实施例5 实施例6 抑那通3.75mg
0天 100.2 99.5 103.2 102.4 98.7
1天 92.2 95.1 97.4 96.8 87.2
7天 64.6 67.1 76.7 76 72.5
14天 55 59.2 58.6 58.4 56.1
21天 41.4 39.7 47.1 45 41.2
28天 28 29.1 19.7 26.1 24.3
35天 2.4 5.1 8.2 6.4 6.1
根据实施例3制备的含有3.75mg(以亮丙瑞林计)的微球分散到1ml专用溶剂中(甘露醇50mg、羧甲基纤维素钠5mg、Tween801mg于蒸馏水的溶液)，使用22G针在比格犬(体重大约11kg)的后腿股二头肌进行肌肉注射。对受试犬定期取血，通过放射免疫法测定血浆中双羟萘酸亮丙瑞林的浓度，测定结果表明双羟萘酸亮丙瑞林的水平在每28天注射一次，98天内一直保持在0.1ng/ml以上，其中双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂在比格犬体内的释放模式如图2所示，血药浓度长期平稳维持在治疗窗内。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (10)

1.一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于，通过以下步骤制备而得：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和酸盐为原料合成亮丙瑞林难溶盐，然后对亮丙瑞林难溶盐进行纯化；
(2)配制油水相
油相：将PLGA或PLA与亮丙瑞林难溶盐混合，加入二氯甲烷溶解，制成油相；所述油相中各成分的质量百分比组成为：PLGA或PLA10-50％，亮丙瑞林难溶盐2-25％，二氯甲烷余量；
水相：10～90℃下配制质量浓度0.05-0.5％的PVA水溶液为水相，将水相冷却到0-10℃备用；
水油比：水相与油相体积配比控制为10-1000:1；
(3)乳化
将油相和部分水相泵入静态混合器混合得到平均粒径在1-500μm初乳，随后剪切机剪切，获得平均粒径为10-200μm的乳滴得乳化液；
水油乳化比：水相与油相体积配比控制为5-100：1；
(4)液中干燥
先将剩余水相在干燥罐内加热至20-40℃，将步骤(3)所得乳化液直接加入水相中，低速搅拌得乳液，停止搅拌，将乳液从干燥罐底吸入再从顶部喷淋，同时对乳液液面吹压缩空气，持续1-5h，含有二氯甲烷的空气从干燥罐顶部排出至精馏塔，以回收二氯甲烷；
(5)过滤收集：液中干燥后的微球悬浊液倒入筛分机中，筛分获得平均粒径1-500μm的微球，对微球加水清洗后，5-50℃干燥后得产品。
2.根据权利要求1所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于：步骤(1)中的酸盐为双羟萘酸盐、单宁酸盐、硬脂酸盐或棕榈酸盐。
3.根据权利要求1或2所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于，步骤(1)中成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度5-90％的溶液，过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；酸盐用超纯水溶解，配制成质量浓度5-90％的溶液，过滤除去水不溶杂质得酸盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、酸盐溶液分别输送至除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及酸盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-4～-15℃保持10-15min，然后加入酸盐除菌液，控制温度0～-10℃，调节pH至6.5-7.5，反应1-2h；
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林难溶盐。
4.根据权利要求3所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于，步骤c中反应时，控制原料醋酸亮丙瑞林与酸盐的摩尔比为1:1-1.5。
5.根据权利要求1所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于，步骤(1)中纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林难溶盐用乙腈溶解，稀释至30-40g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：WatersPrep150LC，
色谱柱：Symmetry300TMC18，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝(92-95)：(2-5)：(2-4)：(1-2)，检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
6.根据权利要求1或2所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于：所述PLGA的丙交酯和乙交酯的摩尔比为90:10-40:60或75:25-40:60或60:40-40:60或50:50。
7.根据权利要求1或2所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于：所述PLGA或PLA的重均分子量为5000～50000道尔顿。
8.根据权利要求1或2所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于：步骤(4)中液中干燥的条件如下：
压缩空气温度：10～40℃，
压缩空气水分含量：≤20％，
压缩空气流量：每分钟流量相当于干燥罐内总体积的0.1～10倍，
压缩空气流速：≤50m/s，
喷液速度：乳液总体积的0.1-10倍/min，
液中干燥乳液温度：5～45℃。
9.根据权利要求1或2所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于：步骤(3)中水油乳化比：水相与油相体积配比控制为5-50：1。
10.根据权利要求1或2所述的一种难溶亮丙瑞林缓释制剂，其特征在于：步骤(4)中低速搅拌的转速为50～150rpm，时间5～10min。
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