CN105770208A - 草药组方提取物及其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种草药组方提取物及其制备方法及应用，按质量份数计算，它包括金银花0‑10份、蒲公英0‑10份及紫花地丁0‑10份为制备原料。本发明将金银花、蒲公英及紫花地丁单独或复配，发现通过水提的方式获得的提取物具有良好的抑菌效果，更发现了这三种药物组合所产生的协同效应，特别是对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌及大肠杆菌这三种人体致病菌有非常良好的抑制作用，为开发新的抑菌药物提供了思路。本发明材料来源广泛，成本低廉，使用效果理想。

Description

草药组方提取物及其制备方法及应用

技术领域

本发明涉及药学领域，尤其是一种草药组方提取物及其制备方法及应用。

背景技术

金银花（LonicerajaponicaThunb）系忍冬科忍冬属多年生半常绿藤本植物，又名忍冬，为常用大宗中药材，是国务院确定的名贵中药材之一。金银花药用历史悠久，其性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，具有宣散风热、清热解毒、消痈散肿、凉血止痢、杀虫止痒之功效，自古被誉为清热解毒的良药。金银花化学成分研究表明，花蕾中含有木犀草素(Luteolin)、肌醇(Inosito1)和皂甙。分离出绿原酸(Chlorogenieacid)和异绿原酸(Isochlorogenicacid)，它们是金银花抗菌作用的主要有效成分。金银花的挥发油中含有30多种成分，包括挥发油(棕榈酸、香树烯、香叶醇、α-松油醇、芳樟醇)、有机酸类、(绿原酸、异绿原酸、棕榈酸和肉豆蔻酸)、黄酮类(木樨草素)、肌醇、三萜皂苷等多种成分。临床广泛用于治疗身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿、瘟疫臃肿毒症、菌痢、麻疹、腮腺炎、痢疾、胃肠炎、腹泻、风湿关节痛、跌打肿痛、功能性子宫出血、治毒蛇咬伤、皮肤湿疹等疾病。

蒲公英（HerbaTaraxaci），属菊科多年生草本植物，又名布谷英、黄花地丁、婆婆丁、华花郎等，是温带至亚热带常见的一种一年或二年生植物。蒲公英含萜类、黄酮、多糖、挥发油、生物碱、有机酸、菊糖等，具有杀菌、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、利尿、利胆、抗过敏、抗血栓形成、降血糖的作用。多种三萜类化合物均具有抗肿瘤活性。蒲公英同时富含蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等，有丰富的营养价值，是药食兼用的植物。

紫花地丁（ViolaphilippicaCar），为堇菜科植物紫花地丁的干燥全草，又名堇菜地丁，为植物紫花地丁或犁头草的带根全草。全草含甙类、黄酮类、蜡、蜡酸、软脂酸、对羟基苯甲酸、反式对羟基桂皮酸、丁二酸、二十酰对羟基苯乙胺、阿福豆甙(afzelin)和山柰酚-3-O-鼠李糖甙等。紫花地丁具有清热解毒、凉血消肿之功效，主要用于治疗疔疮肿毒、痈疽发背、丹毒、毒蛇咬伤等病症，临床应用广泛。

发明内容

本发明的目的是：提供一种草药组方提取物及其制备方法及应用，它具有良好的抗菌作用，为抗菌药物的制备提供了基础。

本发明是这样实现的：草药组方提取物，按质量份数计算，它包括金银花1-10份、蒲公英1-10份及紫花地丁1-10份；以其中的两种或三种为制备原料。

按上述重量份数取各组分，将上述组分中的两种或三种进行混合后，向混合物中加入15-25倍量的水浸泡20-40分钟，再加热煎煮提取三次，并将三次滤液混合，减压浓缩至浓度为5g/mL，紫外灭菌，保存于-20℃。

草药组方提取物在制备抗菌药物中的应用。

由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明将金银花、蒲公英及紫花地丁中的两种或三种进行复配，发现通过水提的方式获得的提取物具有良好的抑菌效果，更发现了这三种药物组合所产生的协同效应，特别是对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌及大肠杆菌这三种人体致病菌有非常良好的抑制作用，为开发新的抑菌药物提供了思路。本发明材料来源广泛，成本低廉，使用效果理想。

附图说明

附图1为终浓度为100μg/mL的不同提取液对三株菌株生长的抑制作用；

附图2为不同浓度的三味中草药等质量混合的水提取液对三株菌株生长的抑制作用。

具体实施方式

本发明的实施例1：草药组方提取物的制备：

金银花为贵州省遵义市产全草，蒲公英为贵州省都匀市产全草，紫花地丁为贵州省贵阳市产全草。三种中药均为夏季所采样本，除杂质后自然阴干。

分别将三种中药进行组合，总共有7个组，分别为：1组金银花10g，2组蒲公英10g，3组紫花地丁10g，4组金银花、蒲公英各10g，5组金银花及紫花地丁各10g，6组蒲公英及紫花地丁各10g，7组金银花、蒲公英及紫花地丁各10g。

取各组分，并按上述分组分好，向各组药物中加入20倍量加水浸泡30分钟后，电炉加热煎煮提取三次，并将三次滤液混合，用旋转蒸发仪浓缩至浓度为5g/mL，紫外灭菌，保存于-20℃冰箱备用。

本发明的实施例2：提取物抑菌效果检测：

菌株、细胞及其它试剂

大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄酒球菌ATCC25923、枯草芽孢杆菌ATCC6051均由贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室保存。蛋白胨、酵母提取物购于Oxoid公司，牛肉膏和琼脂购于Sigma公司。

体外抑菌活性检测

分别将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌接种于琼脂斜面培养基，37℃培养24h后，从斜面培养基中挑取单克隆菌落接种于LB液体培养基，37℃培养18h。用灭菌生理盐水将菌液稀释成1×10⁵CFU/mL的菌悬液。

采用微量稀释法检测提取液的体外抑菌活性。将各组提取液分别过滤除菌后于4℃下保存备用。将生长后的菌液用生理盐水校正浓度至0.5麦氏比浊标准，再用营养肉汤培养基将菌液浓度稀释成1×10⁵CFU/mL。每孔分别加入100μL提取液和100μL稀释好的菌液(终浓度为100μg/mL)，用96孔板检测。分别以200μL的菌液或药液作为空白对照，其终浓度分别为400、200、100、50、25、10、5μg/mL。将96孔板置微型振荡器上振荡1min，使各孔内溶液充分混匀，37℃培养16h后用酶标仪进行检测。其抑制率根据下面公式计算，根据其抑制率确定其MIC值。

结果如图1所示，根据图1得知，7种组合的水提取液对三株菌株的生长都具有不同程度的抑制作用，但两两组合的提取液的抑菌效果明显强于单味中草药（P<0.05），而三味中草药同等质量组合的提取液的抑菌效果极显著强于单味中草药（P<0.01），也明显强于两两组合的提取液的抑菌效果（P<0.05）。这表明三味中草药分别组合及共同组合后均增强了其抗菌活性，起到了显著的协同效应；其中以三种共同组合的效果为最强。

进一步分析了不同浓度的三味中草药组合的水提取液（第7组）对三种细菌生长的抑制曲线，如图2所示，以获得最小抑菌浓度值（MIC）。MIC值的定义为细菌的生长被抑制≥90%的药物浓度。结果表明三味中草药组合的水提取液对大肠杆菌（MIC=246.24±32.65μg/mL）和枯草芽孢杆菌（MIC=251.85±28.41μg/mL）生长的抑制作用显著强于金黄色葡萄球菌（MIC=412.59±42.35μg/mL）。第7组的水提取液对三株细菌的抑菌效果呈现出了浓度依赖关系。以上结果可表明三味中药组合后其水提液对三株细菌生长抑制作用是最强的。

经发明人验证，这三味中药在本发明提供的范围内，按不同比例组合均具有协同效应，但实施例中仅以最优方案作为例子进行说明。

Claims (3)

1.一种草药组方提取物，其特征在于：按质量份数计算，它包括金银花1-10份、蒲公英1-10份及紫花地丁1-10份；以其中的两种或三种为制备原料。

2.一种如权利要求1所述的草药组方提取物的制备方法，其特征在于：按上述重量份数取各组分，将上述组分中的两种或三种进行混合后，向混合物中加入15-25倍量的水浸泡20-40分钟，再加热煎煮提取三次，并将三次滤液混合，减压浓缩至浓度为5g/mL，紫外灭菌，保存于-20℃。

3.一种如权利要求1所述的草药组方提取物在制备抗菌药物中的应用。