CN102488890A

CN102488890A - 整合素阻断剂多肽ap25在制备治疗肿瘤药物中的应用

Info

Publication number: CN102488890A
Application number: CN2011104430378A
Authority: CN
Inventors: 徐寒梅; 杨永晶; 胡加亮
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2011-12-27
Filing date: 2011-12-27
Publication date: 2012-06-13
Also published as: WO2013097707A1

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一种整合素阻断剂，此阻断剂是一种多肽，该整合素阻断剂多肽可用于实体肿瘤的治疗。该整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中所述的整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro(序列中含有两对二硫键，配对方式为1-4、2-3)，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑、甲状腺、胰腺、肺脏、肝脏、食管、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发或继发的癌以及肉瘤。本发明其极大拓展了该整合素阻断剂的治疗谱，为将来药物开发提供了新的思路和前景，具有显著的社会价值和市场价值。

Description

整合素阻断剂多肽AP25在制备治疗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一种整合素阻断剂多肽AP25，此阻断剂是一种多肽，该整合素阻断剂多肽可用于实体肿瘤的治疗。

背景技术

恶性肿瘤是人类健康的首要杀手。传统肿瘤治疗虽然具有一定疗效，但由于化学药物非特异的细胞毒性，对患者具有较大的毒副作用，同时还容易产生耐药性，给肿瘤患者带来巨大痛苦。从1972年Folkman提出了肿瘤血管增生学说以来，通过抑制肿瘤血管增生来治疗肿瘤的报道大量涌现，并取得了巨大成功。肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的形态学基础。绝大多数恶性实体肿瘤如卵巢癌、肝癌、宫颈癌和乳腺癌等都是血管依赖性肿瘤。新生血管一方面为肿瘤生长提供营养和氧气，另一方面还是肿瘤转移的重要途径。因此，抑制肿瘤新生血管可以有效抑制肿瘤的发生、发展及转移。

肿瘤新生血管受许多细胞因子调控，其中与肿瘤血管生成相关的重要肿瘤血管内皮细胞分子之一是整合素家族的部分成员。整合素是细胞表面一种重要的粘附分子，是多种细胞外基质成分的受体，广泛存在于细胞表面，是一个相当大的受体家族。整合素主要介导细胞与细胞及细胞与细胞外基质之间的相互粘附，对细胞的增殖、分化、迁移及凋亡起重要的调控作用，并在肿瘤诱导新生血管形成和肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用。整合素都是由一条α链和一条β链组成，两条链在与配体的结合中都起作用，不同的α链和β链的组合决定了配体的特异性。到目前为止，已发现15种α链和9种β链。在肿瘤细胞中，整合素的组分发生了复杂的变化，大体上讲，参与组织结构的整合素数量下降，而与细胞迁移有关的整合素数量上升。整合素α5β1、ανβ5、ανβ3等都与血管新生和细胞迁移有关，其中ανβ3的作用尤为重要。ανβ3由αν亚基(CD51，150kD)和β3亚基(CD61，105kD)形成的跨膜异二聚体糖蛋白，又名VN受体。ανβ3能识别配体分子中的精-甘-天冬序列(arg-gly-asp，RGD)。这类配体包括FN、VN、TSP-1和vWF等。ανβ3可以表达于多种细胞类型，并与多细胞活动过程中的多种配体结合，参与肿瘤的血管生成，侵袭转移、炎症、伤口愈合和凝血等生理和病理过程。如ανβ3能够与金属蛋白酶结合，降解细胞外基质，从而更有利于侵入。此外，两个受ανβ3影响的过程是细胞凋亡和血管新生，在参与血管新生的毛细血管内皮细胞上，ανβ3的表达量也升高。在肿瘤血管内皮细胞中，血管生长因子类与整合素的表达有着密切的关系，如VEGF、FGF都能够上调ανβ3的表达。整合素ανβ3在多种恶性肿瘤细胞表面和肿瘤组织新生血管内皮细胞膜高表达，而在成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官系统不表达，为设计含有RGD序列的ανβ3配体小分子拮抗肽和ανβ3的单克隆抗体来治疗肿瘤提供理论基础。

目前，国际上开发出的针对整合素的抑制剂主要是特异性抗体，如Vitaxine；或小分子配体抑制剂，如西仑吉肽等。还有一些整合素阻断剂已进入II期临床，而我国尚未有相似或同类产品进入市场。因此，非常有必要开发我国自主知识产权的此类药物。ZL200510040378.5高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用，介绍几种整合素抑制剂，其一为整合素阻断剂多肽序列为：Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro(序列中含有两对二硫键，配对方式为1-4、2-3)(命名为AP25，见Seq.NO.1)，该序列包含了整合素配体序列(Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly)(见Seq.NO.2)和新生血管抑制序列(Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro)(见Seq.NO.3)，其中整合素配体序列中含有RGD-4C序列(Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly)(见Seq.NO.4)，使该多肽序列可以有效地结合于肿瘤特异性表达的整合素亚型，并且该序列中含有新生血管抑制序列，能够抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。先前专利中只是对黑色素瘤做了研究，本发明针对该序列做了进一步研究，发现其对多种肿瘤有治疗作用，增加了其适用症，拓展了其社会价值和经济价值。

发明内容

发明目的

本发明针对序列Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro(序列中含有两对二硫键，配对方式为1-4、2-3)做了进一步研究，发现其对多种实体肿瘤有治疗作用，增加了其适应症。

技术方案

整合素阻断剂多肽AP25在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中所述的整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro(序列中含有两对二硫键，配对方式为1-4、2-3)(命名为AP25，见Seq.NO.1)，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑、甲状腺、胰腺、肺脏、肝脏、食管、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发或继发的癌以及肉瘤。

有益效果

研究发现，序列Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro是内皮抑素的第60-70个氨基酸，在体外具有很好的抑制肿瘤新生血管生成的活性，其活性甚至高于内皮抑素本身。RGD-4C序列是整合素的一个重要配体。因此，含有RGD-4C序列的多肽Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly能够特异性的识别整合素。本发明的整合素阻断剂多肽是在具有抑制血管生成作用的序列Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro的N端连接上与整合素家族具有亲和性和结合能力的RGD-4C序列Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly，构建了一种与整合素有高亲和性和结合能力的多肽。该整合素阻断剂多肽序列为：Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro，其含有25个氨基酸，分子中RGD-4C序列具有整合素亲和性和结合能力。研究表明此整合素阻断剂多肽主要作用靶点为整合素αν、α5亚基，并且该序列中含有新生血管抑制序列，从而抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。

虽然在先前的专利ZL200510040378.5公开了该序列对黑色瘤有治疗效果，但并未公开对其他肿瘤有治疗效果。国内外大量的研究表明即使是同一组织类型、分化程度相同的肿瘤，对同一药物的敏感性也有可能不同，因此，药物开发中对某一分子需要进行抗肿瘤谱的筛选。因为有些药物只对特定肿瘤细胞有效，对其他肿瘤是无效或低效，因此需要实验去摸索和验证其治疗效果。发明人经过大量实验获知该整合素阻断剂靶点明确，在体外能够明显抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的迁移、增殖及管状结构的形成，对人的某些肿瘤细胞的增殖也有抑制作用。体内实验具有明显的抗肿瘤效果，且副作用小、用量少、成本低。说明本发明设计的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物，极大拓展了该整合素阻断剂的治疗谱，为将来药物开发提供了新的思路和前景，具有显著的社会价值和市场价值。

以下所述的整合素阻断剂多肽指的是整合素阻断剂多肽AP25。

附图说明

附图1人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞粘附实验确定多肽的作用靶点；

附图2整合素阻断剂多肽抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖作用；

附图3整合素阻断剂多肽抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖作用；

附图4整合素阻断剂多肽抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖作用；

附图5整合素阻断剂多肽抑制人结肠癌HCT 116细胞的增殖作用；

附图6整合素阻断剂多肽抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖作用；

附图7整合素阻断剂多肽抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖作用；

附图8整合素阻断剂多肽抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的迁移作用；

附图9整合素阻断剂多肽抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的管状结构形成作用；

附图10整合素阻断剂多肽对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图11整合素阻断剂多肽对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图12整合素阻断剂多肽对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图13整合素阻断剂多肽对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图14整合素阻断剂多肽对人肺癌H460裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图15整合素阻断剂多肽对人肝癌Bel-7402裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图16整合素阻断剂多肽对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图17整合素阻断剂多肽对人胃癌MGC-803裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图18整合素阻断剂多肽对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图19整合素阻断剂多肽对人肾癌A498裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图20整合素阻断剂多肽对人胆囊癌GBC-SD裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图21整合素阻断剂多肽对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图22整合素阻断剂多肽对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图23整合素阻断剂多肽对人子宫内膜癌HHUA裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图24整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图25整合素阻断剂多肽对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图26整合素阻断剂多肽对人膀胱癌HT1376裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图27整合素阻断剂多肽对人睾丸癌5637裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图28整合素阻断剂多肽对肉瘤HT-1080裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

具体实施方式

实施例1

整合素阻断剂多肽靶点分析

采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)粘附实验确定整合素阻断剂多肽的作用靶点。即先用一定浓度的多肽铺96孔板，HUVEC细胞分别用不同的整合素亚基抗体孵育后进行粘附实验。与未用抗体孵育的细胞相比，如果用某种抗体孵育过的细胞对多肽的粘附明显减少，则说明此多肽通过该整合素亚基与HUVEC作用。具体操作如下：将多肽用PBS配制为150μg/ml的溶液，按每孔100μl铺96孔板，4℃放置16小时后1％BSA于22℃水浴中封闭4～5小时。HUVEC细胞(只用第2～5代)在37℃、5％CO₂的培养箱中培养至90％以上的汇合度时用无血清内皮细胞培养液孵育4小时。胰蛋白酶消化收集细胞，用无血清内皮细胞培养液重悬并计数，将细胞浓度调整为5×10⁵个/ml。将细胞分别用αν、β3、αν+β3、α5、β1、α5+β1整合素亚基抗体于4℃孵育2小时，并每隔一段时间震荡细胞悬液，使细胞与抗体充分接触。弃去96孔板中的BSA，铺入细胞，每孔100μl细胞悬液(每组设5个复孔)，于37℃粘附90分钟。用PBS轻轻洗去未粘附的细胞后用甲醇-考马斯亮蓝混合液染色并固定40分钟。用脱色液润洗96孔板，除去考马斯亮蓝背景。向96孔板中加入1％SDS，每孔100μl，混和均匀于620nm处测吸光值。

结果：见图1，用αν、αν+β3、α5、α5+β1整合素亚基抗体孵育组的细胞粘附数量与未用整合素亚基抗体孵育组相比具有极显著性差异；用β3整合素亚基抗体孵育组的细胞粘附数量与未用整合素亚基抗体孵育组相比具有显著性差异；用β1整合素亚基抗体孵育组的细胞粘附数量与未用整合素亚基抗体孵育组相比具无显著性差异。由此可以判断，此整合素抑制剂多肽主要通过αν、α5两种整合素亚基与HUVEC细胞相互作用。

实施例2

整合素阻断剂多肽对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖抑制试验

采用MTT法检测整合素阻断剂多肽抑制内皮细胞生长的活性，内皮细胞只用第2-6代。HUVEC细胞在37℃、5％CO₂的培养箱中培养至90％以上的汇合度时用胰蛋白酶消化收集，用培养液重悬细胞并在显微镜下计数，将细胞浓度调整为3×10⁴个/ml，将细胞悬液接种到96孔板中，100μl/孔，并于37℃，5％CO₂培养箱中培养过夜。整合素阻断剂多肽用培养液稀释到各个预定浓度。恩度用培养液稀释到终浓度。待细胞完全贴壁后，将各个稀释液分别加入96孔板中(100μl/孔)。以加入整合素阻断剂多肽稀释液的作为给药组，以加入恩度、紫杉醇作为阳性对照组，以不加任何药物的培养液作为阴性对照组。在37℃，5％CO₂培养箱孵育72h。向96孔板中加入5mg/ml的MTT，每孔20μl，继续培养4h。吸掉培养基，每孔加入100μlDMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀。用酶标仪在测定波长为570nm，参比波长为630nm处测定吸光值，并计算生长抑制率(proliferation inhibition，PI)，公式如下：

PI(％)＝1-给药组/阴性组

试验得到的结果以mean±SD表示，并进行统计T检验，^*P＜0.05为显著性差异，^**P＜0.01为极显著性差异。

表1.整合素阻断剂多肽对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖抑制作用

结果：见表1和图2，与阴性对照相比，整合素阻断剂多肽能显著抑制HUVEC的增殖，并且呈现明显的剂量依赖关系。

实施例3

整合素阻断剂多肽对人胃癌MGC-803细胞的增殖抑制试验

采用MTT法检测整合素阻断剂多肽抑制人胃癌MGC-803细胞生长的活性。肿瘤细胞在37℃、5％CO₂的培养箱中培养至90％以上的汇合度时用胰蛋白酶消化收集，用培养液重悬细胞并在显微镜下计数，将细胞浓度调整为2×10⁴个/ml，将细胞悬液接种到96孔板中，100μl/孔，并于37℃，5％CO₂培养箱中培养过夜。整合素阻断剂多肽用培养液稀释到各个预定浓度。恩度用培养液稀释到终浓度。待细胞完全贴壁后，将各个稀释液分别加入96孔板中(100μl/孔)。以加入整合素阻断剂多肽稀释液的作为给药组，以加入恩度、紫杉醇作为阳性对照组，以不加任何药物的培养液作为阴性对照组。在37℃，5％CO₂培养箱孵育48h。向96孔板中加入5mg/ml的MTT，每孔20μl，继续培养4h。吸掉培养基，每孔加入150μl DMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀。用酶标仪在测定波长为570nm，参比波长为630nm处测定吸光值，并计算生长抑制率(proliferation inhibition，PI)，公式如下：

PI(％)＝1-给药组/阴性组

表2.整合素阻断剂多肽对人胃癌MGC-803细胞增殖抑制作用

结果：见表2和图3，与阴性对照相比，整合素阻断剂多肽在体外能显著抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖，并且呈现明显的剂量依赖关系。

实施例4

整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制试验

采用MTT法检测整合素阻断剂多肽抑制人宫颈癌HeLa细胞生长的活性。具体实施方案见实施例3。

表3.整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用

结果：见表3和图4，与阴性对照相比，整合素阻断剂多肽在体外能显著抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖，并且呈现明显的剂量依赖关系。

实施例5

整合素阻断剂多肽对人结肠癌HCT 116细胞的增殖抑制试验

采用MTT法检测整合素阻断剂多肽抑制人结肠癌HCT 116细胞生长的活性。具体实施方案见实施例3。

表4.整合素阻断剂多肽对人结肠癌HCT 116细胞增殖抑制作用

结果：见表4和图5，与阴性对照相比，整合素阻断剂多肽在体外能显著抑制人结肠癌HCT 116细胞的增殖，并且呈现明显的剂量依赖关系。

实施例6

整合素阻断剂多肽对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制试验

采用MTT法检测整合素阻断剂多肽抑制人脑胶质瘤U87细胞生长的活性。具体实施方案见实施例3。

表5.整合素阻断剂多肽对人脑胶质瘤U87细胞增殖抑制作用

结果：见表5和图6，与阴性对照相比，整合素阻断剂多肽在体外能显著抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖，并且呈现明显的剂量依赖关系。

实施例7

整合素阻断剂多肽对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制试验

采用MTT法检测整合素阻断剂多肽抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的活性。具体实施方案见实施例3。

表6.整合素阻断剂多肽对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用

结果：见表6和图7，与阴性对照相比，整合素阻断剂多肽在体外能显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖，并且呈现明显的剂量依赖关系。

实施例8

整合素阻断剂多肽对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的迁移抑制试验

将10mg/ml Matrigel(BD公司，USA)用无血清的内皮细胞培养液以1∶3稀释，涂布于Transwell小室(Greiner公司，USA)膜上，室温风干。将培养到对数生长期的HUVEC细胞用胰蛋白酶消化，收集，用无血清内皮细胞培养液重悬，于显微镜下计数，将细胞浓度调整到1×10⁵个/ml。配制各组试验用液，分组如下：空白对照组：为不含药物的无血清内皮细胞培养液；恩度组：用不含药物的无血清内皮细胞培养液将5mg/ml的恩度储液稀释到预定浓度；整合素阻断剂多肽组：用不含药物的无血清内皮细胞培养液将整合素阻断剂多肽稀释到各个预定浓度。将细胞接种到Transwell小室中，每孔100μl，并将各组试验用液加入小室中。24孔板中加入0.6ml含5％胎牛血清和1％内皮细胞生长因子(ECGS)的内皮细胞培养液刺激细胞迁移，于5％CO₂，37℃孵育24小时。弃去孔中培液，用无水乙醇常温固定30分钟，0.1％结晶紫常温染色10分钟，清水漂净，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，显微镜下观察并随机选择四个视野拍照计数。按照公式计算迁移抑制率(migration inhibition，MI)：

MI(％)＝(1-Ntest/Ncontrol)×100％

其中Ntest为测试组的细胞迁移数，Ncontrol为空白对照组的细胞迁移数。试验得到的结果以mean±SD表示，并进行统计T检验，^*P＜0.05为显著性差异，^**P＜0.01为极显著性差异。

表7.整合素阻断剂多肽对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移抑制作用

结果：见表7和图8，在整合素阻断剂多肽的作用下，迁移的内皮细胞数显著减少。与空白对照组相比，整合素阻断剂多肽能抑制5％胎牛血清及1％ECGS诱导的HUVEC的迁移作用。在0.5μg/ml和1μg/ml两个剂量下，整合素阻断剂多肽对细胞迁移的抑制作用与空白对照相比有极显著性差异，当整合素阻断剂多肽的剂量为0.5μg/ml时，对HUVEC细胞迁移的抑制率达到最大。

实施例9

整合素阻断剂多肽抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的管状结构形成抑制试验

将10mg/ml Matrigel(BD公司，USA)用含1％ECGS的无血清内皮细胞培养液以1∶1稀释，30μl每孔涂布于96孔板(Greiner公司，USA)内，37℃培养箱中聚合1h。将对数生长期的HUVEC细胞用0.25％胰蛋白酶消化，收集，用含1％ECGS的无血清内皮细胞培养液重悬，于显微镜下计数，将细胞浓度调整为1.5×10⁵个/ml。配制各组的试验用液，分组如下：空白对照组：不含药物的1％ECGS无血清内皮细胞培养液；恩度组：用含1％ECGS的无血清内皮细胞培养液将5mg/ml的恩度储液稀释到预定浓度；紫杉醇组：用含1％ECGS的无血清内皮细胞培养液将6mg/ml的紫杉醇储液稀释到预定浓度。整合素阻断剂多肽组：用含1％ECGS的无血清内皮细胞培养液将10mg/ml多肽储液稀释到预定浓度。将细胞接种到96孔板中，每孔100μl，并且将各组试验用液加入孔中，每孔100μl，于5％CO₂，37℃孵育。分别在6h、12h、24h、36h、48h于倒置显微镜下观察，拍照并计数。

结果：见图9，HUVEC细胞在6h～24h内分化成不规则管腔状结构，36h管腔状结构明显减少，48h基本消失。整合素阻断剂多肽在6h、12h、24h、36h对HUVEC细胞管状结构形成的抑制作用具有良好的剂量依赖关系。且多肽在0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml三个剂量下抑制HUVEC细胞形成管状结构的效果较好。

实施例10

整合素阻断剂多肽对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

取对数生长期的肿瘤细胞，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg，每天给药1次。肿瘤体积计算公式：

TV＝0.52×a×b²

其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：

T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％

T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV

表8.多肽对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表8和图10，顺铂10mg/kg组对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤的抑瘤率为70.38％；恩度2.5mg/kg组对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤的抑瘤率为41.25％；多肽高、中、低剂量组对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为65.18％，52.36％，39.77％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。而多肽对实验动物体重无显著性影响。

因此，多肽对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人鼻咽癌CNE移植瘤的生长具有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对人鼻咽癌CNE移植瘤的生长具有显著性的抑制作用。与阳性对照顺铂相比，多肽对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例11

整合素阻断剂多肽对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案见实施例10。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg，每天给药1次。

表9.多肽对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表9和图11，紫杉醇10mg/kg组对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤的抑瘤率为73.11％；恩度2.5mg/kg组对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤的抑瘤率为38.47％；多肽高、中、低剂量组对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达78.19％，76.21％，69.73％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组对人脑胶质瘤U87移植瘤的生长均具有极显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例12

整合素阻断剂多肽对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

具体实施方案见实施例10。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；5-氟尿嘧啶组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg，每天给药1次。

表10.多肽对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表10和图12，5-Fu(5-氟尿嘧啶)10mg/kg组对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤的抑瘤率为69.26％；恩度组2.5mg/kg，对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤的抑瘤率为22.37％；多肽高、中、低剂量组对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达70.81％，62.35％，57.98％。但5-Fu毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组对人甲状腺癌SW-579移植瘤的生长的均具有极显著性的抑制作用。与阳性对照组5-Fu相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例13

整合素阻断剂多肽对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表11.多肽对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表11和图13，5-Fu 10mg/kg组对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤的抑瘤率为65.26％；恩度2.5mg/kg组对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤的抑瘤率为33.76％；多肽高、中、低剂量组对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达69.08％，53.82％，45.31％。但5-Fu毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人胰腺癌SW-1990移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对人胰腺癌SW-1990移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组5-Fu相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例14

整合素阻断剂多肽对人肺癌H460裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表12.多肽对人肺癌H460裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表12和图14，紫杉醇10mg/kg组对人肺癌H460裸鼠移植瘤的抑瘤率为75.32％，；恩度2.5mg/kg组对人肺癌H460裸鼠移植瘤的抑瘤率为55.37％；多肽高、中、低剂量组对人肺癌H460裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达70.29％，45.02％，42.58％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡，而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人肺癌H460裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人肺癌H460移植瘤的生长有极显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例15

整合素阻断剂多肽对人肝癌Bel-7402裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表13.多肽对人肝癌Bel-7402裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表13和图15，紫杉醇10mg/kg组对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑瘤率为72.47％；恩度2.5mg/kg组对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑瘤率为38.21％；多肽高、中、低剂量组对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达68.55％，45.31％，33.33％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人肝癌Bel-7402移植瘤的生长有极显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例16

整合素阻断剂多肽对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表14.多肽对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表14和图16，紫杉醇10mg/kg组对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤的抑瘤率为69.76％；恩度2.5mg/kg组对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤的抑瘤率为49.21％；多肽高、中、低剂量组对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤的抑瘤率达67.55％，50.03％，40.21％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人食管癌Ec109移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对人食管癌Ec109移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例17

整合素阻断剂多肽对人胃癌MGC-803裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表15.多肽对人胃癌MGC-803裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表15和图17，紫杉醇10mg/kg组对人胃癌MGC-803裸鼠移植瘤的抑瘤率为72.48％；恩度2.5mg/kg组对人胃癌MGC-803裸鼠移植瘤的抑瘤率为45.22％；多肽高、中、低剂量组对人胃癌MGC-803裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达70.35％，65.26％，47.45％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人胃癌MGC-803裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组和多肽10mg/kg组都对人胃癌MGC-803移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽5mg/kg组对人胃癌MGC-803移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例18

整合素阻断剂多肽对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表16.多肽对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表16和图18，紫杉醇10mg/kg组对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤的抑瘤率为70.87％；恩度2.5mg/kg组对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤的抑瘤率为49.21％；多肽高、中、低剂量组对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达75.36％，50.09％，41.32％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人乳腺癌MDA-MB-231移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对人乳腺癌MDA-MB-231移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例19

整合素阻断剂多肽对人肾癌A498裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表17.多肽对人肾癌A498裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表17和图19，紫杉醇10mg/kg组对人肾癌A498裸鼠移植瘤的抑瘤率为72.19％；恩度2.5mg/kg组对人肾癌A498裸鼠移植瘤的抑瘤率为38.23％；多肽高、中、低剂量组对人肾癌A498裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达69.55％，60.21％，54.58％。但紫杉醇毒性较大，动物在试验过程中体重下降明显。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人肾癌A498裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组对人肾癌A498移植瘤的生长均具有极显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例20

整合素阻断剂多肽对人胆囊癌GBC-SD裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表18.多肽对人胆囊癌GBC-SD裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表18和图20，紫杉醇10mg/kg组对人胆囊癌GBC-SD裸鼠移植瘤的抑瘤率为70.66％；恩度2.5mg/kg组对人胆囊癌GBC-SD裸鼠抑制瘤的抑瘤率为29.12％；多肽高、中、低剂量组对人胆囊癌GBC-SD裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为65.35％，52.33％，48.97％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人胆囊癌GBC-SD小鼠移植瘤的抑瘤率的试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人胆囊癌GBC-SD移植瘤的生长具有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg与5mg/kg组对人胆囊癌GBC-SD移植瘤的生长具有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例21

整合素阻断剂多肽对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表19.多肽对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表19和图21，紫杉醇10mg/kg组对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.23％；恩度2.5mg/kg组对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的抑瘤率为37.78％；多肽高、中、低剂量组对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为62.88％，53.13％，45.33％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人结肠癌HT-29移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对人结肠癌HT-29移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例22

整合素阻断剂多肽对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案见实施例10。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg，每天给药1次。

表20.多肽对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表20和图22，顺铂10mg/kg组对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.24％；恩度2.5mg/kg组对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤的抑瘤率为35.14％；多肽高、中、低剂量组对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为70.13％，59.87％，48.08％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg与10mg/kg组对人卵巢癌SK-OV-3移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽5mg/kg组对人卵巢癌SK-OV-3移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组顺铂相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例23

整合素阻断剂多肽对人子宫内膜癌HHUA裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表21.多肽对人子宫内膜癌HHUA裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作

结果：见表21和图23，紫杉醇10mg/kg组对人子宫内膜癌HHUA裸鼠移植瘤的抑瘤率为67.21％；恩度2.5mg/kg组，对人子宫内膜癌HHUA裸鼠移植瘤的抑瘤率为37.56％；多肽高、中、低剂量组对人子宫内膜癌HHUA裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为69.34％，58.77％，45.25％。但紫杉醇毒性较大，试验过程中动物体重下降明显。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人子宫内膜癌HHUA裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组和10mg/kg组对人子宫内膜癌HHUA移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽5mg/kg组对人子宫内膜癌HHUA移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例24

整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表22.多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表22和图24，紫杉醇10mg/kg组对人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤的抑瘤率为65.38％；恩度2.5mg/kg组对人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤的抑瘤率为39.88％；多肽高、中、低剂量组对人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为68.37％，56.54％，40.01％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人宫颈癌HeLa移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对人宫颈癌HeLa移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例25

整合素阻断剂多肽对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表23.多肽对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表23和图25，顺铂10mg/kg组对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤的抑瘤率为71.38％；恩度2.5mg/kg组对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤的抑瘤率为27.68％；多肽高、中、低剂量组对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为75.31％，55.63％，48.27％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人前列腺癌DU-145移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg与5mg/kg组对人前列腺癌DU-145移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组顺铂相比，多肽对实验动物的体重无显著性影响，未见明显的毒副反应。

实施例26

整合素阻断剂多肽对人膀胱癌HT1376裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表24.多肽对人膀胱癌HT1376裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表24和图26，紫杉醇10mg/kg组对人膀胱癌HT1376裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.55％；恩度2.5mg/kg组对人膀胱癌HT1376裸鼠移植瘤的抑瘤率为31.41％；多肽高、中、低剂量组对人膀胱癌HT1376裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为62.03％，51.80％，39.27％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，且试验过程中有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人膀胱癌HT1376裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人膀胱癌HT1376移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对人膀胱癌HT1376移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例27

整合素阻断剂多肽对人睾丸癌5637裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表25.多肽对人睾丸癌5637裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表25和图27，顺铂10mg/kg组对人睾丸癌5637裸鼠移植瘤的抑瘤率为69.64％，恩度2.5mg/kg组对人睾丸癌5637裸鼠移植瘤的抑瘤率为29.33％；多肽高、中、低剂量组对人睾丸癌5637裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为71.92％，57.36％，39.21％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，而多肽且对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人睾丸癌5637裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对人睾丸癌5637移植瘤的生长有极显著性的抑制作用。多肽10mg/kg组对人睾丸癌5637移植瘤的生长具有显著的抑制作用。与阳性对照组顺铂相比，多肽对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例28

整合素阻断剂多肽对肉瘤HT-1080裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案见实施例10。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；环磷酰胺组15mg/kg，每周给药1次；多肽以20mg/kg，每天给药1次。

表26.多肽对肉瘤HT-1080裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表26和图28，环磷酰胺15mg/kg组对肉瘤HT-1080裸鼠移植瘤的抑瘤率为65.67％，多肽20mg/kg组对肉瘤HT-1080裸鼠移植瘤的抑瘤率为71.33％。与阴性对照组相比，环磷酰胺组与多肽组均具有极显著性差异。但环磷酰胺毒性较大，动物体重下降明显；而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对肉瘤HT-1080裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，多肽20mg/kg组对HT-1080移植瘤的生长具有极显著的抑制作用。与环磷酰胺组相比，对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

Claims

1.整合素阻断剂多肽AP25在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中所述的整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑、甲状腺、胰腺、肺脏、肝脏、食管、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠、直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发、继发的癌以及肉瘤。