CN105713095A - 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用 - Google Patents

一种多功能融合多肽及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105713095A
CN105713095A CN201610144213.0A CN201610144213A CN105713095A CN 105713095 A CN105713095 A CN 105713095A CN 201610144213 A CN201610144213 A CN 201610144213A CN 105713095 A CN105713095 A CN 105713095A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gly
arg
ala
polypeptide
asp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610144213.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105713095B (zh
Inventor
康梦实
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Anji Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Nanjing Anji Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Anji Biotechnology Co Ltd filed Critical Nanjing Anji Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201610144213.0A priority Critical patent/CN105713095B/zh
Publication of CN105713095A publication Critical patent/CN105713095A/zh
Priority to EP17765747.5A priority patent/EP3431506A4/en
Priority to JP2018549199A priority patent/JP6858197B2/ja
Priority to US16/083,893 priority patent/US20190031717A1/en
Priority to AU2017234460A priority patent/AU2017234460B2/en
Priority to PCT/CN2017/075861 priority patent/WO2017157205A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105713095B publication Critical patent/CN105713095B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/8146—Metalloprotease (E.C. 3.4.24) inhibitors, e.g. tissue inhibitor of metallo proteinase, TIMP
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/0817—Tripeptides with the first amino acid being basic the first amino acid being Arg
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种多功能融合多肽及其制备方法和应用，属于生物制药领域。本发明的融合多肽含有结构域Pro(DPyr)(DCys)BipArgGlyGlu，IleValArgArgAlaAspArgAlaAlaValPro、ArgGlyAsp和GlyGlyGlyGly，可以治疗人肺纤维化、肺部组织病变、肺癌和其它肿瘤，在肺纤维化细胞模型中，本发明的多肽可以显著降低模型组细胞中羟脯氨酸含量，抑制肺纤维化的进程；MTT实验表明本发明的多肽可以抑制多种人源肿瘤细胞的增殖；本发明的多肽是通过人工合成的方法制备，制备方法简单，具有良好的应用前景。

Description

一种多功能融合多肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物制药领域，更具体地说，涉及一种新的多功能融合多肽及其制备方法和应用。
背景技术
肺纤维化尤其是特发性肺纤维化(idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF)长期以来被认为是一种进行性发展、基本上不可逆的病理改变，IPF患者诊断后5年病死率达到65％，严重威胁公众健康。由于目前的治疗措施疗效甚微，IPF甚至还没有形成一个公认的治疗方案。肺纤维化最常见的症状是：呼吸困难。轻度肺纤维化时，呼吸困难常在剧烈活动时出现，因此常常被忽视或误诊为其他疾病。当肺纤维化进展时，在静息时也发生呼吸困难，严重的肺纤维化患者可出现进行性呼吸困难。
多种因素可引起肺纤维化，如职业性粉尘、放射性损伤及某些药物(博莱霉素)等，此外还有一类不明病因的肺纤维化(如IPF)。虽然起因不同，但肺纤维化的发展过程基本相似，即由下呼吸道炎症细胞浸润起始，逐步引起肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤，并伴有肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)和Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖的细胞因子等的释放，致细胞外基质蛋白和胶原沉积，最终引起肺部结构的损害。多种原因引起的肺损伤在初期存在明显炎症状态，而肺纤维化发生发展的后期炎症状态不明显，这可能是抗炎疗法治疗肺纤维化失效的重要原因。
近期的关于肺纤维化机制的研究发现：蛋白多Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro是人血管新生内皮抑素的一段序列，具有抑制血管新生的作用，三肽Arg-Gly-Asp被发现可以特异性的结合在新生血管表面表达的整合素蛋白，以上两个氨基酸序列的融合多肽(专利公开号：CN1699408A)已被用于抗肿瘤和抗类风湿的治疗。蛋白多肽Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu(专利公开号：CN102746380A)被发现可以抑制细胞外基质金属蛋白酶的活性。目前这两种短肽已被申请用于肿瘤、类风湿疾病的治疗，但是这两种多肽只能针对单一靶点发挥作用，不能够同时针对多个靶点发挥作用，肿瘤细胞对单靶点的药物更容易产生抗药性。
发明内容
1.要解决的问题
针对现有的多肽药物存在靶点单一、易产生抗药性、缺乏治疗肺纤维化的特效药物等问题，本发明提供了一种多功能融合多肽及其制备方法和应用，可以治疗人肺纤维化、肺部组织病变、肺癌和其它肿瘤。本发明的多肽包含多个结构域，同时靶向多个靶点，在肺纤维化细胞模型中，本发明的多肽可以显著降低模型组细胞中羟脯氨酸含量，抑制肺纤维化的进程。
2.技术方案
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种多功能融合多肽，多肽中含有结构域Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu，Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro、Arg-Gly-Asp和Gly-Gly-Gly-Gly。
优选地，多肽的氨基酸序列为：
多肽I：Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp；
多肽II：Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp；
多肽III：Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro；
多肽IV：Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu；
多肽V：Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu；
多肽VI：Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro；
其中，Pyr为3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸，Bip为L-4,4'-联苯丙氨酸。
上述的一种多功能融合多肽在制备抗人肺纤维化、抗肺部组织病变、抗肺癌和抗肿瘤药物中的应用。
优选地，所述的肺纤维化包括特发性肺纤维化和由职业性粉尘、放射性损伤及药物因素引起的肺纤维化。
优选地，所述的肺部组织病变包括细菌性肺炎、病毒性肺炎、支原体肺炎、衣原体肺炎、原虫性肺炎和真菌性肺炎。
优选地，所述的肺癌包括鳞状上皮细胞癌、腺癌、腺鳞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌和大细胞癌。
优选地，所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肝脏、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱或睾丸的原发或继发癌、黑色素瘤、血管瘤以及肉瘤。
上述的一种多功能融合多肽的制备方法，包括固相法合成和液相法合成。
优选地，所述固相法合成包括以下步骤：以固相载体Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin为起始原料，然后用保护氨基酸依次接二肽至二十九肽，接肽工作完成后进行洗涤、切肽、后处理即得上述的融合多肽粗品，将融合多肽粗品溶解，用制备型高效液相经过纯化、浓缩冻干得到上述的融合多肽。
优选地，所述液相法合成包括以下步骤：依次将多肽序列中的氨基酸通过酰胺键连接，氨基酸的非活性基团用Fmoc修饰。
本发明将3种靶向不同靶点的短肽通过优化的氨基酸连接序列Gly-Gly-Gly-Gly连接成一个整体，短肽之间的氨基酸连接序列具有柔性，多肽序列Arg-Gly-Asp结合细胞表面的整合素蛋白ανβ3，抑制细胞迁移，多肽序列Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro抑制微血管的新生，多肽序列Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu抑制细胞外基质金属蛋白酶的活性，降低细胞降解细胞外基质的能力。经过筛选不同顺序的短肽组合和不同的氨基酸连接序列，本发明的融合多肽可以保证每段氨基酸结构域与靶点的结合相互不受影响。本发明的融合多肽同时针对多个靶点，与单个短肽相比，本发明的融合多肽可以激活肿瘤细胞凋亡信号通路，提高肿瘤细胞对药物的敏感性，抗肿瘤效果显著优于单个短肽，且本发明将三种短肽融合后意外地发现该融合多肽产生了一个全新的功能，即可以显著降低细胞中羟脯氨酸含量，对治疗肺纤维化具有明显的作用。虽然肺纤维化的病变进程中也伴随着异常的血管新生和细胞外基质的积累，但是现有的能抑制血管新生和细胞外基质积累的药物或多肽对治疗肺纤维化没有明显的作用，而本发明的融合多肽可以显著抑制肺纤维化的进程，同时还可以抑制多种肺部感染。
3.有益效果
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
(1)本发明的融合多肽可以用于治疗肺纤维化，组成成分为氨基酸，易于合成、无明显的毒副作用；在肺纤维化细胞模型中，本发明的融合多肽可以显著降低细胞中羟脯氨酸含量，改善肺纤维化状况；
(2)本发明的融合多肽对肺部感染有显著的抑制作用，最高抑制率达到65％以上，优于青霉素组的效果；
(3)本发明的融合多肽对肺癌细胞的生长有抑制作用，最高抑制率达到93％以上，与多西他赛相比，具有更好的效果；
(4)与现有的批准治疗肿瘤的药物多西他赛相比，本发明的多肽对多种肿瘤的生长抑制效果更好，并且无明显的毒副作用；本发明的多肽制备方法简单，具有良好的应用前景；
(5)与单一靶点的短肽相比，本发明的融合多肽增加了抗肺纤维化和抗肺部感染的活性。
附图说明
图1是本发明的多肽I和多肽II降低肺纤维化细胞模型中羟脯氨酸含量的图；
图2是本发明的多肽III和多肽IV降低肺纤维化细胞模型中羟脯氨酸含量的图；
图3是本发明的多肽V和多肽VI降低肺纤维化细胞模型中羟脯氨酸含量的图；
图4是本发明的多肽I、II、III、IV、V、VI对肺部感染的抑制效果；
图5是本发明的多肽I、II、III、IV、V、VI对肺癌细胞生长的抑制效果；
图6是本发明的多肽I、II、III、IV、V、VI对不同类型的肿瘤生长的抑制效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
实施例1：
本发明的多功能多肽的制备及检验
本实施例中，多肽Ⅰ-Ⅵ均采用固相合成法合成，采用制备型HPLC进行分离纯化，分析型高效液相测定多肽的纯度。
多肽Ⅰ-Ⅵ固相合成法是以固相载体Fmoc-wang-resin(吉尔生化有限公司)为起始原料，然后用保护氨基酸依次接二肽至二十九肽，接肽工作完成后充分洗涤、切肽、后处理即得多肽的粗品；将粗品溶解，用制备型高效液相经过两次纯化，浓缩冻干得到纯品，最后经过第三次纯化得到多肽精制品。该方法不仅能保证合成的效率，还可提高产物纯度。
1.接肽(包括接二肽至二十九/十七/十三肽)的步骤如下：
称取1.5g固相载体Fmoc-wang-resin，倒入玻璃砂芯反应柱中，加入5mL无水DMF(二甲基甲酰胺)使树脂充分膨胀2h，减压抽去溶剂DMF。
a.脱帽：加入15mL脱帽液(含20％吡啶，80％DMF，以体积分数计)，反应一段时间后将脱帽液抽干，中间用15mL脱帽液洗涤一次，脱去Fmoc保护基。
b.洗涤：将脱帽液抽干，用15mLDMF洗涤树脂三次，充分洗净副产物。
c.缩合：按照设计的多肽氨基酸序列，将用于接肽的Fmoc修饰的单体氨基酸溶于5mLDMF，再加入DIEA(N,N-二异丙基乙胺)0.5mL，混合加入反应容器中，吹N2反应2h，将反应液过滤除去加入5mL甲醇封闭反应1h后，用15mL的DCM(二氯甲烷)洗涤树脂3次。
d.洗涤：将反应液抽干，用15mL的DMF充分洗涤树脂，洗净副产物。
e.切肽：将抽干的树脂装入圆底烧瓶中，加入裂解液充分裂解合成好的二十九肽中间体，用砂芯漏斗将树脂与多肽分离，所述的裂解液的体积组成为：三氟乙酸：苯酚：水：苯甲硫醚：EDT＝90：3：3：2：2。
2.后处理步骤如下：先加无水乙醚到切割液中将多肽析出，然后离心，把清液倒掉，然后再用无水乙醚洗涤多肽，抽干得多肽粗品。
3.纯化的步骤如下：
a.溶解：称取粗品配制成5-20g/L的溶液，用0.45μm的混合滤膜过滤。
制备：通过半制备型高效液相色谱进行一次纯化、二次纯化和三次纯化得到多肽精制合格品，流动相：A相乙腈，B相0.1％TFA水溶液。
①一次纯化：用30％-40％的乙腈水溶液，流速为50mL/min，冲洗10min平衡制备柱。溶解过滤后的粗品用输液泵1mL/min上样。
表1一次纯化洗脱梯度
收集紫外波长220nm处吸收值大于200mv的溶液，检测纯度大于95％的合并作为峰顶，待做二次分离纯化。
②二次纯化：用30％-40％的乙腈水溶液，流速为50mL/min，冲洗10min平衡制备柱。将一次纯化收到的峰顶旋转蒸发去除有机溶剂后，用输液泵1mL/min上样。
表2二次纯化洗脱梯度
收取在紫外波长220nm处吸收大于200mv的溶液，通过检测纯度大于98％的作为合格。
b.浓缩、过滤、冻干：将合格溶液用旋转蒸发仪37℃减压浓缩，除去残留溶剂和注射用水。最后用0.22μm滤膜过滤，滤液装入冻干盘中，用冷冻干燥机进行冷冻干燥得纯品。
③三次纯化：用30％-40％的乙腈水溶液，流速为50mL/min，冲洗10min平衡制备柱。二次纯化所得纯度大于98％的合格样品进行三次纯化制备多肽精制品。
表3三次纯化洗脱梯度
收取在紫外波长220nm处吸收大于220mv的溶液，通过检测合并纯度大于99.5％的样品，即为精制合格品。
4.纯度检测
收集冻干后的纯化产物，通过分析型RP-HPLC进行多肽纯度检测。分析条件为：流动相：CAN(+0.1％TFA)、H2O(+0.1％TFA)；乙腈(CAN)线性梯度：15％-100％；流速：1.5mL/min；运行时间：30min；上样量：20μL；检测波长：220nm。
本实验成功采用固相合成法合成多肽，此方法重复性高，可操作性强，污染少，并使用反相高效液相法纯化多肽，使用梯度洗脱相对于等度洗脱来说，分离效果更好，分离过程中，保留时间合适，生产效率高，纯度高。
实施例2
本实施例中，多肽Ⅰ-Ⅵ均采用液相合成法合成，采用制备型HPLC进行分离纯化，分析型高效液相测定多肽的纯度。以下是多肽I的合成步骤，多肽II-VI与多肽I的合成步骤相同。
多肽I合成步骤如下：
1.根据多肽I的序列，在10mL二氯甲烷中将1mg第一个氨基酸Pro和1mg第二个氨基酸D-Pyr通过酰胺键连接，参加反应的氨基酸的非活性基团用Fmoc修饰。
2.在上述反应体系中加入10mL的氨水使Fmoc基团去掉。
3.重复第一步的反应，按照合成的多肽的序列加入第三个氨基酸D-Cys，氨基酸的非活性基团用Fmoc修饰。
4.重复步骤2和步骤3直到全部的多肽序列Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp被合成。
5.通过制备型HPLC进行多肽产物的分离。流动相：乙腈线性梯度：15％-100％；流速：1.5mL/min；运行时间：60min；上样量：100mL；检测波长：220nm。
实施例3
体外肺纤维化模型的建立
用含10％(体积分数)胎牛血清的DMEM培养基培养人非小细胞肺癌细胞A549，在37℃体积分数为5％的二氧化碳培养箱内培养，隔天换液一次，视细胞密度传代。取对数生长期的A549细胞，0.25％的胰蛋白酶消化后制成细胞悬液，调整细胞浓度至1×109个/L，并按照4×105个/cm2密度接种于90cm2的细胞培养皿中，随机分为两组：(1)对照组：用含有10％(体积分数)胎牛血清的DMEM培养；(2)模型组：含10％(体积分数)胎牛血清、转化生长因子(TGF-β1，终浓度5μg/L)的DMEM培养。置于37℃、体积分数为5％二氧化碳培养箱内培养，隔天换液一次，视细胞密度如期传代。每天用倒置显微镜观察细胞形态确定模型建成的时间。待A549细胞由原有上皮细胞的鹅卵石形状变为间质细胞的长梭形状时，即为建模成功。
实施例4
多肽治疗肺纤维化的实验步骤
将未用TGF-β1诱导的A549细胞作为对照组；将TGF-β1诱导好的肺纤维化模型组分为多个组，其中一组不给药作为模型组对照，其它的组分别加入不同剂量的多肽；加入多肽48小时后，将对照组、模型组、给药组的细胞收集进行后续的肺纤维化相关分子指标的检测。
细胞中羟脯氨酸含量的测定
人体标本实验显示，肺纤维化晚期间质中堆积大量的胶原，胶原含量的多少反映了肺纤维化的水平。而羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4％，因此羟脯氨酸的含量能反映肺纤维化过程中胶原堆积的情况，进而反应肺纤维化程度。
配置柠檬酸缓冲液：柠檬酸钠120g、冰醋酸12mL、柠檬酸46g、氢氧化钠34g溶解于蒸馏水中，调整pH值至6.0，然后定容至1000mL。
配置0.05mol/L氯胺T溶液：称取氯胺T7.05g，溶解于100mL蒸馏水中，然后加入乙二醇150mL，再加入250mL柠檬酸缓冲液混合均匀。
配置对二甲基氨基苯甲醛：试剂A：取无水乙醇20mL，慢慢加入浓硫酸2.74mL；试剂B：取对二甲基氨基苯甲醛12.0g，慢慢加入无水乙醇40mL，水浴加热使其完全溶解并冷却至室温，然后将A液慢慢加入B，混合均匀。
配置3.5mol/L高氯酸溶液：取27mL高氯酸，以蒸馏水定容到100mL。
具体步骤如下：收集细胞在1mL的水中使用匀浆器裂解；调pH至中性，定容至3mL，加活性碳离心；取上清1mL加溶液1(1mL柠檬酸缓冲液和1mL0.05mol/L氯胺T溶液)静置10分钟，加高氯酸1mL静置5分钟，加对二甲基氨基苯甲醛试剂1mL，60℃水浴15分钟；3500rpm/min离心10分钟，取上清550nm波长测定吸光度值。
试验独立重复3次，并计算抑制率，公式如下：抑制率(％)＝(1-实验组吸光值/模型吸光值)×100％。表4表明了本发明的多肽对肺纤维化模型中羟脯氨酸含量的抑制率。图1表明本发明的多肽I和多肽II可以抑制肺纤维化模型细胞中的羟脯氨酸的含量，抑制肺纤维化的进程；图2表明本发明的多肽III和多肽IV可以抑制肺纤维化模型细胞中的羟脯氨酸的含量，抑制肺纤维化的进程；图3表明本发明的多肽V和多肽VI可以抑制肺纤维化模型细胞中的羟脯氨酸的含量，抑制肺纤维化的进程。
表4本发明的多肽对肺纤维化模型中羟脯氨酸含量的抑制率(％)
实施例5
本发明的多肽对多种肺部感染的抑制作用
利用滴鼻法成功建立了小鼠肺炎模型，选用体质量为16～22g的BALB/C小鼠，分别在第0天、第1天和第二天用乙醚麻醉后，将制备好的肺炎链球菌菌液、腺病毒浓缩液、肺炎支原体、肺炎衣原体、原虫、肺炎真菌缓慢滴入小鼠鼻腔，使其进入气管支气管，在操作过程中要防止菌液流入食道，以免灭活菌液，构建小鼠肺炎模型。模型建立成功后，给予本发明的多肽，表5结果显示与青霉素给药组相比，本发明的多肽对多种肺部感染有更显著的改善作用(图4)，试验得到的结果以平均值±标准差表示。
表5本发明的多肽对多种肺部感染的抑制效果(％)
实施例6
MTT法检测本发明的多肽对多种肺癌肿瘤细胞生长的抑制作用
采用MTT法检测本发明的多肽对人源肺癌肿瘤细胞生长的抑制作用。将肺癌肿瘤细胞在37℃、5％(体积分数)CO2的培养箱中培养至密度90％以上时用胰蛋白酶消化收集，用培养液重悬细胞并在显微镜下计数，将细胞浓度调整为2.0×104个/mL，将细胞悬液接种到96孔板中，每孔100μL，并于37℃，5％(体积分数)CO2培养箱中培养过夜。待细胞完全贴壁后，以加入本发明的多肽作为给药组，以不加任何药物的培养液作为空白对照组，用培养液稀释到各个预定浓度。将各个稀释液分别加入96孔板中，每孔100μL，在37℃，5％(体积分数)CO2培养箱孵育48h。向96孔板中每孔加入20μL5mg/mL的MTT，继续培养4h。吸去培养基，每孔加入100μLDMSO溶解。用酶标仪在检测波长为570nm，参比波长为630nm处测定吸光值，并计算生长抑制率，公式如下：肿瘤生长抑制率(％)＝(1-给药组吸光值/未给药组吸光值)×100％，实验独立重复3次，试验得到的结果以平均值±标准差表示。表6结果表明，本发明的多肽对人源的多种肺癌肿瘤有很好的抑制增殖的作用(图5)。
表6MTT法检测的本发明的多肽对多种肺癌肿瘤生长的抑制效果(％)
实施例7
MTT法检测本发明的多肽对多种不同来源的肿瘤细胞生长的抑制作用
将人源的多种肿瘤细胞在37℃、5％(体积分数)CO2的培养箱中培养至密度90％以上时用胰蛋白酶消化收集，用培养液重悬细胞并在显微镜下计数，将细胞浓度调整为2.0×104个/mL，将细胞悬液接种到96孔板中，每孔100μL，并于37℃，5％(体积分数)CO2培养箱中培养过夜。待细胞完全贴壁后，以加入本发明的多肽作为给药组，以不加任何药物的培养液作为空白对照组，用培养液稀释到各个预定浓度。将各个稀释液分别加入96孔板中，每孔100μL，在37℃，5％(体积分数)CO2培养箱孵育48h。向96孔板中每孔加入20μL5mg/mL的MTT，继续培养4h。吸去培养基，每孔加入100μLDMSO溶解。用酶标仪在检测波长为570nm，参比波长为630nm处测定吸光值，并计算生长抑制率，公式如下：肿瘤生长抑制率(％)＝(1-给药组吸光值/未给药组吸光值)×100％，实验独立重复3次，试验得到的结果以平均值±标准差表示，未给药组的肿瘤生长抑制率为0。表7结果表明本发明的多肽对多种肿瘤的生长有显著的抑制作用(图6)。
表7MTT法检测的本发明的多肽对多种肿瘤生长的抑制效果(％)

Claims (9)

1.一种多功能融合多肽，其特征在于，多肽中含有结构域Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu，Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro、Arg-Gly-Asp和Gly-Gly-Gly-Gly。
2.根据权利要求1所述的一种多功能融合多肽，其特征在于，多肽的氨基酸序列为：
多肽I：Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp；
多肽II：Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp；
多肽III：Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro；
多肽IV：Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu；
多肽V：Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu；
多肽VI：Pro-(D-Pyr)-(D-Cys)-Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro；
其中，Pyr为3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸，Bip为L-4,4'-联苯丙氨酸。
3.权利要求1或2所述的一种多功能融合多肽在制备抗人肺纤维化、抗肺部组织病变、抗肺癌和抗肿瘤药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的一种多功能融合多肽在制备抗人肺纤维化、抗肺部组织病变、抗肺癌和抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肺部组织病变包括细菌性肺炎、病毒性肺炎、支原体肺炎、衣原体肺炎、原虫性肺炎和真菌性肺炎。
5.根据权利要求3所述的一种多功能融合多肽在制备抗人肺纤维化、抗肺部组织病变、抗肺癌和抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肺癌包括鳞状上皮细胞癌、腺癌、腺鳞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌和大细胞癌。
6.根据权利要求3所述的一种多功能融合多肽在制备抗人肺纤维化、抗肺部组织病变、抗肺癌和抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肝脏、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱或睾丸的原发或继发癌、黑色素瘤、血管瘤以及肉瘤。
7.权利要求1或2所述的一种多功能融合多肽的制备方法，其特征在于：包括固相法合成和液相法合成。
8.根据权利要求8所述的一种多功能融合多肽的制备方法，其特征在于：所述固相法合成包括以下步骤：Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin为起始原料，然后用保护氨基酸依次接二肽至二十九肽，接肽工作完成后进行洗涤、切肽、后处理即得权利要求1或2中所述的融合多肽粗品，将融合多肽粗品溶解，用制备型高效液相经过纯化、浓缩冻干得到权利要求1或2中所述的融合多肽。
9.根据权利要求8所述的一种多功能融合多肽的制备方法，其特征在于：所述液相法合成包括以下步骤：依次将多肽序列中的氨基酸通过酰胺键连接，氨基酸的非活性基团用Fmoc修饰。
CN201610144213.0A 2016-03-14 2016-03-14 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用 Active CN105713095B (zh)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610144213.0A CN105713095B (zh) 2016-03-14 2016-03-14 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用
EP17765747.5A EP3431506A4 (en) 2016-03-14 2017-03-07 MULTIFUNCTIONAL FUSION POLYPEPTIDE, PRODUCTION METHOD THEREFOR AND USE THEREOF
JP2018549199A JP6858197B2 (ja) 2016-03-14 2017-03-07 多機能融合ポリペプチドとその製造方法及び使用
US16/083,893 US20190031717A1 (en) 2016-03-14 2017-03-07 Multi-functional fusion polypeptide, preparation method thereof, and application of same
AU2017234460A AU2017234460B2 (en) 2016-03-14 2017-03-07 Multi-functional fusion polypeptide, preparation method thereof, and application of same
PCT/CN2017/075861 WO2017157205A1 (zh) 2016-03-14 2017-03-07 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610144213.0A CN105713095B (zh) 2016-03-14 2016-03-14 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105713095A true CN105713095A (zh) 2016-06-29
CN105713095B CN105713095B (zh) 2021-05-07

Family

ID=56158827

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610144213.0A Active CN105713095B (zh) 2016-03-14 2016-03-14 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20190031717A1 (zh)
EP (1) EP3431506A4 (zh)
JP (1) JP6858197B2 (zh)
CN (1) CN105713095B (zh)
AU (1) AU2017234460B2 (zh)
WO (1) WO2017157205A1 (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017157205A1 (zh) * 2016-03-14 2017-09-21 南京安吉生物科技有限公司 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用
WO2018171411A1 (zh) * 2017-03-20 2018-09-27 江苏融泰生物技术有限公司 一种融合蛋白及其制备方法和其在制备治疗眼科疾病、抗炎、抗肿瘤药物中的应用
CN110372800A (zh) * 2019-08-27 2019-10-25 南京安吉生物科技有限公司 具有多功能活性的融合多肽及其应用
CN110437311A (zh) * 2019-08-27 2019-11-12 南京安吉生物科技有限公司 一种多肽及其应用
CN110483647A (zh) * 2019-08-19 2019-11-22 南京萌萌菌业有限公司 一种抗肿瘤多肽及其应用
CN110511285A (zh) * 2019-08-27 2019-11-29 南京安吉生物科技有限公司 一种重组融合多肽及其应用
CN113621054A (zh) * 2021-08-31 2021-11-09 北京化工大学 一种具有抑制人结肠癌细胞（ht-29细胞）增殖作用的鸡源胶原肽及其制备与应用
CN115028683A (zh) * 2022-06-13 2022-09-09 陕西慧康生物科技有限责任公司 五肽化合物及其在制备治疗肝纤维化疾病药物中的应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112259166A (zh) * 2020-10-22 2021-01-22 赤峰市医院 一种靶向prss3的多肽类抑制剂的设计方法、多肽类抑制剂及其制备方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1699408A (zh) * 2005-06-03 2005-11-23 中国药科大学 高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用
CN1827640A (zh) * 2006-04-05 2006-09-06 中国药科大学 血管生成抑制多肽及其制备方法和应用
CN101143894A (zh) * 2007-06-22 2008-03-19 中国药科大学 高效抑制血管生成多肽及其物理化学修饰方法和应用
CN102145161A (zh) * 2011-04-07 2011-08-10 中国药科大学 整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用
CN102499980A (zh) * 2011-12-27 2012-06-20 中国药科大学 多肽在制备治疗或预防类风湿性关节炎药物中的应用
CN102850443A (zh) * 2011-12-27 2013-01-02 中国药科大学 整合素阻断剂多肽及其应用
CN103145855A (zh) * 2013-03-13 2013-06-12 南京安吉生物科技有限公司 基质金属蛋白酶抑制剂多肽及其应用
CN104840941A (zh) * 2015-05-15 2015-08-19 南京安吉生物科技有限公司 具有整合素亲和性和结合能力及基质金属蛋白酶抑制能力的血管抑制多肽的应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4532733B2 (ja) * 1998-03-17 2010-08-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｖｅｇｆおよびｂｍｐ１と相同なポリペプチド群
US6774211B1 (en) * 1998-05-22 2004-08-10 Abbott Laboratories Peptide antiangiogenic drugs
CN102268069B (zh) * 2011-07-01 2012-11-28 中国药科大学 基质金属蛋白酶-9多肽抑制剂4及其应用
CN102488890A (zh) * 2011-12-27 2012-06-13 中国药科大学 整合素阻断剂多肽ap25在制备治疗肿瘤药物中的应用
CN102746380B (zh) * 2012-07-25 2013-12-18 中国药科大学 血管生成抑制剂多肽在制备治疗肿瘤及类风湿性关节炎药物中的应用
CN104045718B (zh) * 2014-07-08 2016-08-17 南京安吉生物科技有限公司 多功能融合多肽及其制备方法和应用
CN105713095B (zh) * 2016-03-14 2021-05-07 南京安吉生物科技有限公司 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1699408A (zh) * 2005-06-03 2005-11-23 中国药科大学 高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用
CN1827640A (zh) * 2006-04-05 2006-09-06 中国药科大学 血管生成抑制多肽及其制备方法和应用
CN101143894A (zh) * 2007-06-22 2008-03-19 中国药科大学 高效抑制血管生成多肽及其物理化学修饰方法和应用
CN102145161A (zh) * 2011-04-07 2011-08-10 中国药科大学 整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用
CN102499980A (zh) * 2011-12-27 2012-06-20 中国药科大学 多肽在制备治疗或预防类风湿性关节炎药物中的应用
CN102850443A (zh) * 2011-12-27 2013-01-02 中国药科大学 整合素阻断剂多肽及其应用
CN103145855A (zh) * 2013-03-13 2013-06-12 南京安吉生物科技有限公司 基质金属蛋白酶抑制剂多肽及其应用
CN104840941A (zh) * 2015-05-15 2015-08-19 南京安吉生物科技有限公司 具有整合素亲和性和结合能力及基质金属蛋白酶抑制能力的血管抑制多肽的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZHENG QIU等: "Inhibition of Neutrophil Collagenase/MMP-8 and Gelatinase B/MMP-9 and Protection against Endotoxin Shock", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGY RESEARCH》 *
谭德明 等: "《传染科医师处方手册》", 31 January 2007, 湖南科学技术出版社 *

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017157205A1 (zh) * 2016-03-14 2017-09-21 南京安吉生物科技有限公司 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用
WO2018171411A1 (zh) * 2017-03-20 2018-09-27 江苏融泰生物技术有限公司 一种融合蛋白及其制备方法和其在制备治疗眼科疾病、抗炎、抗肿瘤药物中的应用
CN110483647A (zh) * 2019-08-19 2019-11-22 南京萌萌菌业有限公司 一种抗肿瘤多肽及其应用
CN110483647B (zh) * 2019-08-19 2021-02-09 重庆大学附属肿瘤医院 一种抗肿瘤多肽及其应用
WO2021037289A3 (zh) * 2019-08-27 2021-04-22 南京安吉生物科技有限公司 一种重组融合多肽及其应用
GB2600845A (en) * 2019-08-27 2022-05-11 Nanjing Anji Biological Tech Co Ltd Recombinant fusion polypeptide and use thereof
CN110437311A (zh) * 2019-08-27 2019-11-12 南京安吉生物科技有限公司 一种多肽及其应用
WO2021037291A3 (zh) * 2019-08-27 2021-04-22 南京安吉生物科技有限公司 具有多功能活性的融合多肽及其应用
CN110372800A (zh) * 2019-08-27 2019-10-25 南京安吉生物科技有限公司 具有多功能活性的融合多肽及其应用
CN110511285B (zh) * 2019-08-27 2023-01-24 南京安吉生物科技有限公司 一种重组融合多肽及其应用
GB2600593A (en) * 2019-08-27 2022-05-04 Nanjing Anji Biological Tech Co Ltd Fused polypeptide with multifunctional activities and use thereof
CN110511285A (zh) * 2019-08-27 2019-11-29 南京安吉生物科技有限公司 一种重组融合多肽及其应用
CN110437311B (zh) * 2019-08-27 2022-05-20 南京安吉生物科技有限公司 一种多肽及其应用
CN110372800B (zh) * 2019-08-27 2022-06-07 南京安吉生物科技有限公司 具有多功能活性的融合多肽及其应用
CN113621054A (zh) * 2021-08-31 2021-11-09 北京化工大学 一种具有抑制人结肠癌细胞（ht-29细胞）增殖作用的鸡源胶原肽及其制备与应用
CN113621054B (zh) * 2021-08-31 2023-10-20 北京化工大学 一种具有抑制人结肠癌细胞（ht-29细胞）增殖作用的鸡源胶原肽及其制备与应用
CN115028683A (zh) * 2022-06-13 2022-09-09 陕西慧康生物科技有限责任公司 五肽化合物及其在制备治疗肝纤维化疾病药物中的应用
CN115028683B (zh) * 2022-06-13 2024-05-14 陕西慧康生物科技有限责任公司 五肽化合物及其在制备治疗肝纤维化疾病药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
JP2019511501A (ja) 2019-04-25
EP3431506A1 (en) 2019-01-23
EP3431506A4 (en) 2020-01-22
AU2017234460B2 (en) 2021-01-21
AU2017234460A1 (en) 2018-10-04
JP6858197B2 (ja) 2021-04-14
CN105713095B (zh) 2021-05-07
US20190031717A1 (en) 2019-01-31
WO2017157205A1 (zh) 2017-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105713095A (zh) 一种多功能融合多肽及其制备方法和应用
KR102106485B1 (ko) 폴리에틸렌글리콜이 수식된 인테그린 차단제 hm-3 및 그 응용
CN102250203B (zh) β-咔啉类氨基酸苄酯及其制备和应用
CA2790014C (en) Fully human anti-vegf monoclonal antibody, preparation method and use thereof
CN103304637B (zh) 细胞穿膜肽hPP3及其用途
CN112386678B (zh) 多肽或其衍生物的应用
CN107118263A (zh) 重组灵芝免疫调节蛋白突变体及其应用
WO2016169239A1 (zh) 与整合素受体αvβ3相关的5肽
AU2012361902A1 (en) Integrin blocker polypeptide and use thereof
CN107417772B (zh) 一种可拮抗hnRNPU蛋白RNA结合活性的多肽HIP-20及其应用
CN107400159A (zh) 多肽及其应用
Shen et al. Benzyl stapled modification and anticancer activity of antimicrobial peptide A4K14-Citropin 1.1
CN106459172B (zh) 一种TRAIL双靶点突变蛋白MuR5S4TR、其制备方法及其应用
Liu et al. Design, synthesis, and biological evaluation of stapled ascaphin-8 peptides
CN110526981A (zh) 一种抗CD3和EpCAM双特异性抗体及其在治疗肺癌中的应用
CN108864258A (zh) 具有抑制肿瘤功能的peg化多肽及其制备方法与应用
CN107082799B (zh) 一种抗肿瘤多肽husp-48及其应用
JP2024512074A (ja) 免疫調節剤
CN108295244A (zh) 用于治疗乳腺肿瘤的多肽
CN106282194A (zh) 人乳腺癌细胞株特异性核酸适配体及其在制备检测、诊断和治疗人乳腺癌制剂中的应用
Kong et al. Design, synthesis and antitumor activity of Ascaphin-8 derived stapled peptides based on halogen–sulfhydryl click chemical reactions
US20210395310A1 (en) Cyclic Peptide
CN108409835B (zh) 一种拮抗乙肝病毒x蛋白结合蛋白的多肽、包含该多肽的药物及其应用
CN104974258B (zh) 重组抗hgf/dll4双特异性抗体、其制备方法和应用
CN109021077A (zh) 一种与耐atra急性髓系白血病细胞特异性结合的多肽及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Xu Hanmei

Inventor before: Kang Mengshi

COR Change of bibliographic data
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant