CN1056837C - 取代的2－氨基羧酸化合物、其药物组合物及用途 - Google Patents

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Abstract

通式(I)的5-芳基异唑-4-基或5-芳基异噻唑-4-基取代的2-氨基羧酸化合物，
其中A是一个单键或间隔基；B为-CH(NR′R″)-COOH，其中R′和R″独立地为氢或C1-6烷基，或者B为通式II基团，其中R2，R3和R4为取代基；或者R3和R4或者R4和R2连接而形成一个环；E是O，S，COO，(CH2)n-COO，O-(CH2)n-COO，或S-(CH2)n-COO(其中n是1-6的整数)，5-四唑基，5-四唑基-C1-6烷基，3-羟基-异唑基或3-羟基异唑基-C1-6烷基；D是O或S；以及R1可选择性取代的芳基或杂芳基；该化合物是兴奋性氨基酸受体配体，其可用于治疗脑缺血、享廷顿舞蹈病、癫痫病、帕金森病、早老性痴呆、精神分裂症、疼痛、抑郁及焦虑。

Description

取代的2-氨基羧酸化合物、其药物组合物及用途
发明领域
本发明涉及新的(5-芳基异噁唑-4-基)-取代的2-氨基羧酸衍生物，其为兴奋性氨基酸(EAA)受体配体，其可用于治疗脑缺血、亨廷顿舞蹈病、癫痫病、帕金森病、早老性痴呆、精神分裂症、疼痛、抑郁及焦虑。
发明背景
在过去的三十年中对中枢神经系统(CNS)兴奋性机理的广泛研究至今所达成的公认意见是(S)-谷氨酸(Glu)是CNS中主要的EAA神经递质(Lodge，D.Excitatroy Amino Acid in Health andDisease.J.Wiley & Sons：Chichester，1988；Wheal，H.；Thomson，A.Excitatory Amino Acid Antagonists.Blackwell Sci.Publ.：Oxford，1991；Krogsgaard-Larsen，P.；Hansen，J.J.ExcitatoryAmino Acid Receptors：Design of Agonist and AntagonistsE.Horwood：Chichester，1992)。操纵Glu(Glu-operated)的神经传导是通过大量受体介导的，其至少分为五类不种受体，即NMDA、AMPA、红藻氨酸、metabotropic及L-AP4类受体(Monaghan，D.T.，et al.Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.1989，29，365-402；Watkins，J.C.；Krogsgaard-Larsen，P.；Honore，T.Trends Pharmacol.Sci.1990，11，25-33；Simon，R.P.Excitatory Amino Acids.Thieme Med.Publ.：New York，1992)。
存在有力的证据表明，由EAA受体介导的过度兴奋(“兴奋毒性”)是继中风、头部损伤、窒息、蛛网膜下出血、心博停止及其它症状后脑缺血中的一个重要因素(Lodge，D.，1988 supra；Meldrum，B.S.，1991 supra)。已表明，在动物模型中，由各种缺血症状导致的损伤可以通过给予Glu-拮抗剂而受到抑制。因此，尽管不同类的EAA受体在缺血损伤中的相对重要性尚未明了，但是一般认为EAA受体拮抗剂是上述症状的有效治疗剂。
不同方面的神经化学及药理学的研究表明derailde EAA受体机理(可能诱导了“兴奋毒性”)在亨廷顿舞蹈病中(Young，A.B.；et al.Science 1988，241，981-983)、癫痫病中(krogsgaard-Larsen，P.；Hansen，J.J.，1992 supra)、帕金森病中(klockgether，T.；Turski，L.Trends.Neurosci.1989，12，285-286)和早老性痴呆中(Greenamyre，J.T.；Maragos，W.F.Cerebrovasc.Brain.Metab.Rev.1993，5，Francis，P.T.，et al.J.Neurochem.1993，60，1589-1604)发挥作用。
另外，中枢EAA受体可以参与精神分裂症(Reynolds，G.P.Trends.Pharmacol.Sci.1992，13，116-121)、疼痛和焦虑
(Drejer，J.In：Excitatory Amino Acid Receptors：Design ofAgonists and Antagonists(Eds.Krogsgaard-Larsen，P.；Harsen，J.J.)E.Horwood：Chichester 1992，pp 352-375)及抑郁(Trullas，R.，Skolnick，P.，Eur.J.Pharmacol.1990，185，1-10 and Trullaset al.，Eur.J.Pharmacol.1991，203，379-385)中的的突触机理。因此，EAA减弱的功能(EAA活动减退)似乎在，例如精神分裂症(Deutsch，S.I.；et al.Clin.Neuropharmacol.1989，12，1-13)及早老性痴呆中可见的一些临床症状中(Greenamyre，J.T.；et al.Prog.Neuro-Psychopharmocol.& Bio.Psychiat.1988，12，421-430)发挥作用。可能是“兴奋毒性”以及EAA活动减退都参与了早老性痴呆中的复杂焦虑(Greenamyre，J.T.；1988 supra；Greenamyre，J.T.；Maragos，W.F.，1993，supra)。
因此，认为EAA受体配体可用于治疗脑缺血、亨廷顿舞蹈病、癫痫病、帕金森病、早老性痴呆、精神分裂症、疼痛、抑郁及焦虑。
至今所检测的大多数EAA受体激动剂在模型系统中表现出或多或少的显著神经毒性，因此这些化合物的临床应用受到限制(Carisson，M.；Carisson，A.Trends.Neurosci.1990，13，272-276)(Willetts，J.；Balster，R.L.；Leander，J.D.Trends.Pharmacol.Sci.1990，11，423-428)。
在激动与拮抗中表现出适当平衡的部分EAA激动剂在另一方面对上述适应症具有可观的治疗意义(Greenamyre，J.T.；1988supra；Christensen，I.T.；et al. Drug.Des.Del.1989，5，57-71；Francis，P.T.；et al.J.Neurochem.1993，60，1589-1604)。部分激动剂，由于其EAA拮抗剂的特性，表现出治疗有效的神经保护功能，同时又足以激动而防止部分EAA受体介导的神经传导阻滞。
已公开了ATPA，即AMPA((RS)-2-氨基-3-(3-羟基-5-甲基异恶唑-4-基)丙酸)的5-叔丁基类似物，具有全身活性，但是尚未报道其在动物中表现出神经毒性(Ornstein，P.L.；et al.J.Med.Chem.1993，36，2046-2048；Lauridsen，J.；Honore，T.；krogsgaard-Larsen，P.J.Med.Chem.1985，28，668-672)。
与AMPA类似，已发现一些单环和双环AMPA类似物对AMPA受体具有选择性激动作用(Hansen，J.J.；Krogsgaard-Larsen，P.Med.Rev.1990，10，55-94；Krogsgaard-Larsen，P.；Hansen，J.J.，1992 supra)。这些类似物中其一，(RS)-2-氨基-3-(3-羟基-5-苯基异恶唑-4-基)丙酸(APPA)(其中AMPA的甲基被苯基取代)，表现出弱的但是独特的部分激动剂特征(Christensen，I.T.；et al.，1989，supra).
从以上证据可看出，无神经毒性的可很好的进入CNS的CNS有效EAA受体配体可治疗上述各种疾病，因此提供这些新药物是本发明的目的。
发明概述
已发现一类新的(5-芳基异恶唑-4-基)取代的2-氨基羧酸衍生物为有效的EAA受体配体。
因此，本发明涉及新的(5-芳基异恶唑-4-基)-或者(5-芳基异噻唑-4-基)取代的2-氨基羧酸类化合物，其具有通式I结构：其中A是一个单键或选自C1-6亚烷基，C2-6亚链烯基或C2-6亚炔基(alkynylene)和环烯基；B选自-CH(NR′R″)-COOH，其中R′和R″独立地为氢或C1-6烷基，以及通式II基团：
Figure C9419438800091
其中R2，R3和R4独立地选自a)氢，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，环烷(链烯)基，环烷(链烯)基-C1-6烷(链烯/炔)基，苯基-C1-6烷基，噻吩基-C1-6烷基，以及b)C1-6烷基，C2-6链烯基和C2-6炔基，其中一个或多个碳原子被N、O和/或S取代；或者R3和R4连接而形成C2-6链烯基，C2-6亚链烯基或C2-6亚炔基；或者R4和R2连接而形成C1-3亚烷基，C2-3亚链烯基或C2-3亚炔基(其可选择性被羟基或甲基单取代或二取代)或者CH2-O-CH2；E是O，S，COO，(CH2)n-COO，O-(CH2)n-COO，或S-(CH2)n-COO(其中n是1-6的整数)，5-四唑基，5-四唑基-C1-6烷基，3-羟基-异恶唑基或3-羟基异恶唑基-C1-6烷基；D是O或S；以及R1是芳基或杂芳基或者被一个或多个被选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、C1-6硫代烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基氨基或二-(C1-6烷基)氨基、氰基、硝基、三氟甲基或三氟甲硫基等取代基取代的芳基或杂芳基；前提是当A是亚甲基时，B是-CH(NH2)-COOH，E是O，D是O，并且R1是苯基或被卤素或甲氧基取代的苯基；其次是化合物必须为非对映体的纯形式。
另一方面，本发明涉及通式I新化合物的制备方法。
另一方面，本发明涉及一种含有通式I新化合物和适当药用载体或稀释剂的一种药物组合物。
另一方面，本发明涉及将通式I新化合物用于制备治疗脑缺血、亨廷顿舞蹈病、癫痫病、帕金森病、早老性痴呆、精神分裂症、疼痛、抑郁或焦虑的药物组合物的用途。
已发现本发明的一些化合物在体外是选择性AMPA受体配体(低微摩尔浓度的亲合力)，而另外一些化合物在体外可选择性结合到NMDA受体上。也发现本发明的一些化合物在体外分别对AMPA和NMDA受体都显示出亲合力。另外，已发现本发明的一些化合物为激动剂，而其它为拮抗剂。因此，本发明的化合物可用于治疗脑缺血、亨廷顿舞蹈病、癫痫病、帕金森病、早老性痴呆、精神分裂症、疼痛、抑郁及焦虑。发明详述
通式I的一些化合物可以其光学异构体形式存在，这些异构体也包括在本发明中。
通式I中，C1-6烷基意指1至6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基-2-丙基等。类似地，C2-6链烯基和C2-6炔基代表2至6个碳原子的直链或支链基团；C1-6亚烷基、C2-6亚链烯基和C2-6亚炔基意指支链或直链的二价基团。环烷基代表3-7个碳原子的基团。
术语“烷(链烯/炔)基”意指该基团可以是烷基、链烯基或炔基。
术语“单键”(A的定义)意指B可以直接连接到异恶唑环的4位。
卤素意指氟、氯、溴或碘。
术语“芳基”意指碳环芳香单环或稠合双环或者联苯基；术语“杂芳基”意指含有至少一个杂原子的芳香单环或双环。这种基团的实例为含有1-4个选自N、O和S杂原子的5元芳香杂芳基，例如噻吩基、呋喃基、吡咯基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基、恶二唑基、噻二唑基和四唑基。其它实例有苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、萘基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基和肉啉基。
通式I的一些化合物可以药用盐的形式存在，其同样包括在本发明内。
通式I化合物的盐是与无毒有机酸例如马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏血酸、草酸、酒石酸、乳酸和苹果酸，或者无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和硝酸形成的盐，或者其为无机碱的盐，例如碱金属盐如钠盐、钾盐或锂盐，碱土金属盐如钙盐或镁盐，或铝盐抑或有机碱的盐。
通式I中，A优选为单键或C1-3亚烷基。
B优选为-CH(MR′R″)-COOH，其中R′和R″为氢或通式II基团，其中R2、R3和R4为氢或低级烷基，或者R4和R2连接而形成C1-3亚烷基。更优选的是，B是-CH(NH2)-COOH或R2、R3和R4为氢的通式II基团。
优选地，E是O，COO，-O-(CH2)n-COO(n＝1，2或3)或四唑基，D是氧。
特别适用的R1为噻吩基、取代的噻吩基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、咪唑基、恶二唑基、取代的恶二唑基、噻二唑基、四唑基、三唑基、吡啶基、苯基、联苯基和萘基。优选的基团是2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基和4-吡啶基以及被卤素或甲基取代的2-噻吩基和苯基。
本发明一个优选的实例是A为单键或C1-3亚烷基，B是-CH(NH2)-COOH或R2、R3和R4为氢的通式II基团，E和D为氧，并且R1为2-吡啶基、4-吡啶基、噻吩基、苯基、取代的噻吩基或取代的苯基。
根据本发明，通式I的新化合物的制备方法包括：a)为了获得B为-CH(NR′R″)-COOH基团(其中R′和R″如前定义)的通式I化合物，将通式III化合物脱保护：
Figure C9419438800121
其中，R1、R′、A、D和E如前定义，R5、R7和R8为保护基，R6为氢或保护基；b)为了获得B为-CH(NR′R″)-COOH基团(其中R′和R″如前定义)的通式I化合物，将通式IV化合物脱保护：
Figure C9419438800131
其中，R1、R5、A、D和E如前定义；c)为了获得B为通式II的通式I化合物，将通式V化合物与通式VI进行加成-消除反应：
Figure C9419438800132
其中，R1-R4、A、D和E如前定义，R′5是氢或保护基；d)为了获得B为通式II(其中R4和R2连接而形成C1-3亚烷基，C2- 3亚链烯基或C2-3亚炔基(其可选择性被羟基或甲基单取代或二取代))的通式I化合物，将通式VII化合物
Figure C9419438800141
(其中R1、R3、A、D和E如前定义；R4和R2连接而形成上述基团，BOC是叔丁氧羰基)与3，4-二乙氧基-3-环丁-1，2-二酮反应，接着闭环及脱保护；e)为了获得B是通式II基团，并且一个或多个R2-R4不是氢的通式I化合物，将通式VIII的化合物烷基化：
Figure C9419438800142
其中，R1、R2、R3、R4、A、D和E如前定义，并且至少一个R2-R4是氢，R′5是氢或保护基。
本发明的方法中，优选的保护基如下：R5和R′5：低级烷基、苄基或苯磺酰基；R6：低级烷氧羰基，R7：低级烷基，以及R8：低级烷基羰基。
方法a)的一步脱保护是通过用适当的酸水溶液(方便起见，48％的HBr水溶液，HBr饱和水溶液、乙酸或2-12N的HCl水溶液)处理通式III化合物而进行的。脱保护也可通过使用酸和碱水溶液(方便起见，在酸水溶液如1-12N的HCl，碱水溶液如1-8N的NaOH和酸水溶液如1-12N的HCl中连续进行，或者在碱水溶液如1-8N的NaOH和酸水溶液如1-12N的HCl中连续进行)以连续步骤进行。当R5是苄基时，E基团的脱保护可以通过催化氢化来完成，方便起见用钯作为催化剂，或者在将α-氨基酸脱保护之前或之后进行。
通式III的起始物可如Christensen，I.T，et al，Drug Design andDelivery 1989，5，57-71 and Christensen，S.B.er al，Acta.Chem.Scand.1978，B32，27-30中所述而易于获得。E为是O，S，COO，(CH2)n-COO，O-(CH2)n-COO，或S-(CH2)n-COO(其中n是1-6的整数)，5-四唑基，5-四唑基-C1-6烷基、3-羟基-异恶唑基或3-羟基异恶唑基-C1-6烷基的通式III化合物的起始物可如Krogsgaard-Larsen，P.，er al.，J.Med.Chem.1991，34，123-130，Madsen，U.，Bio.Med.Chem.lett.1993，8，1649-1654 and Madsen，U.and Wong，E.J.Med.Chem，1992，35，107-111中所述而易于获得。
R1是杂芳基的通式III的起始物(其在酸环境中不稳定)可以从(3-烷氧基-4-甲基异恶唑-5-基)羧酸通过在5位形成芳杂基、将4-甲基异恶唑基溴化然后与氨基酸前体如乙酰氨基丙二酸二乙胺进行烷基化制备而得。烷基保护的3-羟基异恶唑基可以在异恶唑的5位合成芳杂基之前、之中或之后用或不用适当的保护基如苯磺酰基再进行保护。(3-烷氧基-4-甲基异恶唑-5-基)羧酸可以如Hansen，J.J.，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，1980，1826-33所述从3-烷氧基-4，5-二甲基异恶唑通过将5-甲基异恶唑基溴化及氧化成相应的5-异恶唑羧酸化合物制备而得。
当R1是吡啶基的通式III的起始物是通过如K.Tomita，Ann.Sankyo Res.Lab.，1973，25，3-5所述的改进方法制备而得。在异恶唑环的4位引入羟甲基后对3-羟基-5-芳基异恶唑中3-羟基的保护可以形成一个中间体，其易于转化为通式III的起始物。
b)中的一步脱保护是通过将通式IV化合物用适当的酸或碱水溶液(方便起见，2-8N的盐酸水溶液)处理而进行的。脱保护也可通过如上方法a)所述的酸溶液和碱溶液以连续步骤进行。乙内酰脲环可以通过使用Ba(OH)2水溶液、10-70％的硫酸水溶液或者通过使用酶如乙内酰脲酶而开环。乙内酰脲环的开裂可以在E基团脱保护之前或之后进行。
通式IV化合物中的乙内酰脲环按照Ware，E.，Chem.Rev.1950，46，403-470所述的方法形成。乙内酰脲环的开裂按照Curry，K.etal  J.Med.Chem.1988，31，864-867，Farrington.G.K.et al，J.Med.Chem.1987，30，2062-2067，Gruneward，G.L.et al.J.Med.Chem.1980，23，754-758，Hiroi，K.et al，Chem，Pharm.Bull，1968，16，444-447 or Stark，G.R.et al，J.Biol.Chem.1963，238，214-226所述的类似方法而进行。
制备通式IV化合物的起始物可以按照Madsen，U.，Eur.J.Med.Chem.1993，28，791-800所述的类似方法而获得。
当R5是苄基时，E基团的脱保护可以通过氢化而获得，其中用钯作为催化剂。
方法c)的加成-消除反应可以在protic有机溶剂如乙醇中进行，优选在适当无机碱如NaOH水溶液的存在下于室温进行。通式VI的中间体可以按照Cohen，S.et al，J.Amer.Chem.Soc.1966，88，1533-1536，EP-A2-0496561 or Kinney，W.A.et al，J.Med.Chem.1992，35，4720-4726所述的方法制备而得。
通式V的中间体可以通过Sheehan，J.C.et al.，J.Am.Chem.Soc.，1950，72，2786-88所述的伯胺Gabriel合成法获得。该合成中的烷基卤化物起始物可以按照上述有关用于方法a)的起始物而获得。
通过使用酸或碱水溶液，优选0.5-8N的盐酸或0.5-8N的氢氧化钠水溶液在室温或较高温度而进行脱保护。当R′5是苄基时，脱保护通过氢化而进行，其中用钯作为催化剂。
方法d)中，反应和随后的闭环及脱保护Kinney et al.，EP-A2-0496561所述进行。
通式VII的起始物可以通过将例如4-溴甲基异恶唑(由方法a)中所述有关起始物获得)与单-BOC-保护的亚烷基二胺(EP-A2-0496561)反应而得。
方法e)中通式VIII化合物的烷化如Kinney，W.A.，EP-A2-0496561所述在惰性有机溶剂如适当的醇、酮或二甲亚砜，优选在适当碱如氢化钠、碳酸钾或三乙胺的存在下进行。通式VIII的起始物通过方法c)获得。
当β-酮酯用作形成3-羟基异恶唑(其又用作获得化合物III-V以及VII-VIII的起始物)的起始物时，其可以市售得到或者按照Cason，J.et al，J.Org.Chem.1953，18，1594-1600 and Hannick，S.M.et al，J.Org.Chem.1983，48，3833-3835所述的方法制备而得。相应的异恶唑起始物可以按照EP-A1-033655中所述的方法制备而得。
通过用光学活性的酸或碱(如1-苯乙胺)形成非对映体盐而进行通式I化合物的解析。在某些情况下，通过形成非对映体化合物及随后通过闪式色谱或结晶分离非对映体而完成解析。
本发明化合物的盐可以通过本领域熟知的方法制备而得，即将该化合物与等量的酸或碱在水可混溶溶剂如丙酮或乙醇中反应，浓缩冷却分离盐，或者与过量的酸或碱在水不混溶溶剂如乙醚或氯仿中反应，直接分离所需的盐。这些盐也可以通过传统方法将适当的盐进行复分解制备而得。
通式I化合物及其药用酸加成盐可以任何适当的方式给药，例如口服或非肠道给药，而且该化合物可以任何适当的给药形式存在，例如片剂、胶囊、粉剂、糖浆或溶液剂或者注射用分散剂等形式。
通式I化合物或其药用盐的有效日剂量为10μg/kg至50mg/kg体重。
实施例
下面通过实施例的方式进一步阐述本发明，但是不应理解为其限定了本发明。
所有的熔点都由Buchi SMP-20仪器确定，而且都未校正。在Brucker 250MHz的分光计上记录1H NMR和13C NMR谱(1HNMR为250.13MHz，13C NMR为62.90MHz)，除非另外说明，TMS作为内标。对于标题化合物13a，13b，14c和14d，在Brucker 200MHz分光计上记录1H NMR和13C NMR谱(1HNMR为200.0MHz，13C NMR为50.3MHz)，除非另外说明，TMS作为内标。
质谱由VG Biotech，Fisons Instruments，Manchester，GB的Quattro MS-MS系统获得。MS-MS系统与HP 1050调制HPLC系统相连。将溶于乙腈/水/浓氨水(25％)＝25∶25∶1(v/v/v)混合物中的20-50微升样品(0.1-0.05毫克/毫升)经自动进样器以30微升/分钟的流速引入电喷射源中。在标准操作状态获得分子量信息(MH+)的谱图。减去本底。通过手性HPLC(利用手性冠醚柱)确定对映体化合物的对映体余量(ee)。手性HPLC在150-×4-mm Crownpak CR(-)或Crownpak CR(+)柱(Daicel)上进行，在15-40℃用含水高氯酸/甲醇(100-85％/0-15％)以0.4-1.0毫升/分钟洗脱。使用下述其一仪器状态：1)Jasco 880-PU泵，Rheodyne 7125注射器，Waters 480 UV检测器，波长210纳米，连接到Merck-Hitachi D-2000色谱-积分仪上。2)Hitachi-Merch L-6200泵，Hitachi-Merch 655A-40自动进样器和Hitachi-Merch L-4000 UV检测器，波长205纳米，连接到Hitachi-Merch D-2500积分仪上。
从峰区计算对映体纯度。实施例1(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，1a
将2-溴噻吩(250.0克，1.53摩尔)和CuCN(157.5克，1.76摩尔)的混合物于NMP(625毫升)回流下煮90分钟。将混合物冷却至100℃，倒入NaCN的热水溶液(2.5升水中有150克NaCN)中。将此混合物在80℃猛烈搅拌30分钟，趁热过滤。冷却后的混合物用乙醚萃取(3×2升)并在真空中减至1.5升。有机相用水(750毫升)和含水饱和NaCl溶液(750毫升)洗涤。干燥(硫酸镁)有机相并于真空中浓缩而得红色/紫色油，将其减压(1mmHg)蒸馏即得2-噻吩腈(105.3克，63％)。
将2-噻吩腈(25.0克)、活化锌(22.5克)和CuBr2(0.2克；0.9毫摩尔)的苯(350毫升)溶液的混合物加热至回流温度(83℃)。在83℃经60分钟加入2-溴丙酸(62.2克)的苯(150毫升)溶液。将所得混合物回流2小时，冷却至0℃。经60分钟(温度＜10℃)加入含水硫酸(400毫升)，在20℃将混合物搅拌20小时。过滤混合物并分离各相。水相用乙醚萃取(2×500毫升)，干燥(硫酸镁)合并的有机相，真空蒸发。柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇＝4∶4∶1)后即得油状2-甲基-3-(2-噻吩基)-3-氧代丙酸乙酯(35.0克；72％)。
将2-甲基-3-(2-噻吩基)-3-氧代丙酸乙酯(25.3克)和NaOH(5.0克，0.12摩尔)的甲醇/水(10∶1，200毫升)溶液的混合物冷却至-30℃。加入冰冷却(0℃)过滤后的NH2OH，HCl(16.6克)和NaOH(10.0克)的甲醇/水溶液(10∶1，200毫升)的混合物，将所得溶液于-30℃搅拌3小时。使该溶液升温至5℃，然后在80℃经45分钟加入浓盐酸(280毫升)。所得混合物于80℃回流1小时。蒸发掉甲醇并加入水(250毫升)。将该溶液冷却至5℃，过滤收集所得晶体。将此晶体溶于CH2Cl2(500毫升)。干燥(硫酸镁)有机相，于真空中蒸发即得4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-醇(12.0克；55％)。
将4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-醇(12.5克)和K2CO3(14.4克)的丙酮溶液的悬浮液加热至回流温度。于回流温度经25分钟加入溴乙烷(8.0克)，将所得混合物回流3小时。再加入一份溴乙烷(8.0克)并将所得混合物回流3小时。过滤除去溶剂后，将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷＝1∶1)，分离得油状3-乙氧基-4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑(7.3克；51％)。
将3-乙氧基-4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑(5.1克)和N-溴琥珀酰亚胺(NBS)(5.1克)的CCl4(400毫升)溶液的混合物回流18小时。过滤除去溶剂后即得4-溴甲基-3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑(7.8克；100％)。
在乙酰氨基丙二酸二乙酯(4.6克)和叔丁醇钾(2.4克)的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(100毫升)溶液的混合物中于22℃加入4-溴甲基-3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑(3.0克)的NMP(25毫升)溶液。将所得混合物于22℃搅拌1小时后倒入冰水混合物中。水相用乙醚萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤。干燥(硫酸镁)有机相并在真空中蒸发。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇＝5∶5∶1)后即得2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(3.0克；68％)。
将2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(2.7克)和48％HBr(20毫升)的混合物回流1小时。将该混合物在真空中蒸发并将残余物溶于水(50毫升)，用活性炭处理。过滤后，用4N的含水NaOH将pH值调至3。过滤收集所得晶体，真空干燥即得标题化合物，la，(0.5克；30％)。熔点237-39℃(分解)，CHN；计算值：47.23；3.97；11.02，实测值：47.21；4.02；10.92。1H NMR(DMSO-d6)：δ9.90(b，1H)，7.82(dd，1H)，7.55(dd，1H)，7.24(dd，1H)，3.70(dd，1H)，2.95-2.88(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)：δ171.42，171.23，159.62，129.27，128.65，128.22，127.15，101.89，52.59，24.99.
以类似方式制备下述化合物：(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(3-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，1b，熔点：239-40℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.03-7.96(m，1H)，7.76-7.70(m，1H)，7.48-7.43(m，1H)，3.70-3.63(m，1H)，3.00-2.76(m，2H).
以类似方式用苯磺酰基作为3-羟基异恶唑基团的保护基而制备下述化合物：(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-萘基)异恶唑-4-基]丙酸，水合物，1c。熔点：235-37℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ2.89-3.16(m，2H)；3.70-3.77(m，1H)；7.56-7.63(m，2H)；7.74(dd，1H)；7.92-8.09(m，3H)；8.22(s，1H).13C NMR(DMSO-d6)：δ25.10；53.03；103.03；124.30；125.90；126.89；126，96；127.45；127.79；128.70(2C)；132.74；133.18；164.67；171.41；171.54MS(MH+)m/z：299.(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(4-三氟甲基苯基)异恶唑-4-基]丙酸，1d。熔点：237-39℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ2.80(dd，1H)；2.97(dd，1H)；3.71(dd，1H)；7.87(S，4H)13C NMR(DMSO-d6，5％CF3COOH)δ23.35；50.94；101.72；121.94；126.11；126.16；127.77(2C)；130.34(q，CF3)；131.74；184.13；170.29(2C).MS(MH+)m/z：317.(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(3-苯并[b]噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，半水合物，1e。熔点：222-24℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ2.75(dd，1H)；2.96(dd，1H)；3.70(dd，1H)；7.43-7.55(m，2H)；7.96-8.03(m，1H)；8.05-8.14(m，1H)；8.21(s，1H).13C NMR(DMSO-d6)：δ25.02；52.95；104.05；123.17；123.34；123.67；125.27(2C)；129.49；136.80；139.35；161.49；171.11；171.31.MS(MH+)m/z：305.以类似方式从2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸通过将5位的噻吩基锂化和甲基化，随后通过煮沸的47％HBr(含水)脱保护而制备下述化合物。(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(5-甲基-2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，水合物，1f。熔点：242-44℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ2.51(s，3H)；2.84-2.93(m，2H)；3.63-3.72(m，1H)；6.94(dd，1H)；7.33(d，1H).13C NMR(DMSO-d6)：δ14.91；24.95；52.62；101.24；126.63；126.88；127.23；142.33；159.71；171.20；171.31.MS(MH+)m/z：269.实施例2(RS)-2-氨基-2-(3-羟基-5-苯基异恶唑-4-基)乙酸，2a
将如Christensen，I.T.1989，supra所制备的3-乙氧基-4-甲基-5-苯基异恶唑(3.0克；15毫摩尔)、NBS(5.5克；31毫摩尔)和过氧化二苯甲酰(0.2克；0.8毫摩尔)的CCl4(100毫升)溶液的混合物回流20小时。将该混合物冷却至环境温度，过滤，真空蒸发。将残余物溶于水(95毫升)，回流20小时。冷却后，用乙醚萃取水相(3×100毫升)。干燥(硫酸钠)合并的有机相，真空蒸发即得4-(3-乙氧基-5-苯基异恶唑)羰醛(carbaldehyde)(2.4克；75％)。
将4-(3-乙氧基-5-苯基异恶唑)羰醛(1.9克；8.7毫摩尔)、KCN(2.7克；40.5毫摩尔)或(NH4)2CO3(7.8克；81.1毫摩尔)的50％含水甲醇溶液的混合物回流6小时。真空蒸发甲醇，水相用乙酸乙酯萃取(3×150毫升)。干燥(硫酸钠)合并的有机相，真空蒸发除去溶剂。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇＝5∶5∶1)后即得3-乙氧基-4-[5-(咪唑啉-2，4-二酮)]-5-苯基异恶唑(1.0克；40％)。
将3-乙氧基-4-[5-(咪唑啉-2，4-二酮)]-5-苯基异恶唑(800毫克；2.8毫摩尔)的6N含水HCl(20含水；120毫摩尔)溶液的悬浮液回流48小时。将该混合物于真空中蒸发，残余物溶于水(200毫升)和三乙胺(TEA)(870毫克；8.5毫摩尔)。加入二叔丁基碳酸氢盐(Di-tert-butyl dicarbonate)(930毫克；4.3毫摩尔)的四氢呋喃(THF)(50毫升)溶液，将所得溶液于20℃搅拌20小时。真空蒸发掉THF，用0.1N的含水盐酸将pH值调至6.5。水相用乙醚萃取，分离。水相的pH值用0.1N的含水HCl调节至2，用乙醚萃取水相(3×100毫升)。干燥(硫酸钠)合并的有机相，真空蒸发。将残余物溶于乙醚(40毫升)，加入HCl的乙醚饱和溶液。将所得的混合物于20℃搅拌20小时。过滤收集沉淀物并干燥。将晶体溶于水(5毫升)，调节pH值至3。过滤收集沉淀物，干燥而得标题化合物，2a，(100毫克；15％)。熔点228-230℃(分解)。CHN；计算值：56.40；4.31；11.96，实测值：56.20；4.37；11.74。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.83-7.68(m，2H)，7.64-7.40(m，3H)，5.12-4.95(m，1H)，3.90(broad).13C NMR(DMSO-d6)：δ169.10，168.38，168.31，131.39，129.60(2C)，127.73(2C)，126.95，99.69，46.06.
以类似方式从相应的4-异恶唑溴甲基化合物利用热(115℃)二甲亚砜和碳酸氢钠制备4-异恶唑羰醛而制备下述化合物。(RS)-2-氯基-2-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]乙酸，2b。熔点：191-193℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ4.50(s，1H)，7.26(dd，1H)，7.77(d，1H)，7.84(d，1H).13C NMR(HCl salt)(DMSO-d6)δ46.16，98.87，127.62，129.15，129.83，131.20，163.56，168.45，169.39.MS(MH+)m/z：241.(RS)-2-氨基-2-[3-羟基-5-(4-三氟甲基苯基)异恶唑-4-基]乙酸，水合物，2c。熔点：200-201℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：4.46(s，1H)；7.92(d，2H)；8.11(d，2H).13C NMR(HCl salt)(DMSO-d6)：45.84；101.16；121.98；126.43；126.50；128.76(2C)；130.75；131.00(q，CF3)；166.75；168.20；169.21.MS(MH+)m/z：303.实施例3(RS)-2-氨基-5-(3-羟基-5-苯基异恶唑-4-基)戊酸，3a
标题化合物是以Christensen，I.T.et al，Drug Design andDelivery 1989，5，57-71中所描述的方法类似制备的，只是作了如下修饰：1)苯甲酰乙酸乙酯用作起始物。2)中间体5-苯基-4-(2-丙烯基)-3-异恶唑中的异恶唑环按照Sato，K.et al，Agric，Biol.Chem.1986，50，1831-1837中的方法制备。3)标题化合物3a的两性离子是通过用0.1N的含水NaOH将水相的pH值调节至3.5而获得的。熔点210-212℃(分解)，CHN；计算值：54.62；6.40；9.10，实测值：54.67；6.36；9.13。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.72-7.61(m，2H)，7.59-7.43(m，3H)，3.64-3.40(m，2H)，3.50(broad)，3.31-3.19(m，1H)，1.82-1.53(m，4H).13C NMR(DMSO-d6)：δ170.75，163.44，161.65，129.72，129.23(2C)，128.58，126.19(2C)，105.68，53.93，30.57，25.13，20.88.实施例4(RS)-2-氨基-4-[5-(4-氟苯基)-3-羟基异恶唑-4-基]丁酸，4a
β-酮酯，3-氧代-3-(4-氟苯基)丙酸乙酯是按实施例1所述的类似方法利用4-氟苄腈(25.0克；0.21摩尔)、2-溴乙酸乙酯(51.7克；0.31摩尔)、活化锌(20.3克；0.31摩尔)、CuBr2(0.2克；0.9毫摩尔)和苯(500毫升)制备而成。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇＝5∶5∶1)即得油状3-氧代-3-(4-氟苯基)丙酸乙酯(28.0克；65％)。
在NaH(4.4克；0.15摩尔，80％在矿物油中)的乙醇(500毫升)溶液中加入3-氧代-3-(4-氟苯基)丙酸乙酯(28.0克；0.13摩尔)。将所得溶液在25℃搅拌1.5小时。在25℃经30分钟加入3-氯代丙酸乙酯(20.0克；0.15摩尔)，将混合物回流20小时。蒸发除去溶剂，残余物溶于水(400毫升)中，用乙酸乙酯萃取。干燥(硫酸镁)合并的有机相并在真空中蒸发。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇＝4∶4∶1)即得4-乙氧羰基-5-(4-氟苯基)-5-氧代戊酸乙酯(27.5克；67％)。
3-[5-(4-氟苯基)-3-羟基异恶唑-4-基]丙酸乙酯是按实施例所述的方法类似制备而得，只是进行了下述修饰：1)4-乙氧羰基-5-(4-氟苯基)-5-氧代戊酸乙酯(27.5克；89毫摩尔)作为起始物。2)将甲醇从甲醇/水溶液中蒸发后，用乙醚萃取水相。干燥(硫酸镁)合并的有机相并在真空中蒸发。将残余物溶于乙醇(400毫升)中并加入乙酰基氯(40毫升)。将所得混合物过滤20小时，冷却，在真空中蒸发除去溶剂。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇＝2∶2∶1)即得3-[5-(4-氟苯基)-3-羟基异恶唑-4-基]丙酸乙酯(9.3克；31％)。
3-[3-乙氧基-5-(4-氟苯基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯是按实施例1所述的方法制备而得，只是进行了下述修饰：1)3-[5-(4-氟苯基)-3-羟基异恶唑-4-基]丙酸乙酯(5.5克；20毫摩尔)作为起始物。2)只加入一当量的溴乙烷而不是两当量。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇＝10∶10∶1)即得3-[3-乙氧基-5-(4-氟苯基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(4.0克；65％)。
3-[3-乙氧基-5-(4-氟苯基)异恶唑-4-基]丙醛是按照Rich，D.H.etal，J.Org.Chen.1978，43，3624-3626中所述的方法从3-[3-乙氧基-5-(4-氟苯基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯制备而得的。
3-乙氧基-5-(4-氟苯基)-4-[2-[5-(咪唑啉-2，4-二酮)]乙基]异恶唑是按实施例所述方法用相应的醛作为起始物制备而得的。将所得的粗产物从乙醇中重结晶两次即得纯净产物。
标题化合物，4a，按照实施例2所述的类似方法从乙内酰脲制备而得，产率为19％。熔点235-237℃(分解)。CHN；计算值：55.71；4.68；10.00，实测值：54.59；4.61；9.97。1H NMR(DMSO-d6，340°K)：δ7.78-7.54(m，2H)，7.39-7.19(m，2H)，5.92(b)，3.35-3.18(m，1H)，2.81-2.53(m，2H)，2.04-1.70(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)：δ172.19，170.79，164.70 and 160.76(C-F)，162.96，128.64，128.50，125.13，116.55，116.21，104.52，52.35，31.44，17.81.
以类似方式制备如下化合物：(RS)-2-氨基-4-(3-羟基-5-苯基异恶唑-4-基)丁酸，氢氯化物，4b。熔点230-233℃(分解)。1H NMR(D2O)：δ7.59-7.48(m，2H)，7.47-7.32(m，3H)，3.61-3.50(m，1H)，2.57-2.41(m，2H)，2.08-1.90(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)：δ179.12，176.64，161.12，130.41，128.79(2C)，128.13，125.72(2C)，107.13，53.31，32.97，18.62.(RS)-2-氨基-4-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丁酸，水合物，4c。熔点214-216℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6，320°K)：δ7.84-7.73(m，1H)，7.59-7.45(m，1H)，7.29-7.18(m，1H)，3.50(very broad)，3.32-3.10(m，1H)，2.93-2.60(m，2H)，2.00-1.75(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)：δ172.11，170.64，159.47，129.41，128.41(2C)，126.35，103.73，52.42，30.76，17.93.(RS)-2-氨基-4-[3-羟基-5-(3-噻吩基)异恶唑-4-基]丁酸，4d。熔点212-14℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.02-7.95(m，1H)，7.78-7.72(m，1H)，7.48-7.43(m，1H)，3.28-3,16(m，1H)，2.93-2.77(m，1H)，2.75-2.54(m，1H)，2.00-1.75(m，2H).(RS)-2-氨基-4-[3-羟基-5-(2-萘基)异恶唑-4-基]丁酸，水合物，4e。熔点209-11℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.87-2.05(m，2H)；2.60-2.85(m，2H)；2.90-3.06(m，1H)；7.56-7.66(m，2H)；7.80(dd，1H)；7.93-8.16(m，3H)；8.26(s，1H).13C NMR(DMSO-d6)：δ17.92；31.50；52.40；105.02；123.21；125.66；125.95；127.04；127.44；127.76；128.75；128.91；132.82；133.09；163.71；170.70；172.30.MS(MH+)m/z：313.实施例54-[(2-氨基-3，4-二氧代-1-环丁烯-1-基)氨基甲基]-3-羟基-5-苯基异恶唑，半水合物，5a
在90℃于苯邻二甲酰亚胺钾(1.0克；5.4毫摩尔)的DMF(50毫升)溶液的混合物中加入4-溴甲基-3-乙氧基-5-苯基异恶唑(1.4克；5.0毫摩尔)的DMF(25毫升)溶液。4-溴甲基-3-乙氧基-5-苯基异恶唑按照类似上述制备4-溴甲基-3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑的方法制备而得。将所得混合物在90℃搅拌40分钟。加入二氯甲烷(200毫升)并将混合物倒入水中。分离各相，用乙醚萃取水相。合并的有机相用0.1N的含水NaOH和水洗涤，干燥(硫酸钠)并在真空中蒸发即得N-[(3-乙氧基-5-苯基异恶唑-4-基)甲基]苯邻二甲酰亚胺(1.5克；88％)。
将N-[(3-乙氧基-5-苯基异恶唑-4-基)甲基]苯邻二甲酰亚胺(1.3克；3.7毫摩尔)的48％HBr溶液(20毫升)和乙酸(20毫升)的悬浮液在110℃搅拌6小时。真空蒸发混合物，将残余物溶于水中。用乙醚萃取水相，分离。将水相于真空中蒸发，将丙酮(5毫升)加到残余物中。过滤收集沉淀物，干燥而得4-氯基甲基-5-苯基-3-异恶唑的氢溴化物(700毫克；70％)。
在3-氨基-4-乙氧基-3-环丁烯-1，2-二酮(365毫克)(按照Cohen，S.et al，J.Amer.Chem.Soc.1966，88，1533-1536中所述的方法制备)和4-氨基甲基-5-苯基-3-异恶唑的氢溴化物(700毫克；2.6毫摩尔)的乙醇(75毫升)溶液中在22℃加入NaOH(210毫克；5.2毫摩尔)的水(5毫升)溶液。将所得混合物于22℃搅拌4小时。蒸发掉溶剂，将残余物溶于水(200毫升)中。将水相的pH值调至8.5。用乙醚萃取水相，分离。调pH至3.75，过滤收集沉淀物，干燥而得标题化合物5a(675毫克；92％)。熔点259-61℃(分解)，CHN；计算值：57.13；4.12；14.28，实测值：57.70；3.85；14.29。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.81-7.24(m，5H)，4.78-4.56(m，2H)，3.5(s，very broad).13C NMR(DMSO-d6)：δ183.34，183.21，170.14，169.48，168.29，165.84，130.58，129.32(2c)，127.51，126.72(2c)，102.52，35.46.
以类似方式制备如下化合物：4-[(2-氨基-3，4-二氧代-环丁烯-1-基)氨基甲基]-3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑，5b，熔点237-39℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.88(dd，1H)，7.67(dd，1H)，7.26(dd，1H)，4.78-4.63(m，2H)，3.30(s，very broad).13C NMR(DMSO-d6)：δ183.36，183.18，169.97，169.51，168.23，161.29，129.80，128.59，128.25，127.82，101.41，35.20.4-[(2-氨基-3，4-二氧代-环丁烯-1-基)氨基甲基]-3-羟基-5-(3-噻吩基)异恶唑，5c，熔点276-78℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.16-8.13(m，1H)，7.82-7.77(m，1H)，7.56-7.50(m，1H)，4.76-4.66(m，2H).4-[(2-氨基-3，4-二氧代-环丁烯-1-基)氨基甲基]-3-羟基-5-(4-三氟甲基苯基)异恶唑，5d，熔点269-72℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ4.72(d，2H)；7.93(dd，4H).13C NMR(DMSO-d6)：δ35.29；104.19；121.75；126.12；126.17；127.60(2C)；130.25(q，CF3)；131.11；164.09；168.21；169.51；170.11；183.29(2C).MS(MH+)m/z：354.实施例64-[2-[(2-氨基-3，4-二氧代-环丁烯-1-基)氨基]甲基]-3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑，水合物，6a
将氰化钠(4.0克；81毫摩尔)的DMSO(50毫升)混合物加热至90℃。将4-溴甲基-3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑(4.9克；16毫摩尔)的DMSO(50毫升)溶液滴加入此热反应混合物中。将反应混合物继续搅拌30分钟，然后倒入冰水混合物中。水相用二氯甲烷萃取，合并的有机相用饱和NaCl溶液洗涤。干燥(硫酸镁)有机相并在真空中蒸发。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷＝1∶3)后即得(3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑)乙腈(2.2克；58％)。
将AlCl3(1.2克；9毫摩尔)的无水乙醚(50毫升)混合物滴加入LiAlH4(0.34克；9毫摩尔)的无水乙醚(50毫升)混合物中。将反应混合物在室温继续搅拌10分钟。将[3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑]乙腈(2.0克；9毫摩尔)的无水乙醚(50毫升)混合物加入该搅拌下的溶液中，继续搅拌反应混合物45分钟。将反应混合物冷却至5℃，加入水(30毫升)和6M硫酸(5毫升)。用6M的NaOH使酸性水溶液的pH值升至11。分离各相，水相用乙醚萃取。干燥(硫酸镁)合并的有机相并在真空中蒸发。将残余物进行柱色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/甲醇/三乙胺＝90∶10∶5∶5)后即得4-(2-氨基-乙基)-3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑(1.7克；76％)。
将4-(2-氨基-乙基)-3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑(1.7克；7毫摩尔)和47％的HBr(水溶液)的混合物回流1小时。真空蒸发反应混合物，加入丙酮。过滤收集所得晶体，在真空中干燥即得4-(2-氨基-乙基)-3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑的氢溴化物(1.9克；94％)。
于22℃在如上制备的3-氨基-4-乙氧基-3-环丁烯-1，2-二酮(480毫克；3.4毫摩尔)和4-(2-氨基-乙基)-3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑的氢溴化物(1.0克；3.4毫摩尔)的乙醇(30毫升)溶液中加入NaOH(270毫克；6.8毫摩尔)的水(5毫升)溶液。将所得溶液于室温下搅拌18小时。真空蒸发反应混合物，加入水和乙醚。分离各相，用乙醚萃取水相，分离。用2M的盐酸将水相酸化至pH2.5，于5℃放置18小时。过滤收集形成的晶体，用水丙酮和乙醚洗涤。将晶体在真空中干燥即得标题化合物，6a(906毫克，87％)。熔点248-50℃(分解)。CHN；计算值：50.39；3.75；13.57，实测值：50.66；3.72；13.55。1H NMR(DMSO-d6)：δ2.77(dd，2H)；3.51-3.78(m，2H)；7.22(dd，1H)；7.57(d，1H)；7.81(d，1H).13C NMR(DMSO-d6)：δ24.12；42.06；102.06；126.65；127.94；128 53；129.00；160.41；168.65；169.41；170.05；182.82；183.00.MS(MH+)m/z：306.实施例7(RS)-2-氨基-3-[3-(羧基甲氧基)-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，一水合物，7a
将如上制备的4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-醇(10.0克，55毫摩尔)和碳酸钾(19.1克，138毫摩尔)的丙酮溶液悬浮液于室温搅拌30分钟，然后加热至回流温度。经45分钟加入氯代乙酸乙酯(17.6毫升，166毫摩尔)的丙酮(125毫升)溶液，将所得混合物回流煮沸210分钟。冷却该混合物至5℃，过滤，真空浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(500毫升)，用水(2×500毫升)和饱和NaCl水溶液(500毫升)洗涤。干燥(硫酸镁)有机相，真空浓缩。真空浓缩后进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：正己烷/乙酸乙酯/甲醇＝20∶10∶1)即得[4-甲基-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸乙酯(8.7克，59％)。
将[4-甲基-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸乙酯(2.5克，9.4毫摩尔)和NBS(2.0克，11.2毫摩尔)的四氯化碳(125毫升)溶液的混合物回流煮沸8小时。冷却混合物，过滤，真空浓缩而得[4-溴甲基-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸乙酯(2.8克，88％)。
将乙酰氨基丙二酸二乙酯(3.5克，16.2毫摩尔)和叔丁醇钾(0.9克，17.0毫摩尔)的NMP(30毫升)溶液的混合物室温(25℃)搅拌30分钟。加入(温度25-28℃)[4-溴甲基-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸乙酯(2.8克，8.1毫摩尔)的NMP(5毫升)溶液并将所得混合物于28℃搅拌1小时，然后倒入冰水混合物(250毫升)中。用乙醚萃取水相(3×200毫升)，合并的有机相用饱和NaCl水溶液(200毫升)洗涤，干燥(硫酸镁)，真空浓缩。闪式色谱(硅胶，洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯＝7∶1)后得到2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-[(乙氧羰基)甲氧基]-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(2.3克，59％)。
将2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-[(乙氧羰基)甲氧基]-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(2.0克，4.1毫摩尔)的1M盐酸(130毫升)悬浮液回流煮沸24小时。将反应混合物冷却，用二氯甲烷萃取(2×150毫升)并用活性炭处理。真空浓缩后即得标题化合物的盐酸盐(1.2克，86％)。加入水即得标题化合物7a(1.0克，71％)。熔点228-230℃(分解)。CHN；计算值：43.64；4.27；8.48，实测值：43.07；4.17；8.43。1H NMR(DMSO-d6)δ2.86-3.28(m，2H)，3.79(dd，1H)，4.69(s，2H)，7.26(dd，1H)，7.69(dd，1H)，7.86(dd，1H).13C NMR(DMSO-d6)δ23.50，52.42，67.39，100.45，127.91，128.23，128.48，129.47，161.44，169.63，170.14，170.57.MS(MH+)m/z：313.以类似方式用4-溴丁酸乙酯作为烷化剂取代氯代乙酸乙酯而制备下述化合物：(RS)-2-氨基-3-[3-(羧基丙氧基)-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，7b。熔点；197-198℃(分解)。CHN；计算值49.41；4.74；8.23，实测值：49.27；4.73；8.30.1H NMR(DMSO-d6)δ2.01(qui，2H)，2.23-2.60(m，2H)，2.71-3.08(m，2H)，3.56(dd，1H)，4.25(t，2H)，7.26(dd，1H)，7.70(dd，1H)，7.85(dd，1H).13C NMR(DMSO-d6)δ24.37，25.20，32.44，53.03，69.65，101.01，127.92，128.69，128.79，129.37，161.15，170.39，170.97，175.44.MS(MH+)m/z：341.实施例8[4-[(2-氨基-3，4-二氧代-1-环丁烯-1-基)氨基甲基]-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]盐酸，一水合物，8a
将苯邻二甲酰亚胺钾(0.71克，3.8毫摩尔)悬浮在DMF(30毫升)中并加热至90℃。经15分钟加入如上制备的[4-溴甲基-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸乙酯(1.2克，3.5毫摩尔)的DMF(20毫升)溶液，将所得混合物在90℃搅拌40分钟。冷却混合物，加入二氯甲烷(200毫升)和水(200毫升)。分离各相，有机相用饱和氯化钙水溶液洗涤(2×150毫升)，干燥(硫酸镁)，真空浓缩。闪式色谱(硅胶，洗脱液：正己烷/乙酸乙酯＝2∶1)后即得[4-(N-邻苯二甲酰亚氨基甲基)-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸乙酯，将其溶于二氯甲烷(200毫升)，用饱和氯化钙水溶液洗涤(2×200毫升)，干燥(硫酸镁)，真空浓缩后从乙醇中结晶而得白色针状晶体(0.9克，64％)。
将[4-(N-邻苯二甲酰亚氨基甲基)-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸乙酯(0.60克，1.5毫摩尔)在1M的NaOH(60毫升)回流下煮沸45分钟。冷却该溶液，用乙醚萃取(3×60毫升)并用浓盐酸(5毫升)酸化至pH1-2。水相用二氯甲烷(3×80毫升)和乙醚(4×80毫升)萃取。合并的有机相在真空中蒸发而得[4-[N-(2-羧基苯甲酰氨基)甲基]-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸(0.6克，100％)。
将[4-[N-(2-羧基苯甲酰氨基)甲基]-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸(0.6克，1.5毫摩尔)在1M的HCl(125毫升)回流下煮沸45分钟。冷却该溶液，用乙醚萃取(4×200毫升)，真空蒸发即得[4-氨基甲基-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸的氢氯化物(0.38克，100％)。
在[4-氨基甲基-5-(2-噻吩基)-3-异恶唑基氧]乙酸的氢氯化物(0.30克，1.0毫摩尔)和如上制备的3-氨基-4-乙氧基-3-环丁烯-1，2-二酮(0.16克，1.1毫摩尔)乙醇(50毫升)溶液的混合物中加入溶于水(3毫升)中的NaOH(0.08克，2.1毫摩尔)。将混合物在22℃搅拌18小时。所得悬浮液在真空中蒸发，溶于水并用乙醚萃取(2×150毫升)。用1M的HCl将水相(50毫升)的pH值调至3。过滤收集所得晶体，真空干燥而得标题化合物8a(0.26克，69％)。熔点222-223℃(分解)。CHN；计算值45.78；3.57；11.44，实测值：45.13；3.61；11.16.1H NMR(DMSO-d6)δ4.75(d，2H)，4.86(s，2H)，7.30(dd，1H)，7.70(d，1H)，7.94，(d，1H).13C NMR(DMSO-d6)δ34.88，66.27，100.97，127.45，128.52，128.67，130.48，162.42，168.19，168.74，169.55，169.95，183.29.MS(MH+)m/z：350.实施例9(RS)-2-氨基-3-[3-羧基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，水合物，9a
在冷却的钠(4.1克，0.18摩尔)的乙醇(100毫升)溶液中加入草酸二乙酯(2毫升，0.18摩尔)。将1-(2-噻吩基)-1-戊酮(20毫升，0.16摩尔)的乙醇(10毫升)溶液经15分钟加到此冷却溶液中，在0℃将所得混合物搅拌2小时，接着在22℃搅拌16小时。真空浓缩混合物，残余物溶于水(400毫升)。水相用1M的HCl酸化至pH3-4，用二氯甲烷萃取(3×300毫升)。干燥(硫酸镁)合并的有机相，真空浓缩。闪式色谱(硅胶，洗脱液：正己烷/乙酸乙酯＝3∶1)后即得2，4-二氧代-3-甲基-4-(2-噻吩基)丁酸乙酯(20.5克，53％)。
在氯化羟基铵(12.6克，0.18摩尔)的乙醇(200毫升)沸溶液中加入2，4-二氧代-3-甲基-4-(2-噻吩基)丁酸乙酯的乙醇溶液(60毫升)。将所得混合物回流煮沸2小时，冷却，真空浓缩。闪式色谱(硅胶，洗脱液：正己烷/乙酸乙酯＝3∶1)后即得[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酸乙酯(13.2克，92％)。
将[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酸乙酯(8.0克，34毫摩尔)、NBS(6.6克，37毫摩尔)和过氧化二苯甲酰(0.1克；0.4毫摩尔)的四氯化碳溶液的混合物回流煮沸6小时并在22℃放置14小时。冷却混合物，过滤，真空浓缩而得[4-溴甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酸乙酯(10.7克，100％)。
2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧羰基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯是从[4-溴甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酸乙酯按照类似实施例7的方法制备而得。
将2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧羰基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(1.0克；2.2毫摩尔)和47％的HBr(水溶液)(50含水)混合物加热至回流温度并煮沸40分钟。所得溶液在真空中蒸发，加入水(20毫升)。加入NaOH(0.1M；22毫升)水溶液，在22℃搅拌混合物2小时。过滤收集所形成的晶体，真空干燥。将该晶体溶于47％的HBr中，用乙醚萃取该溶液，分离。将此水溶液在真空中蒸发，加入乙醚。将反应混合物在22℃搅拌16小时，滗去乙醚二收集晶体。将此晶体于真空中干燥，滴加入NaOH水溶液(0.1M)至pH2.5。过滤收集形成的晶体并悬浮在水(15毫升)中。将反应混合物在22℃搅拌48小时，过滤收集所得晶体即得标题化合物9a(270毫克；43％)。熔点227-28℃(分解)。CHN；计算值46.07；3.69；9.77，实测值：46.15；3.68；9.74.1H NMR(D2O；DSS)：δ2.93-3.06(m，1H)；3.15-3.24(m，1H)；3.46(dd，1H)；7.26(dd，1H)；7.66-7.72(m，2H).13C NMR(D2O，pH＝12(NaOD)；Dioxane)：δ29,06；57,18；111,38；129,00；129,01(2C)；129,79；162,28；163,26；167,76；182,65.MS(MH+)m/z：283.实施例10(RS)-2-氨基-3-[3-(5-四唑基)-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，水合物，10a
在如上制备的[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酸乙酯的THF(20毫升)的溶液中加入HCl水溶液(6M，100毫升)。将反应混合物回流煮沸6小时。冷却后的反应混合物用乙醚萃取(3×100毫升)，合并的有机相用NaCl的饱和水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，真空浓缩。在残余物中加入二氯甲烷，过滤收集所得晶体。将滤液在真空中蒸发，加入NaHCO3的饱和水溶液。水相用二氯甲烷洗涤(2×60毫升)并用6M的HCl酸化至pH1-2。用乙醚萃取水相(3×80毫升)。干燥(硫酸镁)合并的有机相，真空蒸发。[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酸的总产量为1.6克(48％)。
将[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酸(4.0克；19.1毫摩尔)、SOCl2(40毫升)和DMF(0.1毫升)的混合物回流60分钟。将该溶液在真空中蒸发。残余物溶于THF(50毫升)中，于0-5℃将有机相倒入氨水溶液(25％)中。在22℃将反应混合物搅拌1小时并用乙醚萃取(4×250毫升)。合并的有机相用水和饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，真空浓缩即得[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酰胺(3.7克，93％)。
将[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]羧酰胺(3.4克，16.3毫摩尔)和POCl3(40毫升)溶液回流20分钟。将反应混合物在真空中蒸发，残余物溶于乙醚中。将有机相例入冰水混合物中。分离各相，水相用乙醚萃取(3×100毫升)。合并的有机相用水和饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，字库浓缩而得[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]腈(2.9克，95％)。
[4-溴甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]腈是按实施例7中的类似方法从[4-甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]腈制备的。2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-氰基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯是按照实施例7的类似方法从[4-溴甲基-5-(2-噻吩基)异恶唑-3-基]腈制备的。
将2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-氰基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(2.0克，4.9毫摩尔)、NaN3(0.4克，6.2毫摩尔)和氯化三乙胺(0.9克，6.2毫摩尔)的二甲氧基乙烷溶液(80毫升)的悬浮液回流煮沸48小时。再加入NaN3(0.4克，6.2毫摩尔)和氯化三乙胺(0.9克，6.2毫摩尔)，将反应混合物继续回流20小时。冷却后的反应混合物在真空中煮沸，残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/乙酸＝10∶1)。蒸发溶剂即得2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-(5-四唑基)-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(0.7克，32％)。
2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-(5-四唑基)-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(0.6克；1.3毫摩尔)和47％HBr水溶液(20毫升)的混合物回流30分钟。冷却反应混合物，加入水(50毫升)。水相用乙醚萃取(3×75毫升)。合并的有机相用水萃取(50毫升)。将合并的水相从真空中蒸发。加入水(25毫升)和NaOH水溶液(0.1M，16毫升)，过滤收集所得晶体。真空干燥该晶体即得标题化合物10a(0.4克；90％)。熔点209-11℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)：δ3.27-3.54(m，2H)；4.37-4.47(m，1H)；7.33(dd，1H)；7.76(d，1H)；7.94(d，1H).13C NMR(DMSO-d6)：δ24.51；51.81；108.03；127.80；127.95；128.57；129.71；151.63；155.91；161.96；170.40.MS(MH+)m/z：307.实施例11(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-恶唑基)-4-基]丙酸，乙酸盐，11a
3-羟基-4，5-二甲基异恶唑按照Jacquier，R.et al.，Bull.Chim.Fr.，1970，2685-90中所述并由Sato，K.et al.，Agric.Biol.Chem.，1986，50(7)，1831-1837改进的方法而制备的。
将3-羟基-4，5-二甲基异恶唑(68.5克，0.6摩尔)和碳酸钾(125.6克，0.9毫摩尔)的丙酮(1000毫升)溶液的悬浮液加热至回流温度。在此煮沸的反应混合物中滴加入溴乙烷(99.1克，0.9摩尔)的丙酮溶液。将反应混合物搅拌8小时，冷却，过滤，真空蒸发。将残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/己烷＝1∶3)即得3-乙氧基-4，5-二甲基异恶唑(52.7克，62％)。
在冷却(5℃)的3-乙氧基-4，5-二甲基异恶唑(65.6克，0.5摩尔)的四氯化碳(500毫升)混合物中加入Br2(150克，0.9摩尔)。将反应混合物在暗处搅拌96小时。加入水(200毫升)，通过加入硫化钠将反应混合物脱色。分离各相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机相用饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，真空蒸发。将残余物溶于水/NMP混合物(15∶85，700毫升)中，于100℃搅拌反应混合物24小时。加入水，用乙醚萃取该水溶液。合并的有机相用水和饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，真空蒸发。将残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷＝1∶2)而得3-乙氧基-5-羟甲基-4-甲基异恶唑(26.3克；36％)。
在3-乙氧基-5-羟甲基-4-甲基异恶唑(25.0克；0.16摩尔)的硫酸/水/乙酸混合物溶液(1∶2∶7，200毫升)中加入CrO3/水/乙酸混合物(1∶1∶2，160毫升)。将所得反应混合物于22℃搅拌18小时。加入水，用乙醚萃取水柄。合并的有机相用水和饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，真空蒸发即得(3-乙氧基-4-甲基异恶唑-5-基)羧酸(22.7克；83％)。
将(3-乙氧基-4-甲基异恶唑-5-基)羧酸(5.0克；29毫摩尔)的二氯甲烷(250毫升)溶液、SOCl2(4.3毫升)和DMF(0.2毫升)溶液回流煮沸2小时。将反应混合物在真空中蒸发，溶于二氯甲烷(100毫升)并滴加到冷却(5℃)的氨基乙醛二甲基缩醛(3.5毫升，3.2毫摩尔)和碳酸钾(6.0克；4.4毫摩尔)的二氯甲烷(100毫升)混合物中。将所得溶液于22℃搅拌4小时。加入水，分离各相。有机相用水和饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，真空蒸发即得5-[N-(乙醛二甲基缩醛)羧酰胺]-3-乙氧基-4-甲基异恶唑(7.0克；93％)。
将5-[N-(乙醛二甲基缩醛)羧酰胺]-3-乙氧基-4-甲基异恶唑(6.4克；25毫摩尔)、P2O5(7.1克；50毫摩尔)和浓硫酸(150毫升)的混合物回流煮沸30分钟。冷却(5℃)后的反应混合物倒入冰水混合物中，水相用乙醚萃取(2×500毫升)。合并的有机相用水和饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，真空蒸发。将残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝1∶1∶0.5％)后即得3-羟基-4-甲基-5-(恶唑基)异恶唑(340毫克；8.3％)。
在冷却(-5℃)后的3-羟基-4-甲基-5-(恶唑基)异恶唑(340毫克；2.0毫摩尔)的TEA(0.33毫升)和THF(40毫升)溶液中加入苯磺酰氯(0.27毫升，2.1毫摩尔)的THF(40毫升)溶液。将所得反应混合物在22℃搅拌18小时。真空蒸发掉溶剂并进行闪式色谱(硅胶，乙酸乙酯/正己烷＝1∶3)后而得3-苯磺酰-4-甲基-5-(2-恶唑基)异恶唑(520毫克；85％)。
将3-苯磺酰-4-甲基-5-(2-恶唑基)异恶唑(500毫克；1.6毫摩尔)、NBS(300毫克；1.7毫摩尔)和过氧化二苯甲酰(0.1克；0.4毫摩尔)的四氯化碳(100毫升)溶液的混合物回流煮沸24小时。将冷却后的反应混合物过滤，真空蒸发即得3-苯磺酰氧基-4-溴甲基-5-(2-恶唑基)异恶唑(440毫克；70％)。
2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3[3-苯磺酰氧基-5-(2-恶唑基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(120毫克；22％)是按照实施例7所述的类似方法从3-苯磺酰氧基-4-溴甲基-5-(2-恶唑基)异恶唑(440毫克)制备而得。
在2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3[3-苯磺酰氧基-5-(2-恶唑基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(120毫克；0.25毫摩尔)的甲醇(10毫升)溶液中加入NaOH(20毫克；0.5毫摩尔)的甲醇(10毫升)溶液。将反应混合物在22℃搅拌2小时，于真空中蒸发溶剂。将水加到残余物中，用二氯甲烷萃取水相。用0.1M的盐酸将水相酸化至pH2并用二氯甲烷萃取。真空蒸发水相，加入1M的盐酸溶液。将反应混合物回流煮沸3小时。真空蒸发反应混合物，加入乙醚(10毫升)。过滤收集所得晶体，真空蒸发。将该晶体溶于1M的盐酸水溶液中，用乙醚萃取水相。将水相于真空中蒸发，残余物溶于水中。使水相通过含有离子交换树脂的柱子[Amberlite IRA 400，Cl，150毫升]，用乙酸(1M)作为洗脱液。蒸发溶剂即得标题化合物11a(15毫克；27％)。1H NMR(D2O，二恶烷)：δ3.26-3.36(m，2H)；4.11-4.21(m，1H)；7.40(s，1H)；8.04(s，1H).13C NMR(D2O；二恶烷)：δ23.41；54.17；105.83；128.96；142.16；152.56；171.55；177.26；177.74.MS(MH+)m/z：240.实施例12(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，12a
将如实施例11制备的5-[N-(乙醛二甲基缩醛)羧酰胺]-3-乙氧基-4-甲基异恶唑(6.5克；25.2毫摩尔)和P2S5(5.6克；25.2毫摩尔)的甲苯溶液的混合物回流煮沸2小时。将反应混合物于真空中蒸发，残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：甲苯/乙酸乙酯＝11∶1)即得3-乙氧基-4-甲基-5-(2-噻唑基)异恶唑(0.5克；9％)。
将3-乙氧基-4-甲基-5-(2-噻唑基)异恶唑(0.5克；2.4毫摩尔)和NBS(0.5克；2.6毫摩尔)的四氯化碳(50毫升)溶液的混合物回流煮沸36小时。将冷却后的反应混合物过滤，真空蒸发即得4-溴甲基-3-乙氧基-5-(2-噻唑基)异恶唑(0.6克；87％)。
2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧基-5-(2-噻唑基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(320毫克；41％)是按照实施例7所述的类似方法从4-溴甲基-3-乙氧基-5-(2-噻唑基)异恶唑(540毫克)制备而得。
将2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧基-5-(2-噻唑基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯(245毫克；0.6毫摩尔)的47％HBr水溶液(5毫升)的悬浮液回流煮沸30分钟。真空蒸发反应混合物，加入水(30毫升)。用活性炭处理该水溶液，过滤，真空蒸发。将残余物溶于水中，使该水溶液通过含有离子交换树脂的柱子[Amberlite IRA400，Cl，25毫升]，用乙酸(2M)作为洗脱液。蒸发溶剂即得标题化合物12a(66毫克；45％)。1H NMR(DMSO-d6，10％，CF3COOH)：δ3.13-3.27(m，1H)；3.30-3.45(m，1H)；4.14-4.28(m，1H)；8.03(d，1H)；8.10(d，1H).13C NMR(DMSO-d6，10％，CF3COOH)：δ22.98；51.03；102.43；122.64；144.76；154.97；159.81；170.31；170.50.MS(MH+)m/z：256.(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(5-四唑基)异恶唑-4-基]丙酸按照类似的方式制备，只是进行了如下修饰：
将如前制备的(3-乙氧基-4-甲基异恶唑-5-基)羧酸通过常规方法用SOCl2和氨水(25％)将其转化为相应的羧酰胺。相应的腈化合物(3-乙氧基-4-甲基异恶唑-5-基)腈通过用POCl3将酰胺脱水而得。将(3-乙氧基-4-甲基异恶唑-5-基)腈与NBS进行溴化，随后与乙酰氨基丙二酸二乙酯反应而得2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-(5-氰基-3-乙氧基异恶唑-4-基)丙酸乙酯。相应的5-(5-四唑基)化合物优选通过2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-(5-氰基-3-乙氧基异恶唑-4-基)丙酸乙酯与NaN3和氯化三乙胺的二甲氧基乙烷溶液反应而形成。用47％的HBr水溶液将2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-乙氧基-5-(5-四唑基)异恶唑-4-基]丙酸乙酯脱保护即得(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(5-四唑基)异恶唑-4-基]丙酸。实施例13(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-吡啶基)异恶唑-4-基]丙酸，水合物，13a
将5-(2-吡啶基)异恶唑-3-醇(1.14克，7.0毫摩尔)(从2，3-二溴-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯的氢溴化物通过K.Tomita，Ann.SankyoRes.Lab.，1973，25，3-5所述的方法改进制备而得)和NaOH(0.28克，7.0毫摩尔)的水(10毫升)和乙醇(10毫升)溶液蒸发至干并在0.01mmHg再干燥2小时。将残余物悬浮在无水DMF(10毫升)中，冷却至-10℃。滴加入硫酸二甲酯(0.73毫升，7.7毫摩尔)，将混合物在-10℃搅拌1小时，然后在22℃搅拌15小时。将所得溶液于真空中蒸发。将水(15毫升)加到残余物中，用二氯甲烷萃取该混合物(3×30毫升)。干燥合并的有机相，真空蒸发。将残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：甲苯/乙酸乙酯/冰醋酸＝1∶1∶1％)而得3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑(0.73克，59％)。
将3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑(1.53克，8.68毫摩尔)的无水THF(40毫升)溶液冷却至-78℃。经5分钟加入正丁基锂的己烷溶液(9.0毫升，1.6M，14毫摩尔)，接着加入仲甲醛(2.48克，83毫摩尔)。将该混合物在-78℃搅拌15分钟，加入在22℃搅拌2小时。将反应混合物在真空中蒸发，加入水(25毫升)和二氯甲烷(40毫升)，用稀盐酸调pH值至6。分离各相，水相用二氯甲烷萃取(2×30毫升)。干燥合并的有机相，真空蒸发。通过闪式色谱(硅胶，洗脱液：甲苯/乙酸乙酯＝19∶1)分离4-羟基甲基-3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑，得到357毫克(20％)。
将4-羟基甲基-3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑(357毫克，1.73毫摩尔)和亚硫酰氯(10毫升)的混合物回流煮沸2小时。将反应混合物在真空中蒸发。将碳酸氢钠水溶液(5％，15毫升)加到残余物中，用二氯甲烷萃取混合物(2×25毫升)。干燥合并的有机相，真空蒸发而得4-氯甲基-3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑(388毫克，100％)。
将少量氢化钠(84毫克，60％在油中，2.09毫摩尔)加到乙酰氨基丙二酸二甲酯(361毫克，1.91毫摩尔)的无水DMF(4毫升)溶液中。将该混合物于22℃搅拌45分钟。将4-氯甲基-3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑(390毫克，1.74毫摩尔)的无水DMF(4毫升)溶液滴加入反应混合物中，所得反应混合物在22℃继续搅拌6小时。将混合物在真空中蒸发，将水(10毫升)加到残余物中。用二氯甲烷萃取含水反应混合物。干燥合并的有机相，真空蒸发。将残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：甲苯/乙酸乙酯＝19∶1)而得2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑-4-基]丙酸甲酯(500毫克；76％)。
将2-乙酰氨基-2-乙氧羰基-3-[3-甲氧基-5-(2-吡啶基)异恶唑-4-基]丙酸甲酯(500毫克；1.3毫摩尔)和氢溴酸水溶液(47％，20毫升)的混合物回流煮沸1小时。将混合物在真空中蒸发，加水(10毫升)至残余物中。用活性炭处理该水溶液，将碳酸钠(2N)水溶液小心加到滤液中直至pH为3。在5℃24小时后，收集沉淀物，用水洗涤，真空干燥而得标题化合物13a(174毫克，54％)。计算值；Calcd：52.07；4.57；16.56，实测值52.03；4.50；16.38.1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ8.70(d，1H)；7.95(m，1H)；7.80(d，1H)；7.45(m，1H)；3.75(m，1H)；3.40(dd，1H)；3.15(dd，1H).13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ171.83；171.53；162.88；149.68；147.64；137.82；124.41；121.17；104.86；53.30；24.24.以类似方式制备下述化合物：(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(4-吡啶基)异恶唑4-基]丙酸，水合物，13b。CHN；Calcd：49.44；4.90；15.72，Found：49.49；4.88；15.83.1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ8.70(d，2H)；7.65(d，2H)；3.75(m，1H)；3.05(dd，1H)；2.90(dd，1H).13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ172.97；171.20；161.73；150.52；135.30；121.01；105.39；52.70；24.69.实施例14(S)-(+)-2-氨基-3-(3-羟基-5-苯基异恶唑-4-基)丙酸，14a
将按照Christensen，I.T.，1989，sapra制备的(RS)-2-氨基-3-(3-羟基-5-苯基异恶唑-4-基)丙酸，0.5水(11.0克；44毫摩尔)和(R)-(+)-1-苯基乙胺(5.1克；44毫摩尔)的非对映体盐于0℃从乙醇(300毫升)中沉淀出。
将该晶体溶于水中，用0.1N的盐酸将混合物酸化至pH2.5。过滤收集结晶的标题化合物(320毫克；6％)。熔点251-53℃。
[α]D：+35.3°(c＝0.25，1N HCl，20℃).ee＝99.0％；CHN.计算值58.05；4.88；11.29实测值：58.03；5.22；11.33.
(R)-(-)-2-氨基-3-(3-羟基-5-苯基异恶唑-4-基)丙酸，水合物，14b以类似的方式用(S)-(-)-1-苯基乙胺(5.1克；44毫摩尔)制备而得。标题化合物的水合物产量为1.4克；26％。水的含量为7.7％。熔点252-54℃。[α]D：-37.8°(c＝1，1N HCl，20℃).ee＝99.8％；CHN：计算值54.12；5.31；10.52，实测值：54.10；5.27；10.54.
下述化合物以类似方式从(RS)-2-氨基-3-[5-(4-氟苯基)-3-羟基异恶唑-4-基]丙酸(其与实施例1所述的(RS)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸的制备类似)制备而得：(-)-2-氨基-3-[5-(4-氟苯基)-3-羟基异恶唑-4-基]丙酸，14c。熔点247℃(分解)；
ee＝99.6％；CHN；计算值54.12；4.16；10.56实测值：54.16；4.12；10.48.1H NMR(200MHz，D2O，NaOD，二恶烷)δ2.56(dd，1H)，2.82(dd，1H)，3.40(dd，1H)，7.22(dd，2H)，7.67(dd，2H).(+)-2-氨基-3-[5-(4-氟苯基)-3-羟基异恶唑-4-基]丙酸，14d。熔点246℃(分解)；
[α]D：+37.9°(c＝0.25，1N HCl，20℃)；ee＝99.8％；CHN：Calcd：54.12；4.16；10.56，Found：54.12；4.06；10.45.1H NMR(200MHz，D2O，NaOD，二恶烷)δ与140相同实施例15(-)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，15a。
将如实施例1制备的化合物1a(20.8克；81.8毫摩尔)于25℃加到乙醇(350毫升)和乙酰氯(35毫升)的混合物中。所得反应混合物含量煮沸3.5小时。将冷却后的溶液真空蒸发即得(RS)-2-氨基-3-[3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸(25.0克；96％)。
将(RS)-2-氨基-3-[3-乙氧基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸(24.9克；78.1毫摩尔)的二氯甲烷溶液(1200毫升)和TEA(45毫升)加热至回流温度。将以常规方法从(S)-(+)-2-甲氧基-2-苯基乙酸的二氯甲烷溶液(250毫升)制备而得的(S)-(+)-2-甲氧基-2-苯基乙酰氯(16.2克；87.9毫摩尔)经40分钟加入热反应混合物中。将所得的反应混合物回流煮沸1小时。冷却后的反应混合物于真空中蒸发并经闪式色谱(硅胶，洗脱液：正己烷/乙酸乙酯/乙酸＝55∶45∶1)后即得2-[N-(2-甲氧基-2-苯基乙酰氨基)]-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸(RS)-乙酯(27.2克；81％)。
在冷却(0℃)的2-[N-(2-甲氧基-2-苯基乙酰氨基)]-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸(RS)-乙酯(27.2克；61.1毫摩尔)的无水THF溶液(600毫升)和TEA(10毫升)的溶液中经160分钟加入苯磺酰氯(12.5克；70.8毫摩尔)的无水THF溶液(300毫升)。将所得溶液于22℃搅拌18小时。真空蒸发反应混合物，加入水和二氯甲烷。分离各相，干燥(硫酸镁)有机相，真空蒸发。将含有2-[N-(2-甲氧基-2-苯基乙酰氨基)]-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸(RS)-乙酯两种非对映体的残余物进行闪式色谱(硅胶，洗脱液：甲苯/乙酸乙酯＝7∶1)。首先洗脱下来的异构体(异构体1)的产量为10.4克(60％)，其次洗脱下来的异构体(异构体)产量为9.0克(51％)。将异构体1(10.4克；18.2毫摩尔)溶于甲醇(600毫升)。加入NaOH(0.8克；20.0毫摩尔)的甲醇溶液(20毫升)，将所得反应混合物于22℃搅拌10分钟。将水(5000毫升)加到反应混合物中，用浓盐酸水溶液调节该水溶液的pH至1。水溶液用乙醚和二氯甲烷萃取。干燥合并的有机相，真空蒸发。闪式色谱(硅胶，洗脱液：乙酸乙酯/正己烷/乙酸＝50∶50∶1)后得到2-[N-(2-甲氧基-2-苯基乙酰氨基)]-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸(RS)-乙酯的异构体1(5.8克；74％)。
将所得异构体1(5.8克；13.5毫摩尔)和47％的HBr水溶液(250毫升)的混合物回流煮沸1小时。将反应混合物于真空中蒸发，加入水。用二氯甲烷洗涤该水溶液，用活性炭处理。通过真空蒸发使水溶液的体积减少至200毫升。通过加入NaOH水溶液使水溶液的pH达3而结晶出异构体1的两性离子。过滤收集所得晶体而得(-)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，15a(1.0克；30％)。熔点258-60℃(分解)；
[α]D：-26.8°(c＝0.25，1NHCl，20℃)；ee＝96.9％；CHN；Calcd：47.23；3.97；11.02，Found：46.88；3.97；10.89；MS(MH+)m/z：255.2.以类似的方式处理异构体1即得：(+)-2-氨基-3-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丙酸，15b。熔点259-61℃(分解)；[α]D：+24.4°(c＝0.25，1N HCl，20℃)；ee＝98.9％；CHN；Calcd：47.23；3.97；11.02，Found：47.15；4.05；10.88；MS(MH+)m/z：255.2.将化合物4c用类似方式处理即得：(-)-2-氨基-4-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丁酸，15c，熔点217-19℃(分解)；[αb：-16.3°(c＝0.25，1N HCl，20℃)；ee＝85.1％；和(+)-2-氨基-4-[3-羟基-5-(2-噻吩基)异恶唑-4-基]丁酸，15d，熔点217-19℃(分解)；[α]D：+15.6°(c＝0.25，1N HCl，20℃)；ee＝81.9％.药理
将本发明化合物按照下述公知的可靠的试验方法进行测试。受体结合试验的试验结果如表1所示，电生理大鼠皮质楔标本的试验结果如表2所示。
〔3H〕AMPA结合
在试验中药物对AMPA受体的亲合力通过测量从AMPA受体中置换〔3H〕AMPA的能力来测定
试验是按照Honore，T.and Nielsen，M.，Neurosci.Lett.1985，54，27-32中的方法经修饰而进行的。该试验是在KSCN的存在下进行的。这意味着只有[3H]AMPA的高亲合力结合位点被标记。
所用的膜标本按照Ransom，R.W.and Stec，J.Neurochem.1988，51，830-836中的方法获得。[3H]CPP结合
该试验用以确定药物对NMDA-受体的亲合力。在本试验中可计算出药物将[3H]CPP(4-(3-膦酰基)哌嗪-2-羧酸)从NMDA-受体的递质结合位点取代的能力。
本试验是按照Murphy，D.E.，et al.J.Pharm.Exp.Ther.1987，240，778-784中所述的方法进行的。所用的膜标本如上制备。皮质楔模型
在皮质楔模型的试验中，体外检测大鼠脑切片是为了确定配体在谷氨酸-受体的效果以及评价配体的药理学特性(即激动/拮抗性质)。本试验是按照Harrison，N.L.and Simmonds，M.A.Br.J.Pharmacol.1985，84，381-191中所述并根据Wheatley，P.L.Br.J.Pharmacol.1986，87 159P的改进方法进行的。表1：受体结合数据
化合物 [3H]AMPA结合IC50值(μm) [3H]CPP结合IC50值(μm)
1a1b2a3a4a4b4c4d5a5b14a     0.283.543.09.0＞100＞100＞100＞10033.038.05.5     ＞100＞1007.521.00.762.50.190.722.06.9＞100
表2：电生理数据(大鼠皮质楔标本)
 化合物 性质 EC50值(μM)   IC50值(μM) 受体亚型
 1a1b1f2a2b3a4a4b4c4d5a5b5c13a13b14a14b14c14d15a15b 激动激动激动Part.Ago.#激动激动拮抗拮抗拮抗拮抗拮抗拮抗拮抗激动激动激动拮抗拮抗激动拮抗激动     5.843.013030030.024055.07.42301702.7 9.018.02.58.6ND30ND290.*/950*337*300 AMPAAMPAAMPANMDANMDAAMPANMDANMDANMDANMDANMDA/AMPA/KAINNMDANMDA/AMPAAMPAAMPAAMPAAMPA/KAINAMPAAMPAAMPAAMPA
*)＝Ki值；ND＝未测；#)Part.Ago.＝部分激动
在皮质楔标本的药理特性中，发现一些化合物为AMPA和NMDA受体的激动剂，另外一些化合物为选择性的NMDA拮抗剂，而其它化合物为非选择性的AMPA和NMDA受体拮抗剂。这些化合物在μM范围内显示活性。结论
从表1可看出，本发明的一些化合物在体外可选择性将[3H]AMPA从AMPA受体以低微摩尔浓度的亲合力取代。另外一些化合物在体外可选择性将[3H]CPP从NMDA受体取代。另外发现本发明的其它化合物在体外可分别将[3H]AMPA和[3H]CPP从AMPA和NMDA受体取代。
在皮质楔标本中，发现本发明的一些化合物为激动剂或部分激动剂，而另外一些则为拮抗剂。因此，本发明包括那些可以滴微摩尔浓度的活性对谷氨酸受体具有不同激动/拮抗特性的化合物。制剂实例
本发明的药物制剂可利用本领域中的常规方法制备而得。
例如，可通过将活性成分与普通的佐剂和/或稀释剂混合，然后将该混合物在常规的压片机上压片而制得片剂。佐剂或稀释剂的实例包括：玉米淀粉、乳糖、滑石、硬脂酸镁、明胶、胶等。也可使用其它佐剂或着色剂、香味剂防腐剂等添加剂，前提是其与活性成分相容。
注射用溶液是通过将活性成分和可能的添加剂溶于赋形剂(优选无菌水)中，调节溶液至所需体积，将溶液灭菌并装入适当的安瓿或小瓶中而制备成的。可加入本领域所用的任何适当的添加剂，例如强壮剂、防腐剂、抗氧剂等。
本发明制剂的代表性配方实例如下：1)含有5毫克化合物1a的片剂：化合物1a                  5.0毫克乳糖                       60毫克玉米淀粉                   30毫克羟丙基纤维素              2.4毫克微晶纤维素               19.2毫克Croscarmellose钠Type A    2.4毫克硬脂酸镁                 0.84毫克2)含有1毫克化合物4c的片剂：化合物4c                  1.0毫克乳糖                     46.9毫克玉米淀粉                 23.5毫克聚乙烯吡咯烷酮            1.8毫克微晶纤维素               14.4毫克Croscarmellose钠Type A    1.8毫克硬脂酸镁                 0.63毫克3)每毫升糖浆：化合物la                  5.0毫克山梨醇                    500毫克羟丙基纤维素                         15毫克甘油                                 50毫克对羟苯甲酸甲酯                        1毫克对羟苯甲酸丙酯                      0.1毫克乙醇                              0.005毫升矫味剂                             0.05毫克糖精钠                              0.5毫克水                                加至1毫升4)每毫升的注射用溶液化合物4a                            0.5毫克山梨醇                              5.1毫克乙酸                               0.08毫克注射用水                          加至1毫升

Claims (11)

1.一种具有通式I结构的(5-芳基异噁唑-4-基)-或(5-芳基异噻唑-4-基)-取代的2-氨基羧酸化合物或其药用盐：
Figure C9419438800021
其中A是一个单键或选自C1-6亚烷基，C2-6亚链烯基或C2-6亚炔基和环烯基的间隔基；B为-CH(NR’R″)-COOH，其中R’和R″独立地为氢或C1-6烷基，或者B为通式II基团：其中R2，R3和R4独立地选自a)氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、环烷基、环烯基、环烷基-C1-6烷基、环烯基-C1-6烷基、环烷基-C2-6链烯基、环烯基-C2-6链烯基、环烷基-C2-6炔基、环烯基-C2-6炔基、苯基-C1-6烷基、噻吩基-C1-6烷基，以及b)C1-6烷基，C2-6链烯基和C2-6炔基，其中一个或多个碳原子被N、O和/或S取代；或者R3和R4连接而形成C2-6链烯基，C2-6亚链烯基或C2-6-亚炔基；或者R4和R2连接而形成C1-3亚烷基，C2-3亚链烯基或C2-3亚炔基，其可选择性被羟基或甲基单取代或二取代；或者CH2-O-CH2；E是O，S，COO，(CH2)n-COO，O-(CH2)n-COO，或S-(CH2)nCOO，其中n是1-6的整数，5-四唑基，5-四唑基-C1-6烷基，3-羟基-异噁唑基或3-羟基异噁唑基-C1-6烷基；D是O或S；以及R1是被一个或多个选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、C1-6硫代烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基氨基或二-(C1-6烷基)氨基、氰基、硝基、三氟甲基或三氟甲硫基的取代基选择性取代的杂芳基。
2.权利要求1的化合物，其特征在于A是单键或C1-3亚烷基。
3.权利要求1的化合物，其特征在于B是-CH(NR’R″)-COOH或其中R2、R3和R4为氢或低级烷基，或者R4和R2连接而形成可选择性被羟基取代的C1-3亚烷基的通式II基团。
4.权利要求3的化合物，其特征在于B是-CH(NH2)-COOH或其中R2、R3和R4为氢的通式II基团。
5.权利要求1的化合物，其特征在于E是O，COO，-O-(CH2)n-COO，其中n＝1，2或3，或四唑基，D是氧。
6.权利要求1的化合物，其特征在于R1为噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基和四唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基和肉啉基，并且这些芳杂芳基可以被一个或多个选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、C1-6烷基硫基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基氨基或二-(C1-6烷基)氨基、氰基、硝基、三氟甲基或三氟甲硫基的取代基取代。
7.权利要求6的化合物，其特征在于R1是噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、咪唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、三唑基、吡啶基、或被卤素或甲基取代的噻吩基或噁二唑基。
8.权利要求7的化合物，其特征在于R1为2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基或4-吡啶基、或者被卤素或甲基取代的2-噻吩基。
9.权利要求1的化合物，其特征在于A是单键或C1-3亚烷基，B是-CH(NH2)-COOH或其中R2、R3和R4为氢，E和D为氧，并且R1为2-吡啶基、4-吡啶基、噻吩基、或被卤素或甲基取代的噻吩基的通式II基团。
10.一种药物组合物，其特征在于其含有权利要求1-9的任一化合物及药用载体或稀释剂。
11.应用权利要求1-9的任一化合物制备治疗脑缺血、亨廷顿舞蹈病、癫痫病、帕金森病、早老性痴呆、精神分裂症、疼痛、抑郁或焦虑的药物组合物的用途。
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