CN104212745B

CN104212745B - 一种鸡用微生态制剂及其制备方法

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Publication number: CN104212745B
Application number: CN201410457020.1A
Authority: CN
Inventors: 张从敬; 黄迪海; 秦卓明; 王世荣; 刘霞; 张再辉; 徐秀荣; 盛晓丹
Original assignee: SHANDONG JIANMU BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SHANDONG JIANMU BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-09-10
Filing date: 2014-09-10
Publication date: 2017-01-25
Anticipated expiration: 2034-09-10
Also published as: CN104212745A

Abstract

本发明涉及一种鸡用微生态制剂及其制备方法，属于微生物制剂制备技术领域。本发明的鸡用微生态制剂是将鸡全肠内容物用培养基稀释，然后过滤，得滤液；然后将滤液接种于培养基，于厌氧培养系统、40.5‑41.5℃培养35‑37h，得肠菌培养液种子液；最后将种子液接种于发酵罐中，向罐内充氮气，保持压力为0.018‑0.022MPa、pH为6.8‑7.0，于40.5‑41.5℃静止培养46‑50h。该微生态制剂是一种全天候、多菌属、联合、协调和叠加共同起作用的生物源性复合制剂，无毒副作用，不存在排异反应，无药物残留，无激素残留，不产生细菌的耐药性。其所含有效活菌含量不低于100亿个/ml；其主要益生菌的生物活性有效期在常温下延长至8个月。

Description

一种鸡用微生态制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种鸡用微生态制剂及其制备方法，属于微生物制剂制备技术领域。

背景技术

微生态制剂又名促生素、利生素、活菌制剂、益生素，是从动物或自然界分离、鉴定或通过生物工程人工组建的有益微生物，经培养、发酵、干燥、加工等特殊工艺制成的含有活菌并用于动物的生物制剂或活菌制剂。广义的动物微生态制剂既包括正常微生物成员，即益生素(菌)，还包括一些能促进正常微生物群生长繁殖所需物质的制剂，如低聚糖等益生元。狭义上，微生态制剂就指益生素。本发明中所述微生态制剂为广义含义的微生态制剂。

根据菌种组成，微生态制剂可分为单一菌制剂和复合菌制剂。常见的单一菌制剂为乳酸菌制剂、芽孢杆菌制剂、酵母菌制剂、放线菌制剂及光合细菌制剂等几大类。作为本领域技术人员公知的是，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但是不同类型微生物对营养物质的需求是不一样的。所以，复合菌制剂的制备要远远难于单一菌制剂的制备；因此，目前所公开的复合菌制剂较少。其中所含复合菌种类最多的是日本琉球大学比嘉照夫教授发明的复合微生物制剂，由光合细菌、乳酸菌、酵母菌和放线菌等10属8O多种微生物组成。但是健康人群以及其它动物的肠道中存在的菌种种类高达1000多种，这些微生物菌群在肠道免疫系统的形成上扮演着重要作用，且每种微生物对于维持机体消化和维生素代谢以及对于宿主的健康都是功不可没的，如果改变肠道菌群的组成将会增加食品过敏或者肠道炎性疾病的风险。所以，单一菌制剂和复合菌制剂存在以下缺陷：1.单一菌种和复合制剂功能不全面，联合、协调和叠加作用不明显；2.有些单一菌种和复合制剂使用的菌种非原籍菌，存在致病风险。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含有与固有菌群的杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例基本保持一致菌群的微生态制剂及其制备方法。

本发明实现上述发明目的的技术方案：

一种鸡用微生态制剂的制备方法，其步骤为：

（1）将SPF成年母鸡全肠内容物用9-11倍其重量的培养基稀释，然后过滤，得滤液；

（2）将滤液按9-11%的接种量接种于培养基，于厌氧培养系统、40.5-41.5℃静止培养35-37h，得肠菌培养液种子液；

（3）将种子液按4.5-5.5%的接种量接种于发酵罐中，向罐内充氮气，保持压力为0.018-0.022MPa、pH为6.8-7.0，于40.5-41.5℃静止培养46-50h。

步骤（2）和（3）所用培养基的制备方法：取豆芽液300ml，然后向其加入鱼粉蛋白胨8g、盐酸半胱氨酸0.6g、大豆蛋白胨6g、维生素B₁0.4g、牛肉膏20g、酵母浸粉2g、可溶性淀粉0.5g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾25g，硫酸镁10g；然后加热至溶解，再搅拌至混合均匀；然后加水补足1000ml，再调pH值至7.0；于121℃灭菌30分钟即得1000ml培养基。

上述制备方法，其步骤（1）、（2）和（3）中的数据（用量比例、发酵参数）的改变会影响所制备的微生态制剂的品质；即含菌群的种类、各菌群的含量、活菌含量、常温保存期等。所以，必须将上述数据限定在本发明的范围内，此时所制备的生态制剂的有效活菌含量不低于100亿个/ml，常温保存期可达8个月；与鸡肠道内固有菌群相比，其杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例与鸡肠道内固有菌群的基本保持一致，杆菌球菌的比例80:20-85:15之间；革兰氏阳性菌和阴性菌的比例在75:25-85:15之间；且嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌、粪球菌、乳酸片球菌、酵母菌和含量分别增加8-10%、4-5%、4-5%、8-10%、4-5%。

上述制备方法，优选的，步骤（1）中全肠内容物与培养基的重量比为1:10；

步骤（2）中滤液按10%的接种量接种于培养基，41℃静止培养36h；

步骤（3）中将种子液按5%的接种量接种于发酵罐中，压力为0.02MPa、pH为6.8-7.0，于 41℃静止培养48h。在此制备条件下制备的生态制剂，有效活菌含量不低于110亿/ml，常温保存期可达9个月，其杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例与鸡肠道内固有菌群的比例更加一致；杆菌球菌的比例为80:16-18；革兰氏阳性菌和阴性菌的比例为75:21-24；其嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌、粪球菌、乳酸片球菌、酵母菌和含量分别增加10%、5%、5%、10%、5%。

本发明还提供了一种采用上述方法制备的鸡用微生态制剂。

该微生态制剂是一种全天候、多菌属、联合、协调和叠加共同起作用的生物源性复合制剂，无毒副作用，不存在排异反应，无药物残留，无激素残留，不产生细菌的耐药性。其所含有效活菌含量不低于100亿个/ml；其主要益生菌的生物活性有效期在常温下延长至8个月。

与本发明之前的单一菌种制剂、复合菌种制剂相比，其所含有益菌的种类更多，与固有菌群的杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例基本保持一致；能有效防治鸡幼禽肠道疾病，尤其是对雏鸡白痢有突出的预防效果。

另外，该微生态制剂所含主要益生菌包括嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌、粪球菌、乳酸片球菌、酵母菌等5种益生菌比例稍优于固有菌群；该制剂在畜禽养殖中具有以下功能：防治畜禽肠道疾病，预防耐药性病原菌和混合感染；提高饲料转化率并降低饲料成本；提高生产性能和肉品质；优化生态环境和降低环境污染。

具体实施方式

黄豆芽加水煮沸1h后，用8层医用纱布过滤，滤液于121℃灭菌，制得豆芽液。

实施例1

取豆芽液300ml，然后向其加入鱼粉蛋白胨8g、盐酸半胱氨酸0.6g、大豆蛋白胨6g、维生素B₁0.4g、牛肉膏20g、酵母浸粉2g、可溶性淀粉0.5g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾25g，硫酸镁10g；然后加热至100℃使之完全溶解，此时各组分均溶解，再搅拌至混合均匀；然后加水补足1000ml，再调pH值至7.0；分装之后于121℃灭菌30分钟，即得培养基。

在无菌环境中将符合GB/T17999-2008标准的SPF成年母鸡解剖，取其全肠内容物（简称肠容物）称重；然后按肠容物:培养基为1：10的重量比例将肠容物加入到培养基中，充分搅拌之后过滤，得滤液；将滤液按10%的接种量接种于培养基中，然后置于厌氧培养系统中，于41℃静止培养36h，得鸡原籍肠道菌群种子液，并保存菌种。然后取种子液按5%的接种量接种于1吨的发酵罐（发酵罐中是与步骤2相同的培养基）中，将罐内充氮气，保持压力为0.02MPa，pH保持在6.8-7.0， 41℃静止培养48h后，检测后无菌环境分装，制得本发明的鸡用原生态制剂。常温保质期为9个月；所述常温保质期是自然温度下遮光、密闭保存的期限。

实施例2

在无菌环境中将符合GB/T17999-2008标准的SPF成年母鸡解剖，取其全肠内容物（简称肠容物）称重；然后按肠容物:培养基为1：9的重量比例将肠容物加入到培养基中，充分搅拌之后过滤，得滤液；将滤液按9%的接种量接种于培养基中，然后置于厌氧培养系统中，于40.5℃静止培养37h，得鸡原籍肠道菌群种子液，并保存菌种。然后取种子液按5.5%的接种量接种于1吨的发酵罐（发酵罐中是与步骤2相同的培养基）中，将罐内充氮气，保持压力为0.022MPa，pH保持在6.8-7.0， 40.5℃静止培养50h后，检测后无菌环境分装，制得本发明的鸡用原生态制剂。常温保质期为8个半月；所述常温保质期是自然温度下遮光、密闭保存的期限。

实施例3

在无菌环境中将符合GB/T17999-2008标准的SPF成年母鸡解剖，取其全肠内容物（简称肠容物）称重；然后按肠容物:培养基为1：11的重量比例将肠容物加入到培养基中，充分搅拌之后过滤，得滤液；将滤液按11%的接种量接种于培养基中，然后置于厌氧培养系统中，于41.5℃静止培养35h，得鸡原籍肠道菌群种子液，并保存菌种。然后取种子液按4.5%的接种量接种于1吨的发酵罐（发酵罐中是与步骤2相同的培养基）中，将罐内充氮气，保持压力为0.018MPa，pH保持在6.8-7.0， 41.5℃静止培养46h后，检测后无菌环境分装，制得本发明的鸡用原生态制剂。常温保质期为8个月；所述常温保质期是自然温度下遮光、密闭保存的期限。

效果试验

对实施例1-3所制备的鸡用原生态制剂及用于制备该生态制剂的鸡的肠容物菌群分别进行检测。

检测方法：常规活菌平板计数法和厌氧活菌平板计数法

检测条件：常规微生物检测实验室

检测结果如表1；

表1

该数据说明所制备的原生态制剂中所含菌群与鸡原籍肠道菌群的杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例基本保持一致；且主要益生菌（包括嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌、粪球菌、乳酸片球菌、酵母菌）的比例稍优于鸡原籍肠道菌群。

对实施例1-3所制备的鸡用原生态制剂的使用效果进行检测，

预防鸡幼禽肠道疾病的效果试验，选用200只2日龄健康AA幼雏作为试验对象。平均分成4组，各组之间没有明显差异，具有可比性。各组采用相同的饲养条件。具体分组如下：

表2 试验分组

试验结束后，统计各组发病率，死亡率和保护率，具体见表3

表3

	对照组1	对照组2	对照组3	试验组
					患病率	0	82%	30%	12%
死亡率	0	36%	6%	0
					保护率	/	/	70%	100%

该结果表明，本发明的微生态制剂对鸡幼雏肠道疾病有突出的预防效果。另本发明的微生态制剂所含的全部细菌均为鸡的原籍菌，不存在排异反应、药物残留及毒副作用。

Claims

1.一种鸡用微生态制剂的制备方法，其特征在于，其步骤为：

（3）将种子液按4.5-5.5%的接种量接种于发酵罐中，向罐内充氮气，保持压力为0.018-0.022MPa、pH为6.8-7.0，于40.5-41.5℃静止培养46-50h；

2.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，

步骤（1）中全肠内容物与培养基的重量比为1:10。

3.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，

步骤（2）中滤液按10%的接种量接种于培养基，41℃静止培养36h。

4.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，

步骤（3）中将种子液按5%的接种量接种于发酵罐中，压力为0.02MPa、pH为6.8-7.0，于41℃静止培养48h。

5.一种采用权利要求1-4中任意一项所述方法制备的鸡用微生态制剂。

6.根据权利要求5所述的鸡用微生态制剂，其特征在于，含有效活菌含量不低于100亿个/ml。