CN111187745A - 一种藻类的保藏方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种藻类的保藏方法，属于藻类保藏技术领域，包括：将藻类与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。本发明提供的保藏方法同时具有保藏效果好与操作简洁两个特点。

Description

一种藻类的保藏方法
技术领域
本发明属于藻类保藏技术领域，尤其涉及一种藻类的保藏方法。
背景技术
节旋藻与螺旋藻是重要的经济微藻，广泛应用于食品、饲料、药品、化工以及环保等方面，而经济微藻的研究与养殖离不开藻种保藏，最常用的保藏方法是常温继代保藏法、普通低温保藏法以及超低温保藏法。普通低温保藏法克服了常温继代保藏法的易染菌、藻种易老化和频繁传代的缺点，在低温下(0-10℃)细胞代谢与呼吸作用减弱，可以延长生命周期；同时普通低温保藏法与必须进行多步骤预冷的超低温冷冻保藏相比更方便可行。
普通低温保藏法在进行藻种保藏时藻种会不同程度地受到冷迫害的影响，造成保藏的藻种活力不佳；另外当微藻种类较多时，传统的普通低温保藏法不仅需要加大人力成本来应对频繁的传代，而且原液体藻种占用空间大。在水产养殖中应用浓缩藻液的普通低温保藏法来进行微藻饵料储藏，以减少微藻饵料中营养成分的流失，并且减少空间的占用，但对于微藻是否能够存活以及存活藻种的活力并无要求，因此应用于藻种保藏时并不完全适合。保护剂的加入可以缓解低温对藻种造成的伤害，并延长保藏时长；研究表明弱光照更适合于新生代藻丝体的存在，不仅能够维持藻种的形态，还可以降低藻细胞的死亡率。
但是现有的藻种保藏技术不能同时具有保藏效果好与操作简洁两个特点。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种藻类的保藏方法，本发明提供的保藏方法同时具有保藏效果好与操作简洁两个特点。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种藻类的保藏方法，包括：将藻类与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
优选的，所述琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.6％。
优选的，所述混合物中藻类的浓度数量级范围为105～106CFU/mL。
优选的，所述琼脂保藏液的制备方法包括：将AB基础培养液与A5溶液、PIV溶液混合后，得到AB培养液，将AB培养液与琼脂混合，得到琼脂保藏液；
所述AB基础培养液与A5溶液、PIV溶液的体积比为1000:2:12；
所述AB基础培养液以水为溶剂，每升包括：碳酸氢钠27.22g、碳酸钠8.06g、磷酸二氢钾1g、硝酸钠5g、硫酸钾2g、氯化钠2g、七水合硫酸镁0.4g和二水合氯化钙0.08g；
所述A5溶液以水为溶剂，每升包括：硼酸2.86g、四水合氯化锰1.81g、七水合硫酸锌0.22g、五水合硫酸铜0.074g、钼酸钠0.021g和七水合硫酸锰2.5g；
所述PIV溶液以水为溶剂，每升包括：乙二胺四乙酸二钠0.75g、六水合氯化铁0.097g、四水合氯化锰0.041g、氯化锌0.005g、六水合氯化钴0.002g和二水合钼酸钠0.004g。
优选的，所述藻类的种类包括节旋藻和/或螺旋藻。
本发明提供了一种藻类的保藏方法，包括：将藻类与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
具体实施方式
本发明提供了一种藻类的保藏方法，包括：将藻类与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
在本发明中，所述藻类的种类优选包括节旋藻和/或螺旋藻。本发明对所述藻类的获取方法没有特殊限定，采用常规制备藻类的方法制备得到即可。在本发明中，所述混合物中藻类的浓度数量级范围为105～106CFU/mL。
在本发明中，所述琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量优选为0.6％，所述琼脂的作用是保持水分与分散营养物质，固定与支撑生物体。在本发明中，所述琼脂保藏液的制备方法优选包括：将AB基础培养液与A5溶液、PIV溶液混合后，得到AB培养液，将AB培养液液与琼脂混合，得到琼脂保藏液。在本发明中，所述AB基础培养液与A5溶液、PIV溶液的体积比优选为1000:2:12。在本发明中，所述AB基础培养液以水为溶剂，每升优选包括：碳酸氢钠27.22g、碳酸钠8.06g、磷酸二氢钾1g、硝酸钠5g、硫酸钾2g、氯化钠2g、七水合硫酸镁0.4g和二水合氯化钙0.08g。在本发明中，所述A5溶液优选以水为溶剂，每升优选包括：硼酸2.86g、四水合氯化锰1.81g、七水合硫酸锌0.22g、五水合硫酸铜0.074g、钼酸钠0.021g和七水合硫酸锰2.5g。在本发明中，所述PIV溶液优选以水为溶剂，每升优选包括：乙二胺四乙酸二钠0.75g、六水合氯化铁0.097g、四水合氯化锰0.041g、氯化锌0.005g、六水合氯化钴0.002g和二水合钼酸钠0.004g。在本发明中，所述AB基础培养液中含有藻类生长所需的基本营养物质，A5溶液与PIV溶液中含有藻类生长所需的微量元素，三者配制所得到的AB培养基为藻类生长提供必需营养物质。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(节旋藻、4×105CFU/mL、4℃、4lx、琼脂0.6％)
将节旋藻与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
其中，混合物中节旋藻的浓度为4×105CFU/mL，琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.6％，琼脂保藏液的制备方法为：
(1)AB基础培养液的制备：取1L蒸馏水分为Ⅰ(400mL)、Ⅱ(400mL)、Ⅲ(200mL)三组份，于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，按照表1称量药品：
表1 AB基础培养液的成分
Figure BDA0002423204830000031
Figure BDA0002423204830000041
待灭菌后的无菌水降温至40～50℃，将相应药品加入无菌水中，待三组份都充分溶解后将三组份进行混合，混合液降至室温后，加入A5溶液2mL、PIV溶液12mL，得到混合液。1L的A5溶液及1L的PIV溶液的配制方法如表2所示：
表2 A5溶液及PIV溶液的成分
Figure BDA0002423204830000042
取2mL的AB培养液在50℃水浴锅中温热，将琼脂按照1.2％的浓度加入蒸馏水中于高压灭菌锅中进行灭菌，灭菌完成后取出，在降温前取2mL与温热的混合液混合均匀得到琼脂保藏培养液，冷却至室温后加入保藏藻种，利用移液枪定量移取1mL的标准藻液，枪头插入琼脂保藏培养液中心位置将藻液打入，然后晃动保藏管使藻液在琼脂保藏培养液分散开。
节旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果为见表3：
表3保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000043
实施例2
(节旋藻、2×105CFU/mL、4℃、4lx、琼脂0.4％)
将节旋藻与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
其中，混合物中节旋藻的浓度为2×105CFU/mL，琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.4％，其余保藏步骤同实施例1。
节旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果见表4：
表4保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000051
实施例3
(螺旋藻、4×106CFU/mL、4℃、4lx、琼脂0.6％)
将螺旋藻与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
其中，混合物中螺旋藻的浓度为4×106CFUCFU/mL，琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.6％，其余保藏步骤同实施例1。
螺旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果见表5：
表5保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000052
实施例4
(螺旋藻、2×106CFU/mL、4℃、4lx、琼脂0.4％)
将螺旋藻与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
其中，混合物中螺旋藻的浓度为2×106CFU/mL，琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.4％，其余保藏步骤同实施例1。
螺旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果见表6：
表6保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000061
对比例1
(节旋藻、3×105CFU/mL、4℃、0lx、琼脂0.6％)
将节旋藻与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为0lx下进行保藏。
其中，混合物中节旋藻的浓度为3×105CFU/mL，琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.6％，其余保藏步骤同实施例1。
节旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果见表7：
表7保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000062
对比例2
(节旋藻、4×105CFU/mL、4℃、4lx、海藻糖15％)
将节旋藻与海藻糖保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
其中，混合物中节旋藻的浓度为4×105CFU/mL，海藻糖保藏液中琼脂海藻糖的质量百分含量为15％(保藏菌种的常用范围)，AB培养基配制步骤同实施例1。
取2mL的AB培养基与2mL的30％浓度的海藻糖溶液混合，冷却至室温后加入保藏藻种，利用移液枪定量移取1mL的标准藻液，枪头插入海藻糖保藏培养液中心位置将藻液打入，然后晃动保藏管使藻液在海藻糖培养基分散开。
节旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果见表8：
表8保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000071
对比例3
(螺旋藻、3×106CFU/mL、4℃、0lx、琼脂0.6％)
将螺旋藻与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为0lx下进行保藏。
其中，混合物中螺旋藻的浓度为3×106CFU/mL，琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.6％，其余保藏步骤同实施例1。
螺旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果见表9：
表9保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000072
对比例4
(螺旋藻、4×106CFU/mL、4℃、4lx、脱脂乳15％)
将螺旋藻与脱脂乳保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
其中，混合物中螺旋藻的浓度为4×106CFU/mL，脱脂乳保藏液中琼脂的质量百分含量为15％(保藏菌种的常用范围)，AB培养基配制步骤同实施例1。
取2mL的AB培养基与2mL的30％浓度的脱脂乳溶液混合，冷却至室温后加入保藏藻种，利用移液枪定量移取1mL的标准藻液，枪头插入海藻糖保藏培养液中心位置将藻液打入，然后晃动保藏管使藻液在脱脂乳培养基分散开。
螺旋藻保藏6个月后，求出2-6月保藏藻种的菌种活力指标的均值，结果见表10：
表10保藏藻种的菌种活力指标
Figure BDA0002423204830000081
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种藻类的保藏方法，其特征在于，包括：将藻类与琼脂保藏液混合，将得到的混合物在温度为4℃和光照强度为4lx下进行保藏。
2.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述琼脂保藏液中琼脂的质量百分含量为0.6％。
3.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述混合物中藻类的浓度数量级范围为105～106CFU/mL。
4.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述琼脂保藏液的制备方法包括：将AB基础培养液与A5溶液、PIV溶液混合后，得到混合液，将所述混合液与琼脂混合，得到琼脂保藏液；
所述AB基础培养液与A5溶液、PIV溶液的体积比为1000:2:12；
所述AB基础培养液以水为溶剂，每升包括：碳酸氢钠27.22g、碳酸钠8.06g、磷酸二氢钾1g、硝酸钠5g、硫酸钾2g、氯化钠2g、七水合硫酸镁0.4g和二水合氯化钙0.08g；
所述A5溶液以水为溶剂，每升包括：硼酸2.86g、四水合氯化锰1.81g、七水合硫酸锌0.22g、五水合硫酸铜0.074g、钼酸钠0.021g和七水合硫酸锰2.5g；
所述PIV溶液以水为溶剂，每升包括：乙二胺四乙酸二钠0.75g、六水合氯化铁0.097g、四水合氯化锰0.041g、氯化锌0.005g、六水合氯化钴0.002g和二水合钼酸钠0.004g。
5.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述藻类的种类包括节旋藻和/或螺旋藻。
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