CN108179140A - 一种中性蛋白酶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中性蛋白酶的制备方法,包括如下步骤:(1)培养基调理:调节污泥含固率为3~4%,调pH为7.0~7.5,搅拌均匀,灭菌;(2)摇瓶培养:挑取一环反硝化产碱菌接种到装有LB液体培养基中,29~30℃、100~200转/分摇瓶培养12~15小时;(3)发酵罐发酵:按1~5%的接种量将摇瓶菌液移入装有含固率为3~4%的污泥的发酵罐,进行发酵培养;发酵温度30~32℃,发酵时间70~80小时;(4)纯化:发酵完成后,调pH为6.0~7.0,浓缩制成中性蛋白酶制剂。本发明不仅可处置污泥,而且可获得附加值高、成本较低的中性蛋白酶产品,推广应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及中性蛋白酶,具体地说,涉及中性蛋白酶的新制备方法。
背景技术
城市污泥是污水处理厂和污水处理的必然产物。未经恰当处理处置的污泥进入环境后,直接给水体和大气带来二次污染,不但降低了污水处理系统的有效处理能力,而且对生态环境和人类的活动构成了严重的威胁。目前,城市污泥的处置途径主要有:填埋、焚烧和土地利用等。但都不是最佳的处理方式。
中性蛋白酶是一种内切酶,可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、pH值下,本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。可广泛应用于动植物蛋白的水解,制取生产高级调味品和食品营养强化剂的HAP和HVP,此外还可用于皮革脱毛、软化、羊毛丝绸脱胶等加工。目前用于生产中性蛋白酶的原料价格相对较为昂贵。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处,而提供一种成本低、环保的中性蛋白酶的制备方法。
为了实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种中性蛋白酶的制备方法,包括如下步骤:
(1)培养基调理:调节污泥含固率为3~4%,调pH为7.0~7.5,搅拌均匀,灭菌;
(2)摇瓶培养:挑取一环反硝化产碱菌接种到装有LB液体培养基中,29~30℃、100~200转/分摇瓶培养12~15小时;
(3)发酵罐发酵:按1~5%的接种量将摇瓶菌液移入装有含固率为3~4%的污泥的发酵罐,进行发酵培养;发酵温度30~32℃,发酵时间70~80小时;
(4)纯化:发酵完成后,调pH为6.0~7.0,浓缩制成中性蛋白酶制剂。
在上述的制备方法中,步骤(2)所述LB液体培养基配方为:酵母浸膏5g,胰蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000 mL,pH 7.2~7.6。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明利用城市污泥所含丰富的有机碳、氮和无机盐为营养物质,经过大量实验发现反硝化产碱菌在适宜pH、温度与通气量的条件下得以生长与增殖,并向发酵液中分泌中性蛋白酶,发酵液经一定的处理制成中性蛋白酶产品。本发明不仅可处置污泥,而且可获得附加值高、成本较低的中性蛋白酶产品,推广应用前景广阔。
具体实施方式
%是指每100份质量的培养基液体中接入接种物的质量份数。
实施例1. 反硝化产碱菌以污泥为原料发酵生产中性蛋白酶
(1)培养基调理:调节城市污泥含固率为3%,加入0.3%泡敌,并用NaOH调pH为7.0,搅拌均匀,0.1KPa压力与121℃下灭菌50分钟,冷却备用。
(2)摇瓶培养:从反硝化产碱菌斜面培养基上挑取一环菌苔接种到装有LB液体培养基的三角瓶中,30℃、100转/分进行摇瓶培养12h。
LB液体培养基配方为:酵母浸膏5g,胰蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000 mL,pH 7.4;
(3)发酵:以3%的接种量将摇瓶菌液移入装有含固率为3%的污泥的发酵罐,进行发酵培养。条件为:罐温30℃、罐压0.005MPa、通气量1:1.0(V/V/分)、搅拌速度200转/分、发酵时间75小时。
(4)蛋白酶纯化:发酵完成后,调pH为7.0,浓缩制成中性蛋白酶制剂。
(5)中性蛋白酶的检测:发酵完成后,取样,测定中性蛋白酶酶活,酶活力达到100%。
Claims (2)
1.一种中性蛋白酶的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)培养基调理:调节污泥含固率为3~4%,调pH为7.0~7.5,搅拌均匀,灭菌;
(2)摇瓶培养:挑取一环反硝化产碱菌接种到装有LB液体培养基中,29~30℃、100~200转/分摇瓶培养12~15小时;
(3)发酵罐发酵:按1~5%的接种量将摇瓶菌液移入装有含固率为3~4%的污泥的发酵罐,进行发酵培养;发酵温度30~32℃,发酵时间70~80小时;
(4)纯化:发酵完成后,调pH为6.0~7.0,浓缩制成中性蛋白酶制剂。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(2)所述LB液体培养基配方为:酵母浸膏5g,胰蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000 mL,pH 7.2~7.6。
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CN111647583A (zh) * | 2020-05-23 | 2020-09-11 | 内蒙古溢多利生物科技有限公司 | 一种中性蛋白酶的制备方法 |
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