CN103122324B - 鸡大肠杆菌培养方法 - Google Patents

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本发明涉及疫苗原液生产工艺，具体为一种鸡大肠杆菌培养方法。其目的在于提供一种可以获得高活菌浓度的鸡大肠杆菌培养方法。本发明的具体技术方案为：鸡大肠杆菌培养方法，将鸡大肠杆菌菌株的二级种子液接种到含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，二级种子液接种量为培养基总量的2～3%，菌株种子在37℃条件下于微生物发酵罐内通气培养12～14小时。本发明的有益效果为：优化了微生物发酵培养菌条件，培养工艺简单，获得理想的高活菌浓度。

Description

鸡大肠杆菌培养方法
技术领域
    本发明涉及疫苗原液生产工艺，具体为一种鸡大肠杆菌培养方法。 
背景技术
鸡大肠杆菌灭活疫苗的制备中，首要环节就是鸡大肠杆菌的培养。为了获得理想的活菌浓度，业界对鸡大肠杆菌培养工艺进行了大量研究。 
影响鸡大肠杆菌培养菌浓度的因素有很多，如培养基组成、培养时间、菌种接种量以及细菌生长环境等。 
目前关于鸡大肠杆菌的培养，尚未有业界公认的较佳工艺，获得理想活菌浓度，以为生产高浓度制苗菌液奠定基础。 
发明内容
本发明目的在于提供一种可以获得高活菌浓度的鸡大肠杆菌培养方法。 
本发明的具体技术方案为：鸡大肠杆菌培养方法，将鸡大肠杆菌菌株的二级种子液接种到含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，二级种子液接种量为培养基总量的2～3%（体积比），菌株种子在37℃条件下于微生物发酵罐内通气培养12～14小时。 
所述鸡大肠杆菌菌株的二级种子液的制备为：将鸡大肠杆菌菌株的一级种子液接种到马丁肉汤中，37℃条件下培养24小时，经纯粹检验合格后，作为二级种子。置2～8℃条件下保存，使用期不超过21日。 
所述一级种子液制备为：将鸡大肠杆菌菌种分别接种于含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基中，37℃条件下培养24小时，划线接种麦康凯氏琼脂平板上培养，再接种马丁琼脂斜面，37℃条件下培养20～24小时，作为一级种子。置2～8℃条件下保存，使用期不超过3日。 
所述含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，其pH值范围为7.2～7.6。 
所述发酵罐培养时，搅拌速度控制为100～200转/分钟。 
所述发酵罐内通气为通入新鲜氧气，通气量为5～6升/分钟。 
本发明的有益效果为：优化了微生物发酵培养菌条件，培养工艺简单，获得理想的高活菌浓度。 
具体实施方式
实施例1：鸡大肠杆菌培养方法
1、准备鸡大肠杆菌菌种：鸡大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50菌株；菌株向农业部下属中国兽医药品监察所建立的中国兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）购买。
菌种标准： 
①形态和生化特性：培养物涂片为革兰氏阴性杆菌。生化特性应符合细菌分类学中本菌的特性。
②培养特征：接种麦康凯式培养基平板上，37℃培养24小时，肉眼观察呈粉红色或砖红色，菌落隆起，表面光滑。低倍显微镜下45度折光观察，边缘整齐，呈鲜艳的金光。 
③血清学特性：EC24为078、EC30为0111、EC45为02、EC50为05。 
④毒力：鸡大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50各菌株的毒力分开测定。取1～2月龄SPF鸡8只，胸部肌肉注射大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50各菌株的普通肉汤菌液0.5ml（含活菌2～5×108 CFU），观察10日，应全部发病。 
⑤免疫原性：各菌株按本发明分别制备单价蜂胶灭活疫苗进行免疫原性鉴定。取1～2月龄SPF鸡10只，经颈部皮下注射0.5ml，21日后连同条件相同的对照鸡8只，分别经胸部肌肉注射一个最小感染剂量（1MID）的对应制苗用强毒菌液0.5ml（含活菌3～4×108 CFU），观察10日，对照鸡应至少7/8发病，免疫鸡应至少8/10保护。 
纯粹：按照《中国兽药典》检验，应纯粹。 
2、制备鸡大肠杆菌菌株的一级种子液：将鸡大肠杆菌菌种分别接种于含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基中，37℃条件下培养24小时，划线接种麦康凯氏琼脂平板上培养，各菌株选取符合上述“培养特征”标准的典型菌落10个，再分别接种马丁琼脂斜面若干支，37℃条件下培养20～24小时，作为一级种子。置2～8℃条件下保存，使用期不超过21日。 
3、制备鸡大肠杆菌菌株的二级种子液：将鸡大肠杆菌菌株的一级种子液接种到马丁肉汤中，37℃条件下培养24小时，经纯粹检验合格后，作为二级种子，置2～8℃条件下保存，使用期不超过3日。 
4、将鸡大肠杆菌菌株的二级种子液接种到含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，其pH值范围为7.2～7.6；二级种子液接种量为培养基总量的2～3%（体积比），菌株种子在37℃条件下于微生物发酵罐内通入新鲜氧气，通气量为5～6升/分钟，搅拌速度控制为100～200转/分钟，培养12～14小时。所得菌液活菌数较高，活菌浓度为4.6～4.8×109 CFU/ml。 
微量盐溶液的配制： 按中华人民共和国兽用生物制品规程配制。 
实施例2：不同培养基对制苗菌液浓度的影响研究测试
1、材料：
（1）菌种：EC24、EC30、EC45、EC50菌株，菌种标准同实施例1；
（2）培养基：普通肉汤培养基、0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基（每百毫升培养基含微量盐溶液0.1ml）。
（3）发酵罐：40L微生物发酵罐，购自上海高机生物工程有限公司。 
2、测试方法： 
将EC24、EC30、EC45、EC50各菌株的二级种子液以2～3%接种量分别接种普通肉汤培养基和含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，37℃培养12～14小时，收获菌液，进行活菌计数，比较两种培养基对培养菌液浓度的影响。详细结果见表1：
表1  不同培养基配方对鸡大肠杆菌各菌株培养菌液浓度的影响
由表1可以看出，不同培养基配方组成对鸡大肠杆菌菌液终浓度影响较大，含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，其pH值范围为7.2～7.6，鸡大肠杆菌代谢产物产酸，会抑制该菌的增殖，该培养基的营养成分、pH值范围、渗透压均适合鸡大肠杆菌的增殖与培养。尽管其制备工艺较为复杂，成本相对较高，但可以获得高浓度、高质量的菌液抗原，综合考虑采用含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基进行鸡大肠杆菌菌液的增殖培养。
实施例3：不同二级种子接种量对各菌株菌液浓度的影响研究测试
以含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，分别按1%、2%、3%、5%的接种量接种各菌株的二级种子液，37℃培养12～14小时，收获菌液，进行活菌计数，详细结果见表2：
表2 不同二级种子接种量对各菌株培养浓度的影响
由表2可知，在培养基中接种2～3%接种量的二级种子，可以获得较好的培养效果。同时实验结果也表明，鸡大肠杆菌各菌株在接种2～3%接种量的二级种子，同条件下培养，结果差异不明显。在良好的营养型培养基中，鸡大肠杆菌很快进入旺盛的对数生长期，在2～3%范围内的接种量，培养效果较好。增大接种对鸡大肠杆菌的菌液终浓度影响不大。接种量为2～3%时，接种初期菌体生长速度较缓慢，但进入对数生长期后，其生长增殖速率最大，其最终菌液浓度与其他接种量并无明显差异。因此从成本及培养效果因素考虑，选择2～3%接种量为适宜接种量。
实施例4：各菌株不同培养时间对各菌株菌液浓度的影响研究测试
将各菌株的二级种子液2～3%接种量分别接种0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，37℃培养16小时，自接种6小时后每隔2小时取样对各菌株菌液进行活菌计数，详细结果见表3：
表3  鸡大肠杆菌各菌株在不同培养时间的菌液浓度
由表3可以看出，不同培养时间对细菌培养浓度存在一定影响，鸡大肠杆菌经培养8h后，细菌进入对数生长期，此时菌体分裂快，增殖速率大，培养物中的细菌含量随培养时间的延长而增加，至14h左右达到高峰，以后随着培养基中营养成分的逐渐耗尽，代谢产物增加，细菌逐渐进入衰退期，呈降低趋势，而且随着菌体的崩解，鸡大肠杆菌中内毒素逐渐释放，其菌液中内毒素含量逐渐增加，对菌液品质有重大影响，因此综合各种因素，将鸡大肠杆菌培养时间定为12～14小时收获菌液，以获得高浓度高质量的菌液抗原。
实施例5：菌液不同培养方式对各菌株菌液浓度的影响研究测试
分别以静置培养及通气培养方式，检测不同菌液培养方式对菌液浓度的影响。通气培养时开始小量通气，逐渐加大通气量，通气量控制在5～6升/分钟，37℃培养12～14小时收获菌液，活菌计数，详细结果见表4：
表4  静置培养与通气培养对各菌株菌液浓度的影响
由表4可知，鸡大肠杆菌在培养增殖过程中，产生的代谢产物使培养基局部pH值降低，抑制菌体的生长增殖，通气培养在培养过程中不断输入新鲜氧气，并排出细菌产生的气体，及时调整整个培养基的营养成分均匀度及pH值，因此对鸡大肠杆菌进行通气培养的优点明显。
实施例6：菌液不同培养方式对各菌株菌液浓度的影响研究测试
按发酵罐最小装量加入含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，按培养基总量的2～3%接种量分别加入EC24、EC30、EC45、EC50菌株的二级种子液，分别单独进行微生物发酵罐单独扩大培养，温度控制在37℃，调节搅拌转速、pH值、通气量，培养12～16小时，按培养后8h、12h、14h、16h收获菌液，活菌计数，不同搅拌速度对各菌株菌液终浓度的影响试验结果见表5，不同通气量对各菌株菌液终浓度的影响试验结果见表6：
表5  微生物发酵罐不同搅拌速度对各菌株菌液终浓度的影响
在微生物发酵罐培养鸡大肠杆菌各菌株过程中，搅拌速度可显著增加菌液的培养浓度，但搅拌速度过高，影响鸡大肠杆菌的菌液浓度，综合考虑将搅拌速度控制在100～200转/分钟。
表6  不同通气量对各菌株菌液终浓度的影响 
鸡大肠杆菌在微生物发酵罐培养过程中，不断输入新鲜氧气，并排出细菌产生的气体，及时调整整个培养基的营养成分均匀度及pH值，对细菌浓度影响较大，通过试验结果确定5～6L/分钟的通气量较好。
实施例7：本发明方法培养的鸡大肠杆菌用于制备鸡大肠杆菌病蜂胶灭活疫苗的制造工艺：
包括以下步骤：
（1）准备鸡大肠杆菌菌株：鸡大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50菌株，菌株向农业部下属中国兽医药品监察所建立的中国兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）购买。
菌种标准：①形态和生化特性：培养物涂片为革兰氏阴性杆菌。生化特性应符合细菌分类学中本菌的特性。 
②培养特征：接种麦康凯式培养基平板上，37℃培养24小时，肉眼观察呈粉红色或砖红色，菌落隆起，表面光滑。低倍显微镜下45度折光观察，边缘整齐，呈鲜艳的金光。 
③血清学特性：EC24为078、EC30为0111、EC45为02、EC50为05。 
④毒力：鸡大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50各菌株的毒力分开测定。取1～2月龄SPF鸡8只，胸部肌肉注射大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50各菌株的普通肉汤菌液0.5ml（含活菌2～5×108 CFU），观察10日，应全部发病。 
⑤免疫原性：各菌株按本发明分别制备单价蜂胶灭活疫苗进行免疫原性鉴定。取1～2月龄SPF鸡10只，经颈部皮下注射0.5ml，21日后连同条件相同的对照鸡8只，分别经胸部肌肉注射一个最小感染剂量（1MID）的对应制苗用强毒菌液0.5ml（含活菌3～4×108 CFU），观察10日，对照鸡应至少7/8发病，免疫鸡应至少8/10保护。 
纯粹：按照《中国兽药典》检验，应纯粹。 
（2）准备培养基：含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，微量盐溶液的配制：按中华人民共和国兽用生物制品规程配制。 
（3）制备种子：①一级种子繁殖：将鸡大肠杆菌菌株分别接种于含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基中，37℃条件下培养24小时，划线接种麦康凯氏琼脂平板上培养，各菌株选取符合上述“培养特征”标准的典型菌落10个，分别接种马丁琼脂斜面若干支，37℃条件下培养20～24小时，作为一级种子；在2～8℃保存，使用期不超过21日；②二级种子繁殖：将鸡大肠杆菌菌株的一级种子液接种到含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基中，37℃条件下培养24小时；进行纯粹检验，应纯粹；置2～8℃保存，使用期不超过3日； 
（4）制备菌液：
①菌液培养：采用微生物发酵罐分别单独培养鸡大肠杆菌各菌株菌液，按发酵罐容积总量的70%加入含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，按培养基总量的0.01～0.02%加入消泡剂，蒸汽高压灭菌后待其温度降至37～38℃时，按培养基总量的2～3%接入鸡大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50各菌株二级种子液，混合均匀后在37℃条件下单独进行培养；开始小量通氧气逐渐增大通气量，通气量为5～6升/分钟，pH值7.2～7.6，培养期间搅拌2～3次，搅拌速度100～200转/分钟，于37℃培养12～14小时，收获菌液，置2～8℃保存备用；
纯粹检验及活菌计数：菌液培养结束后取样进行纯粹检验，按现行《中国兽药典》附录所述方法进行，应纯粹。同时进行活菌计数，每ml鸡大肠杆菌各菌株菌液菌数应≥3.0×109 CFU
②菌液浓缩：用中空纤维超滤器将菌液浓缩，然后再用pH7.2的磷酸盐缓冲液PBS制成悬浮液，使每毫升至少含9×109 CFU菌体；
（5）灭活：按菌液量的0.6%加入甲醛溶液，经37℃灭活72小时，期间每隔4～6小时搅拌数次；灭活检验：取样接种马丁肉汤培养基，应无菌生长；
（6）疫苗制备：①蜂胶纯化：蜂胶一般在低温中贮存，应用时先将蜂胶在-15℃冷冻24小时以上，再用冷冻粉碎机磨碎过筛，按每克蜂胶干物质加入4毫升的比例加入95%乙醇，37℃浸提48～72小时，冷却、过滤，即得纯净蜂胶乙醇浸出液（透明栗色溶液），蜂胶干物质含量在50%以上即可使用；②疫苗配制：将注射用水置配苗乳化罐中，将灭活检验合格的鸡大肠杆菌各菌株菌液按EC24：EC30：EC45：EC50为2：1:1:1的比例加入配苗乳化罐，1500转/分钟低速搅拌3分钟，然后缓慢加入蜂胶乙醇浸出液，继续1500转/分钟搅拌5～10分钟，使其充分混合乳化，使每毫升疫苗中含灭活的鸡大肠杆菌菌数≥2.0×109 CFU，蜂胶干物质含量为15～20mg/ml。
半成品检验：按现行《中国兽药典》附录所述方法进行，应无菌生长。 
分装：经无菌检验合格后，定量分装，加塞密封。分装期间应随时搅拌，使其混合均匀。 
以上制备的鸡大肠杆菌病蜂胶灭活疫苗免疫保护率高于鸡大肠杆菌灭活疫苗（铝胶佐剂），且蜂胶灭活疫苗免疫注射时无应激反应，免疫后鸡食欲、饮欲正常，安全性良好。 

Claims (3)

1.鸡大肠杆菌病蜂胶灭活疫苗的制造方法，其特征是：
（1）一级种子液制备：将鸡大肠杆菌菌种分别接种于含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基中，37℃条件下培养24小时，划线接种麦康凯氏琼脂平板上培养，再接种马丁琼脂斜面，37℃条件下培养20～24小时，作为一级种子，所述鸡大肠杆菌菌种为鸡大肠杆菌EC24、EC30、EC45、EC50菌株；
（2）二级种子液的制备：将鸡大肠杆菌菌株的一级种子液接种到马丁肉汤中，37℃条件下培养24小时，经纯粹检验合格后，作为二级种子，置2～8℃条件下保存；
（3）将鸡大肠杆菌菌株的二级种子液接种到含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，二级种子液接种量为培养基总量的2～3%，菌株种子在37℃条件下于微生物发酵罐内通气培养12～14小时；所述发酵罐内通气为通入新鲜氧气，通气量为5～6升/分钟；
（4）灭活：按菌液量的0.6%加入甲醛溶液，经37℃灭活72小时，期间每隔4～6小时搅拌数次； 
（5）疫苗制备：①蜂胶纯化：蜂胶一般在低温中贮存，应用时先将蜂胶在-15℃冷冻24小时以上，再用冷冻粉碎机磨碎过筛，按每克蜂胶干物质加入4毫升的比例加入95%乙醇，37℃浸提48～72小时，冷却、过滤，即得纯净蜂胶乙醇浸出液，蜂胶干物质含量在50%以上即可使用；②疫苗配制：将注射用水置配苗乳化罐中，将灭活检验合格的鸡大肠杆菌各菌株菌液按EC24：EC30：EC45：EC50为2:1:1:1的比例加入配苗乳化罐，1500转/分钟低速搅拌3分钟，然后缓慢加入蜂胶乙醇浸出液，继续1500转/分钟搅拌5～10分钟，使其充分混合乳化，使每毫升疫苗中含灭活的鸡大肠杆菌菌数≥2.0×109CFU，蜂胶干物质含量为15～20mg/ml。
2.根据权利要求1所述的鸡大肠杆菌病蜂胶灭活疫苗的制造方法，其特征是，所述含0.1%微量盐溶液的马丁肉汤培养基，其pH值范围为7.2～7.6。
3.根据权利要求1所述的鸡大肠杆菌病蜂胶灭活疫苗的制造方法，其特征是，所述发酵罐培养时，搅拌速度控制为100～200转/分钟。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN104877939A (zh) * 2015-05-27 2015-09-02 成都易创思生物科技有限公司 一种应用于大肠杆菌的培养基及培养方法
CN105238719A (zh) * 2015-10-27 2016-01-13 桂林瑞丰环保微生物应用研究所 一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法
CN105296407A (zh) * 2015-12-07 2016-02-03 山东华宏生物工程有限公司 一种副鸡禽杆菌菌液的培养方法
CN111518719A (zh) * 2020-04-29 2020-08-11 杭州经世科技有限公司 一种大肠杆菌菌种发酵与纯化工艺

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
制苗用鸡大肠杆菌培养基及培养方法;成进等;《中国兽医学报》;20010131;第47-48页 *
大肠杆菌灭活疫苗的制备;李琦等;《畜牧兽医科技信息》;20070331;第24-25页 *
鸡致病性大肠杆菌高密度发酵条件优化的研究;陆庆泉等;《中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集》;20021001;全文 *
鸭大肠杆菌制苗用基础种子的建立及高密度发酵培养试验研究;吴信明等;《中国畜牧兽医》;20111231;第227-230页，尤其是摘要及正文第2节 *

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