CN111721940A - Micb蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用 - Google Patents

Micb蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用 Download PDF

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刘寰忠
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Abstract

本发明提供了人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用，属于生物技术领域。抑郁障碍患者和双相抑郁障碍患者MICB蛋白在外周血清和脑组织中存在表达差异。MICB蛋白表达能够作为抑郁障碍和双相障碍鉴别诊断的生化标记物。

Description

MICB蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴 别试剂盒中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及MICB蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用。
背景技术
抑郁障碍(Major depressive disorder，MDD)是常见的精神疾病，主要表现为显著且持久的心境障碍，并且伴有相应的行为和认知改变。抑郁症状是抑郁障碍患者最典型的临床症状。抑郁症状是指情绪低落、思维迟缓、意志活动减退等“三低”症状。但值得注意的是，抑郁症状并不仅仅只在抑郁障碍患者中出现。双相障碍(Bipolar disorder，BD)患者抑郁相时也会出现抑郁症状。双相障碍也被称为双相情感障碍，是指患者既有躁狂症状，又有抑郁症状的一类精神疾病。当双相障碍患者表现为抑郁症状时，很难将其与抑郁障碍进行鉴别诊断，因此双相障碍极易被误诊为抑郁障碍。
发明内容
本发明的目的在于提供MICB蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用，本发明的MICB蛋白能够作为抑郁障碍和双相障碍鉴别诊断的生化标记物。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用。
本发明提供了人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍或双相障碍诊断试剂盒中的应用。
优选的，所述人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量包括外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量；和/或脑组织中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量。
优选的，所述应用过程中，以血清中MICB蛋白的表达量为0.15ng/mL作为诊断抑郁障碍和双相障碍的截断值。
优选的，所述应用过程中，所述抑郁障碍和双相障碍通过血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平进行鉴别诊断；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平为高于或等于0.15ng/mL且低于或等于0.31ng/mL时，判定为患有抑郁障碍；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平高于或等于0.07ng/mL且低于0.15ng/mL时，判定为患有双相障碍；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平低于0.07ng/mL时，判定为健康；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平高于0.31ng/mL，属于异常值，再次检测。
优选的，所述脑组织包括前额叶皮层和/或小脑组织。
优选的，所述蛋白的表达量的检测方法包括酶联免疫吸附检测或免疫印迹法检测。
本发明的有益效果：本发明提供了人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用。抑郁障碍患者和双相抑郁障碍患者MICB蛋白在外周血清和脑组织中存在表达差异。MICB蛋白表达能够作为抑郁障碍和双相障碍鉴别诊断的生化标记物。
附图说明
图1为健康对照、抑郁障碍患者和双相障碍患者外周血清MICB表达比较结果；
图2为以血清MICB蛋白表达为0.15ng/mL为截断值时诊断抑郁障碍的ROC曲线；
图3为健康对照、抑郁障碍患者、双相障碍患者和精神分裂症患者前额叶皮层MICB蛋白表达量比较结果；
图4为健康对照、抑郁障碍患者、双相障碍患者和精神分裂症患者小脑组织MICB蛋白表达量比较结果。
具体实施方式
本发明提供了人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B(MICB)蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用。
在本发明中，所述MICB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，具体为：MGLGRVLLFLAVAFPFAPPAAAAEPHSLRYNLMVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAEDVLGAETWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYNGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGAGGGGSDSTENVIKPFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGVGEGRPYEGFQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPHFTYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNYEDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKGKIKMRLKLKDGGHYTSEVKTTYKAKKPVQLPGAYIVDIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHHLFQ。
本发明提供了人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍、双相障碍或精神分裂症的诊断试剂盒中的应用。
在本发明中，所述人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量优选的包括外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量；和/或脑组织中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量。
在本发明中，所述脑组织优选的包括前额叶皮层和/或小脑组织。
在本发明中，所述蛋白的表达量的检测方法包括酶联免疫吸附检测或免疫印迹法检测。
在本发明中，以血清中MICB蛋白的表达量为0.15ng/mL作为诊断抑郁障碍和双相障碍的截断值；当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平为高于或等于0.15ng/mL且低于或等于0.31ng/mL时，判定为患有抑郁障碍；当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平高于或等于0.07ng/mL且低于0.15ng/mL时，判定为患有双相障碍；当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平低于0.07ng/mL时，判定为健康；当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平高于0.31ng/mL，属于异常值，再次检测。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例：抑郁障碍和双相障碍患者外周血清MICB蛋白表达比较
1.1对象和方法
1.1.1研究对象
本研究对象来源于安徽医科大学附属巢湖医院精神科门诊或住院患者。抑郁障碍(MDD)入组标准：①符合《精神障碍诊断与统计手册》第5版(Diagnostic and statisticalmanual of mental disorders,fifth edition,DSM-5)抑郁症诊断标准；②18～60岁；③17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)总分≥21分；④初中以上文化程度；⑤入组前未服用任何精神类药物或停药至少1个月。排除标准：①符合DSM-5中除抑郁障碍以外的其他精神障碍诊断标准；②有脑器质性疾病或其他的严重躯体疾病；③孕妇或哺乳期妇女。
双相障碍(BD)入组标准：①符合DSM-5双相障碍抑郁发作的诊断标准；②年龄18～60岁；③初中及以上文化水平；④汉密尔顿抑郁量表≥8分；杨氏躁狂评定量表(Youngmanic rating scale,YMRS)评分＜5分；⑤入组前未服用任何精神类药物或停药至少1个月。排除标准：①符合DSM-5中除双相障碍以外的其他精神障碍诊断标准；②有脑器质性疾病或其他的严重躯体疾病；③孕妇或哺乳期妇女。
本研究健康对照来源于安徽医科大学附属巢湖医院体检中心。健康对照(CON)入组标准：①年龄18～60岁；②初中及以上文化水平；③既往无精神障碍病史。排除标准：①有脑器质性疾病或其他的严重躯体疾病；②物质依赖或滥用；③有精神疾病阳性家族史。所有受试者均对本研究知情同意，并签订知情同意书，本研究医院医学伦理委员会批准。
1.1.2人口学资料和量表评估
收集入组抑郁障碍患者和双相障碍患者及健康对照人群的年龄、性别、受教育年限、身高、体重等一般人口学资料，使用HAMD、YMRS和汉密尔顿焦虑量表(Hamilton anxietyscale，HAMA)等评估入组对象的临床症状。由两名经过一致性培训的中级职称精神科医师进行量表评定。
1.1.3外周血采集和酶联免疫吸附测定
所有入组者均于上午8：00抽取静脉血5mL，使用血清分离管收集样本，使外周血在室温下凝结30min，然后以1000×g离心15min，将离心后的血清在≤-80℃保存。保存样本期间，避免反复冻融。MICB酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒购自Abcam公司(编号：ab100593)。按照试剂盒说明书进行操作。
1.1.4统计分析
实验数据均采用均数±标准差记录。统计分析使用SPSS23.0软件。两组间计量资料比较采用独立样本t检验，计数资料的比较采用卡方检验。使用ROC曲线验证MICB蛋白表达诊断抑郁障碍和双相障碍的敏感度和特异度。P<0.05表示有统计学意义。
1.2结果
1.2.1人口学资料和量表评估结果
本研究共招募抑郁障碍患者和双相障碍患者及健康对照各25例。三组人群一般人口学资料比较结果见表1。
表1健康对照、抑郁障碍患者和双相障碍患者一般人口学资料和量表评估结果
Figure BDA0002559658760000051
Figure BDA0002559658760000061
由表1可知，三组在年龄、性别、受教育年限和BMI等方面差异无统计学意义(P值均＞0.05)。健康对照组、抑郁障碍组和双相障碍组在HAMD-17评分上差异有统计学意义(P<0.01)。事后检验结果表明，抑郁障碍患者和双相障碍患者在HAMD-17评分上差异同样无统计学意义，而且抑郁障碍患者组和双相障碍患者组评分明显高于对照组(P＜0.01)。健康对照组、抑郁障碍组和双相障碍组在YMRS评分上差异无统计学意义(P>0.05)。健康对照组、抑郁障碍组和双相障碍组在HAMD-17评分上差异有统计学意义(P<0.05)。事后检验结果表明，抑郁障碍患者和双相障碍患者在HAMA评分上差异同样无统计学意义，但抑郁障碍患者组和双相障碍患者组评分明显高于对照组(P＜0.01)。
1.2.2血清MICB蛋白表达量变化
健康对照组、抑郁障碍组和双相障碍组在血清MICB蛋白表达量上差异有统计学意义(P<0.05)。事后检验结果表明，抑郁障碍患者和双相障碍患者在MICB蛋白表达量上差异同样无统计学意义，抑郁障碍患者MICB蛋白表达量高于双相障碍患者，抑郁障碍患者MICB蛋白表达量同样高于健康对照，(P值均＜0.05)。具体结果如图1、表2所示。
表2健康对照、抑郁障碍患者和双相障碍患者血清MICB蛋白表达结果
Figure BDA0002559658760000062
1.2.3血清MICB蛋白表达诊断抑郁障碍和双相障碍的敏感度和特异度
使用ROC曲线验证MICB蛋白表达诊断抑郁障碍和双相障碍的敏感度和特异度。结果如图2所示，图2中曲线是当MICB表达为0.15ng/mL时，诊断为抑郁症的曲线。ROC曲线下面积(AUC)为0.670，95％置信区间：0.516～0.824，P<0.05。直线是参考线，表示AUC＝0.5，采用这个值时有一半诊断抑郁，一半诊断双相。采用同样的方法，绘制ROC曲线，鉴别双相障碍和健康对照。当MICB表达为0.07ng/mL时，ROC曲线下面积(AUC)为0.998，95％置信区间：0.993～0.100，P<0.01。
1.3结论
以上结果表明，MICB蛋白在抑郁障碍和双相抑郁障碍外周血清中表达有差异。抑郁障碍患者血清MICB蛋白表达水平为0.18±0.07ng/mL，而双相障碍患者血清MICB蛋白表达水平为0.14±0.07ng/mL。健康对照的水平一般表达较低，约为0.03±0.02ng/mL。当选取0.15ng/mL作为截断值区分双相障碍和抑郁障碍有很好的灵敏度和特异性。选取0.07ng/mL作为截断值能够很好地区分双相障碍和健康人群。
实施例2：抑郁障碍和双相障碍患者脑组织MICB蛋白表达量比较
2.1材料和方法
2.1.1实验对象
自斯坦利医学研究所(Stanley medical research institute)脑库购入前额叶和小脑等部位尸脑组织样本，包括抑郁障碍(MDD)、双相障碍(BD)、精神分裂症(SZ)和健康对照(CON)各15例。
2.1.2实验方法
2.1.2.1样本制备
使用裂解液对脑组织进行裂解，离心并取上清。采用BCA蛋白定量试剂盒(美国Pierce公司)检测蛋白浓度、计算上样量。之后对检测过浓度的蛋白进行变性，保存备用。
2.1.2.2免疫印迹(Western Blot)法检测MICB蛋白表达量水平
取含有30μg蛋白的样本上样，电泳、电转、封闭，分别加一抗MICB(Abcam，1：1000)、β-actin(Santa Cruz Biotechnology，1：1000)，4℃孵育过夜。次日，加HRP标记山羊抗兔(1:5000)二抗，室温孵育2h。暗室曝光、显影、定影，扫描后用Quantity One4.6.2软件处理结果。所有数据均以与对照组值(设为100％)相比所得的百分比表示。每个实验(即每个脑区、每个抗体检测)重复3次。
2.1.3统计分析
实验数据均采用均数±标准差记录。统计分析使用SPSS23.0软件分析。MICB相关数据分析采用单因素方差分析，采用LSD法进行Post hoc两两之间检验。P<0.05表示有统计学意义。
2.2结果
前额叶皮层，抑郁障碍和双相障碍MICB蛋白浓度差异有统计学意义(P＜0.01)，抑郁障碍障碍MICB蛋白表达高于双相障碍患者。小脑组织，抑郁障碍和双相障碍MICB蛋白浓度差异同样有统计学意义(P＜0.05)，抑郁障碍障碍MICB蛋白表达仍然高于双相障碍患者。具体结果如表3、图3和图4所示，其中图3为健康对照、抑郁障碍患者、双相障碍患者和精神分裂症患者前额叶皮层MICB蛋白表达量比较结果；图4为健康对照、抑郁障碍患者、双相障碍患者和精神分裂症患者小脑组织MICB蛋白表达量比较结果。
表3抑郁障碍患者和双相障碍患者尸脑组织MICB蛋白表达与健康对照比较结果
Figure BDA0002559658760000081
2.3结论
以上结果表明，抑郁障碍和双相障碍的患者前额叶皮层和小脑等脑组织中MICB蛋白表达有差异。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 安徽医科大学附属巢湖医院
<120> MICB蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 612
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Gly Leu Gly Arg Val Leu Leu Phe Leu Ala Val Ala Phe Pro Phe
1 5 10 15
Ala Pro Pro Ala Ala Ala Ala Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu
20 25 30
Met Val Leu Ser Gln Asp Gly Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Ala Glu
35 40 45
Gly His Leu Asp Gly Gln Pro Phe Leu Arg Tyr Asp Arg Gln Lys Arg
50 55 60
Arg Ala Lys Pro Gln Gly Gln Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Ala Glu
65 70 75 80
Thr Trp Asp Thr Glu Thr Glu Asp Leu Thr Glu Asn Gly Gln Asp Leu
85 90 95
Arg Arg Thr Leu Thr His Ile Lys Asp Gln Lys Gly Gly Leu His Ser
100 105 110
Leu Gln Glu Ile Arg Val Cys Glu Ile His Glu Asp Ser Ser Thr Arg
115 120 125
Gly Ser Arg His Phe Tyr Tyr Asn Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn
130 135 140
Leu Glu Thr Gln Glu Ser Thr Val Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr
145 150 155 160
Leu Ala Met Asn Val Thr Asn Phe Trp Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr
165 170 175
Lys Thr His Tyr Arg Ala Met Gln Ala Asp Cys Leu Gln Lys Leu Gln
180 185 190
Arg Tyr Leu Lys Ser Gly Val Ala Ile Arg Arg Thr Val Pro Pro Met
195 200 205
Val Asn Val Thr Cys Ser Glu Val Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr
210 215 220
Cys Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg
225 230 235 240
Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val
245 250 255
Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile
260 265 270
Arg Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly
275 280 285
Asn His Gly Thr His Pro Val Pro Ser Gly Lys Ala Leu Val Leu Gln
290 295 300
Ser Gln Arg Thr Asp Phe Pro Tyr Val Ser Ala Ala Met Pro Cys Phe
305 310 315 320
Val Ile Ile Ile Ile Leu Cys Val Pro Cys Cys Lys Lys Lys Thr Ser
325 330 335
Ala Ala Glu Gly Pro Glu Leu Val Ser Leu Gln Val Leu Asp Gln His
340 345 350
Pro Val Gly Thr Gly Asp His Arg Asp Ala Ala Gln Leu Gly Phe Gln
355 360 365
Pro Leu Met Ser Ala Thr Gly Ser Thr Gly Ser Thr Glu Gly Ala Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Asp Ser Thr Glu Asn Val Ile Lys Pro Phe Met Arg
385 390 395 400
Phe Lys Val His Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Glu Ile
405 410 415
Glu Gly Val Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Phe Gln Thr Ala Lys
420 425 430
Leu Lys Val Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp Ile Leu
435 440 445
Ser Pro His Phe Thr Tyr Gly Ser Lys Ala Tyr Val Lys His Pro Ala
450 455 460
Asp Ile Pro Asp Tyr Leu Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe Lys Trp
465 470 475 480
Glu Arg Val Met Asn Tyr Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val Thr Gln
485 490 495
Asp Ser Ser Leu Gln Asp Gly Glu Phe Ile Tyr Lys Val Lys Leu Arg
500 505 510
Gly Thr Asn Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Met
515 520 525
Gly Trp Glu Ala Ser Ser Glu Arg Met Tyr Pro Glu Asp Gly Ala Leu
530 535 540
Lys Gly Lys Ile Lys Met Arg Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly His Tyr
545 550 555 560
Thr Ser Glu Val Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Pro Val Gln Leu
565 570 575
Pro Gly Ala Tyr Ile Val Asp Ile Lys Leu Asp Ile Thr Ser His Asn
580 585 590
Glu Asp Tyr Thr Ile Val Glu Gln Tyr Glu Arg Ala Glu Gly Arg His
595 600 605
His Leu Phe Gln
610

Claims (7)

1.人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍和双相障碍的鉴别试剂盒中的应用。
2.人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量检测试剂在制备抑郁障碍或双相障碍诊断试剂盒中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量包括外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量；和/或脑组织中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达量。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用过程中，以血清中MICB蛋白的表达量为0.15ng/mL作为诊断抑郁障碍和双相障碍的截断值。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用过程中，所述抑郁障碍和双相障碍通过血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平进行鉴定；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平为高于或等于0.15ng/mL且低于或等于0.31ng/mL时，判定为患有抑郁障碍；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平高于或等于0.07ng/mL且低于0.15ng/mL时，判定为患有双相障碍；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平低于0.07ng/mL时，判定为健康；
当外周血清中人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B蛋白的表达水平高于0.31ng/mL，属于异常值，再次检测。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述脑组织包括前额叶皮层和/或小脑组织。
7.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述蛋白的表达量的检测方法包括酶联免疫吸附检测或免疫印迹法检测。
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