CN105695375A - 鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法 - Google Patents

鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105695375A
CN105695375A CN201610261257.1A CN201610261257A CN105695375A CN 105695375 A CN105695375 A CN 105695375A CN 201610261257 A CN201610261257 A CN 201610261257A CN 105695375 A CN105695375 A CN 105695375A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture medium
riemerella anatipestifer
water
novel
consumption
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610261257.1A
Other languages
English (en)
Inventor
刘马峰
张利
王梦怡
程安春
汪铭书
贾仁勇
朱德康
陈舜
杨乔
吴英
孙昆峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Agricultural University
Original Assignee
Sichuan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Agricultural University filed Critical Sichuan Agricultural University
Priority to CN201610261257.1A priority Critical patent/CN105695375A/zh
Publication of CN105695375A publication Critical patent/CN105695375A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法，按1L水计，加入的组分及各组分的用量为：蛋白胨15.0～25.0g，氯化钠5.0～15.0g，磷酸氢二钾4.0～10.0g，磷酸二氢钾1.0～2.5g，葡萄糖4～7g，谷氨酰胺0.1～0.2g，维生素B1 0.2～0.5μg，硝酸铁5～20mg；调节pH范围值为7.0-7.5。本发明所述培养基价格低廉，配制方法简单，鸭疫里默氏杆菌能够在该培养基中较好地生长，可用于鸭疫里默氏杆菌的分离培养，且分离效率相对较高。

Description

鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法。
背景技术
鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerellaanatipestifer)引起的一种接触性传染病，又称为鸭传染性浆膜炎，多见于1-8周龄的雏鸭，呈急性或慢性败血症，常引起雏鸭的大批发病和死亡，给养鸭业带来巨大损失。
鸭疫里默氏杆菌为革兰氏阴性菌，对培养基要求较为苛刻，在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上不生长。目前能用于培养鸭疫里默氏杆菌的培养基主要有血琼脂培养基和胰蛋白胨大豆肉汤(TrypticSoyBroth，TSB)培养基。血琼脂培养基价格较为昂贵，不适于用于大批量分离组织病料，且不能用于液体培养。胰蛋白胨大豆肉汤可用于液体培养，但各成份及含量不清楚，同样存在价格昂贵的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法，该培养基廉价、高效，且能使鸭疫里默氏杆菌杆菌较好地生长。
本发明采取的技术方案如下：
1、鸭疫里默氏杆菌新型培养基，按培养基用水量1L计，加入的组分及各组分的用量为：蛋白胨15.0～25.0g，氯化钠5.0～15.0g，磷酸氢二钾4.0～10.0g，磷酸二氢钾1.0～2.5g，葡萄糖4～7g，谷氨酰胺0.1～0.2g，维生素B10.2～0.5μg，硝酸铁5～20mg；调节pH范围值为7.0-7.5。
优选的，配制培养基时，将培养基组分分为三组，A组为蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾，B组为葡萄糖和谷氨酰胺，C组为硝酸铁，三组分别灭菌，并且A组在灭菌前需要调节pH值；在培养基使用之前将三组混合。
优选的，还包含组分琼脂，琼脂的用量为用水重量的1.5％。
优选的，按用水量1L计，加入的组分及各组分的用量为：蛋白胨15g，氯化钠5g，磷酸氢二钾4g，磷酸二氢钾1g，葡萄糖4g，谷氨酰胺0.1g，维生素B10.2μg，硝酸铁5mg；调节pH范围值为7.2。
2、鸭疫里默氏杆菌新型培养基的制备方法，按培养基用水量1L计，包括如下步骤：
(1)将15.0～25.0g蛋白胨，5.0～15.0g氯化钠，4.0～10.0g磷酸氢二钾，1.0～2.5g磷酸二氢钾溶于1L水中，调节好pH值后高压灭菌；
(2)将400.0～700.0g葡萄糖和10.0～20.0g谷氨酰胺溶于1L水中，滤器过滤除菌；
(3)将0.20～0.50mg维生素B1溶于1L水中，滤器过滤除菌；
(4)将5.0～20.0g硝酸铁溶于1L水中，高压灭菌；
(5)培养基使用前，取步骤(2)溶液10mL、步骤(3)和步骤(4)溶液各1mL，加入步骤(1)溶液中，混匀即可。
需要说明的是，培养基中各组分的用量均按水的使用量为1L计算，加入的葡萄糖和谷氨酰胺溶液体积、维生素B1溶液体积以及硝酸铁溶液体积不计算在内。
本发明的有益效果在于：本发明所述培养基价格低廉，配制方法简单，鸭疫里默氏杆菌能够在该培养基中较好地生长，可用于鸭疫里默氏杆菌的分离培养，且分离效率相对较高。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：
图1为本发明新型培养基与TSB培养基(购自Sigma)在相同条件下培养鸭疫里默氏杆菌ATCC菌株的SDS-PAGE图，其中1号为新型培养基培养菌株，2号为TSB培养基培养菌株，3号为蛋白marker。
图2为鸭疫里默氏杆菌ATCC菌株在新型液体培养基与TSB液体培养基(购自Sigma)的生长曲线。
图3三种用于分离培养感染鸭疫里默氏杆菌CH-1株雏鸭心血的培养基的比较，A为血琼脂培养基；B为TSB培养基(购自Sigma)；C为本发明新型培养基。
具体实施方式
下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1SDS-PAGE法比较TSB培养基与新型培养基的培养结果
1L水计，新型培养基各组分用量为：蛋白胨15g，氯化钠5g，磷酸氢二钾4g，磷酸二氢钾1g，葡萄糖4g，谷氨酰胺0.1g，维生素B10.2μg，硝酸铁5mg；调节pH值为7.2。
鸭疫里默氏杆菌新型培养基的制备方法，按1L水计，包括如下步骤：
(1)将15g蛋白胨，5.0g氯化钠，4.0g磷酸氢二钾，1.0g磷酸二氢钾溶于1L水中，调节好pH值后121℃灭菌20min；
(2)将400.0g葡萄糖和10.0g谷氨酰胺溶于1L水中，101℃灭菌15min；
(3)将0.20mg维生素B1溶于1L水中，滤膜过滤除菌；
(4)将5.0g硝酸铁溶于1L水中，121℃灭菌20min；
(5)培养基使用前，取步骤(2)溶液10mL、步骤(3)和步骤(4)溶液各1mL，加入步骤(1)溶液中，混匀即获得1L培养基。
比较试验步骤如下：
1)从-80℃冰箱中取出RA-ATCC菌株，待其解冻后划线于血琼脂培养基上，置于37℃培养箱培养12-24h；
2)取15ml离心管，加入3mlTSB，用一次性接种环挑取ATCC单克隆菌落接种到TSB中，在37℃，180r/min条件下培养至对数生长期；
3)分别取两个15ml离心管，各加入3mlTSB和3ml新型培养基，分别向培养基中加入菌液，使得起始OD为0.05，37℃，180r/mim条件下培养至对数生长期，离心，去除上清液，保留菌体；
4)将菌体加入适量蛋白buffer，使菌体重悬，沸水煮沸10min，使得菌体裂解；
5)制备SDS-PAGE胶：下层为分离胶，上层为浓缩胶；
6)点样：每孔10μL；
7)电泳：先90V，20min；再120V，90min，直至溴酚蓝完全跑出来，停止电泳；
8)考马斯染色：取出SDS-PAGE胶(此时应为透明色)置于考马斯亮蓝液中染色90min；
9)脱色并照相：取出染好的SDS-PAGE胶于脱色液中脱色2h；置于成像系统中照相。
结果见图1，从图中看出，1号和2号两条条带完全一样，说明鸭疫里默氏杆菌ATCC菌株在新型培养基中可以正常生长，且不影响鸭疫里默氏杆菌蛋白表达模式。
实施例2鸭疫里默氏杆菌ATCC株在TSB和新型培养基上的生长曲线
新型培养基配方及配制方法同实施例1。
绘制生长曲线的方法步骤为：
1)从-80℃冰箱中取出ATCC株，解冻后划线于血琼脂培养基上，置于37℃培养箱培养12-24h；
2)取15ml离心管，加入3mlTSB，用一次性接种环挑取ATCC单克隆菌落接种到TSB中，37℃，180r/min条件下培养至对数生长期；
3)将细菌起始OD稀释到0.05，分别接入20ml液体TSB培养基和新型培养基中，测两种培养基的生长曲线。
生长曲线结果见图2，可以看出，鸭疫里默氏杆菌在新型培养基中的生长速度与TSB培养基中的生长速度相当。
实施例3三种培养基用于鸭疫里默氏杆菌的分离培养
新型培养基配方及配制方法同实施例1。
用血琼脂培养基、TSB培养基、新型培养基分别对鸭疫里默氏杆菌进行分离培养，具体步骤为：
1)构建感染鸭疫里默氏杆菌雏鸭模型：以攻毒剂量为109CFU鸭疫里默氏杆菌CH-1型经肌肉注射接种于三只3日龄雏鸭，约28℃环境下常规供给饲料、饮水；
2)接种24h后对3只雏鸭进行无菌心脏采血：用PBS依次倍比稀释心血至：10-1、10-2、10-3、10-4，10-5；
3)心血稀释液滴板于三种培养基，计数血液载菌量，选取稀释倍数为10-4，10-5的菌悬液，每个浓度各吸取100μL分别滴于血琼脂培养基，TSB培养基和新型培养基；
4)将培养基置于37℃培养箱培养12-18h；
5)平板细菌计数。
培养结果见图3，其中，血琼脂培养基：10-4区域有293±5个单克隆菌落；10-5区域有50±5个单克隆菌落；
TSB培养基：10-4区域有270±5个单克隆菌落；10-5区域有45±5个单克隆菌落；
新型培养基：10-4区域有301±5个单克隆菌落；10-5区域有61±5个单克隆菌落。
以上结果表明，新型培养基的分离率要率高于血琼脂培养基和TSB培养基。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (5)

1.鸭疫里默氏杆菌新型培养基，其特征在于，按用水量1L计，加入的组分及各组分的用量为：蛋白胨15.0～25.0g，氯化钠5.0～15.0g，磷酸氢二钾4.0～10.0g，磷酸二氢钾1.0～2.5g，葡萄糖4～7g，谷氨酰胺0.1～0.2g，维生素B10.2～0.5μg，硝酸铁5～20mg；调节pH范围值为7.0-7.5。
2.根据权利要求1所述的鸭疫里默氏杆菌新型培养基，其特征在于，配制培养基时，将培养基组分分为三组，A组为蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾，B组为葡萄糖和谷氨酰胺，C组为硝酸铁，三组分别灭菌，并且A组在灭菌前需要调节pH值；在培养基使用之前将三组混合。
3.根据权利要求1所述的鸭疫里默氏杆菌新型培养基，其特征在于，还包含组分琼脂，琼脂的用量为用水重量的1.5％。
4.根据权利要求1所述的鸭疫里默氏杆菌新型培养基，其特征在于，按用水量1L计，加入的组分及各组分的用量为：蛋白胨15g，氯化钠5g，磷酸氢二钾4g，磷酸二氢钾1g，葡萄糖4g，谷氨酰胺0.1g，维生素B10.2μg，硝酸铁5mg；调节pH范围值为7.2。
5.权利要求1～4任一项所述鸭疫里默氏杆菌新型培养基的制备方法，其特征在于，按培养基用水量1L计，包括如下步骤：
(1)将15.0～25.0g蛋白胨，5.0～15.0g氯化钠，4.0～10.0g磷酸氢二钾，1.0～2.5g磷酸二氢钾溶于1L水中，调节好pH值后高压灭菌；
(2)将400.0～700.0g葡萄糖和10.0～20.0g谷氨酰胺溶于1L水中，滤器过滤除菌；
(3)将0.20～0.50mg维生素B1溶于1L水中，滤器过滤除菌；
(4)将5.0～20.0g硝酸铁溶于1L水中，高压灭菌；
(5)培养基使用前，取步骤(2)溶液10mL、步骤(3)和步骤(4)溶液各1mL，加入步骤(1)溶液中，混匀即可。
CN201610261257.1A 2016-04-25 2016-04-25 鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法 Pending CN105695375A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610261257.1A CN105695375A (zh) 2016-04-25 2016-04-25 鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610261257.1A CN105695375A (zh) 2016-04-25 2016-04-25 鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105695375A true CN105695375A (zh) 2016-06-22

Family

ID=56217466

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610261257.1A Pending CN105695375A (zh) 2016-04-25 2016-04-25 鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105695375A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107384830A (zh) * 2017-08-20 2017-11-24 云南省畜牧兽医科学院 一种鸭疫里默氏杆菌的培养方法及其培养基
CN108220168A (zh) * 2016-12-14 2018-06-29 康盛时代（北京）生物技术有限公司 一种培养基及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101065477A (zh) * 2004-06-25 2007-10-31 协和发酵工业株式会社 物质的制备方法
CN101948781A (zh) * 2010-09-01 2011-01-19 四川农业大学实验动物工程技术中心 一种鸭疫里默氏杆菌疫苗生产用培养基及其制备方法
CN101967458A (zh) * 2010-10-11 2011-02-09 四川农业大学实验动物工程技术中心 一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法
CN102250792A (zh) * 2011-06-17 2011-11-23 四川农业大学 鸭疫里默氏菌用培养基
WO2015148943A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-01 Conjugon, Inc. Preparation of small colony variants of therapeutic bacteria

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101065477A (zh) * 2004-06-25 2007-10-31 协和发酵工业株式会社 物质的制备方法
CN101948781A (zh) * 2010-09-01 2011-01-19 四川农业大学实验动物工程技术中心 一种鸭疫里默氏杆菌疫苗生产用培养基及其制备方法
CN101967458A (zh) * 2010-10-11 2011-02-09 四川农业大学实验动物工程技术中心 一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法
CN102250792A (zh) * 2011-06-17 2011-11-23 四川农业大学 鸭疫里默氏菌用培养基
WO2015148943A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-01 Conjugon, Inc. Preparation of small colony variants of therapeutic bacteria

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王艳: "鸭疫里默氏菌制苗菌株筛选及大罐发酵培养工艺条件优化", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *
黄方一 程爱芳主编: "《发酵工程（第三版）》", 31 January 2013, 华中师范大学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108220168A (zh) * 2016-12-14 2018-06-29 康盛时代（北京）生物技术有限公司 一种培养基及其应用
CN107384830A (zh) * 2017-08-20 2017-11-24 云南省畜牧兽医科学院 一种鸭疫里默氏杆菌的培养方法及其培养基

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106011001A (zh) 一种抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂及其制备方法
CN108949619A (zh) 一种鸭疫里默氏杆菌的发酵工艺
CN105695375A (zh) 鸭疫里默氏杆菌新型培养基及其制备方法
CN105132307B (zh) 一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用
CN103013893A (zh) 一株植物乳杆菌ccl67及其应用
CN104877939A (zh) 一种应用于大肠杆菌的培养基及培养方法
CN103122324B (zh) 鸡大肠杆菌培养方法
CN103992977A (zh) 一种高密度发酵培养枯草芽孢杆菌的方法
CN110643522A (zh) 禽多杀性巴氏杆菌的培养基、培养方法及其应用
CN108315384A (zh) 硝呋太尔制霉素阴道软胶囊的微生物限度检查方法
CN109988811A (zh) 一种微生物快速检测培养基及其制备方法和应用
CN109496988B (zh) 一种昆虫病原线虫规模化培养的方法及培养装置
CN104498391A (zh) 一种大肠杆菌及其培养基的培养方法
CN104212745B (zh) 一种鸡用微生态制剂及其制备方法
CN105838641A (zh) 一种鸡滑液囊支原体的培养方法
CN105031635A (zh) 一种鸡白痢沙门氏菌灭活疫苗的制备方法及其应用
CN101648013B (zh) 鸡传染性鼻炎灭活疫苗的制备方法
CN112553109B (zh) 一株铜绿假单胞菌y12及其应用
CN104740622B (zh) 一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、巴氏杆菌三联灭活疫苗
CN109706083B (zh) 一种经代谢调控后抗菌活性显著增加的杜仲内生真菌
CN109699683B (zh) 一种滑石基质爪哇虫草孢子制剂
CN107325993A (zh) 高效培养鸡鼻炎副鸡嗜血杆菌培养基及其制备方法和应用
CN106350472B (zh) 用于培养牛支原体的液体培养基及其制备方法
CN108102924B (zh) 一种利用噬菌蛭弧菌控制小球藻培养中细菌污染的方法
CN111011590A (zh) 复合益生菌剂及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160622