CN1602186A - 缓释可生物降解微球体及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种制备缓释水溶性活性成分的微球体形式的药物组合物的方法。本发明的特征在于它包括以下连续步骤：将活性成分溶于适量的水中；用溶于氯化烃的平均分子量为40000－80000且乳酸/乙醇酸比例为50/50－80/20的d，l－丙交酯－共－乙交酯基质共聚物的溶液将如此得到的活性成分的水溶液乳化，得到第一微细和均匀的乳液；在含有表面活性剂、增粘剂和渗透剂的外部水相中乳化如此得到的该第一乳液；萃取－蒸发所述溶剂以得到微球体，将其过滤、洗涤和干燥后回收。本发明还涉及通过实施这种方法得到的微球体，所述微球体在大于2个月的时间内，有利地为至少3个月的时间内连续释放。

Description

缓释可生物降解微球体及其制备方法
本发明涉及一种制备缓释水溶性活性成分的微球体形式的药物组合物的方法。本发明还涉及可以使用这种方法得到的微球体，所述微球体表现出在大于2个月的时间内，有利地为至少3个月的时间内连续释放活性成分。
现有技术的多种文献中已描述了许多包含药理学活性化合物并设计用于控制和缓释该化合物的可生物降解的基于聚合物和共聚物的微球体形式的药物组合物。这些药物组合物对许多要求连续和缓释活性成分的疾病的治疗具有巨大的价值。
但是，迄今研制的用于建立这种类型的组合物的制剂具有许多缺点，且它们当中很少有达到临床试验阶段。
与这些缓释制剂有关的一个主要的问题是在药物组合物给药之后的第一小时内释放大量的活性成分。“突发”效应或“突发”释放是常用于指明这种释放的术语。这种释放一般导致药品血浆浓度的突然释放，从而在许多情况下导致人不可接受的毒理学问题。这种“突发”释放还导致药物组合物活性的持续时间减少，因为在组合物给药之后突然和快速释放大量的该活性成分。
第二个问题是使用常规的微囊化方法一般得不到较充足的胶囊化速率，特别是在活性成分是水溶性药品的时候。
在这些制剂的研制中必须解决的第三个问题是活性成分在面对生产微球体的剧烈条件，例如高温或在溶剂蒸步骤活性成分与有机溶剂长时间接触时的不稳定性。
已完成多种浓度以解决这些不同的问题。因此，已将添加剂如糖、油、蜡、蛋白质、聚合物、盐或酸用于制备微球体形式的药物组合物。这些用作将药物保持在微球体中的物质的添加剂可以增加微囊化方法的效率，甚至可以通过发挥稳定剂的作用而保持加工期间的活性成分。
但是，微球体中这些添加剂的纳入可能导致在添加剂和活性成分或基于聚合物的基质之间的相互作用的问题，从而导致毒理学和药品的药理学活性方面的问题。此外，在生产加工期间将活性成分保持在微球体中的添加剂影响微球体中所含的活性成分的释放曲线，可能阻止在微球体给药之后连续释放该活性成分。
还研制了其它微囊化方法以尝试在使用有机溶剂的混合物的基础上增加微球体内活性成分的微囊化效率，但这种方法导致微球体生产加工过程中活性成分的稳定性问题。
因此，需要研制一种设计用于缓释水溶性活性成分的可生物降解的基于聚合物和共聚物的微球体形式的药物组合物的制备方法，所述方法不具有现有技术文献所述的组合物和迄今研制的组合物的缺点。
本发明满足这种需求。本申请人已令人惊奇地发现，使用快速多乳剂/溶剂蒸发法，不使用任何如专利FR 2 718 642那样的添加剂或调节剂，研制基于活性成分和具有特定的分子量和特定的乳酸/乙醇酸比例可生物降解的d，l-丙交酯-共-乙交酯基质共聚物的微球体，可以获得表现出在大于2个月的时间内连续和持续释放活性成分，同时表现出有限的“突发”效应的微球体。这种使用温和并对药品相对不具有侵袭性的条件的微囊化方法，也可以保持该药品的稳定性，并实现药品在所得的微球体内的均匀分布。
已具体在US专利3 523 906中描述了用于将水溶性活性成分胶囊化的多乳剂的物理原理。一般地，在通过W/O/W多乳剂和溶剂蒸发的这种类型的方法中，首先将水溶性活性成分溶于第一W/O乳液的内部相，然后进一步在外部水相中将第一乳液乳化。
申请人令人惊奇地发现，在外部水相中乳化第一乳液的步骤中使用渗透剂可以通过增加聚合物基质内胶囊包封的活性成分的含量而获得特别高的胶囊化效力，并影响微球体的尺寸。
本发明的主题涉及一种快速、非常有效的胶囊化方法，它对活性成分相对不具有侵袭性，从而能够获得基于水溶性活性成分和d，l-丙交酯-共-乙交酯基质共聚物的微球体，所述微球体表现出在大于2个月，优选至少3个月的时间内连续和持续释放活性成分，同时在组合物给药后数小时内表现出小“突发”效应。
因此，本发明的主题是一种制备缓释水溶性活性成分的微球体形式的药物组合物的方法，其特征在于它包括以下的连续的步骤：
-将活性成分溶于适量的水中，
-用溶于氯化烃的平均分子量为40000-80000且乳酸/乙醇酸比例为50/50-80/20的d，l-丙交酯-共-乙交酯基质共聚物的溶液将如此得到的活性成分的水溶液乳化，得到第一微细和均匀的乳液，所述的乳液的尺寸有利地为低于1μm，
-在含有表面活性剂、增粘剂和渗透剂的外部水相中乳化如此得到的该第一乳液，
-萃取-蒸发所述溶剂以得到微球体，将其过滤、洗涤和干燥后回收。
阅读以下提供的详述，特别是根据某些特定的实施例将显现其它特征和优点。
可以用于本发明方法范围的水溶性活性成分有利地选自肽、蛋白质、疫苗、抗生素、抗抑郁药、止痛药、抗炎药和细胞抑制剂。根据本发明更有利的是，所述活性成分为5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt或它的一种盐。这种活性成分为具有激动剂活性的GnRH激素类似物。
在根据本发明的方法的上下文中，用于将活性成分溶于水以形成内部水相的第一步骤是在不加入任何保持活性成分的物质或稳定乳液的试剂，并在不进行任何意在增加粘度的操作的情况下完成的。根据本发明有利的是，在不加入任何添加剂或助剂的情况下将活性成分溶于内部水相。
在本发明上下文中的内部水相中使用的浓度取决于活性成分的水溶性、该活性成分的特征和要获得的目标释放持续时间。根据本发明有利的是，相对于内部水相的总重而言，活性成分存在的浓度为0.01-95wt％，有利地为0.5-40wt％。
第一乳液具体可以使用超声装置或匀浆器形成。
根据本发明可以用于通过W/O/W制备微球体的基质共聚物必须能够溶于适宜的挥发性溶剂，例如卤代烷烃。根据本发明有利的是，所述溶剂为氯化烃如二氯甲烷、氯仿、氯乙烷、二氯乙烷或三氯乙烷。根据本发明甚至更优选，所述氯化烃为二氯甲烷。
可以用于本发明的方法的d，l-丙交酯-共-乙交酯基质共聚物具有不溶于水、可生物降解(这种共聚物在不在重要器官蓄积的情况下被吸收，并最终被完全消除)、与器官生物相容和完好地对它耐受并最终具有最小的炎症反应的累积优点。
在本发明方法的上下文中，通过在不加入任何释放调节剂的情况下将共聚物溶于氯化烃如二氯甲烷而得到d，l-丙交酯-共-乙交酯-基质共聚物的溶液。实际上，已发现释放调节剂的使用不适于生产设计用于在大于2个月的时间内释放的微球体。
因此，在本发明主题方法中选择具有特定分子量和特定乳酸/乙醇酸比例的共聚物，并结合作为本发明主题的不使用释放调节剂的事实，提供了获得表现出在大于2个月的时间内，优选至少3个月的时间内连续和持续释放活性成分，同时在组合物给药后的数小时内表现出有限的“突发”效应的微球体的优点。
溶于二氯甲烷的有机溶液的聚合物的浓度取决于活性成分和目标释放速率。根据本发明主题方法有利的是，相对于由溶于氯化烃的共聚物组成的溶液的总重而言，基质共聚物存在的浓度为5-50wt％。
根据本发明主题方法，外部水相包含表面活性剂如聚山梨酸酯80，增粘剂如聚乙烯吡咯烷酮和渗透剂如甘露醇或氯化钠。根据本发明主题方法有利的是，外部水相包含聚山梨酸酯80、聚乙烯吡咯烷酮和甘露醇或氯化钠的溶液。根据本发明甚至更有利的是，外部水相包含聚山梨酸酯80、聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠的溶液。
根据本发明主题方法有利的是，相对于外部水相的总重而言，表面活性剂存在的浓度为0.1-0.5wt％，增粘剂存在的浓度为1-25wt％，而渗透剂存在的浓度为0.1-10wt％。外部水相的组成决定第二乳液的形成(乳化第一乳液)，因而决定了微球体的产生。因此，它有助于快速稳定微球体，影响活性成分胶囊化效率，并构成控制最终微球体的尺寸和它们的形态的基本因素。
在由萃取-蒸发溶剂组成的步骤中，根据由足够长斜面组成的连续蒸发系统，溶剂在室温和大气压下快速消除，在此期间微球体的悬浮液流入薄层。
这种用于连续蒸发有机溶剂的系统，增加和促进乳液与空气的接触，能够实现快速稳定聚合物基质，其效果是增加活性成分的稳定，同时在微球体内截留高百分率的该成分(胶囊化效率)；并导致快速蒸发溶剂，其效果是减少方法实施的总时间。在这个用于萃取-蒸发有机溶剂的步骤中实现聚合物基质的快速稳定，还可以实现活性成分在整个微球体内的均匀分布(因而能够获得低浓度的紧挨微球体表面胶囊化的活性成分)，从而有助于减少在微球体给药之后发生“突发”释放。此外，在室温和大气压下实施所述方法能够避免在萃取-蒸发步骤中使用真空时发生诸如不耐热产物改变或微球体破裂的问题。
更为详细地，生产本发明的微球体的方法包括以下步骤：
将一定量的活性成分溶于25体积的水。用超声波仪器，例如在1体积的含有平均分子量为40000-80000道尔顿且乳酸与乙醇酸的比例为50/50-80/20的聚(丙交酯-共-乙交酯)共聚物的二氯甲烷中将此溶液乳化。其中得到的第一乳液应该是微细而均匀的，因而能够将活性成分扩散到整个聚合物基质上，确保不同批次的再现性，并不需使用表面活性剂或其它助剂。一旦形成第一乳液，进一步在由作为表面活性剂的聚山梨酸酯80、作为增粘剂的聚乙烯吡咯烷酮和作为渗透剂的甘露醇或NaCl的水溶液组成的外部相中将其乳化，并作短时间搅拌。在此步骤之后，用水稀释双乳液，然后在大气压下将悬浮液通过由足够长的斜面组成的连续蒸发系统，在此期间微球体的悬浮液流入薄层。此系统能够促进乳液和大气的接触，从而减少蒸发有机溶剂的时间，并增加活性成分的稳定。然后通过过滤回收以这种方式得到的微球体，用水洗涤，并进行冻冷干燥。
根据本发明主题方法得到的微球体是具有高含量活性成分的微球体，允许在体内在大于2个月的时间内，优选至少3个月的时间内连续释放药品，并且在微球体的肠胃外给药之后的“突发”效应小。
本发明的主题也是可以通过实施本发明的方法而获得的微球体，它表现出在大于2个月的时间内，有利地为至少3个月的时间内连续释放活性成分。
根据本发明有利的是，相对于微球体的总重而言，活性成分存在的浓度为0.5和20wt％，有利地为5-15wt％。
根据本发明有利的是，微球体的尺寸小于250μm，甚至更有利的是小于90μm。这种尺寸适于微球体给药。
根据本发明的微球体有利地进行肠胃外给药，甚至更有利以肌内、皮下或动脉内注射或者在肿瘤部位注射的形式进行肠胃外给药。对于适宜的给药，优选用分散剂和渗透剂将微球体分散在标准水介质中。
以下的实施例(体内和体外研究)以非限制性规模提供，并例示本发明。
实施例1(比较)：
根据出版物Advanced Drug Delivery Reviews，28，(1997)，43-70所述的不同于本发明主题方法的生产方法制备基于5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的微球体的批次。通过以下方法制备微球体：将适量的活性成分溶于水，然后用在二氯甲烷中的平均分子量为15000的聚丙交酯(100％丙交酯)的溶液将如此得到的活性成分的水溶液乳化。用搅拌器剧烈搅拌完成乳化。一旦形成第一W1/O乳液，用聚乙烯醇(0.25％)水溶液并使用高速搅拌器将其进一步乳化，以得到W1/O/W2乳液。然后将如此形成的双乳液缓慢搅拌数小时，以蒸发有机溶剂。然后洗涤微球体，通过离心回收并冻干。含药品的微球体的最终载量为9-11wt％。
根据上述现有技术的文献中所述的方法得到的微球体和根据本发明主题方法得到的微球体之间的主要差别在于：
-聚合物的选择。在实施例1中，所用的聚合物为平均分子量为15000的聚丙交酯(100％丙交酯)。根据该文献，它是一种标准聚合物，用于在3个月的时间内缓释5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐；
-外部水相的组成，在实施例1中它由聚乙烯醇(0.25％)组成；
-蒸发有机溶剂的系统。在实施例1中，将双乳液搅拌数小时。
实施例2：
根据本发明主题生产方法，将5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐溶于水，然后用超声装置，在包含15％的平均分子量为63 000道尔顿(固有粘度大约为0.6dl/g)而乳酸与乙醇酸的比例为75/25的d，l-丙交酯-共-乙交酯共聚物的二氯甲烷溶液中将活性成分的水溶液乳化。一旦已形成第一乳液，进一步用由0.25％的聚山梨酸酯80、7％聚乙烯吡咯烷酮和5％甘露醇组成的水溶液乳化，并使用浆式叶片搅拌器搅拌。在此步骤之后，在大气压下将双乳液通过由足够长的斜面组成的连续蒸发系统，在此期间微球体的悬浮液流进薄层。使用这种蒸发系统，有机溶剂快速蒸发，导致快速稳定聚合物基质。微球体最终通过过滤回收，用水洗涤，然后冷冻干燥。微球体中药品的最终载量为9-11wt％。
实施例2a：
根据实施例2所述的方法生产微球体，使用在外部水相中的5％氯化钠作为渗透剂代替5％甘露醇。
实施例3：
在磷酸盐缓冲液中研究根据实施例1和2制备的微球体中5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的体外释放。
将25mg微球体形式的各制剂悬浮在由5ml磷酸盐缓冲液(pH7.4)组成的释放介质中，然后在37℃下搅拌(旋转)4天。在不同的时间，通过高压液相色谱法(HPLC)测定肽释放量。
此研究结果由表1给出。它们证明根据本发明主题方法(实施例2)制备的组合物表现的“突发”效应大大小于根据实施例1的现有技术方法制备的组合物的“突发”释放。因此，在研究开始后4天，实施例2的微球体仅释放微球体中存在的肽总量的3.4％，而实施例1的微球体释放多至肽总量的22.6％。
表1
    ％释放的肽
    时间     实施例1     实施例2
    1天     13.4％     1.0％
    2天     16.7％     1.4％
    4天     22.6％     3.4％
实施例4：
研究大鼠体内释放根据实施例1、2和2a制备的微球体中的5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐。
对于此研究，将三种类型的微球体(实施例1、2和2a)悬浮在标准水赋形剂中，然后在事先剃毛的背部区域对大鼠进行皮下给药。每只动物的给药剂量为3.6mg微胶囊化5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐。在给药后3天处死某些大鼠，而且其它大鼠在给药后7天处死。一旦大鼠死亡，则切除注射部位，然后将保留在注射部位的微球体和邻近结缔组织一起回收。接着萃取保留的5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐，然后通过高压液相色谱法(HPLC)进行定量。
此研究的结果由表2提供。可以看出，3天后实施例1的微球体已释放微球体中存在的肽总量的35.3％，而实施例2的微球体仅释放20.6％。
                   表2：
           ％释放的肽
  时间     实施例1     实施例2     实施例2a
  3天     35.3％     20.6％     25.9％
  7天     41.6％     29.5％     -
因此可以断定，此体内研究的结果与体个研究(实施例3)得到的结果一致，并证明根据本发明的方法制备的制剂表现的“突发”释放大大小于根据实施例1的现有技术方法制备的组合物的“突发”释放。
实施例5：
为了完成前面的结果(实施例3和4)，在微球体给药后第一个24小时期间进行关于活性成分的体内释放的彻底研究。
在此试验中，在进行根据实施例1和2制备的微球体形式的制剂的皮下给药之后，通过液相色谱-质谱-质谱法(LC/MS/MS)评价大鼠的5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的血清含量。因此，将3.6mg胶囊化5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐注射到大鼠，并在给药后不同的时间取血样以评价血清中的5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的含量。
此研究的结果由图1提供。因此，在实施例1的微球体给药后1小时，血清中的肽浓度为107.8μg/l，而关于实施例2的微球体，血清中的肽浓度为51.8μg/l。在2、3、4、8和24小时后，实施例1的微球体分别表现出103.7、50.1、30.3、9.5和3.8μg/l的血清浓度，而实施例2的微球体分别表现28.0、5.5、4.5、9.3和1.0μg/l的值。
因此，此研究的结果与实施例3和4所得的结果一致，因为注意到实施例2的微球体比实施例1的微球体在第一个24小时(“突发”效应)内释放较少的肽。可以断定，如果微球体包含根据本发明的聚合物基质，并且如果它们使用根据本发明的方法生产，则在体内给药之后它们表现的“突发”释放基本上小于根据现有技术方法制备的微球体。
实施例6：
在大鼠上研究根据实施例2制备的微球体中的5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的完全释放曲线。此研究的目标是证明，在发生“突发”释放现象(它系统性地发生，但比现有技术所述的微球体较低)之后，根据本发明的方法得到的微球体在数个月的时间内连续释放肽。
以与实施例4类似的方式，将微球体悬浮在标准水赋形剂中以使它们可以在大鼠的事先已剃毛的背部区域进行皮下给药。每只动物的给药剂量为3.6mg胶囊化5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-ProNHEt乙酸盐。
在3个月内的不同时间，处死大鼠小组，切除注射部位，然后回收保留在所述部位的微球体以及邻近的结缔组织。随后萃取保留在注射部位的5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-ProNHEt乙酸盐，然后通过高压液相色谱法(HPLC)进行定量。
此研究的结果由图2给出。因此它们表明所述微球体在至少3个月的时间内连续释放肽。
实施例7：
这里研究根据实施例2和实施例2a制备的微胶囊于微球体中的5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的体内生物活性。
S-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-ProNHEt乙酸盐是一种作为强力LH-RH激素激动剂并在急性剂量下刺激垂体分泌促性腺激素和生殖器官类固醇生成的类似物。但是，如果它作慢性给药，则它反常地产生对垂体促性腺激素和睾丸与卵巢类固醇生成的竞争性抑制作用。5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的最初给药导致促性腺激素和性激素的血浆水平的突然增大，但在与药品连续接触的情况下，这些激素水平明显降低，直至在给药后数天它们达到小于最初基线值以下的水平，且这种现象持续治疗期间。
因此，为了证明根据实施例2和2a生产的制剂的小“突发”释放不改变它的药理学活性，给大鼠皮下注射3.6mg微胶囊化于这些微球体中的5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐，并在给药后不同的时间取血样以通过放射免疫试验评价血清睾酮。
此研究的结果由图3给出。因此，这些结果表明适宜的血清睾酮曲线：在第一天内突然释放，然后抑制血浆睾酮浓度，因此它们证明从根据本发明的制剂中释放的肽的正确的生物活性。
实施例8-10的目的在于显示根据本发明的主题方法制备的微球体与根据专利FR 2 718 642所述的方法制备的微球体相比表现出许多优点。本发明和专利FR 2 718 642所述的发明之间存在的主要差别如下：
●本发明的方法中不使用释放调节剂。
●将作为渗透剂的甘露醇或NaCl加到第一乳液被乳化的外部水相。
●关于本发明d，l-丙交酯-共-乙交酯(PLGA)共聚物的分子量范围(40000-80000)和乳酸/乙醇酸比例范围(50/50-80/20)的选择。
实施例8：释放调节剂在体外释放时的作用
根据实施例2所述的生产方法制备微球体，使用含有30％的平均分子量为34 000道尔顿(固有粘度大约为0.4dl/g)而乳酸与乙醇酸的比例50/50的d，l-丙交酯-共-乙交酯共聚物的二氯甲烷的溶液作为有机相，还使用不同数量(实施例8.1、8.2和8.3)的平均分子量2000道尔顿(PLA 2000)的聚(d，l-丙交酯)。
实施例8.1：0％的PLA 2000.
实施例8.2：2.5％的PLA 2000.
实施例8.3：5％的PLA 2000.
外部水相为由0.25％的聚山梨酸酯80、4％聚乙烯吡咯烷酮和5％甘露醇组成的水溶液。
在磷酸盐缓冲液中进行根据实施例8.1、8.2和8.3制备的微球体中的5-Oxopro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的最初的体外释放。
将25mg的各制剂悬浮在由5ml磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)组成的释放介质中，然后在37℃下搅拌(旋转)7天。在不同的时间，通过高压液相色谱法(HPLC)测定释放的肽的数量。结果由下表3给出。
                        表3：
    时间               释放的肽％
    天   实施例8.1   实施例8.2   实施例8.3
    2天     1.1％     1.1％     1.6％
    4天     1.7％     2.7％     2.9％
    7天     3.7％     11.8％     18.3％
以下关于3种情况8.1、8.2和8.3的结果表明非常小的“突发”释放，并表明释放调节剂(PLA)具有加速活性成分释放的作用，即使在低浓度(2.5％)的PLA下，表明使用这种试剂可能不适于生产设计用于缓释(在3个月的时间内)的微球体。
实施例9：释放调节剂对药效曲线的作用和用于在3个月内缓 释的聚合物的选择
在大鼠上进行药效研究中研究微球体的聚合物组成对活性成分的释放的作用。根据实施例2所述的生产方法制备微球体，使用不同类型的聚合物：
实施例9.1：97.5％的平均分子量为34000道尔顿且乳酸与乙醇酸的比例为50/50的d，l-丙交酯-共-乙交酯共聚物和2.5％的平均分子量为2000道尔顿的聚(d，l-丙交酯)(释放调节剂)的混合物。
实施例9.2：平均分子量为34000道尔顿且乳酸与乙醇酸的比例为50/50的d，l-丙交酯-共-乙交酯共聚物。
实施例9.3：平均分子量为63000道尔顿且乳酸与乙醇酸的比例为75/25的d，l-丙交酯-共-乙交酯共聚物。
微球体中5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt乙酸盐的体内释放研究依据其对血浆睾酮水平抑制的药理学作用。
此研究的结果由图4提供。因此结果证明释放调节剂的存在加速活性成分的释放，因而释放调节剂不可能用于长期非常长时间释放的制剂(睾酮水平抑制5周)。
结果还表明平均分子量为34000道尔顿且乳酸与乙醇酸的比例为50/50的d，l-丙交酯-共-乙交酯共聚物可以将睾酮水平抑制作用保持8周，而平均分子量为63000道尔顿且乳酸与乙醇酸的比例为75/25的d，l-丙交酯-共-乙交酯共聚物可以将去势保持至少3个月。
实施例10：渗透剂加到外部水相的作用
制剂10.1：
根据实施例2所述的生产方法制备微球体，使用由0.25％聚山梨酸酯80和4％聚乙烯吡咯烷酮组成的溶液作为外部水相。
制剂10.2：
根据实施例10.1所述的生产方法制备微球体，将2.5％-5％的甘露醇加到外部水相作为渗透剂。
实施例10.3：
根据实施例10.1所述的生产方法制备微球体，将2.5％-5％的氯化钠加到外部水相作为渗透剂。
所述研究结果表明外部水相中的渗透剂的影响的研究的结果由下表4给出。
                          表4：
    实施例     渗透剂     尺寸μm     含量％
    10.1     59.3     7.7
    10.2     2.5％甘露醇     50.4     10.5
    10.2     5％甘露醇     43.8     10.7
    10.3     2.5％NaCl     39.7     10.7
    10.3     5％NaCl     32.7     10.4
因此，微球体的尺寸和肽含量取决于外部水相中渗透剂的存在。外部水相中作为渗透剂的甘露醇或NaCl的加入增加胶囊化效率，即活性成分微胶囊化的百分率(含量)。所加入的渗透剂的类型和数量还可以控制颗粒的尺寸。在本发明的上下文中，NaCl有利地用作渗透剂，因为已经证明在相同的搅拌和粘度条件下氯化钠比甘露醇更大地减小颗粒的尺寸，但不导致胶囊化效率的降低。
实施例11：外部水相中在在的增粘剂(粘剂改性剂)的浓度对 颗粒尺寸的作用
制剂11.1：
根据实施例2的生产方法制备微球体，但不包含活性成分，使用由0.25％聚山梨酸酯80、5％甘露醇和6.8％聚乙烯吡咯烷酮组成的溶液作为外部水相。
制剂11.2：
根据实施例2的生产方法制备微球体，但不包含活性成分，使用由0.25％聚山梨酸酯80、5％甘露醇和8.0％聚乙烯吡咯烷酮组成的溶液作为外部水相。
所述表明外部水相中的粘度改性剂的影响的研究的结果由下表5给出。
表5：
    实施例     粘度改性剂     尺寸μm
    11.1  6.8％聚乙烯吡咯烷酮     31.3
    11.2  8.0％聚乙烯吡咯烷酮     25.4
用由0.25％聚山梨酸酯80、5％甘露醇和4％聚乙烯吡咯烷酮组成的外部水相产生的实施例10.2，能够获得43.8μm的粒径。通过增加粘度改性剂的浓度，可以观察实现粒径的显著减小，如上表5所示。因此，微球体的尺寸取决于外部水相中粘度改性剂的存在及其浓度。

Claims (14)

1.一种制备缓释水溶性活性成分的微球体形式的药物组合物的方法，其特征在于它包括以下连续步骤：
-将活性成分溶于适量的水中，
-用溶于氯化烃的平均分子量为40000-80000且乳酸/乙醇酸比例为50/50-80/20的d，l-丙交酯-共-乙交酯基质共聚物的溶液将如此得到的活性成分的水溶液乳化，得到第一微细和均匀的乳液，
-在含有表面活性剂、增粘剂和渗透剂的外部水相中乳化如此得到的该第一乳液，
-萃取-蒸发所述溶剂以得到微球体，将其过滤、洗涤和干燥后回收。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述活性成分选自肽、蛋白质、疫苗、抗生素、抗抑郁药、止痛药、抗炎药和细胞抑制剂。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述活性成分为5-OxoPro-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PrONHEt或它的一种盐。
4.如权利要求1-3之任一项所述的方法，其特征在于将活性成分溶于水以形成内部水相的第一步骤是在不加入任何保持活性成分的物质或稳定乳液的试剂，并在不进行任何意在增加粘度的操作的情况下完成的。
5.如前述权利要求之任一项所述的方法，其特征在于相对于内部水相的总重而言，所述活性成分存在的浓度为0.01-95wt％，有利地为0.5-40wt％。
6.如前述权利要求之任一项所述的方法，其特征在于所述氯化烃为二氯甲烷。
7.如前述权利要求之任一项所述的方法，其特征在于相对于由溶于氯化烃的共聚物组成的溶液的总重而言，所述基质共聚物存在的浓度为5-50wt％。
8.如前述权利要求之任一项所述的方法，其特征在于所述外部水相包含聚山梨酸酯80、聚乙烯吡咯烷酮和甘露醇或氯化钠的溶液，有利地为聚山梨酸酯80、聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠的溶液。
9.如前述权利要求之任一项所述的方法，其特征在于相对于外部水相的总重而言，所述表面活性剂存在的浓度为0.1-0.5wt％，所述增粘剂存在的浓度为1-25wt％，而所述渗透剂存在的浓度为0.1-10wt％。
10.如前述权利要求之任一项所述的方法，其特征在于由萃取-蒸发溶剂组成的步骤中，所述溶剂在室温和大气压下，按照由足够长度的斜面组成的连续蒸发系统快速消除，在此期间微球体的悬浮液流入薄层。
11.一种微球体，所述微球体可以通过实施权利要求1-10之任一项所述的方法而得到，表现出在大于2个月的时间内，有利地为至少3个月的时间内连续释放活性成分。
12.如权利要求11的所述的微球体，其特征在于相对于微球体的总重而言，所述活性成分存在的浓度为0.5-20wt％，有利地为5-15wt％。
13.如权利要求11和12之任一项所述的微球体，其特征在于其尺寸小于250μm，有利地为小于90μm。
14.如权利要求11-13之一所述的微球体，其特征在于它通过肠胃外给药，有利地为肌肉内、皮下或动脉内注射，或者在肿瘤部位注射的形式。
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