CN106635801A - 一种金藻保藏技术 - Google Patents

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王颖
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Abstract

本发明涉及微藻养殖技术领域，尤其涉及一种金藻保藏技术。它所用到的保藏培养基配方为：尿素40～50mg，磷酸二氢钾8～12mg，硫酸亚铁2～3mg，乙二胺四乙酸二钠8～12mg，f/2维生素1～2ml，琼脂5～7g，灭菌海水1000ml。通过配制固体培养基、接种、涂布甘油保护、常温生长、低温保藏等步骤来保藏金藻，能使金藻持续获得营养，不断生长，保藏时间较长；同时利用甘油保护藻细胞在低温中不受伤害，保证了其正常生长能力和较强的复苏能力；整个过程在无菌环境中进行，保证藻细胞不被污染。综合之，本发明是一种理想的金藻保藏技术。

Description

一种金藻保藏技术
技术领域
本发明涉及微藻养殖技术领域，尤其涉及一种金藻保藏技术。
背景技术
在微藻产业化生产中，藻种的保藏和正常供应一直是制约其发展规模的重要因素。大部分通过液体保藏技术，将藻种接种于小三角烧瓶中，置于光线较弱、温度较低的藻种室培养，这样保藏的藻种保种周期短、容易污染、生活力差、复苏较困难；少部分通过固体培养基保存，这样藻种的保藏时间能得到延长，细菌污染情况也能得到改善。但是大部分技术人员所用保藏藻种的固体培养基，都是简单地向藻株生长培养基中添加琼脂制得而成，这样的固体培养基并不适合某些藻的生长，难以获得较好的保藏效果。
金藻，也称金褐藻，除叶绿素外，还能合成较多的类胡萝卜素，所以藻液呈现金褐色。金藻是单细胞游动的种类，无细胞壁，个体微小营养丰富，是水生动物很好的天然饵料。但是对金藻的大规模养殖并不十分有效，主要原因是金藻生长速率快、代谢周期短导致藻种易污染、优良藻种难以保存。有技术人员曾尝试用f/2固体培养基来保藏金藻，其效果并不好，藻种在f/2固体培养基上基本不生长。通过实验，发现金藻在液体培养基中喜欢利用硝酸盐作为氮源，而在固体培养基中喜欢利用尿素作为氮源。
发明内容
为解决现有技术存在的问题，我们提供一种金藻保藏技术。
本发明采用的技术方案是：
一种金藻保藏技术，所用到的保藏培养基配方为：尿素40～50mg，磷酸二氢钾8～12mg，硫酸亚铁2～3mg，乙二胺四乙酸二钠8～12mg，f/2维生素1～2ml，琼脂5～7g，灭菌海水1000ml。
所述f/2维生素为VB10.1g/L，VB120.5mg/L，生物素0.5mg/L。
一种金藻保藏技术，包括以下步骤：
步骤一按配方配制固体保藏培养基，高温灭菌后于超净工作台倒板，冷却后紫外线照射；
步骤二在超净工作台中吸取少量藻液，均匀涂布到固体培养基表面，敞口放置，待藻液被无菌风吹干；
步骤三再吸取少量甘油，同步骤二，均匀涂布到固体培养基表面，敞口放置，待甘油被无菌风吹干；
步骤四用封口膜将固体板封口，置于23℃，12:12光照条件下，让金藻自由生长；
步骤五一段时间后，待固体培养基中出现金褐色藻落，将固体板转移至4℃冰箱中，倒置放置保存即可。
所述步骤一中，紫外线照射时间为15～25min。
所述步骤三中，所用甘油为10％浓度的丙三醇，灭菌后使用。
本发明的有益效果：
通过实验发现，使用本发明的培养基和方法保藏金藻，能使金藻持续获得营养，不断生长，保藏时间较长；同时利用甘油保护藻细胞在低温中不受伤害，保证了其正常生长能力和较强的复苏能力；整个过程在无菌环境中进行，保证藻细胞不被污染。综合之，本发明是一种理想的金藻保藏技术。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述：
一种金藻保藏技术，所用到的保藏培养基配方为：尿素45mg，磷酸二氢钾10mg，硫酸亚铁2.5mg，乙二胺四乙酸二钠10mg，f/2维生素1ml，琼脂6g，灭菌海水1000ml。
所述f/2维生素为VB10.1g/L，VB120.5mg/L，生物素0.5mg/L。
一种金藻保藏技术，包括以下步骤：
步骤一按配方配制固体保藏培养基，高温灭菌后于超净工作台倒板，冷却后紫外线照射20min；
步骤二在超净工作台中吸取少量藻液，均匀涂布到固体培养基表面，敞口放置，待藻液被无菌风吹干；
步骤三再吸取少量10％甘油，同步骤二，均匀涂布到固体培养基表面，敞口放置，待甘油被无菌风吹干；
步骤四用封口膜将固体板封口，置于23℃，12:12光照条件下，让金藻自由生长；
步骤五一段时间后，待固体培养基中出现金褐色藻落，将固体板转移至4℃冰箱中，倒置放置保存即可。
上述仅为本发明的一个具体实施方式，显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种金藻保藏技术，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一按配方配制固体保藏培养基，高温灭菌后于超净工作台倒板，冷却后紫外线照射；
步骤二在超净工作台中吸取少量藻液，均匀涂布到固体培养基表面，敞口放置，待藻液被无菌风吹干；
步骤三再吸取少量甘油，同步骤二，均匀涂布到固体培养基表面，敞口放置，待甘油被无菌风吹干；
步骤四用封口膜将固体板封口，置于23℃，12:12光照条件下，让金藻自由生长；
步骤五一段时间后，待固体培养基中出现金褐色藻落，将固体板转移至4℃冰箱中，倒置放置保存即可。
2.根据权利要求1所述金藻保藏技术，其特征在于，所用到的保藏培养基配方为：尿素40～50mg，磷酸二氢钾8～12mg，硫酸亚铁2～3mg，乙二胺四乙酸二钠8～12mg，f/2维生素1～2ml，琼脂5～7g，灭菌海水1000ml。
3.根据权利要求1所述金藻保藏技术，其特征在于，所述步骤一中，紫外线照射时间为15～25min。
4.根据权利要求1所述金藻保藏技术，其特征在于，所述步骤三中，所用甘油为10％浓度的丙三醇，灭菌后使用。
5.根据权利要求2所述金藻保藏技术所用到的保藏培养基配方，其特征在于，所述f/2维生素为VB1 0.1g/L，VB12 0.5mg/L，生物素0.5mg/L。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107699492A (zh) * 2017-11-09 2018-02-16 福建省微生物研究所 一种小球藻的保藏方法
CN111187745A (zh) * 2020-03-24 2020-05-22 天津商业大学 一种藻类的保藏方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN107699492A (zh) * 2017-11-09 2018-02-16 福建省微生物研究所 一种小球藻的保藏方法
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