CN105734070A - Corin基因变异体及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Corin基因变异体及其用途。具体而言，与如SEQ ID NO:1所示的Corin基因相比，本发明的Corin基因变异体具有下列变异中的任意一种：c. G1203A、c. C2753T、c. C2928T、c. G1747T，其编码的多肽具有下列变异中的任意一种：p. R349H、p. P866S、p. T924M、p. R530S。该变异体以及多肽能够用于制备高血压诊断试剂和妊娠高血压疾病诊断试剂，用于人群的大规模检测筛查，发现受试者是否高血压易感；通过检测外周血，即可明确部分高血压及妊娠期高血压患者的发病机制，简便易行，特异性强，可为临床治疗提供指导。

Description

Corin基因变异体及其用途

技术领域

本发明属于临床医学及分子生物学领域，涉及Corin基因变异体及其在制备高血压诊断试剂和妊娠高血压疾病诊断试剂中的用途。

背景技术

高血压（Hypertension）是一种常见的心血管疾病，据世界卫生组织（WHO）估计，世界范围内约1/3的成年人患有高血压。高血压同时增加了血栓形成、急性心肌梗死、中风、肾功能衰竭和心力衰竭等高死亡率疾病的发生率，这些疾病所带来的社会和经济负担是巨大的。随着我国社会和经济的发展，高脂血症和肥胖等高血压和心血管疾病的危险因素也在日益增加，高血压和心血管疾病已成为我国现代社会主要的健康问题。

众所周知，遗传因素和环境因素共同参与了高血压的发病机制。目前已知的与高血压相关的基因包括上皮细胞钠通道、钠/钾转运酶、肾素-血管紧张素-醛固酮、钾通道以及心钠肽（又称心钠素）基因等。然而，高血压患者中仅有5%能够明确诊断为由特定基因缺陷而致病，大部分患者的致病机制尚不明确。妊娠期高血压疾病（又称妊娠高血压综合征，Pregnancy-induced hypertension syndrome）发生的相关因素包括血管生长因子受体、血管紧张素及雌激素等，但具体发病机制尚不清楚。由于高血压及妊娠高血压患者人数众多，血压水平与疾病的危险程度又密切相关，因此，研究高血压发病的分子机制，明确各类高血压患者的致病机理，对于疾病的诊断及治疗都具有重大的意义。

根据NCBI参考序列NM_006587.3中的记载，Corin基因全长5015 bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。从5’-端开始，第158至160位的ATG对应起始密码子，之前为157 bp长的5’-端非编码区；第3284至3286位的TAA对应终止密码子，之后为1.7 kb长的3’-端非编码区；5’-端非编码区和3’-端非编码区之间为3126 bp长的开放阅读框架（ORF），用于编码由1042个氨基酸组成的蛋白质（分子量约为116 kDa，下文中称为Corin蛋白），如氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。Corin蛋白是一种II型跨膜丝氨酸蛋白酶（Transmembrane serineprotease），除含有一个跨膜结构域、两个卷曲结构域、八个低密度脂蛋白受体结构域和一个清道夫受体结构域之外，还含有一个胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域。Corin蛋白主要表达于心脏，在调节血压和心脏功能中起重要作用（参见Yan, W., N. Sheng, et al.,J.Biol. Chem., 1999, 274:14926-14935）。

发明内容

为了进一步明确Corin基因与高血压及妊娠高血压疾病之间的关系，本发明通过提供Corin基因的变异体来探究Corin基因中参与血压调节的关键区域，并将之运用于高血压及妊娠高血压疾病的早期预测及诊断，为患者的个性化治疗提供依据。

具体而言，本发明提供了下列一种分离的Corin基因变异体，与核苷酸序列如SEQID NO:1所示的Corin基因相比，其具有下列变异中的任意一种：

（1）c. G1203A，其中第1203位碱基发生鸟嘌呤（G）→腺嘌呤（A）变异；

（2）c. C2753T，其中第2753位碱基发生胞嘧啶（C）→胸腺嘧啶（T）变异；

（3）c. C2928T，其中第2928位碱基发生胞嘧啶（C）→胸腺嘧啶（T）变异；

（4）c. G1747T，其中第1747位碱基发生鸟嘌呤（G）→胸腺嘧啶（T）变异。

另一方面，本发明提供了一种由上述分离的Corin基因变异体编码的分离的多肽（其结构如图2所示），与氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的Corin蛋白相比，其具有下列变异中的任意一种：

（1）p. R349H，其中第349位氨基酸发生精氨酸（R）→组氨酸（H）变异；

（2）p. P866S，其中第866位氨基酸发生脯氨酸（P）→丝氨酸（S）变异；

（3）p. T924M，其中第924位氨基酸发生苏氨酸（T）→甲硫氨酸（M）变异；

（4）p. R530S，其中第530位氨基酸发生精氨酸（R）→丝氨酸（S）变异。

最后一方面，本发明提供了上述分离的Corin基因变异体以及由其编码的分离的多肽在制备高血压诊断试剂和妊娠高血压疾病（包括妊娠期高血压、子痫前期、子痫、慢性高血压并发子痫前期、妊娠合并慢性高血压）诊断试剂中的用途。

与现有技术相比，采用上述技术方案的本发明具备如下优势：

（1）Corin基因变异体以及由其编码的多肽能够用于人群的大规模检测筛查，发现受试者是否高血压易感；

（2）通过检测外周血，即可明确高血压及妊娠期高血压患者的发病机制，简便易行，特异性强；

（3）首次明确高血压及妊娠期高血压患者发病与Corin基因的变异相关，有利于指导患者的临床治疗。

附图说明

图1为Corin基因外显子测序图。

图2为Corin蛋白的结构模式及其突变R349H、P866S和T924M以及多态性R530S的示意图，其中TM表示跨膜结构域（transmembrane domain），Fz1表示第1卷曲结构域（frizzled-like domain），Fz2表示第2卷曲结构域，LDLR表示低密度脂蛋白受体结构域（LDL receptor domain），SR表示清道夫受体结构域（scavenger receptor domain），Protease表示蛋白酶结构域（protease domain），并且其中突变R349H位于两个卷曲结构域之间的低密度脂蛋白受体结构域，突变P866S和T924M位于蛋白酶结构域，多态性R530S位于第2卷曲结构域。

图3为Corin基因突变T924M及多态性R530S影响Corin活化的效果图，其中（a）为Western blotting结果示意图，（b）为灰度扫描图，Corin-P表示活化的Corin，Vector表示载体对照，WT表示野生型Corin，R801A和S985A分别为Corin活化位点及酶活性位点突变的Corin，并且其中R801A为阴性对照，Corin不能活化，因此无Corin-P条带。

图4为Corin基因突变T924M及多态性R530S影响Corin功能的效果图，其中（a）为Western blotting结果示意图，（b）为灰度扫描图，pro-ANP表示心钠素原，ANP表示心钠素，Vector表示载体对照，WT表示野生型Corin，R801A为Corin活化位点突变的Corin，并且其中R801A为阴性对照，Corin不能活化，因此无ANP条带。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做出进一步的描述。需要说明的是，下列实施例仅用于解释本发明的技术方案，而并不旨在限制其保护范围。另外，除非特殊说明，下列实施例中使用各种试剂、药品和仪器均可通过商业手段获得。

实施例1：血液标本的收集。

研究对象：以高血压以及妊娠高血压患者为研究对象。高血压诊断标准依据1999年WHO/ISH血压分类及标准。妊娠高血压临床诊断标准如下：妊娠20周后出现高血压，间隔4小时两次随机血压≥140/90 mmHg。正常对照为既往无原发性高血压、慢性肝脏疾病、肾脏疾病、糖尿病、心脏病及甲状腺功能亢进等病史，无吸烟、饮酒、输血、免疫治疗史等无基础疾病。

样本采集：静脉采血，采用EDTA抗凝管收集，室温下于3000 rpm离心10分钟，分离血浆及血细胞，分装后于-80℃贮存，备用。

实施例2：基因组DNA的提取及PCR扩增。

提取血细胞基因组DNA：用美国Qiagen公司生产的全血DNA抽提试剂盒（QIAampDNA Mini and Blood Mini Kit），按照试剂盒中说明书的提示，提取样本基因组DNA，并于-20℃保存。

PCR引物设计：根据Genbank中人Corin基因序列，用Primer 5.0软件设计Corin外显子扩增引物，具体引物序列见表1。

PCR扩增及序列分析：PCR扩增条件：94℃预变性6 min；94℃变性50 s，58℃延伸32s，72℃退火32 s，35个循环后72℃延伸8 min。PCR产物进行测序分析。使用Chromas 2.31软件将测序结果与NCBI网站中人Corin mRNA序列（NM_006587.3）进行比对分析。如图1所示，（a）c. G1203A中第1203位碱基发生鸟嘌呤（G）→腺嘌呤（A）变异；（b）c. C2753T中第2753位碱基发生胞嘧啶（C）→胸腺嘧啶（T）变异；（c）c. C2928T中第2928位碱基发生胞嘧啶（C）→胸腺嘧啶（T）变异；（d）c. G1747T中第1747位碱基发生鸟嘌呤（G）→胸腺嘧啶（T）变异。

实施例3：Corin基因突变或多态性的鉴别及其与疾病的关系研究。

为了判断所发现Corin基因变异为突变还是多态性，通过PCR产物测序或定量PCR来分析Corin基因变异在正常人群及高血压患者中的分布。以正常人及高血压患者为研究对象（n>100例/组），采集外周血，提取基因组DNA，扩增基因改变所在外显子，PCR产物进行测序分析。用Chromas 2.31软件将测序结果与NCBI网站中人Corin mRNA序列（NM_006587.3）进行比对分析。

如果正常人群中未发现相应变异，则提示该变异为基因突变；如果正常人群中的变异频率大于等于1%，则提示该变异为基因多态性。如基因改变为基因多态性，比较其在正常人群及高血压患者的分布频率，判断这些改变是否与疾病相关。通过卡方检验计算两个人群之间突变体出现频率是否具有差异，若p＜0.05则被认为具有统计学差异，p＜0.01为差异显著，提示基因改变与疾病相关。

突变R349H、P866S和T924M仅见于高血压患者，396例患者中检出以上3种Corin基因变异各1例，而在217例正常人中未见，提示这3种Corin基因变异为仅见于高血压患者的基因突变。另外，分析多态性R530S在正常对照及高血压患者中的分布情况（其结果如表2所示），639例正常人中发现3例R530S变异，750例高血压患者中有19例R530S变异。经卡方检验，p=0.002，差异显著，即R530S基因多态性与高血压显著相关。

实施例4：Corin基因变异对Corin活化的影响。

突变体构建：以现有的野生型Corin表达载体为模板，采用Stratagene公司的Quickchange^®定点突变试剂盒，按照试剂盒中的说明，设计并合成含突变位点的引物，构建含突变位点的表达载体，测序验证，具体方法参见文献Dong, N., Fang C., et al., J.Biol. Chem., 2013, 288:7867-74。

Corin突变体的表达与活化检测：用Lipofectamine 2000（Invitrogen）转染试剂将野生型Corin及其突变体载体分别转染人胚肾细胞（HEK293），用细胞裂解液[50 mMTris-HCl（pH 8.0）、150 mM NaCl、1%（v/v）Triton X-100、10%（v/v）甘油、组合蛋白酶抑制剂（1:100稀释，Sigma）]冰上裂解细胞45 min。蛋白样本与含2% β-巯基乙醇（β-Mercaptoethanol，β-ME）的上样缓冲液（还原条件）或不含β-ME的缓冲液（非还原条件）混匀并煮沸5 min，进行SDS-PAGE电泳（恒压125V，90 min），转膜（恒流200 mA，2 h），用anti-V5抗体检测Corin蛋白，根据Western blotting结果比较Corin突变体对Corin蛋白表达的影响。

Corin蛋白以酶原形式合成，必须经过蛋白酶裂解才具有活性。根据Corin蛋白结构分析，在还原条件下，二硫键断裂，活化的Corin片段将与前肽分离，产生一条~40 kDa的活化蛋白条带。将野生型Corin及其突变体的表达载体分别转染HEK293细胞，裂解细胞。蛋白样本与含2% β-ME的上样缓冲液（还原条件）混匀并煮沸5 min，进行SDS-PAGE电泳，转膜，用anti-V5 抗体检测Corin蛋白的活化片段，即有无~40 kDa的Corin活化条带（Corin-P），用于研究突变位点对Corin活化的影响。

从图3中可以看出，Corin基因多态性R530S和突变T924M不影响Corin蛋白的表达，但影响了Corin的活化。如图4（a）中所示，R530S和T924M 的Corin-P条带显著弱于野生型（WT）Corin条带，将图4（a）中的蛋白条带进行扫描，计算 Corin-P与对应的总Corin的比值（Corin-P/Corin），用单因素方差分析进行比较，结果显示R530S和T924M 的Corin-P/Corin显著低于WT（p<0.01）。

实施例5：Corin基因变异对Corin功能的影响。

Corin突变体活化pro-ANP的功能研究：将野生型Corin及其变异体与pro-ANP的表达载体共同转染HEK293细胞，收集条件培养液，利用免疫沉淀和Western blotting方法检测分析pro-ANP和ANP，具体方法参见文献Dong, N., Zhou T., et al., J. Biol. Chem.,2014, 289:17909-16，其结果如图4所示。

从图4中可以看出，HEK293细胞表达的WT、R530S和T924M Corin蛋白具有将pro-ANP活化为ANP的能力，但是R530S和T924M Corin蛋白活化生成的ANP显著低于WT Corin蛋白（p<0.01）。

SEQ ID NO:1：

0001 agagcagaca aaatatgggg cccctggcgc ttaaagttca gtttgtctct cttgagcttg

0061 gagaaaatca tccgtagtgc ctccccgggg gacacgtaga ggagagaaaa gcgaccaaga

0121 taaaagtgga cagaagaata agcgagactt tttatccatg aaacagtctc ctgccctcgc

0181 tccggaagag cgctgccgca gagccgggtc cccaaagccg gtcttgagag ctgatgacaa

0241 taacatgggc aatggctgct ctcagaagct ggcgactgct aacctcctcc ggttcctatt

0301 gctggtcctg attccatgta tctgtgctct cgttctcttg ctggtgatcc tgctttccta

0361 tgttggaaca ttacaaaagg tctattttaa atcaaatggg agtgaacctt tggtcactga

0421 tggtgaaatc caagggtccg atgttattct tacaaataca atttataacc agagcactgt

0481 ggtgtctact gcacatcccg accaacacgt tccagcctgg actacggatg cttctctccc

0541 aggggaccaa agtcacagga atacaagtgc ctgtatgaac atcacccaca gccagtgtca

0601 gatgctgccc taccacgcca cgctgacacc tctcctctca gttgtcagaa acatggaaat

0661 ggaaaagttc ctcaagtttt tcacatatct ccatcgcctc agttgctatc aacatatcat

0721 gctgtttggc tgtaccctcg ccttccctga gtgcatcatt gatggcgatg acagtcatgg

0781 actcctgccc tgtaggtcct tctgtgaggc tgcaaaagaa ggctgtgaat cagtcctggg

0841 gatggtgaat tactcctggc cggatttcct cagatgctcc cagtttagaa accaaactga

0901 aagcagcaat gtcagcagaa tttgcttctc acctcagcag gaaaacggaa agcaattgct

0961 ctgtggaagg ggtgagaact ttctgtgtgc cagtggaatc tgcatccccg ggaaactgca

1021 atgtaatggc tacaacgact gtgacgactg gagtgacgag gctcattgca actgcagcga

1081 gaatctgttt cactgtcaca caggcaagtg ccttaattac agccttgtgt gtgatggata

1141 tgatgactgt ggggatttga gtgatgagca aaactgtgat tgcaatccca caacagagca

1201 tcgctgcggg gacgggcgct gcatcgccat ggagtgggtg tgtgatggtg accacgactg

1261 tgtggataag tctgacgagg tcaactgctc ctgtcacagc cagggtctgg tggaatgcag

1321 aaatggacaa tgtatcccca gcacgtttca atgtgatggt gacgaggact gcaaggatgg

1381 gagtgatgag gagaactgca gcgtcattca gacttcatgt caagaaggag accaaagatg

1441 cctctacaat ccctgccttg attcatgtgg tggtagctct ctctgtgacc cgaacaacag

1501 tctgaataac tgtagtcaat gtgaaccaat tacattggaa ctctgcatga atttgcccta

1561 caacagtaca agttatccaa attattttgg ccacaggact caaaaggaag catccatcag

1621 ctgggagtct tctcttttcc ctgcacttgt tcaaaccaac tgttataaat acctcatgtt

1681 cttttcttgc accattttgg taccaaaatg tgatgtgaat acaggcgagc atatccctcc

1741 ttgcagggca ttgtgtgaac actctaaaga acgctgtgag tctgttcttg ggattgtggg

1801 cctacagtgg cctgaagaca cagattgcag tcaatttcca gaggaaaatt cagacaatca

1861 aacctgcctg atgcctgatg aatatgtgga agaatgctca cctagtcatt tcaagtgccg

1921 ctcaggacag tgtgttctgg cttccagaag atgtgatggc caggccgact gtgacgatga

1981 cagtgatgag gaaaactgtg gttgtaaaga gagagatctt tgggaatgtc catccaataa

2041 acaatgtttg aagcacacag tgatctgcga tgggttccca gactgccctg attacatgga

2101 cgagaaaaac tgctcatttt gccaagatga tgagctggaa tgtgcaaacc atgcgtgtgt

2161 gtcacgtgac ctgtggtgtg atggtgaagc cgactgctca gacagttcag atgaatggga

2221 ctgtgtgacc ctctctataa atgtgaactc ctcttccttt ctgatggttc acagagctgc

2281 cacagaacac catgtgtgtg cagatggctg gcaggagata ttgagtcagc tggcctgcaa

2341 gcagatgggt ttaggagaac catctgtgac caaattgata caggaacagg agaaagagcc

2401 gcggtggctg acattacact ccaactggga gagcctcaat gggaccactt tacatgaact

2461 tctagtaaat gggcagtctt gtgagagcag aagtaaaatt tctcttctgt gtactaaaca

2521 agactgtggg cgccgccctg ctgcccgaat gaacaaaagg atccttggag gtcggacgag

2581 tcgccctgga aggtggccat ggcagtgttc tctgcagagt gaacccagtg gacatatctg

2641 tggctgtgtc ctcattgcca agaagtgggt tctgacagtt gcccactgct tcgaggggag

2701 agagaatgct gcagtttgga aagtggtgct tggcatcaac aatctagacc atccatcagt

2761 gttcatgcag acacgctttg tgaagaccat catcctgcat ccccgctaca gtcgagcagt

2821 ggtggactat gacatcagca tcgttgagct gagtgaagac atcagtgaga ctggctacgt

2881 ccggcctgtc tgcttgccca acccggagca gtggctagag cctgacacgt actgctatat

2941 cacaggctgg ggccacatgg gcaataaaat gccatttaag ctgcaagagg gagaggtccg

3001 cattatttct ctggaacatt gtcagtccta ctttgacatg aagaccatca ccactcggat

3061 gatatgtgct ggctatgagt ctggcacagt tgattcatgc atgggtgaca gcggtgggcc

3121 tcttgtttgt gagaagcctg gaggacggtg gacattattt ggattaactt catggggctc

3181 cgtctgcttt tccaaagtcc tggggcctgg cgtttatagt aatgtgtcat atttcgtcga

3241 atggattaaa agacagattt acatccagac ctttctccta aactaattat aaggatgatc

3301 agagactttt gccagctaca ctaaaagaaa atggccttct tgactgtgaa gagctgcctg

3361 cagagagctg tacagaagca cttttcatgg acagaaatgc tcaatcgtgc actgcaaatt

3421 tgcatgtttg ttttggacta atttttttca atttattttt tcaccttcat ttttctctta

3481 tttcaagttc aatgaaagac tttacaaaag caaacaaagc agactttgtc cttttgccag

3541 gcctaaccat gactgcagca caaaattatc gactctggcg agatttaaaa tcaggtgcta

3601 cagtaacagg ttatggaatg gtctctttta tcctatcaca aaaaaagaca tagatattta

3661 ggctgattaa ttatctctac cagtttttgt ttctcaagct cagtgcatag tggtaaattt

3721 cagtgttaac attggagact tgcttttctt tttctttttt tataccccac aattcttttt

3781 tattacactt cgaattttag ggtacacgag cacaacgtgc aggttagtta catatgtata

3841 catgtgccat gttggtgtgc tgaacccagt aactcgtcat ttgatttatt aaaagccaag

3901 ataatttaca tgtttaaagt atttactatt acccccttct aatgtttgca taattctgag

3961 aactgataaa agacagcaat aaaagaccag tgtcatccat ttaggtagca agacatattg

4021 aatgcaaagt tctttagata tcaatattaa cacttgacat tattggaccc cccattctgg

4081 atgtatatca agatcataat tttatagaag agtctctata gaactgtcct catagctggg

4141 tttgttcagg atatatgagt tggctgattg agactgcaac aactacatct atatttatgg

4201 gcaatatttt gttttactta tgtggcaaag aactggatat taaactttgc aaaagagaat

4261 ttagatgaga gatgcaattt tttaaaaaga aaattaattt gcatccctcg tttaattaaa

4321 tttatttttc agttttcttg cgttcatcca taccaacaaa gtcataaaga gcatatttta

4381 gagcacagta agactttgca tggagtaaaa cattttgtaa ttttcctcaa aagatgttta

4441 atatctggtt tcttctcatt ggtaattaaa attttagaaa tgatttttag ctctaggcca

4501 ctttacgcaa ctcaatttct gaagcaatta gtggtaaaaa gtatttttcc ccactaaaaa

4561 actttaaaac acaaatcttc atatatactt aatttaatta gtcaggcatc cattttgcct

4621 tttaaacaac taggattccc tactaacctc caccagcaac ctggactgcc tcagcattcc

4681 aaatagatac tacctgcaat tttatacatg tatttttgta tcttttctgt gtgtaaacat

4741 agttgaaatt caaaaagttg tagcaatttc tatactattc atctcctgtc cttcagtttg

4801 tataaaccta aggagagtgt gaaatccagc aactgaattg tggtcacgat tgtatgaaag

4861 ttcaagaaca tatgtcagtt ttgttacagt tgtagctaca tactcaatgt atcaactttt

4921 agcctgctca acttaggctc agtgaaatat atatattata cttattttaa ataattctta

4981 atacaaataa aatggtaatg gtctaatcaa aaaaa

以上为Corin基因的核苷酸序列，其中以“斜体”表示“非编码区”，以“粗体+下划线”表示“起始密码子”和“终止密码子”，以“粗体”表示“变异位点”。

SEQ ID NO:2：

0001 mkqspalape ercrragspk pvlraddnnm gngcsqklat anllrflllv lipcicalvl

0061 llvillsyvg tlqkvyfksn gseplvtdge iqgsdviltn tiynqstvvs tahpdqhvpa

0121 wttdaslpgd qshrntsacm nithsqcqml pyhatltpll svvrnmemek flkfftylhr

0181 lscyqhimlf gctlafpeci idgddshgll pcrsfceaak egcesvlgmv nyswpdflrc

0241 sqfrnqtess nvsricfspq qengkqllcg rgenflcasg icipgklqcn gyndcddwsd

0301 eahcncsenl fhchtgkcln yslvcdgydd cgdlsdeqnc dcnpttehrc gdgrciamew

0361 vcdgdhdcvd ksdevncsch sqglvecrng qcipstfqcd gdedckdgsd eencsviqts

0421 cqegdqrcly npcldscggs slcdpnnsln ncsqcepitl elcmnlpyns tsypnyfghr

0481 tqkeasiswe sslfpalvqt ncykylmffs ctilvpkcdv ntgehippcr alcehskerc

0541 esvlgivglq wpedtdcsqf peensdnqtc lmpdeyveec spshfkcrsg qcvlasrrcd

0601 gqadcdddsd eencgckerd lwecpsnkqc lkhtvicdgf pdcpdymdek ncsfcqddel

0661 ecanhacvsr dlwcdgeadc sdssdewdcv tlsinvnsss flmvhraate hhvcadgwqe

0721 ilsqlackqm glgepsvtkl iqeqekeprw ltlhsnwesl ngttlhellv ngqscesrsk

0781 isllctkqdc grrpaarmnk rilggrtsrp grwpwqcslq sepsghicgc vliakkwvlt

0841 vahcfegren aavwkvvlgi nnldhpsvfm qtrfvktiil hprysravvd ydisivelse

0901 disetgyvrp vclpnpeqwl epdtycyitg wghmgnkmpf klqegevrii slehcqsyfd

0961 mktittrmic agyesgtvds cmgdsggplv cekpggrwtl fgltswgsvc fskvlgpgvy

1021 snvsyfvewi krqiyiqtfl ln

以上为Corin蛋白的氨基酸序列，其中以“粗体+下划线”表示“变异位点”。

Claims (8)

1.一种分离的Corin基因变异体，与核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的Corin基因相比，其具有下列变异中的任意一种：

1）c. G1203A，其中第1203位碱基发生G→A变异；

2）c. C2753T，其中第2753位碱基发生C→T变异；

3）c. C2928T，其中第2928位碱基发生C→T变异；

4）c. G1747T，其中第1747位碱基发生G→T变异。

2.根据权利要求1所述的分离的Corin基因变异体在制备高血压诊断试剂中的用途。

3.根据权利要求1所述的分离的Corin基因变异体在制备妊娠高血压疾病诊断试剂中的用途。

4.根据权利要求3所述用途，其特征在于：所述妊娠高血压疾病包括妊娠期高血压、子痫前期、子痫、慢性高血压并发子痫前期、妊娠合并慢性高血压。

5.一种分离的多肽，其由根据权利要求1所述的分离的Corin基因变异体编码，与氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的Corin蛋白相比，其具有下列变异中的任意一种：

1）p. R349H，其中第349位氨基酸发生R→H变异；

2）p. P866S，其中第866位氨基酸发生P→S变异；

3）p. T924M，其中第924位氨基酸发生T→M变异；

4）p. R530S，其中第530位氨基酸发生R→S变异。

6.根据权利要求5所述的分离的多肽在制备高血压诊断试剂中的用途。

7.根据权利要求5所述的分离的多肽在制备妊娠高血压疾病诊断试剂中的用途。

8.根据权利要求7所述用途，其特征在于：所述妊娠高血压疾病包括妊娠期高血压、子痫前期、子痫、慢性高血压并发子痫前期、妊娠合并慢性高血压。