CN105238719A

CN105238719A - 一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法

Info

Publication number: CN105238719A
Application number: CN201510708172.9A
Authority: CN
Inventors: 林炳营
Original assignee: GUILIN RUIFENG ENVIRONMENTAL PROTECTION MICROBIOLOGY APPLICATION INSTITUTE
Current assignee: GUILIN RUIFENG ENVIRONMENTAL PROTECTION MICROBIOLOGY APPLICATION INSTITUTE
Priority date: 2015-10-27
Filing date: 2015-10-27
Publication date: 2016-01-13

Abstract

本发明涉及生物培养技术领域，具体涉及一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法。该方法包括步骤：1)对第一培养基进行超声波震荡处理，处理后将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，培养得到一级培养种子；2)对第二培养基进行超声波震荡处理，处理后将一级培养种子接种到第二培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，培养得到二级培养种子；3)将二级培养种子接种于菌液中，再导入至离心管中，加入的琼脂，摇床过夜，离心分离，将上层清液去除，即得。本发明所提供的方法能稳定的对大肠埃希菌进行快速培养，重复性好，适于培养实验室用高浓度活菌。

Description

一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法

技术领域

本发明涉及生物培养技术领域，具体涉及一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法。

背景技术

大肠埃希菌，是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。然后，处于研究目的，实验室内需要稳定且简易的方法进行繁殖和培养。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法。

一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，包括以下步骤：

1)对第一培养基进行超声波震荡处理，处理后将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速1～4秒/转，37.0～38.0℃条件下培养12～18小时，得到一级培养种子；

2)对第二培养基进行超声波震荡处理，处理后将将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速1～3秒/转，35.0～36.0℃条件下培养12～18小时，得到二级培养种子；

3)将步骤2)得到的二级培养种子接种于菌液中，再导入至离心管中，加入12～16％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。

具体的，步骤1)中，所述的第一培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、七水硫酸镁、甘油、二水钼酸钠、生物素、硫酸锰、六水氯化钴和蒸馏水。

具体的，步骤2)中，所述的第二培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、六水氯化铁、硼酸、谷氨酸钠和蒸馏水。

优选的，步骤1)中，超声频率为10kHz～30kHz，超声功率30w，处理时间30～45分钟。

优选的，步骤2)中，超声频率为10kHz～30kHz，超声功率50w，处理时间40～60分钟。

本发明所提供的超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法能稳定的对大肠埃希菌进行快速培养，重复性好，适于培养实验室用高浓度活菌。

具体实施方式

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1

一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，包括以下步骤：

1)对第一培养基进行超声波震荡处理，处理后将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速2秒/转，37.5℃条件下培养15小时，得到一级培养种子。

其中，第一培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、七水硫酸镁、甘油、二水钼酸钠、生物素、硫酸锰、六水氯化钴和蒸馏水。超声频率为20kHz，超声功率30w，处理时间40分钟。

2)对第二培养基进行超声波震荡处理，处理后将将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速2秒/转，35.5℃条件下培养15小时，得到二级培养种子。

其中，第二培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、六水氯化铁、硼酸、谷氨酸钠和蒸馏水。超声频率为20kHz，超声功率50w，处理时间50分钟。

3)将步骤2)得到的二级培养种子接种于菌液中，再导入至离心管中，加入14％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。

所得活菌浓度为7.6×10⁹CFU/ml。

实施例2

一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，包括以下步骤：

1)对第一培养基进行超声波震荡处理，处理后将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速4秒/转，37.0℃条件下培养18小时，得到一级培养种子。

其中，第一培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、七水硫酸镁、甘油、二水钼酸钠、生物素、硫酸锰、六水氯化钴和蒸馏水。超声频率为10kHz，超声功率30w，处理时间45分钟。

2)对第二培养基进行超声波震荡处理，处理后将将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速1秒/转，36.0℃条件下培养12小时，得到二级培养种子。

其中，第二培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、六水氯化铁、硼酸、谷氨酸钠和蒸馏水。超声频率为30kHz，超声功率50w，处理时间40分钟。

3)将步骤2)得到的二级培养种子接种于菌液中，再导入至离心管中，加入16％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。

所得活菌浓度为8.5×10⁹CFU/ml。

实施例3

一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，包括以下步骤：

1)对第一培养基进行超声波震荡处理，处理后将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速1秒/转，38.0℃条件下培养12小时，得到一级培养种子。

其中，第一培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、七水硫酸镁、甘油、二水钼酸钠、生物素、硫酸锰、六水氯化钴和蒸馏水。超声频率为30kHz，超声功率30w，处理时间30分钟。

2)对第二培养基进行超声波震荡处理，处理后将将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，将培养基固定在离心旋转机中，转速3秒/转，35.0℃条件下培养18小时，得到二级培养种子。

其中，第二培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、六水氯化铁、硼酸、谷氨酸钠和蒸馏水。超声频率为10kHz，超声功率50w，处理时间60分钟。

3)将步骤2)得到的二级培养种子接种于菌液中，再导入至离心管中，加入12％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。

所得活菌浓度为9.2×10⁹¹⁰CFU/ml。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，其特征在于：步骤1)中，所述的第一培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、七水硫酸镁、甘油、二水钼酸钠、生物素、硫酸锰、六水氯化钴和蒸馏水。

3.根据权利要求2所述的超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，其特征在于：步骤2)中，所述的第二培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、六水氯化铁、硼酸、谷氨酸钠和蒸馏水。

4.根据权利要求1至3任一所述的超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，其特征在于：步骤1)中，超声频率为10kHz～30kHz，超声功率30w，处理时间30～45分钟。

5.根据权利要求1至3任一所述的超声波震荡式大肠埃希菌的培养方法，其特征在于：步骤2)中，超声频率为10kHz～30kHz，超声功率50w，处理时间40～60分钟。