CZ127296A3 - Derivatives of (5-arylisoxazol-4-yl)substituted 2-aminocarboxylic acids, their use and pharmaceutical composition containing thereof - Google Patents

Description

Deriváty (5-arylisoxazol-4-yl)-substituovaných 2-aminokarboxylových kyselin, jejich použití a farmaceutické prostředky s jejich obsahem

Oblast techniky

Vynález se týká nové skupiny derivátů (5-arylisoxa'zol-4-yl)-substituovaných 2-aminokarboxylových kyselin, jde o látky, použitelné při léčení nedostatečného prokrvení mozku, Huntingtonovy choroby, epileptických poruch, Parkinsonovy choroby, Alzheimerovy choroby, schizofrenie, bolestivých stavů, deprese a úzkostných stavů.

Dosavadní stav techniky

V důsledku rozsáhlých studií excitačního mechanismu, v centrálním nervovém systému CNS v průběhu posledních třeceti let je nyní všeobecně uznáváno, že (S)-glutamát (Glu) je hlavním nervovým přenašečem excitačních aminokyselin EAA v CNS podle publikací Lodge D., Excitatory Amino Acids in Health and Disease, J. Wiley and Sons, Chichester, 1988,

Wheal H., Thompson A., Excitatory Amino Acids and Synaptic Transmission, Academie Press, Londýn, 1991, Meldrum B. S., Excitatory Amino Acids'Antagonists, Blackwell Sci. Publ.: Oxford, 1991, Krogsgaard-Larsen P., Hansen J.J., Excitatory Amino Acid Receptors: Design of Agonist and Antagonists,

E. Horwood, Chichester, 1992. Nervový přenos pomocí Glu je zprostředkován velkým počtem receptorů, které jsou klasifikovány do nejméně pěti heterogenních skupin receptorů, a to NMDA, AMPA, kyselina kainová, metabotropické receptory a skupina L-AP4 receptorů podle Monaghan D. T. a další, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 1989, 29, 365 - 402, Watkins J.

C., Krogsgaard-Larsen P., Honoré T. Trends Pharmacol Sci.,

1990, 11, 25 - 23, Simon R. P., Excitatory Amino Acids.

Thieme Med. Publ.: New York, 1992.

Je možno prokázat, že excitace v příliš vysoké míře, zprostředková receptory EAA (excitotoxity) je důležitým faktorem při sníženém prokrvení mozku po mozkové mrtvici, potaněních hlavy, po dušení, subarachnoidním krvácení, při zástavě srdce a dalších podobných situací podle Lodge D., 1988 svrchu a Meldrum B. S., 1991, svrchu). Na zvířatech bylo prokázáno, že poškození, která byla způsobena různými ischemickými stavy, je mošno zmírnit podáváním látek, antagonizujících Glu. To znamená, že přestože relativní důležitost různých skupin receptorů EAA při ischemií není jasná, všeobecně se přijímá, že u těchto stavů jsou důležitými léčivými látkami ty látky, které antagonizují receptory EAA.

V poslední době jsou stále častěji podávány zprávy ze středisek neurochemického a farmakologického, výzkumu,' které předpokládají určitou úlohu receptorů EAA při vzniku excitotoxicity při Huntingtonově chorobě podle Young A. B., a další, Science, 1988, 241, 981 - 983, u epileptických poruch podle Krogsgaard-Larsen P., Hansen J. J., 1992, svrchu, při Parkinsonově choroběpodle Klockgether T., Turski L., Trends Neurosci., 1989, 12, 285 - 286 a při Alzheimerově chorobě podle Greenamyra J. T., Maragos W. F., Cerebrovasc.. ..Brain,. Metab. Rev., 1993, 5, 61 - 94, a Francis Ρ. T. a další, J. Neurochem., 1993, 60, 1589 - 1604.

Mimoto se .centrální receptory EAA mohou účastnit synaptického mechanismu, který je patrně podkladem pro vznik schizofrenie podle Reynolds G. P., Trends. Pharmacol. Sci.', » 1992, 13, 116 - 121, bolestivých .stavů, a. úzkostných stavů podle Drejer J., Excitatory Amino Acid Receptors, Design of Agonists and Antagonists, Eds. Krogsgaard-Larsen P., Hansen J. J., E. Horwood: Chichester 1992, str. 352 - 375 a také deprese podle Trullas R., Skolnick P., Eur. J. Pharmacol.,

1990, 185, 1 - 10 a Trullas a další, Eur, J. Pharmacol.,

1991, 203, 379 - 385. To znamená, že snížená funkce receptorů EAA nebo jejich hypoaktivita patrně hraje svou úlohu například při vzniku schizofrenie podle Deutsch S. I., a další, Clin.

Neuropharmacol., 1989, 12, 1 - 13, a také v případě některých klinických příznaků, které je možno pozorovat při Alzheimerově chorobě- podle Greenamyre J. T. a další, Prog. Neuro-Psychopharmacol. and Biol. Psychiat., 1988, 12. 421 -430. Je pravděpodobné, že excitotoxicita i hypoaktivita EAA se účastní komplexního mechanismu, který vede ke vzniku Alzheitri | měrový choroby podle Greenamyre J. T., 1988, svrchu a

Greenamyre J. T., Maragos W. F., 1993, svrchu)Podle svrchu uvedených výzkumů je tedy velmi pravděpodobné, že látky, které jsou schopné se vázat na receptory EAA budou užitečné při léčení sníženého zásobení mozku kyslíkem, při Huntingtonově chorobě, u epilepsie, Parkinsonovy. choroby, Alzheimerovy choroby, u úzkostných stavů, schizo- _ά frenie, u deprese a při bolestivých stavech.

Většina až dosud zkoušených agonistů receptorů EAA měla při pokusech na modelových systémech méně nebo více ,-_s vyjádřenou neurotoxicitu a v důsledku toho se považovalo klinické použití těchto látek za omezené podle Carlsson M. ,_ř Carlsson A., Trends. Neurosci., 1990, 13, 272 - 276 a Willetts.J., Balster R. L., Leander J. D., Trends. Pharmacol. Sci., 1990, 11, 423 - 428.

Na druhé straně látky, které jsou částečnými agonisty r<

I EAA a mají vyvážený poměr mezi agonismem. a antagonismem, mo, hou být z léčebného hlediska velmi zajímavé například při svrchu uvedených indikacích podle Greenamyre J. T., 1988, .svrchu, Cristensen I. T. a další, Drug. Des. Del·., 1989, 5,

- 7Γ, Francis Ρ. T. a další, J. Neurochem., 1993, 60,

1589 - 1604. Látky s částečným agonistickým účinkem mohou vzhledem k Částečnému antagonismu EAA mít ochranné účinky na nervový systém a současně mohou být dostatečně agonistické tak, aby nedošlo k úplné blokádě nervového přenosu, zprostředkovaného příslušným receptorem EAA.

ATPA, 5-terc.butyl analog AMPA, to znamená kyselina (RS)-2-amino-3-(3-hydroxy-5-methylisoxazol-4-yl)propionové podle posledních výzkumů má systemický účinek, přičemž nebyly dosud popsány žádné neurotoxické účinky u pokusných zvířat podle Ornstein P. L. a další, J, Med. Chem., 1993,

36, 2046 - 2048, Lauridsen J., Honoré T., Krogsgaard-Larsen P.,.J. Med. Chem., 1985, 28, 668 - 672.

Bylo prokázáno, še. stejně jako AMPA, také celá řada mono- a bicyklických analogů AMPA má selektivní agonistický účinek na receptorech AMPA podle Hansen J. J., Krogsgaard-Larsen P., Med. res., Rex. , 1990, 10, 55 - 94, Krogsgaard-Larsen P., Hansen J. H., 1992, svrchu. Jeden z.těchto analogů, kyselina (RS)-2-amino-3“(4-hydroxy-5-fenylisoxazol-4-ylJpropionová, APPA, v níž methylová skupina AMPA byla nahrazena fenylovou skupinou, má slabý, avšak zce.la. výjimačný profil částečného agonisti-ckého-účinku podle Christensen Γ.

T. a další, 19.89, svrchu.

r

Jak je ze svrchu uvedeného popisu zřejmé, bylo by velmi žádoucí nalézt vazné látky pro. receptory EAA, účinné v CNS, bez neurotoxického účinku, s dobrým průnikem do CNS tak, aby je bylo možno použít při léčení různých svrchu uvedenýchonemocnění. Vynález si klade za úkol takové nové účinné látky navrhnout.

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že určitá nová skupina derivátů (5-arylisoxazol-4-yl)substituovaných 2-aminokarboxýlovýčh kyselin představuje velmi účinné vazné látky pro receptory AEE.

Podstatu vynálezu tvoří deriváty. (5-arylisoxazol-4-yl)-substituovaných nebo (5-arylísoxazol-4-yl)-substituovaných

2-aminokarboxylových kyselin obecného vzorce I b-a ε-Η 'i i

l· t

••ř kde znamená chemickou vazbu nebo alkylenovou s.kupinu o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenylenovou skupinu o 2 až 6 atomech uhlíku, alkinylenovou skupinu o 2 až 6 atomech uhlíku nebo cykloalkylenovou skupinu, znamená skupinu -CH(NR R)-CQ0H, kde r' a R se nezávisle volí z atomu vodíku nebo alkylové skupiny o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo skupinu obecného vzorce II ?' \_X°

Rd /

R₂

II kde R2, R^ a R^ se nezávisle volí ze skupiny

a) atom vodíku, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 6 atomech uhlíku, alkinyl o 2 až 6 atomech uhlíku, cykloalk(en}yl, cykloalk(en)ylalk(en/in)yl o 1 až 6 atomech uhlíku v alk(en/in)ylové části, fenylalkyl nebo thienylalkyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, nebo

b) alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl nebo alkinyl vždy o 2 až 6 atomech uhlíku, přičemž nejméně jeden atom'uhlíku v těchto zbytcích je nahrazen N, 0 a/nebo S nebo

R^ ^{a R}4 spolu tvoří alkylenový, alkenylenový nebo alkinylenový zbytek vždy o 2 až 6 atomech uhlíku nebo a Rg spolu tvoří alkylenový zbytek o 1 až 3 atomech uhlíku, alkenylenový nebo alkinylenový zbytek o 2 až 3 atomech uhlíku, popřípadě mono- nebo disubstituovaný hydroxyskup lnou nebo methylovou skupinou nebo skupinu CHg-O-CHg, znamená 0, S, C00,-(CHg)^-000, O-ÍCHg^-COG nebo S-(CHg)_n-COO, kde n znamená celé Číslo 1 až 6, dále, 5-tetrazolyl, 5-tetrazolylalkyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové Části, 3-hydroxyisoxazoly1 nebo 3-hydroxyisoxazolylalkyl o 1 až 6 atomech uhlíků v alkylové části,

D znamená atom kyslíku nebo síry a í ...

R. znamená arylovou nebo heteroarylovou skupinu, popřípadě substituovanou nejméně jedním substituentem ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, hydroxyskupina, alkylthioskupina, alkylsulfonyl, alkylaminoskupina nebo dialkylamincskupina vždy o 1 až 6 atomech uhlíku v al.kylových,.částech, kyanoskupina, nitroskupina, trifluormethyl nebo trifluormethylthioskupina, za předpokladu, že v případě, že A znamená methylenovou skupinu, B znamená skupinu -CH(NHg)-COOH, E znamená atom kyslíku, D znamená atom kyslíku a R^ znamená fenyl, popřípadě' substituovaný atomem halogenu nebo methoxyskupinou, pak se musí sloučenina nacházet v enanciomerně čisté' formě. · - - .

Podstatu vynálezu cenin obecného vzorce I tvoří také způsob výroby nových slouVynález se rovněž týká farmaceutických prostředků pro léčení svrchu uvedených chorob, které jako svou účinnou složku obsahují nové sloučeniny obecného vzorce I spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Součást podstaty vynálezu tvoří také použití sloučenin obecného vzorce I pro výrobu farmaceutických prostředků, určených k léčení mozkové ischemie, Huntingtonovy choroby, epileptických poruch, Parkinsonovy choroby, Alzheimerovy choroby, schizofrenie, bolestivých stavů, deprese nebo úzkostných stavů.

Pro některé sloučeniny podle vynálezu bylo prokázáno in vitro, že běží o selektivní ligandy receptorů AMPA s afinitou zejména při nízkých mikromolárních koncentracích, naopak jiné látky jsou schopné se in vitro selektivně vázat na receptory NMDA. Další látky podle vynálezu mají in vitro. aktivitu k receptorům AMPA i NMDA. Mimoto bylo prokázáno, že některé sloučeniny podle vynálezu mají agonistický účinek, kdežto jiné látky mají účinek antagonistický. Sloučeniny v

podle vynálezu jsou použitelné při léčení mozkové ischemie,

Huntingtonovy choroby, epileptických poruch,. Parkinsonovy * -fc choroby, Alzheimerovy choroby, schizofrenie, bolestivkých stavů, deprese a úzkostných stavů.

Některé sloučeniny podle vynálezu mohou existovat ve formě optických isomerů, přičemž všechny tyto ísomery spadají do rozsahu vynálezu.

V obecném vzorci I znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, například methyl, ethyl, 1-propyl, 2-propyl, 1-butyl,2-buty1,

2-methyl-2-propyl a.podobně. Alkenyl nebo alkinyl o 2 až 6 atomech uhlíku mohou rovněž znamenat skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem a také alkylenové skupiny o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenylenové i alkinylenové skupiny o 2 až 6 atomech uhlíku znamenají dvojvazné skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Cykloalky! obsahuje 3 až 7 atomů uhlíku.

Pojem alk(en/in)yl znamená, že může jít o alkylovou, alkenylovou nebo alkinylovou skupinu.

Pod pojmem vazba ve významu A se rozumí, že .skupina ve významu B může být přímo vázána v poloze 4. isoxazolového kruhu.

Atomem halogenu se v průběhu přihlášky rozumí atom fluoru, chloru,' bromu nebo jodu.·

Arylový zbytek znamená uhlíkovou aromatickou monocyklickou nebo kondenzovanou bicyklickou skupinu nebo bifenylovou skupinu, heteroarylová skupina znamená aromatickou monocyklickou nebo bicyklickou skupinu, obsahující nejméně jeden heteroatom. Příkladem takových skupin mohou být pěti- . členné aromatické heteroarylové skupiny, obsahující 1 až 4 heteroatomy ze skupiny dusík, kyslík a síra, například thiényl, furyl, pyrrolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, triazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl a tetrazolyl. Dalšími příklady mohou být benzothi-en-yl, benzofuranyl., indolyl, fenyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazinyl, náftyl, čhinolyl, chinazolynyl, ch'inoxalinyl a chinolinyl.

Některé sloučeniny' obecného vzorce I mohou vytvořit farmaceuticky přijatelné soli, které rovněž..spadají do rozsahu vynálezu.

Soli sloučenin obecného vzorce I lze vytvořit s netoxickými organickými kyselinami, jako jsou k'ysel'i'na .'mal-eino- vá, fumarová, benzoová, askorbová, štavelová, vinná, mléčná a jablečná nebo s anorganickými kyselinami, jako jsou kyselina chlorovodíková, bromovodíkové, sírová, fosforečná a dusičná, nebo může také jít o soli s anorganickými bázemi, například s alkalickými kovy, jako sodíkem, draslíkem nebo lithiem, soli s kovy alkalických zemin, například soli vápenaté nebo horečnaté, dále amonné soli a také soli s některými organickými bázemi.

V obecném vzorci I znamená symbol A s výhodou chemickou vazbu nebo alkylenovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku.

B s výhodou znamená skupinu -CH(NRR)-COOH, kde R' a R znamenají atomy vodíku nebo skupinu obecného vzorce II, v níž R„, R^ a R^ znamenají atom vodíku nebo nižší alkyl nebo spolu R^ a Rg tvoří alkylenovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku. Nejvýhodnějším významem pro symbol B je skupina -CH(NHg)-COOH nebo skupina obecného vzorce II, kde Rg, a R₄ znamenají atomy vodíku.

E s výhodou znamená 0, C00, -O-(CHg) -C00, kde n zna-, mená 1, 2 nebo 3 nebo tetrazolyl-a D je atom kyslíku. '

Zvláště výhodnými skupinami ve významu R^ jsou thienyl, ,* substituovaný thienyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, iso- .ý thiazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, óxadiazolyl', substituovaný oxadiazolyl, thiadiazolyl, tetrazolyl, triazolyl, pyridyl, fenyl, bifenyl 'a naftyl. Výhodnými skupinami jsou 2-thienyl,

3-thienyl, fenyl, 2-pyridyl a 4-pyridyl, dále '2-thienyl' a fenyl.,. substituované. atomem halogenu nebo methylovou skupinou. ...

Ve výhodném provedení A znamená chemickou vazbu nebo alkylenovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku, B znamená skupinu -CH(NHg)-COOH nebo skupinu obecného vzorce II, v němž Rg, R^ a Rg znamenají atomy vodíku, E a D znamenají atomy kyslíku a R^ znamená 2-pyridyl, 4-pyridyl, thienyl, fenyl, substituovaný thienyl nebo substituovaný fenyl.

Nové sloučeniny podle'vynálezu je možno připravit různými chemickými postupy:

a) při výrobě sloučenin obecného vzorce I, v němž B znamená skupinu -CH(R*R)-COOH, kde R* a R mají svrchu uvedený význam, se odstraní ochranné skupiny ze sloučeniny obecného vzorce III

b) kde

Rp r , A, D a E mají svrchu uvedený význam,

R_, R_ a R_o znamenají ochranné skuoiny a Ď / O

R_ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu, - o

při výrobě sloučenin obecného vzorce I, v němž B známe ná skupinu -CH(NRRJ-COOH, v níž R a R znamenají atomy vodíku se odstraní ochranné skupiny ze sloučenin obecného vzorce IV

kde jednotlivé symboly mají svrchu uvedený význam,

c) při výrobě sloučenin obecného vzorce I, v němž B znamená skupinu obecného vzorce II se uskuteční adičně eliminacní reakce sloučeniny obecného vzorce V a slou· ceniny obecného vzorce VI

Rj^-N OCH2CH3

A₄ '

VI kde

R^ až R₄,. A, D a E mají svrchu uvedený význam a R'_e znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu,

d) při výrobě sloučenin obecného vzorce 1, v němž 3 známe ná skupinu obecného vzorce II, v němž R^ a R^ společně tvoří alkylenovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku nebo alkenylenovou nebo aíkinylenovou skupinu vždy o 2 až3 atomech uhlíku^ popřípadě mono- nebo disubstítuovanou hydroxyskupinou nebo methylenovou skupinou se uvede do reakce sloučenina

SOC \

N NH-A, / \ /

R3 R₄—R2

........ .... R<

obecného vzorce VII

-VII.

kde

Rp R^, A, D a E mají svrchu uvedený význam,

R₄ a R^ společně tvoří skupiny've svrchu uvedeném významu a

BOC znamená terč.butoxykarbonyl, s 3,4-diethoxy-3-cyklobuten-l,2-díonem s následným uzavřením kruhu a odstraněním ochranných Skupin,

e) při výrobě sloučenin obecného vzorce I, v němž B znamená skupinu obecného vzorce II, přičemž nejméně jeden ze symbolů R^ ^4 ^ma význam, odlišný od atomu vodíku se podrobí alkylaci sloučenina obecného vzorce VIII

kde ^Rl’ ^R2’ ^3’ %’ ^A' ^{D a E svrc}*7u uvedený význam, přičemž nejméně jeden ze symbolů R^ ^až ^/1 znamená atom vodíku a

R'_ znamená vodík nebo ochrannou skuoinu.

Při provádění způsobu podle vynálezu jsou výhodnými ochrannými skupinami v případě· Rg a R'g. nižší alkyl, benzyl nebo benzensulícnyl, v případě Rg nižší alkoxykarbonyl, v případě R? nižší alkyl a v případě Rg-nižší alkylkarbonyl.

«·

Podle postupu a)* se odstraněni ochranných skupin v jediném stupni provádí, tak, že se na sloučeninu obecného vzor ce III působí vodným roztokem kyseliny, obvykle 48% vodným, roztokem HBr, nasyceným roztokem HBr v kyselině octové nebo 2 až 12 N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Ochranné skupiny je možno také odstranit postupně při použiti vodného' roztoku kyseliny a vodného roztoku baze, například postupně působením 1 až. 12 N HCl ve vodě, 1 až 8 N NaOH ve vodě a 1 az 12 N HCl ve vodě nebo postupně působením vodné baze, například 1 až 8 N NaOH ve vodě a pak 1 až 12 N HCl ve vodě.

V případě, že Rg znamená benzyl, je možno ochrannou skupinu na skupině E také odstranit katalytickou hydrogenaci, například při použití katalyzátoru na bázi paladia, a to před nebo po odstranění ochranné skupiny na alfa-aminoskupině.

Výchozí látky obecného vzorce III je možno připravit podle publikací Chrinstensen I. T. a další, Drug Design and Delivery, 1989, 5, 57 až 71 a Cristensen S. 3. a další, Acta Chem. Scand., 1973, B 32, 27 - 30. Výchozí látky obecného vzorce III, v nichž E znamená skupinu COO, (CHj) -COO, O-(CH₂)_n-COO nebo S-(CH₂)_n-C00, kde n znamená celé číslo 1 až 6, 5-tetrazolylalkylovou skupinu nebo 3-hydroxyisoxazolyl alkylovou skupinu, v nichž alkylová skupina obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, je možno snadno získat podle publikací Krogsgaard-Larsen P. a další, J. Med.Chem., 1991, 34, 123 až L30, Madsen U. , Bio. Med. Chem. Lett., 1993 , 8, 1649 až'· 1654 a Madsen U a Wong E., J. Med. Chem., 1992, 35, 107-111.

Výchozí látky obecného vzorce III, v němž znamená heteroarylovou skupinu, která je nestálá v kyselém prostředí, je možno snadno připravit z kyseliny (3-alkoxy-4-methylisoxazol-5-yl)karboxylová tvorbou heteroarylové skupiny v poloze 5, bromací 4-methylisoxazolové skupiny a následnou alkylací působením prekursoru aminokyseliny, například diethylacetamidomalonátem. 3-hydroxyisoxazolovou skupinou, chráněnou-alkylovou skupinou - je mo-žno v případě potřeby znovu chránit vhodnou ochrannou skupinou, například benzensulfo· nylovou skupinou před, v průběhu nebo po vytvoření heteroarylové skupiny v poloze 5 isoxazolu. Kyselinu (3-alkoxy-4-methylisoxazol-5-yl)karboxylovou je možno snadno získat z

3-alkoxy-4,5-dimethylisoxazolyl, připraveného podle publikace Hansen J. J., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1980, 1826 až 1833 bromací s následnou oxidací 5-methylisoxazolové skupiny na odpovídající derivát kyseliny 5-isoxazolkarboxylové.

V dalších případech je možno výchozí látky obecného vzorce III, například v nichž R^ znamená pyridylovou skupinu, snadno získat modifikací postupu, popsaného v K. Totnita, Ann. Sankyo Res. Lab., 1973, 25, 3 - 5. Ochrana 3-hydroxyskupiny v 3-hydroxy-5-aryiisoxazolové skupině s následným zavedením hydroxymethylové skupiny do polohy 4 isoxazolového kruhu vede k získání meziproduktu, který je již možno snadno převést na výchozí látku obecného vzorce

III.

Při provádění postupu b) se ochranné skupiny odstraní tak, že se na sloučeninu obecného vzorce IV působí vhodnou vodnou kyselinou nebo baží, .obvykle 2 až 8 N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Odstranění ochranných skupin je rovněž možno provést spostupně při použití, vodné kyseliny a vodné baze tak, jak bylo uvedeno u postupu a). Hydantoinový kruh je možno rozštěpit také použitím vodného roztoku hydroxidu barnatého, 10 až 70% vodné kyseliny sírové nebo s použitím enzymů typu hydantoinázy. Rozštěpení hydantoinového kruhu je možno uskutečnit před nebo po odstranění ochranné skupiny ze skupiny E.

Hydantoínové kruhy vesloučeninách- obecného .vzorce IV je možno, snadno vytvořit podle Ware E., Chem. Rev., 1950,

46, 403 - 470. Štěpení hydantoinového kruhu se provádí podle postupů, uvedených v publikacích Curry K. a další, J. Med. Chem., 1988, 31, 864 -'867, Farrington G. K. a další, J. Med. Chem., 1987, 30, 2062 - 2067, Grunewald G. L. a další, J.

Meč. Chem., 1980, 23, 754 - 758, Hiroi K. a další, Chem. Pharm. Bull.., 1.9.68, .16, 444 447.nebo Stark G. R. a další,

J. Biol. Chem., 1963, 238, 214 - 226.

Výchozí látky pro výrobu sloučenin obecného vzorce IV je možno připravit podle Madsen U., Eur. J. Med. Chem., '1993, 28, 791 - 800.

V případě, že R₅ znamená benzyl, je mošno odstranit ochrannou skupinu ze skupiny E hydrogenaci při použití paladia jako katalyzátoru.

Adiční-eliminační reakce v průběhu postupu c) se snadno provádí v protickém organickém rozpouštědle, například v alkoholu, s výhodou v přítomnosti vhodné anorganické baze, jako vodného hydroxidu sodného při teplotě místnosti. Meziprodukty obecného vzorce VI je možno připravit podle publikací Cohen S. a další, J. Am. Chem. Soc,, 1966, 88, 1533 1535, EP-A2-0496561 nebo Kinney W. A. a další, J. Med. Chem., 1992, 35, 4720 - 4726.

Meziprodukty obecného vzorce V je možno snadno získat Gabrielovou syntézou primárních aminů, popsanou v publikaci Sheehan J. C. a další, J^Am. Chem. Soc., 1950, 72, 2786 až 2788. Výchozí alkylhalogenidy pro tuto syntézu je možno snadno připravit týmiž způsoby jako výchozí materiály, používané při postupu a) svrchu.

Odstranění ochranných skupin je možno snadno uskutečnit použitím vodného roztoku kyseliny nebo baze, s výhodou 0,5 až 8 N HC1 nebo 0,5 až 8 N NaOH ve vodě, při teplotě místnosti i při vyšší teplotě. V případě, že R znamená benzylovou skupinu, je možno tuto skupinu odstranit také hydrogenaci při použití paladia jako katalyzátoru.

Při provádění postupu d) je možnovlastní reakci, následné uzavření kruhu a odstranění ochranných skupin uskutečnit podle Kinney a další, ĚP-A2-0496561.

Výchozí látky obecného vzorce VII je možno připravit například reakcí 4-bnommethylisoxazolyl, získaného jako výchozí látka-pro postup a) s alkylendiaminem, chráněným skupinou BOC podle EP-A2-0496561.

Alkylaci sloučenin obecného vzorce VIII podle svrchu popsaného postupu e) je možno snadno uskutečnit v inertním organickém rozpouštědle, například ve vhodném alkoholu, ketonu nebo v dimethylformamidu, reakce se s výhodou provádí v přítomnosti vhodné baze, například hydridu sodíku, uhličitanu draselného nebo triethylaminu, tak jak bylo popsáno v Kinney W. A., EP-A2-0496561. Výchozí látky obecného vzorce VIII je možno připravit podle postupu c).

V případě, že se beta-ketoestery užijí jako výchozí látky pro přípravu 3-hydroxyisoxasolů, které se pak opět užijí jako výchozí látky pro přípravu sloučenin obecných vzorců III až V a VII až VIII, jsou tyto látky běžně dodávány nebo je možno je snadno připravit způsoby, které byly popsány v publikacích Cason J.a další, J. Org. Chem., 1953, 18, 1594 - 1600 a Hannick S. M. a další, J. Org. Chem., 1983, 48, 3833 - 3835. '

Odpovídající isothiazolové výchozí látky je možno připravit postupy, popsanými v EP-A1-0336 555.

. , .Dělení isomerů sloučenin.obecného vzorce I je možno snadno uskutečnit tak, že se vytvoří diastereomerní soli při použití opticky aktivních kyselin nebo baží, například při použití l-fenylethylaminu. V některých případech je možno rozdělení snadno uskutečnit tak, že se připraví diastereomerní sloučeniny, načež se vzniklé diastereomery dělí rychlou chromatografií nebo krystalizaci.

Soli sloučenin podle vynálezu je možno snadno připravit řadou postupů, které jsou v oboru dobře známy, to znamená tak, že se příslušná sloučenina uvede do reakce s ekvivalentním množstvím kyseliny nebo baze ve vodném rozpouštědle, mísitelném s vodou, například v acetonu nebo ethanolu, vzniklá sůl se izoluje zahuštěnímroztoku a jeho zchlazením, nebo se příslušná sloučenina uvede do reakce s přebytkem kyseliny nebo baze v rozpouštědle, nemísitelném s vodou, například ethyletheru nebo chloroformu, takže přímo dojde k vysrážení požadované soli. Soli je také mošno připravit klasickými postupy podvojného rozkladu příslušných solí.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich adiční soli s kyselinami, přijatelné z farmaceutického hlediska je možno podávat jakýmkoliv vhodným způsobem, například perorálně nebo parenterálné, k tomuto účelu se účinné látky zpracovávají na vhodné lékové formy pro určité podání, například na tablety, kapsle, prášky nebo sirupy nebo také roztoky nebo disperze pro injekční-podání. /'

Účinná denní dávka sloučenin obecného vzorce I nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí se obvykle pohybuje v rozmezí 10 mikrogramů/kg až 50 mg/kg.

PJLí-!íí-i-5jLX___2JÍL2-Z,® JÉ-θ JLÍ___Ζ_Σ_Π-^_1_θ-5_ϋ

Vynález· je dále demonstrován ne Příkladech, které nemají být v žádném případě chápány tak, že by limitovaly jakýmkoliv způsobem patentové nároky.

Všechny údaje o teplotě tání byly získány na bodotávku typu Bíichi SMP-2O a nejsou korigovány.

Spektra nukleární magnetické rezonance .(^H-.NKÍS.a. . ¹³C-NMR) byla zaznamenána na spektrometru typu Brucker 250 MHz, t.j. 250,13 MHz pro ^-NMR a 62,90 MHz pro

C-NMR, za použití tetraměthylsilanu , jako vnitřního standardu ( pokud není uvedeno jinak).

V případě sloučenin, označených 13aJ 13b^ 1.4c,.,a 14d, byla H-NMR a ¹^C-NMR spektra zaznamenána na spektrometru typu Brucker 200 MHz, t.j. 200,0 MHz pro ^HNTjíR a 50,30 MHz pro ¹^C-NMR, za použití te tramě, thy Isilanu jako vnitřního standardu( pokud není uvedeno jinak). - ...... .

Hmotnostní spektra byla zaznamenána na spektrometru typu Quattro, systém MS-MS, dodaného firmou VG Biotech, Fisons Instruments, Manchester, V.Britanie, a připojenému ku modulárnímu systému vysokovýkonné kapalinové chromatografie HP 1050.

Bylo'používáno '20 - 50 yul vzorku (0,10 - 0,05 mg/ ml), rozpuštěného ve směsi acetonitril/voda/konc.vodný roztok amoniakuí 25&ní čpavková voda) v poměrech 25 :

: 1 ( objem/objem/objem) a vnášeného do elektrorozstřikovacího zařízení pomocí automatického vzorkovacího zařízení při průtoku 30 yul minuta.

Spektra byla zaznamenávána aa standardních provozních podmínek a cílem získat údaje o molekulové hmotnosti ( MH+). Pozadí bylo odečteno.

Enantiometrický přebytek (ee) enantiometrických sloučenin byl stanoven pomocí chirální vysokovýkonné kapalinové chromatografie za použití sloupce chirálního korunového etheru.

Chirální vysokovýkonná kapalinová chromatografie byla prováděna na sloupci Daicelu ( Crownpak CR(-) nebo Crownpak CR(+)}_ř za použití eluce 0,40 1,0 ml/min. směsi vodná kyselina chloristá/methanol (100-85&/0-15%), jako elučního Činidla, při teplotě 40°C.

Byl použit jeden z následujících přístrojů:

1) Jasco SSO-PU čerpadlo; injektor Rheodyn 7125 a detektor Waters 480 UV, nastavený na 210 nm a připojený ku integrátoru firmy Merck-Hitachi t.j.í

D-2400 Chromato-Integrator

2) Merck-Hitachi L-6200 čerpadlo; Merck-Hitachi

655A-40 automatické vzorkovací zařízení a

Merck-Hitachi L-4000 UV detektor, nastavený na

205 nm a připojený k integrátoru Merck-Hitachi

D-2400.

Enantiometrické čistoty byly vypočteny z maximálních ploch.

Příklad 1

Příprava kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-h.ydroxy-5-(2thienyl)- isoxazol-4-yl)- propionové ( Sloučenina 1a )

S t u p e η I

Příprava 2- thiofenkarbor.itrilu

Směa 250,0 g ( 1,53 molu) 2-bromthiofenu a 157.0 g ( 1,76 molu) kvanidu mědného, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 90 minut ve 625,0 ml 1-methy1-2-pyrrolidonu, Poté byla vzniklá reakční. směs ochlazena na teplotu 100°C a nalita! do.horkého vod ného roztoku kyanidu sodného,-připraveného rczpuště- ním 150,0 g kyanidu sodného ve 2,50 litrech vody. Τ'Poté byla reakční směs intenzivně míchána přiř-teplotě SO°G po dobu 30,0 minut s následně byla za. horka zfiltrována. Ochlazená směs. byla ..jx. vy tře pána. se 2,0 litry diethyletheru a poté byla za vakua zahuštěna na objem 1,50 litru. ' ,

Organická fáze byla promyta se 750,0 ml vody a. se 750,0 ml vodného nasyceného roztoku chloridu sodného.Poté byla organická fáze vysušena síranem horečnatým a po zahuštění za vakua byla získána červenofialově zbarvená látka olejovité konzistence, která byla poté za sníženého tlaku (0,133 KPa) zdestilována.

Bylo získáno 105,30 g (63%) žádaného, v nadpise ’ uvedeného 2- thiofenkarbonitrilu_a

Stupeň II * ύ

Příprava ethyl-2-methy1-3-(2-thienyl)-3-oxopropionátu

Směs 25,0 g 2-thiofenkarbonitrilu, připravenéhov předcházejícím Stupni 1J 22,50 g aktivovaného zinku a 0,20 g ( 0,90 mmolů) bromidu mednatého, byla zahřívána ve 350,0 ml benzenu za refluxu pod zpětným chladičem při teplotě 83°C po dobu 60 minut.

Poté byl k této reakční směsi přidán při teplotě 83°C ethyl-2-brompropionát (62,20 g) ve 150,0 ml benzenu a tato směs byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 2,0 hodin a poté byla ochlazena na teplotu 0°C,

Po 60 minutách ( teplota nižší než 10°C) bylo ku směsi přidáno 4-00,0 ml 15%ního vodného roztoku kyseliny sírové a reakční aměs byla míchána při teplotě 20°C po dobu 20,0 hodin. Poté byla směs zfiltrována a -_B. organické a vodné fáze byly odděleny.Vodná fáze byla poté 2x vytřepána se 500,0 ml-diethyletheru a spojené organické fáze byly vysušeny síranem hořečnatým a následně byly za vakua odpařeny.

Získaný zbytek byl zpracován sloupcovou chromatografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/ n-heptan/methanol (4 : 4 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 35,0 g (72%) žádaného, v nadpise uvedeného ethyl-2-methy1-3-(2-thienyl)-3-oxopropionátu, ve formě látky olejovité konzistence.

Stupeň ΊΪΙ

Příprava 4-methy1-5-(2-thienyl)- isoxazolu

Ku směsi 25,30 g ethy1-2-methy1-3-(2-thienyl)3-oxopropionatu, připraveného v předcházejícím Stupni IIJ a 5,00 g (0,12 molu) hydroxidu sodného ve 200,0 ml směsi methanol/voda ( 10 : 1), vychlazené na teplotu minus 30°C, byl přidán, na teplotu 0°C ledem vychlazený, zfiltrovány roztok hydroxidu amonnéhoí kyseliny chlorovodíkové ( 16,60 g ) a 10,0 g hydroxidu sodného ve 200,0 ml směsi methanol/voda ( 10 : 1).

Vzniklá reakční směs byla poté míchána při teplotě minus 30°C po dobu 3,0 hodin® Poté byla směs ponechána samovolně vytemperovat na teplotu 5°0 a po-této operaci byla po 45 minutách přidána při teplotě 83°0 ku 280,0 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

Výsledná reakční směs byla poté zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem při teplotě 80°C po dobu 1,0 hodiny. Po odpaření methanolu bylo přidáno 250,0 mí vody a směs byla vychlazena na teplotu 5°C a. vzniklé výsledné krystaly byly izolovány filtrací. Poté byly krystaly rozpuštěny ve 500,0 ml dichlormethanu,organická fáze byla vysušena síranem horečnatým a následně byla za vakua zahuštěna,- _ . _ .

Eylo získáno 12,0 g Í55í) žádaného, v nadpise— uvedeného 4-methy1-5-(2-thienyl)-isoxazolu. _;λ.

S t u p e η IV

Příprava 3-ethoxy-4-methy1-5-(2-thienyl)-isoxazolu $

Ku suspenzi 12,50 g 4-methy1-5-(2-thienyl)-isoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni III, a 14,40 g uhličitanu draselného, ve 250,0 ml acetonu, zahřívané pod zpětným chladičem po dobu 25 minut na refluxní teplotu, bylo po uvedené době-přidáno...při _ ..

refluxní teplotě, 8,0 g ethylbromidu a takto připravená reakční směs byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 3,0 hodin.

Poté bylo přidáno najednou v jedné vsádce dalších

8,0 g ethylbromidu a směa byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem delší 3,0 hodiny.

Po zfiltrováni směsi a odstranění rozpouštědla za vakua byl získaný zbytek zpracován sloupcovou chro matografií na siiikagelu, za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 7,30 g ( 51%) Žádaného, v nadpise uvedeného 3-ethoxy-4?ethyl-5-(2-thienyl)-i soxazolu, ve formě látky olejovité konzistence.

S t u p e ň V

Příprava 4-bromraethyl-3-ethoxy-5-(2-thienyl)-isoxazolu.

Směs 5,10 g 3-ethoxy-4- methyl-5-(2-thienyljisoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni IV, a 5,10 g N-bromsukcinimidu ve 400,0 ml tetrachlormethanu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 16,0 hodin.

Poté byla reakční smě3 zfiltrována a rozpouštědlo tylo za vakua odstraněno.

Bylo získáno 7,80 g ( 100%) žádaného, v nadpise uvedeného 4-brommethyl-3-ethoxy-5-(2-thienyl)- isoxazolu.

S t u p e π ' VI

Příprava ethyl-2-acetylamino-2-ethoxykarhonyl-3/3-ethoxy-5-(2-thienyl)- isoxazol-4-yl)-propionátu

Ku směsi 4,60 g diethylacetamidomalonátu a 2,40 g terc.-butoxidu draselného, ve 100,0 ml N-me.thyl24

2-pyrrolidonu, byl přidán při teplotě 22°C roztok

4-brommethyl-3-ethoxy-5-(2-thienyl)-isoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni V, ve 25,0 ml N-methyl2-pyrrolidonu, a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 22°C po dobu 1,0 hodiny a poté byla nalita do směai vody a ledu.

Vodné fáze byly poté vy třepány s diethyletherem a spojené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Poté byly organické fáze vysušeny se síranem horečnatým a následně byly za vakua zahuštěny.

Získaný zbytek byl zpracován sloupcovou chromá-» tografií na silikagelu,. sa použití směsi ethylacetát/ n-heptan/methanol (5:5:1), jako elučního činidla.

Byly získány 3,0 g (68%) Žádaného, v. nadpise uvedeného ethyl-2-acetylamino-2-ethoxykarbonyl-3-/3ethoxy-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl·)- propionatu.

Stupen VII

Příprava finální Sloučeniny la, t.j. kyseliny (R,S)2- amino-3-/-hydroxy-5-(2-isoxazol-4-yl)- propionové

Směs 2,70 g ěthyl-2-ecetylamino-2-ethoxykarbonyl3- /3-θthoxy-5-(2-thie ny1)-i s oxa zol-4-yl)-propi ona tu, připraveného v předcházejícím Stupni VI, a 20,0 ml 48%ního kys .bromovod.j byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 1,0 hodiny. Poté byla reakční směs za vakua odpařena a získaný zbytek byl rozpuštěn v 50,0 ml vody a zpracován s aktivním uhlím.

Po zfiltrování bylo pH filtrátu upraveno pomocí

4N vodného roztoku hydroxidu sodného na pH 3,0 a vzniklé krystal/ byly odfiltrovány a za vakua byly vysušeny.

Bylo získáno 0,50 g žádané finální Sloučeniny le, t.j. kyseliny (R,S)- 2-amino-3-/-hydroxy-5-(2isoxazol-4-yl)- propionové ( 30%).

Teplota tání: 237 - 239°C. ( rozklad)

Analytické hodnocení:

Vypočteno : C 47,23; H 3,97*, N 11,02 %

Nalezeno : C 47,21; H 4,02', N 10,92 % ¹H-NMR ( dimethylsulfoxid-dg = DMSO-dg):

delta 9,90 ( b.J IH); 7,82 (d.d.; 1H); 7,55 ( d.d.;, ih·); 7,24 ( d.d.; ih); 3,70 ( d.d.; ih); 2,95 2,88 ( m.; 2H ).

¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 171,42; 171,23; 159,62; 129,27', 1 28,65', 128,22; 127,15', 101,89; 52,59; 24,99.

Příprava kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(3thienyl)- isoxazol-4-yl/- propionové ( Sloučenina 1b)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena analogickým postupem, popsaným· výše.

Teplota tání: 239 - 24O°C ( rozklad)

ÍR-NMR (DMSO-dg):

delta 8,03 - 7,96 (m.; IH); 7,76 - 7,70 ( m.; IH);

7,48 - 7,43 ( m.J IH ); 3,70 - 3,63 ( m.; IH); 3,00 >

- 2,76 ( m.; 2H).

Příprava hydrátu kyseliny (R,S )-2-amino-3-/3-hydroxy5-(2-naftyl)- isoxazol-4-yl/- propionové ( Sloučenina lc )

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena analogickým postupem popsaným výše, za použití benzensulfonylové skupiny jako chránící skupiny pro

3-hydroxyisoxazolovou skupinu.

Teplota tání: 235 - 237°G ( rozklad) ^-NMR (DMSO-dg):

delta 2,89 - 3,16 ( m_e; 2H); 3,70 - 3,77 ( m.; IH); 7,56 - 7,63 ( m.; 2H ); 7,74 ( d.d.J 1H); 7,92 - 8,09 ( m.J 3H ); 8,22 ( s.; IH ).

¹³C-NMR (DMSO-dg): « delta 25,10; 53,03; 103,03; 124,30*, 125,90; 126,89; 126,96; 127,45; 127,79; 128,70; 127,70 (2C); 132,74; 133,18; 164,67; 171,41; 171,54.

Hmotnostní spektroskopie (MH+)m/z: 299

Příprava kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(4trifluormethylfenyl)-isoxazol-4-yl/- propionové ( Sloučenina 1 d)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena analogickým postupem popsaným výše', za použití benzensulfonylové skupiny jako chránící skupiny pro

3- hydroxyisoxazolovou skupinu.

Teplota tání: 237 - 239°C ( rozklad ) ¹H-NMR ( DMSO-dg):

delta 2,80 ( d.d.; IH); 2,97 (d.d.; IH); 3,71(d.d.· ih ); 7,87 ( s; 4H);

^C-NMR (DMSO-dgJ 5%ní kyselina trifluoroctová):

delta 23,35; 50,94; 101,72; 121,94; 126,11*, 126,16; 127,77 (2C); 130,34 ( k_r; cp₃); 131,74; 164,13*, 170,29

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 317

Příprava hemihydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3hydroxy-5-(3-benzo-/b/-thienyl)-isoxazol-4-yl/- propionové ( Sloučenina 1e )

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena analogickým postupem popsaným výše, za použití benzen-sulfonylové skupiny jako chránící skupiny pro

3-hydroxyisoxazolovou skupinu.

Teplota tání: 222- 224°C ( rozklad) ¹H-NMR (DMSO-dg):

delta 2,75 ( d.d.; 1H)J 2,96 (d.d.; IH); 3,70 (d.d.;

1H )J 7,43 - 7,55 ( m.; 2H ); 7,96 - 8,03 ( m.; ÍH 8,05 - 8,14 ( m.J IH ); 8,21 ( s.; IH).

¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta.25,02; 52,95*, 104,05; 123,17; 123,34;.123,67; 125,27 (2C)· 129,49; 136,80; 139,35; 161,49; 171,1 IJ 171,31.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 305

Příprava hydrátu kyseliny (R,S)- 2-amino-3-/3-hydroxy5-(5-sethy 1-2-thienyl )-isoxazol-4-yí/-propi onové ( Sloučenina 1f )

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena analogickým postupem popsaným výše, z 2ace tylamino-2-ethoxykarbony l-3-/3-e thoxy-5- (2-thienyl)

- isoxazol-4=yl/- propionátu lithiací a methylací v poloze 5-thienylové skupiny a následným odstraněním^ chránící skupiny ve vroucí vodné 47%ní kys.bromovodíkové. Teplota tání: '242 - 244°C ¹H-NMR (DMSO-dg):

delta 2,51 ( s.; 3H); 2,84 - 2,93 ( m.;.2H)J 3,63 3,72 ( m.f IH ); 6,94 ( d.d.J 1H); 7,33 ( d.J 1H ), ¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 14,91; 24,95; 52,62;-101,24*, 126,63; 126,88;

127,23; 142,33; 159,71; 171,20; 171,31.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 269

Příklad 2

Příprava kyseliny (R,S)-2-amir,o-2-(3-hydroxy-5-fenylisoxazol-4-yl)- octové ( Sloučenina 2s )

Stupeň I

Příprava 4-(3-ethoxy-5-fenylisoxazol)-kartaldehydu

Směs 3,0 g ( 15,0 mmolu) 3-ethoxy-4-methyl-5-fenylisoxazolu, jehož příprava je popsána Christensenem I.T. (1989)/viz výše/; 5,50 g (31,0 mmolu) N-bromsukcinimidu a 0,20 g (0,80 mmolu) dibenzoylperoxidu ve 100,0 ml tetrachlormethanu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným ¹ chladičem po dobu 20,0 hodin. Poté byla reakční směs ochlazena na teplotu místnosti, zfiltrována a za vakua byla odpařena.

Získaný zbytek byl rozpuštěn v 95,0 ml vody a zahříván za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 20,0 hodin. Po ochlazení tyla vodná fáze vytřepána 3x se 100,0 ml diethyletheru a spojené organické extrakty byly vysušeny síranem sodným a za vakua byla odpařeny.

Bylo získáno 2,40 g (753&) žádaného, v nadpise uvedeného 4-(3-ethoxy-5-fenylisoxazol)-karbaldehydu.

S t u p e ň II

Příprava 3-ethoxy=4=/5=(imidazolidin=2,4=dion)=5= fenylisoxazolu

Směs 1,90 g (8,7 mmolu) 4-(3=ethoxy-5-fenylisoxazol ).-kerbaldehydu, připraveného v předcházejícím Stupni IJ hodin. Po odpaření methanolu sa fáze vytřepána 3x se 150,0 ml organické fáze byly poté vysuse2,70 g (40,50 mmolu) kyanidu draselného a 7,80 g ( 81,W mmolu) uhličitanu amonného, ve 250,0 ml 50%ního vodného methanolu byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 6,0 vakua byla poté vodná ethylacetátu. Spojené ny síranem sodným a rozpouštědlo bylo za vakua odpařeno, Získaný zbytek byl poté zpracován sloupcovou chromatografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/ n-heptan/methsnol ( 5 : 5·: 1), jako elučního činidla.

Eyl získán 1,0 g žádaného, v nadpise uvedeného 3-ethoxy-4-/5-(imidazolidin-2,4-dion)/-5- fenylisoxazolU t 40/V ! ,

Stupeň III

Příprava finální Sloučeniny 2a, t.j, kyseliny (S,S)2-amino-2-(3-hydroxy-5-fenylisoxazol-4-yl)- octové”

Suspenze 800,0 mg (2,80 mmolu) 3-ethoxy-4~/5( imidazolidin-2,4-dion)/-5-fenvlisoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni II, ve 20,0 ml (120 mmolu) 6N vodné kyseliny chlorovodíkové, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 48,0 hodin. Poté byla 3raěs za vakua odpařena a získaný zbytek byl rozpuštěn ve 200,0 ml vody a 870,0 mg ( 8,50 mmolu) triethylaminu, Poté byl k reakční směsi přidán di-terc. -butyldikarbonát (4,30 mmolu) a 50,0 ml tetrahydrofu ránu a tato směs byla míchána -při- teplotě-20°C. po. do-: .. „ bu 20,0 hodin.

Poté byl tetrahydrofuran za vakua odpařen a pH bylo upraveno s 0,1N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 6,50 a vodná fáze byla následně vytře31 pána s diethyletherem, který byl odstraněn a pH vodné fáze bylo upraveno pomocí O,1N vodnéhc roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH 2,0 a vodná fáze byla následné vytřepána 3 x se 100,0 ml diethyletheru. Spojené organické fáze byly vysušeny se síranem sodným a za vakua byly odpařeny.

Zlákaný zbytek byl rozpuštěn ve 40,0 ml diethyletheru, ku kterému byl přidán nasycený roztok chlorovodíku v diethyletheru.Výsledná směs tyla míchána při teplotě 20°C po dobu 20,0 hodin a vzniklá sraženina byla izolována filtrací a vysušena.

Krystaly byly rozpuštěn?/ v 5,0 ml vody a pH bylo upraveno na pH 3,0 · Sraženina byla izolována filtrací a poté byla vysušena.

Bylo získáno 100,0 mg ( 15%) žádané, v nadpise uvedené Sloučeniny 2a, t.j. kyselin}' (R,S)-2-smino-2(3-hyčoxy-5-fenylisoxszol-4-yl/-octové.

Teplota tání: 228 - 23O°C( rozklad)

Analytické hodnocení:

Vypočteno : Nalezeno :

C 56,40; H 4,31; N 11,96 % C 56,20; H 4,37; N 11,74 76

¹³C-NMR (ÓMSO-dg):

delta 169,10; 168,38; 168,31*, 131,39', 129,60(20); 127,73 (2G); 126,95; 99,69; 46,06.

Příprava kyseliny (R,3)-2-amino-2-/3-hydroxy-5-(2thienyl)-isoxazol-4-yl/-octové ( Sloučenina 2b )

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena postupem popsaným výše, s tím rozdílem, že

4-isoxazolkarbaldehyd byl připraven z příslušné.4isoxazolbrommethylové sloučeniny,’ za použití horkého ( 115°C) dimethylsulfoxidu a hydrogenuhličitanu sodného. Teplota tání; 191 - 193°G ( rozklad) ’η-NMR (DMSO-dg):

delta 4,50 (s.; IH); 7,26 (d.d.J 1H ); 7,77 ( d.; 1H); 7,S4 ( d.J 1H ), ¹³C-NMR ( HC1 sůl)(DMSO-dg):

delta 46,16; 93,5?; 127,62; 129,15; 129,83; 131,20; 163,56; 168,45; 169,39.

Hmotnostní spektroskopie (.MH+)m/.z n. -241 * - - - Příprava hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-2-/3-hydroxy

5-(4-trifluorme thylfenyl )-isoxa2ol-4-yl/-octové ( Sloučenina 2c )

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena postupem popsaným výše,'9 tím rozdílem, že

4-isoxa2olkarbaldehyd byl připraven z příslušné 4isoxazolbrommethylové sloučeniny za použití horkého (115°C) dimethylsulfoxidu a hydrogenuhličitanu sodného.

Teplota tání: 200 - 201 °C ’η-ΝΜΒ (DMSO-dg):

4,46 ( 3.; IH); 7,92 (d.; 2H); 8,11 (d.; 2H).

¹³C-mm (HCl 3Ú1)(DMSO-dg):

45,84; 101,16; 121,98; 126,43; 126,50; 128,76(20); 130,75; 131,00 (k.; cf₃); 166,75; 168,20; 169,21. Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 303

Příklad 3

Příprava hydrátu kyseliny (R,3)-2-smino-5-(3-hydroxy5-fenylisoxazol-4-yl)- pentanové ( Sloučenina 3a )

V nadpise uvedená sloučenina byla připravena analogickým postupem popsaným v odborném časopise Drug Design end Delivery,5 ,57-71/1989/, autor Christensen I.T. se s p., s následujícími modifikacemi:

) Jako výchozí materiál byl' použit ethylbenzoylacetát 2) Isoxazolový kruh v meziproduktu 5-fenvl-4-(2propenyl )-3-isoxazolu, byl připraven dle postupu popsaném v odborném Časopise Agric.5iol.Chem.;

£0,1831-1837,3,/1986/, autor Seto K. se sp.

Obojetný ion ( zwiterion), v nadpise uvedené,žádané Sloučeniny 3a, byl získán po úpravě pH ve vodné fázi_z 0,1N vodným roztokem hydroxidu sodného_/na pH 3,50.

Teplota tání: 210 - 212°C ( rozklad)

Analytické hodnocení:

Vypočteno: C 54,62', H 6,40; N 9,10 %

Nelezeno : C 54,67*, H 6,36; N 9,13 % ¹ H-NfňE í DVSO-dg):

delta 7,72 - 7,61 (m.; 2H); 7,59 - 7,43 (m.; 3H);

3,64 - 3,40 ( m.; 2H ); 3,50 ( široký); 3,31- 3,19 ( m/, 1H ); 1,82 - 1,53 ( m.*, 4H ).

¹³C-NMR (BMSO-dg):

delta 170,75; 163,44; 161,65; 1 29,72*, 129,23(20); 128,58*, 126,19(20; 105,68; 53,93; 30,57; 25,13; 20,88. . ..

Příklad 4

Příprava kyseliny (R,S )-2-emino-4-/5-í 4-f luorf enyl”)

3-hydroxyisoxazol-4-yl/-butanové ^:( Sloučenina 4a )

S t u p e n 1

Příprava ethyl-3-oxo-3-(4-fluorfenyl)-propionatu

V nadpise uvedený beta-ketoester byl připraven analogickým postupem.popsaným .v Příkladu 1., za použití.. 25,0 g (0,21 molu) 4-fluorbenzonitrilů; 51,70 g(O,31 molu) ethy1-2-bromacetátu; 20,30 g (0,31 molu) aktivovaného zinkuj 0,20 g ( 0,90 mmolu) bromidu mědnatého a 500,0 ml benzenu.

Po zpracování zbytku sloupcovou chromatografií ns silikagelu, za použití směsi ethylacetát/n-heptan/ mezhanol (5:5:1), jako elučního činidla, bylo získáno 28,0 g ( 65%) žádaného, v nadpise uvedeného ethyl-3-oxo-3-(4-fluorfenyl)-propionátu, ve formě látky olejovité konzistence.

Stupeň II

Příprava ethyl-4-ethoxykartony 1-5-(4-f1uorfeny1)-5oxopentanoátu

Ku roztoku hvdridu sodného ( 4,40 gj 0,15 moluj / S0%ní produkt v minerálním oleji/) v 500,0 ml e.thanolu bylo přidáno 28,0 g ( 0,13 molu) 3-oxo-3-U-f] uorfenyl)-propionátu, připraveného v předcházejícím Stupni I, a vzniklá reskční směs byla míchána- při teplotě 25°C po dobu 1,50 hodiny.Poté byl ku směsi.přidán při teplotě 25°C během 30,0 minut ethvl-3-chlorpropionat ( 20,0 g] 0,15 molu) a tato směs byle zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem ,po dobu 20,0 hodin.Poté bylo rozpouštědlo za vakua odstraněno a získaný zbytek byl rozpuštěn ve 400,0 ml vody a následně vytrepán s ethylacetátem.Spojené organické fáze byly vysušeny se Síranem hořečnatým' e poté byly za vakua odpařeny·

Po zpracování získaného zbytku sloupcovou chromatografií na silikagelu, za použití směsi -ethylacetát/ n-heptan/methanol (4:4:1), bylo .získáno 27,50 g ( 67%), Žádaného, v nadpise uvedeného ethyl-4-ethoxykarbonyl-5-(4-fluorfenyl)-5-oxopentsnoátu

Stupeň III

Příprava ethy 1-3-/5-(4-fluorfenyl)-3-hydroxyisoxszol4-yl/- propionatu

V nadpise uvedená sloučenina byla připravena analogickým po3tupem popsaným v Příkladě 1, s následujícími modifikacemi:

1) Jako výchozí materiál byl použit ethyl-4-ethoxykarbony1-5-(4-fluorfenyl)-5-oxopenfeanoát ( 27,5 g*, B9_t0 mmolu?

2) Po odpaření methanolu z roztoku methanol/voda,byla vodná fáze vytřepána s diethyletherem.

Spojené organické fáze byly vysušeny se síranem horečnatým a poté byly za vakua odpařeny.Získaný'zbytek byl rozpuštěn ve 400,0 ml ethanolu a bylo přidáno k' roztoku 40,0 ml ačetylchloridu.Výsledná smě3 byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 20,0 hodin a poté bylo rozpouštědlo., za vakua odpařeno.

Po zpracování získaného zbytku sloupcovou chromá-ΛΛ' tografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/ ·£,·% n-heptan/methanol (2:2:1), bylo získáno 9,30 g ( 3V;ó) žádaného, v nadpise uvedeného éthy 1-3-/5-(4f luorf e ny 1) -3 -hy d r oxy i s oxa z o 1-4 -y 1 /-pro pi ona tu.

Stupeň IV

Příprava ethyl-3-/3-ethoxy-5-(4-fluorfenyl)-isoxázol -4-yl/-propionatu

V nadpise uvedená sloučenina‘byla připravená^-.....

analogickým postupem, popsaným v Příkladě 1, s následujícími modifikacemi:

1) . Jako výchozí materiál byl použit ethyl-3-/5fluorfenyl)-3-hydroxyisoxazol-4-yl/-propionat (5,50 gj 20 mmolu )

2) Místo 2 ekvivalentů ethylbromidu, byl použit pouze ekvivalent jeden.

Po zpracování zbytku sloupcovou chromatografií ns silikagelu, za použití směsi ethylacetát/n-heptan/ methanol ¢10: 10 : 1), jako elučního činidla, byly získány 4,0 g ( 65%) žádaného, v nadpise uvedeného 3-(3-ethoxy-5-U-fluorfenyl)-isoxazol-4-yl)- propionstu.

S t u p e ň V

Příprava 3-/3-ethoX7-5-(4-fluorfenyl)-isoxazol-4-yl/propanalu

V nadpise uvedená sloučenina byla připravena z ethyl-3-/3-ethoxy-5-(4-fluorfenyl)-isoxazol-4-yl)-propionatu analogickým postupem, popsaným v odborném časopise J.Org.Chem.'; 43,3624-3626/1978/, _řautor 3ich D.H.

t u p e ň VI

Příprava 3-ethoxy-5-(4-fluorfenyl)-4-/2-/5-(imidszolidin-2,4-d i on)/-e thy 1 /-i s oxa z olu

V nadpise uvedená sloučenina bvla připravena .postupem popsaným v Příkladě 2, za použití příslušného aldehydu jako výchozího materiálu.

Získaný surový produkt b.vl 2x překrystalizován z ethanolu a byla získána čistá substance.

Stupeň VII

Příprava finální Sloučeniny 4a, t.j. kyseliny (R,S)2-amino-4-/5-(4-fluorfe nyl)-3-hydroxyisoxa zol-4-yl/butanové

V nadpise uvedená finální Sloučenina 4a, byla připravena z hydantoinu analogickým postupem popsaným v Příkladě 2, ve výtěžku 19%.

Teplota tání: 235 - 237°C ( rozklad)

Analytické hodnoceni:

Výpočet: C 55,71; H 4,68; N 10,00 %

Nalezeno: C 54,59; H 4,61; N 9,97 % ^H-NMR (DMSO-dg,340°K):

delta 7,78 - 7,54 (m.; 2H); 7,39 - 7,19( m.; 2H );

5,92 (b.)* 3,35 - 3,18 (m.; 1H); 2,81 - 2,53 (m.;

2H ); 2,04 - 1,70 ( m.*, 2H ).

<· _ ·- ΐ’ ¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 172,19; 170,79*, 164,70 a 160,76( C-F); 162,96; .

4.28,64·; 128,50; 425,1-3, 1 16,55*, 1 16,21; 104,52’ 52,35*, 31,44*, 17,81.

Příprava kyseliny (R,S)-2-amino-4-(3-hyároxy-5-fenylisoxazol-4-yl)-butanové, hydrochloridu ( Sloučenina 4b )

V nadpise uvedená Sloučenina 4b byla připravena analogickým postupem, popsaným výše.

Teplota·? tání: 230 - 233°C( rozklad) ¹H-NME. (D₂0):

delta 7,59 - 7,48( m.; 2H)J 7,47 - 7,32 (m.; 3H)J 3,61 - 3,50 (m.; IH); 2,57 - 2,41 (m.; 2H); 2,08 1,90 ím.; 2fí).

¹C.-WMR (DMSO-dg):

delta 179,12; 176,64; 161,12; 130,41; 128,79(20); 128,13; 125,72(20); 107,13? 53,31,* 32,97; 18,62,.

Příprava kyseliny (R,S)-2-emino-4-/3-hydroxy-5-(2thienyl)-isoxazol-4-yl/-butanové, hydrátu i

( Sloučenina .4c) - .'

V nadpise uvedená Sloučenina 4c, byla připravena analogickým postupem, popsaným výše.

Teplota táni: 214 - 216°C( rozklad) ¹H-NMP (DMSO-dg,320°K):

delta 7,84- 7,73(m.; IH); 7,59 - 7,45 (□.; 1H);7,29 ' -_r7,l8 (m.J IH); 3,50 ( velmi široký); 3,32 - 3,10 (m.; 1H ); 2,93 - 2,60 (m.; 2H ); 2,00 - 1,75 <m.; 2H ); ¹³C-ŇMR (DMSO-dg):

delta 172,11; 170,64; 159,47*, 129,41; 128,41 (2C); 126,35; .103,73; 52,42; 30,76; 17,93.

Příprava (R,S)-2-amino-4-/3-hydroxy-5-(3-thienyl)i3oxazol-4-y1/- butanové kyseliny ( Sloučenina 4d)

V nadpise uvedená Sloučenina 4d, byla připravena analogickým postupem, popsaným výše_c

Teplota tání: 212 - 214°C ¹H-NMR (DMSO-dg):

delta 8,02 - 7,95 (m.; IH); 7,78 - 7,72 (m.J 1H ); 7,48 - 7,43 (m.J 1H); 3,28 - 3,16 (m.J IH); 2,93-2,77( m.; 1H ); 2,75 - 2,54 (m_e; 1H); 2,00 - 1,75 (m.; 2H ).

Příprava (R,.S)-2-amino-4-/3-hýdroxy-5-(2-naf t.yl)-isoxazÓÍ

4-yl/-butanové,ky seliny, hydra tu ( Sloučenina 4e)

V nadpise uvedená Sloučenina 4e, byla připravena- analogickým postupem, popsaným výše.

Teplota tání: 209 - 2H°C ^H-NMR (DMSO-dgb delta 1,87 - 2,05 U.*, 2H); 2,60 - 2,85 (m.; 2H)J 2,90 .

- 3,06 (m.; ΊΗ ); 7,56 - 7,66 (m.‘, 2H); 7,80 -(d/d.; ih);- -7,93 - 8,16 (m.; 3H); 8,26' (s.; IH).

¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 17,92; 31,50; 52,40; 105,02; 123,31; 125,66;i25,95;

127,04; 127,44; 127,76; 128,75 J 128,91; 132,82; 133,09*,

163,71; 170,70; 172,30.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 313

Příklad 5

Příprava hemihydrátu 4-/(2-smino-3,4-dioxo-1-cyklobuten·

1-y1)-aminomethyl/-3-hydroxy-5-fenyli soxa zolu ( Sloučenina 5a)

Stupeň I

Příprava N-/(3-e thoxy-5-fenyliaoxaz ol-4-y1)-me thy1/-'ftalimidu

Ku směsi 1,0 g (5,40 mmolu) draselné formy ftalimidu v 50,0 ml dimethylformamidu bylo přidáno při teplotě 9Q°C , ve 25,0 ml dimethylformamidu, 1,40 g ( 5,0 mmolu)

4-brommethyl-3-ethoxy-5-fenylisoxazolu, který byl připraven analogickým,jvýšeyzmíněným postupem, použitým pro přípravu 4-brommethyl-3-ethoxy-5-(2-thienyl).-isoxa- . zolu. Výsledná reakční směs byla míchána při teplotě 90°C po dobu 40,0 minut. Poté bylo ku směsi přidáno 200,0 ml dichlormethanu a tato směs byla nalita do vody.Organická a vodná fáze byly odděleny a vodná fáze byla vytřepána s diethyletherem.

Spojené organické fáze byly promyty s O,IN vodným roztokem hydroxidu sodného a vodou, vysušeny síranem sodným a následně ·Ζ8 vakua odpařeny.

Bylo získáno 1,50 g ( 88&) žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, t.j. N-/(3-ethoxy-5-fenylisoxszol-4-yl)methyl/-ftalimidu.

S t u p e ň II *

Přípravě 4-aminomethyl-5-fenyl-3-isoxazolu, hydrobromida

- - Suspenze 1,30 g ( 3,70 mmolu-) N-/(3-ethoxy-5fenylisoxazol-4-yl)-meth.yl/-ftalimidu, připraveného v předcházejícím Stupni I, ve 20,0 ml 48%ní vodné’ kys.· bromovod.a 20,0 ml kyseliny octové, byle míchána při. teplotě 110°G po dobu 6,0 hodin,Vzniklá reakční směs byla poté za vskua odpařena a získaný zbytek byl rozpuštěn ve vodě. Vodná fáze byla vytřepána s diethyletherem, který byl odstraněn a vodná fáze. byle za vakua odpařena a ku zbytku byl-o přidáno 5,0 ml acetonu.

Vzniklá sraženina byla izolována filtrací a vysušena, a bylo získáno 700,0 mg (70%) žádaného, v nadpise uvedeného 4-aminomethyl-5-fenyl-3-isoxazolu.hydrobromidu.

Stupeň III

Příprava finální Sloučeniny 5a, t.j. hemihydrátu 4/(2-emino-3,4-dioxo-1-cyklobuten-1-yl)-aminome thyl/3-hydroxy-5-fenylisoxazolu

Kusměsi 365,0 mg 3τ8ύϋηο-4-βth'ó’xy-3-čykTbbuťeriV

1,2-dionu, připraveného dle postupu popsaného v odborném Časopise J.Amer.Chem.Soc.,88,1533-1536/1966/,autor Cohen S, se sp.; a 700,0 mg (2,60 mmolu) 4-aminomethyl5-fenyl-3-isoxazaolu. hydrobromidu, připraveného v

4} předcházejícím Stupni IIJ ve 75,0 ml ethanolu, byl přidán při teplotě 22°C roztok 210,0 mg (5,20 mmolu) v 5,0 ml vody a vzniklá reakční směs byla míchána pří teplotě 22°C po dobu 4,0 hodin,Po odpaření rozpouštědla byl získaný zbytek rozpuštěn ve 200,0 ml vody a pří vodné fáze bylo upraveno na pH 8,50,

Poté byla vodná fáze vytřepána 3 diethyletherem, který byl odstraněn, a pH vodné fáze bylo upraveno na pH 3,75. Vzniklá sraženina byla izolována filtrací a poté byla vysušena.

Bylo získáno 675,0 mg (92¾) žádané, v nadpise uvedené finální Sloučeniny 5a, t.j. hemihydrátu 4/22-amino-3,4-dioxo-1-cyklobuteri-1-yl)-aminomethyl/3-hydroxy-5-fenylisoxazolu.

Teplota tání:. 259 - 261°C( rozklad)

Analytické hodnocení:

Vypočteno: . C 57,13; H 4,12; N 14,28 %

Nalezeno : C 57,70J H 3,S5J N 14,29 % ¹H-NMS (DMSO-dg):

delta 7,31 - 7,24 (m.J 5H); 4,78 - 4,56 Cm.; 2H );

3,50 ( s.J velmi, široký).

^JC-NMR (DMSO-dg): ...............

delta 183,34; 183,21J 170,14*, 169,48; 168,29; 165,84;. 130,58;. 129,32( 2C)* 127,51 í 126,72 (2C); 102,52J 35,46«,

Příprava 4-/(2-amino-3,4-dioxo-1 -cyklobutén-1-yl)aminome thyl/-3-hydroxy-5-(2-thieny1)-is oxa zolu ( Sloučenina 5b )

- 44 V nadpise uvedená Sloučenina 5b, byla připravena analogickým postupem, popsaným výše.

Teplota tání: 237 - 239°C( rozklad) ¹H-NMR (DMSO-dg):

delta 7,88 (d.d.*, IH)*, 7,67 (d.d.*, IH); 7,26 (d.d.J 1H); 4,78 - 4,63 ( m.J 2H )J 3,30 (s.J velmi široký), ¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 183,36; 183,18; 169,97*, 169,51168,23 ζ 161,29*, 129,30; 128,59; 128,25*, 127,82*, 101,41; 35,25.

Příprava 4-/(2-amino-3,4-dioxo-1-cyklobutsň-1-yl)-aminomethyl/-3-hydroxy-5-(3-thienyl)-isoxazplu · (Sloučenina 5c)

V nadpise uvedená Sloučenina 5c, byla připravena< analogickým postupem, popsaným výše.

Teplota tání: 276 - 278°C ( rozklad)' ·'» ¹H-NMR (DMSO-dg):

delta 8,16 - 8,13 (m.; IH); 7,82 - 7,77( m.J 1H); 7,56 - 7,50 (m.; 1H); 4,76 - 4,66 (m.*, 2H).

Příprava 4-/(2-araino-3,4-dioxo-1-cyklobuten-1-yl)eminome thy l/-3-hydroxy-5-(4-trif luorme thylf eny 1)isoxazolu ( Sloučenina 5d ) . '

V nadpise uvedená Sloučenina 5d, byla připravena analogickým postupem, popsaným výše.

Teplota tání: 269 - 272°C

H-NMB (DMSO-dg):

delta 4,72 (d.J 2H); 7,93 (d.d.; 4H), ¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 35,29; 104,19; 121,75; 126,12; 126,17', 127,60(20); 130,25 (k.; CF₃); 131,11; 164,09; 168,21; 169,51; 170,11; 183,29 (20).

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 354

P ř í k 1 a d 6

Příprava 4-/2-/(2-jámiiio:-J,.4-dioxo-1-cyklobuten-1 -yl)amino/-e thyl/-3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxa zolu.hydrátu ( Sloučenina 6a ) ‘

Stupeň 1

Příprava(3-e thoxy-5-(2-thienyl)-i soxazol)-ace tonitrilu

Ku směsi 4,0 g (81 mmolů) kyanidu sodného v 50,0 ml dimethylsulfoxidu, zahřáté na teplotu 90°C, bylo přidáno při uvedené teplotě po kapkách 4,90 g (16 mmolů)

4-brommethyl-3-ethoxy-5-(2-thienyl)-isoxazolu, rozpuštěného v 50,0 ml dimethylsulfoxidu. Poté byla reakční směs míchána po dobu dalších 30 minut a následně byla nalita na směs ledu a vody. Vodná fáze byla vytřepána s dichlormethanem a spojené organické fáze byly promyty s vodným nasyceným roztokem chloridu sodného.

Po vysušení organických fází síranem hořečnatým byly zmíněné fáze za vakua odpařeny.uZískaný zbytek byl zpracován dále sloupcpvou chromatografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/n-heptan ( 1 : 3), jako elučního činidla.

Bylo.získáno 2,20 g ( 58%) žádaného, v nadpise uvedeného f 3-e thoxy-5-(2-thieny.l)-isoxazol J-acetonitrilu.

Stupeň II

Příprava 4- (2-aminoethyl)-3-ethoxy-5- (2-thienyl )-isoxazolu Ku směsi 0,34 g ( 9,0 mraolu) tetřahydrohlinitanu lithného, ve 50,0 ml vysušeného diethyletheru, byla přidána po kapkách směs 1,20 g (9,0 mmolů) chloridu hlinitého v 50,0 ml vysušeného diethyletheru a vzniklá reakční směs byla míchána dalších 10·minut při teplotě místnosti, ku které byla poté přidána směs /3-ethoxy5-(2-thienyl)-isoxazol/acetonitrolu (2,0 g; 9,0 mmolů), připraveného v předcházejícím Stupni I, v 50,0 ml vysušeného diethyletheru, a reakční směs byla míchána dalších 45 minut. Poté byla reakční směs ochlazena na teplotu 5°G a bylo k ní přidáno 30,0 ml vody a 5,0 ml 6SÍ kyseliny sírové. Poté bylo pH kyselého vodného roztoku zvýšeno za použití 6M roztoku hydroxidu sodného na pH 11,0.

Po oddělení vodné a organické fáze byla vodná fáze. vytřepána s diethyletherem a spojené organické fáze byly vysušeny síranem hořečnatým a za vakua byly zahuštěny.

Získaný zbytek byl zpracován sloupcpvou chromatografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/ n-heptan/methanol/triethylamin ( 90 10 : 5 : 5 )_z jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,70 g ( 76¾) v nadpise uvedeného, Žádaného 4-(2-aminoethyl)-3-ethoxy-5-(2-thienyl)-isoxazolu.

Stupeň III

Příprava 4-(2-aminoethyl)-3-h.ydroxy-5-(2-thienyl)isoxazolu. hydrobromidu

Směs 1,70 g ( 7,0 mmolu)4-(2-aminoethyl)-3-ethoxy5-(2-thienyl)-isoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni II, a 47%ní vodný roztok ky a. bromo vod .(množství neudáno )j byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 1,0.hodiny.. Vzniklé krystaly byly izolovány filtrací a poté byly za vakua vysušeny.

Bylo získáno 1,90 g ( 94%) žádaného, v nadpise uvedeného 4-(2-aminoethyl)-3-hydroxy-5-(2-thienyl4isoxazolu.hydrobromidu'

S t u p e ň IV

Příprava finální Sloučeniny 6a, t.j, 4-/2-/(2-amino3,4-dioxo-1-cyklobuten-1-yl)-amino/-ethyl/-3-hydroxy5-(2-thienyl)-isoxazolu.hydrátu . ..Ku roztoku 480,0 mg (3,40 mmolu) 3-amino-4-ethoxy3-cyklobuten-1,2- dionu, jehož příprava je popsána' výše, a 1,0 g (3,40 mmolu) 4-(2-aminoethyl)-3-hydroxy5-(2-thienyl)-isoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni V, ve 30,0 ml ethanolu, byljpřidán při teplotě

22°C roztok 270,0 mg (6,80 mmolu) hydroxidu sodného v 5,0 ml vody, a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 18,0 hodin. Poté byla směs za vakua odpařena a ku zbytku byla přidána voda a diethylether. Organická a vodná fáze byly odděleny a vodná fáze byla vytřepána s diethyletherem, který byl odstraněn.

Vodná fáze byla okyselena 2M roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 2,50 a byla poté ponechána v klidu při teplotě 5°C po dobu 18,0 hodin.

Vzniklé krystaly byly izolovány filtrací a poté byly promyty postupně s vodou, acetonem a diethyletherem, a.iná3ledně byly za vakua vysušeny.

3ylo získáno 906,0 mg (87%) žádané, v nadpise uvedené finální Sloučeniny 6a,. t.j, 4-/2-/(2-amino-3,4dioxo-1-cyklobutan-1-yl)-amino-/ethyl/-3-hydroxy-5( 2-thienyl)- isoxazolu.hydrátu, *· >***

Teplota tání: 248 - 25O°C( rozklad) ·*

Snálytické. hodnocení :

Výpočet: C 50,39; H 3,75; N 13,57 %.

Nalezeno: C 50,66; H 3,72; N 13,55 % ¹H-NMR (DMSO-dg):

delta 2,77 td.d.J 2H); 3,51 - 3,78( m.; 2H); 7,22 ( d.d.J IH); 7,57 ( d.J IH); 7,81 ( d.J IH ).

¹³H-NMR(DMSO-dg):

delta 24,12; 42,06; 102,06; 126,65; 127,94; 128,53;

129,oo; 160,41; 168,65; 169,4i; 170,05; 182,82; 183,00.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 306

Příklad 7

Fříprava monohydrátu kyseliny (R,S)-2-smino-3-/3(karboxyme thoxy)-5-(2-thienyl)-isoxa zol-4-yl/-propionové ( Sloučenina 7a )

Stupen 1

Příprava e thyl-/4-methy1-5-(2-thienyl )-3-Í3oxazolyloxy )acetátu

Suspenze 10,0 g (55,0 mmolů) 4-me thy1-5-(2-thienyl)isoxazol-3-olu, jehož příprava je popsána výše, a 19,1 g ( 138,0 mmolů) uhličitanu draselného, ve 350,0 ml aceto^ nu, byla míchána při teplotě místnosti po dobu 30,0 mi-7 nut a poté byla zahřáta -pod zpětným chladičem na refluxní teplotu» Po 45,0 minutách bylo *k této reakční směsi přidáno 17,60 ml ( 166,0 mmolů) ethylchloracetátu ve '125,0 ml acetonu a výsledná reakční směs byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 210 minut, Poté byla směs Ochlazena na teplotu 5°C, zfiltrována a za vakua byla zahuštěna.

Získaný zbytek byl rozpuštěn v 500,0 ml dichlorv + methanu,, promyt 2x .s 500,0 ml vody a poté ještě s 500,0 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým a za vakua byla zahuštěna a zbytek byl zpracován pomocí urychlené chro:

mstografie na silikagelu, za použití směsi n-hepatn/ ethylacetát/methanol ( 20 : 10 : 1),jako elučního činidla a poté za vakua zahuštěn.

Bylo získáno 8,70 g (59%) v nadpise uvedeného,žádaného ethyl-/4-methyl-5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy)- . acetátu

S t u p e ň II

Příprava e thyl-/4-bromme thy 1-5-(2-thienyl)-3-isoxa zolyloxy/-a četa tu

Směa 2,50 g (9,40 mmolu) /4-methyl-5-(2-thienyl)3- isoxazolyloxy/-acetátu, připraveného v předcházejícím Stupni I, a 2,0 g (11,20 mmolu) N-bromsukcinimidu, ve 125,0 ml tetrachlormethanu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 8,0 hodin, poté byla ochlazena, zfiltrována a nakonec byla za vakua zahuštěna.

Bylo získáno 2,80 g (88%) žádaného, v nadpise uvedeného e thvl-/4-bromme thvl-5-(2-thi enyl) -3-isoxa zolyloxy/-acetátu.

Stupeň III

Příprava e thy 1-2-a ce tylamino-2-e thoxykarbony1-3-/34# /3 -/ (e thoxy karbony 1) -me thoxy /-5- (2-thienyl) -i soxa žol4-yl/-propionatu fc

Ku směsi 3,50 g (16,20 mmolu) diethylacetamidomalonatu a 0,90 g (17,0 mmolu) te-rc.-butoxidu ďraseli ného , ve 30,0 ml 1-methyl-2-pyrrolidinonujjcterá byla míchána při teplotě 25°C po dobu 30 minut, bylo poté přidáno při teplotě 25- 28°C ,2,80 g (8,10 mmolu) ethyl/4-bromme thyl-5-(2-thi enyl )-3-isoxazolyloxy/-ace ta tu, připraveného v předcházejícím Stupni II, v 5,0 ml 1methy1-2- pyrrolidinonu, a výsledná reakční směs byla poté. píchána při teplotě .28°C. po dobu. 1,0 hodiny.,., a . . poté byla nalita na 250,0 ml směsi vody a ledu.

Vodná fáze byla vytřepána 3x se 200,0 ml diethyletheru a spojené organické fáze byly promyty se 200,0 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného, poté byly vysušeny síranem hořečnatým a nakonec byly za vakua zahuštěny.

Získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití aměsi dichlormethan/ ethylacetát (7:1).

Byly získány 2,30 g (5%) žádaného ethyl-2-acetylamino-2-ethoxykarbony1-3-/3-/(ethoxykarbonyl)-methoxy/5-(2-thienyl)-isoxaz ol-4-yl/-propiona tu.

Stupeň. IV

Příprava finální Sloučeniny 7a, t.j. monohyarátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-(karboxyme thoxy)-5-(2-thienyl)isoxazol-4-yl/-propionové

Suspenze 2,0 g ( 4,10 mmolu) ethyl-2-acetylamino2-ethoxykarbonyl-3-/3-/(ethoxykarbonyl)-methoxy/-5-(2thienyl)-isoxazol-4-yl/-propionatu ve 130,0 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkové, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 24,0 hodin. Poté byla reakční směs ochlazena, vytřepána 2x se 150,0 ml dichlormethanu a zpracována s aktivním uhlím.Po zahuštění za vakua bylo získáno 1,20 g ( 8656) soli kyseliny chlorovodíkové a po přidání vody byla získána žádaná, v nadpise uvedená Sloučenina 7a, t.j. monohydrát kyseliny (S,S)-2-amino-3·!· /3-(karboxymethoxy)-5-(2-thienyl)-i s oxa zol-4-y l/-propi onové, v množství 1,0 g ( 71% ).

íeplota tání: 228 -	23O°C (	rozklad)
Analytické hodnocení:
Výpočet: 0	43,64;	H 4,27*, N 8,48.	%
Nalezeno: C	43,07;	H 4,17; N 8,43	%

¹H-NMR( DMSO-d₆):

delta 2,86 - 3,28 (m.J 2H); 3,79 (d.d.; IH); 4,69 (a.; 2H ); 7,26 ( d.d.; IH )· 7,69 ( d.d.; IH ); 7,86 (d.d.; 1H ).

¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 23,50; 52,42; 67,39‘, 100,45; 127,91;_ 1 28,23; 128,48; 129,47; 161,44, 169,63', 170,14*, 170,57. Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 313

Příprava kyseliny (P,S).-2-araino-3-/3-(karboxypropoxy)5-(2-thienyl)-isoxa zol-4-yl/-propionové (Sloučenina 7b)

V nadpise uvedená Sloučenina 7b bvla připravena postupem popsaným výše, s tím rozdílem, že místo ethylchloracetátu jako alkylačního činidla, byl použit 4brombutyrát.

Teplota tání: 197 - 198°G ( rozklad)

t.

Analytické hodnocení:

Výpočet: C 49,41; H 4,74', N 8,23 %

Nalezeno:; 0:49,27; H 4,73; N 8,30 % ^H-NMR ( DMSO-dg):

delta 2,01 (k.J 2H); 2,23 - 2,60 (m.; 2H ); 2,71,- 3,08 ( m.; 2H )J 3,56 (d.d.; 1H)J 4,25 (t.; 2H); 7,26 (d.d.*, IH ); 7,70 (d.d.; IH); 7,85 (d.d.; 1H).

¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 24,37; 25,20; 32,44; 53,03; 69,65; 101,01', 127,92', 128,69', 128,79; 129,37; 161, Γ5*, 170,39*, 170,97*, 175,44.

Hmotnostní spektroskopie(LTH+)m/z: 341

Příklad 8

Příprava monohydrátu kyseliny /4-/(2-amino-3,4-diozo1-cyklobuten-1-ýl)-aminomethyl/-5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy/- octové ( Sloučenina 8a)

Stupeň 1

Příprava ethy1-/4-(N-ftalimidomethyl)-5-(2-thienyl)3-Í3oxazolyloxy/-acetatu _t

Ku směsi 0,71 g ( 3,80 mmolu) draselné formy ftalimidu, nasuspendovaného do 30,0 ml dimethylformamidu, a zahřáté na teplotu 90°C, bylo po 15 minutách přidáno ?

1,20 g ( 3,50 mmolu) ethyl-/4-bromme thy 1-5-(2-thi enyl)... -3-isoxazolyloxy/-acetátu, jehož příprava je popsána výše, ve 20,0 ml dimethylformamidu a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 90°C po dobu 40,0 minut.

Poté byla směs ochlazena s bylo přidáno 200,0 ml dichlormethanu a 200,0 ml vody. Organická a vodná fáze byly odděleny a organická fáze byla promvta 2x se 150,0 ml nsSyceňéhoG.yodného roz^ku chloridu vápenatého a poté byla- vysušena sírsnem hořena tým a za vakua byla zahuštěna.

Získsný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi n-heptan/ethylacetát (2:1) ,jako elučního činidla, a získaný žádaný produkt v surové formě byl rozpuštěn ve 200,0 ml dichlormethanu, Tento roztok byl promyt 2x se 200,0 ml nasyceného vodného roztoku chloridu vápenatého, poté byl vysušen síranem horečnatým a za vakua byl odpařen.

Po krystalizaci zbytku z ethanolu bylo získáno 0,9g ( 64%) žádaného, v nadpise uvedeného produktu, t.j.

e thy1-/4-(N-ftalimidomethyl)-5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy/yacetatu, ve formě bíle zbarvených krystalů je· hličkovitého tvaru.

Stupeň II

Příprava /4-/N- (2-karboxybenzamido )-methyl/-5-(2-thien.yl) -3-isoxazolyloxy/- octové kyseliny

V60,0 ml IM roztoku hydroxidu sodného bylo zahříváno za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 45,0 m-irmÝ Π Afi » í 1 50 mm a! η a +hv1-/4-(N-ft3

5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy)-acetstu, připraveného v předcházejícím Stupni I, a vzniklá reakční směs byla poté ochlazena a vytřepána 3x se 60,0 ml diethyletheru a následně okyselena ne$Hl.0- 2,0 s 5,0 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové.“

Vodná fáze byla vytřepána 3x se 80,0 ml dichlojrmethanu a 4xs 80,0 ml diethyletheru. Spojené organické fáze byly poté za vakua odpařeny.

Sylo získáno 0,60 g (100%) žádané] v nadpise uvedenéhkyseliny /4-/N-(2-karboxybenzamido)-methy1/-5- . (2-thienyl)-3-isoxazolyloxy/-octové.

Stupeň III

Příprava hydrochloridu kyseliny /4-aminomethyl-5-(2thienyl)-3-isoxazolyloxy/- octové

Ve 125,0 ml 1M roztoku kyseliny, chlorovodíkové bylo zahříváno za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 45,0 minut 0,60 g (1,50 mmolu) /4-/N-(2-karboxybenzamido)-methyl/-5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy/ octové kyseliny, připravené v předcházejícím Stupni II, a vzniklá reakční směs byla poté ochlazena a vytřepána se 200,0 ml diethyletheru a nakonec byla za vakua odpařena.

Bylo získáno 0,38 g ( 100%) žádaného, v nadpise uvedeného hydrochloridu kyseliny /4-aminomethyl-5-(2 thienyl)-3-isoxazolyloxy)-octové.

S t u p e η IV

Příprava finální Sloučeniny 8a, t.j, monohydrátu kyseliny /4-/(2-amino-3,4-dioxo-1-cyklobuten-1-yl)-aminome thyl/-5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy/-octové

Ku směsi 0,30 g. ( 1,0 mmolu) hydrochloridu /4aminomethy 1-5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy/-octové kyseliny, připraveného v předcházejícím Stupni III, a 0,16 g ( 1,10 mmolu) 3-amino-4-ethoxy-3-cyklobuten-1,2-dionu, jehož, příprava je popsána výše, v 50,0 ml ethanolu, bylo přidáno 0,08 g (2,10 mmolu) hydroxidu sodného, rozpuštěného ve 3,0 ml vody. Vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 22°C po dobu 18,0 hodin a vzniklá suspenze byla za vakua odpařena a zbytek byl po rozpuštění ve ? vodě vytřepán 2x se 150,0 ml diethyletheru.

Poté bylo pH vodné fáze upraveno s 1M roztokem kyseliny chlorovodíkové.na. pH 2,0 a vzniklá.krystalická látka byla izolována filtrací a poté byla vysušena za vakua.

Bylo získáno 0,26 g (69%) žádané Sloučeniny 8a, t.j. monohydrátu kyseliny /4-/(2-amino-3,4-dioxo-1-cyklobuten-1-y 1)-aminome thy1/-5-(2-thienyl)-3-isoxazolyloxy/octové.

Teplota tání: 222 - 223°C( rozklad)

Analytické hodnocení:

Výpočet: 045,78; H 3,57; N 11,44 %

Nalezeno: C 45J3J H3,ói; ,N 11,16 % 'h-NMR (DMSO-dg):

delta 4,75 (d.J 2H)J 4,86 (a.; 2H); 7,30 (d.d.; IH);

7,70 ( d.J IH ); 7,94 (d.J 1H ).

¹³C-NMR( DMSO-dg):

delta 34,88; 66,27*, 100,97; 127,45; 128,52; 128,67; 130,48; 162,42; 168,19*, 168,74; 169,55; 169,95; 183,29.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 350

Příklad 9 '-♦v'

Příprava hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-karboxy5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl)-propionové ( Sloučenina 9a )

S t u p e ň I

Příprava ethyl-2,4-dioxo-3-methyl'4-(2-thienyl)- butyratu

Ku 4,10 g (0,18 molu) sodíku ve 100,00 ml etha' nolu bylo přidáno sa chlazení 24,0 ml( 0,18.molu) diethyloxalatu a k takto vychlazené směsi bylo přidáno po 15 minutách 20,0 ml (0,l6>molu) 1-(2-thienyl)-1-propanonu v 10,0 ml ethanolu a výsledná reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 2,0 hodin a poté ještě 16,0 hodin při teplotě 22°C, Poté byla směs za vakua zahuštěna a získaný zbytek byl rozpuštěn ve 400,0 ml vodyjyodná fáze byla okyselena s ÍM roztokem kyseliny chlorovodíkově na pH 3,0 - 4,0 a poté byla vytřepána 3x se 300,0 ml dichlormethanu.

Spojené organické fáze byly vysušeny síranem hořečnatým a poté byly za vakua zahuštěny, a zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu,za použití směsi n-heptsn/etbylacetát, jako elučního činidla.

Bylo získáno 20,50 g (53$) žádaného, v nadpise uvedeného 2,4-dioxo-3-methy1-4-(2-thienyl)-butyratu.

Stupeň II

Příprava ethyl-/4-methyl-5-(2-thienyl)-isoxazol-3-yl/karboxylatu

Ku vroucímu roztoku 12,60 g (Q,t8 molu) hydroxylamoniumchloridu ve 200,0 ml ethanolu, byl přidán ethyl2,4-dioxo-3-methy1-4-(2- thienyl)-butyrat, přípravěný v předcházejícím Stupni I, v 60,0 ml ethanolu.

Výsledná reakční směs byla zahřívána k varu za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 2,0 hodin, poté byla ochlazena a za vakua byla zahuštěna.Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na. silikagelu .za použití směsi n-heptan/ethyláce tát, jako elučního činidla.

Bylo získáno 13,20 g(92%) ethyl-/4-methyl-5-(2thienýl)-isoxazol-3-yl/-karboxylatu

Stupen III

Příprava ethyl-/4-brommethyl-5-(2-thienyl)-isoxazol-3ýl/-karboxylatu

Směs 8,0 g (34 mmolů) ethyl-/4-metbyl-5-(2thienyl)-isoxazol-3-yl/-karboxylatu, připraveného . v předcházejícím Stupni II*, 6,60 g ( 37 mmolů) Nbromsukcinimidu a 0,10 g ( 0,40 mmolů) dibenzoylpe‘ roxidu byla zBhřívána k varu za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 6,0 hodin a poté byla ponechána v klidu při teplotě 22°C ještě po dobu 14,0 hodin.Poté byla reakční směs ochlazena, zfiltrovárta a za vakua byla zahuštěna.

Bylo získáno 10,70 g (100%) žádaného, v nadpise uvedeného e thyl-/4-bromme thy1-5-(2-thi enyl)-is oxa zol3- yl/-karboxylatu

S t u p e ň IV

Příprava finální ..Sloučeniny 9a, t.j. hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-karboxy-5-(-2-thienyl)-isox8zol-4- yl/-propionové

Směs ethyl-2-acetylamino-2-ethoxykarbony 1-3-/3- . e thoxy karbony1-5-(2-thienyl)-i soxa zol-4-yl/-propionatu (1,0 gj 2,20 mmolů), připraveného analogickým postupem popsaným v Příkladě 7 , z e thy 1-/4-br omme thy 15-(2-thienyl)-isoxazol-3ť!yl/-k8rboxyl8tu, a 50,0 ml 47%ního vodného roztoku kys.bromovod. byla zahřívána za refluxuxní teplotu za varu po dobu 40,0 minut a vzniklý roztok byl za vakua odpařen a poté bylo přidáno 20,0 ml vody. Poté bylo ku směsi přidáno 22,0 ml 0,1M vodného roztoku hydroxidu sodného a takto upravená směs byla míchána při teplotě 22°C po dobu 2,0 hodin. Poté byla reakční směs opět odpařena do sucha a bylo přidáno 20,0 ml vody.Vzniklá krystalická látka byla izolována filtrací a za vakua byla vysušena.

Poté byly krystaly rozpuštěny ve 47%ním roztoku kys.bromovod., a vzniklý roztok byl vytřepán s diethyl59 etherem , který byl odstraněn.

Vodný roztok byl za vakua odpařen a ku zbytku byl přidán diethylether a takto upravená reakční směs byla míchána při teplotě 22°C po dobu 16,0 hodin.

Poté byla krystalická látka odizolována od diethyletheru dekantací a po vysušení krystalů za vakua byl k nim přidán po kapkách O,1M vodný roztok hydroxidu sodného, ež bylo docíleno pH 2,50.

Vzniklé krystaly byly izolovány filtrací a poté byly nasuspgndovány do 15,0 ml vody a tato reakční směs byla míchána při teplotě 22°C po dobu 48,0 hodin, a výsledná krystalická látka byla izolována filtrací.

Bylo získáno 270,0 mg ( 43%) žádané, v nadpise uvedené Sloučeniny 9a, t.j, hydrátu kyseliny (R,S)2-amino-3-/3-ksrboxy-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl( propionové

Teplota tání: 227 - 228°C( rozklad)

Analytické hodnocení:

Vypočteno: C 46,07', H 3,69; N 9,77 % ·

Nalezeno : C 46,15; H 3,66* N 9,47 % ¹H-NMR (D₂0; DSS):

delta 2,93 - 3,06 (m.; IH); 3,15 - 3,24( m.', IH )',

3,46 ( d.d.; 1H ); 7,26 ( d.d.; IH ); 7,66 - 7,72 ( m.; 2H )..

¹³C-NMH( I^o; pH = 12(NaOD); dioxan):

delta 29,06; 57,18; 111,38; 129,00', 129,01(20); 129,79', 162,28; 163,26; 167,76; 182,65.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 283 so

Příklad 10 í

Příprava hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-(5te trazolyl )-5-( 2-thienyl )-isoxazol-4-yl/-propi onové ( Sloučenina 10a )

Stupen I

Příprava kyseliny /4-methyl-5-(2-thienyl)-isoxazol-3 -y l/-karb oxy 1 o vé

Ku roztoku 3,70 g ( 15,60 molu) ethyl-/4-methyl5-(2-thienyl)-isoxazol-3-yl/-karboxylatu, jehož příprava je popsána výše, ve 20,0 ml tetrahydrofuranu, bylo přidáno 100,0 ml 6M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a vzniklá reakční směs byla zahřívána 'k va- ru za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 6,0 hodin. Poté byla směs ochlazena a vytřepána 3x se 100,0 ml diethyletheru. Spojené organické fáze byly promyty a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, poté byly vysušeny síranem hořečnatým a za vakua byly zahuštěny.

Ku získanému zbytku byl přidán dichlormethan a vzniklé krystaly byly izolovány filtrací. Poté byl filtrát za vakua odpařen a byl k němu přidán nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze byla promyta 2x se 60,0 ml dichlormethanu a okyselena a 6M roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 1,0 až 2,0.Po- té byla vodná fáze vytřepána se 3x 80,0 ml. diethyl® the ru, spájené organické fáze byly vysušeny’síranem heřečnatým a následně byly za vakua odpařeny.

Bylo získáno 1,60 g (48%) kyseliny /4-methy1-5( 2-thienyl)-isoxazol-3-yl/-karboxylové.

S t u peň II

Příprava /4-methyl-5-(2-thienyl)-isoxazol-3-yl/karboxamidu

Směs 4,0 g ( 19,10 mmolů ) kyseliny /4-methyl-5(2-thienyl)-isoxazol-3-ýl/-karboxylové, připravené v předcházejícím Stupni Iý 40,0 ml thionylchloridu a 0,10 ml dimethylformamidu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 60 minut. Poté byla reakční aměs za vakua odpařena a získaný zbytek byl rospuStěn v 50,0 ml tetrahydrofuranu a organická fáze byla při teplotě 0 - 5°C nalita do vodného 25%ního roztoku amoniaku. Poté byla reakčni směs míchána při teplotě 22°C po dobu 1,0 hodiny a následně byla vytřepáaa 4x se 250,0 ml diethyletheru.

Spojené organické' fáze byly promyty s vodou a vodným nasyceným roztokem chloridu sodného, vysušeny síranem hořečnatým a, nakonec byly za vakua odpařeny.

Bylo získáno 3,70 g (93%) /4-methyl-5-(2-thienyl) -isoxazol-3-yl/-k8rboxamidu

Stupeň III

Příprava (4-methyl-5-(2-thienyl)-isoxazol-3-yl/karbonitrilu

Roztok 3,40 g (16,30 mmolů) /4-methy1-5-(2-thienyl)isoxazol-3-yl/-karboxamidu, připraveného v předcházejícím Stupni II, a 40,0 ml oxychloridu fosforečného,byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 20,0 minut. Poté byla reakční směs za vakua odpařena a získáný zbytek byl rozpuštěn v diethyletheru. Organická fáze byla nalita na směs led/ voda a po oddělení organické a vodné fáze byla svodná fáze vytřepána 3x se 100,0 ml ¹ - - N - , ''Γ ' ' diethyletheru.

Spojené organické fáze byly promyty vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysušeny se síranem horečnatým a najpnec byly za vakua zahuštěny.

Bylo získáno 2,90 g (95%) /4-methy1-5-(2-thienyl) iaoxazol-3-yl/-karbonitrilu.

S t u ρ β η XV

Příprava ethyl-2-acetylamino-2-e thoxykarbonyl-3-/3(5-tetrazelyl)-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl/-propionatu

Suspenze 2,0 g (4,90 mmolu) ethyl-2-acetylamino2-e thoxy karbony l-3-/3-kyan©-5- (2- thi e ny 1) -i s oxa z ol-4yl/-propionatu, připraveného postupem popsaným v Příkladě 7_} ze 4-/brommethyl-5-(2-thienyl)-isoxazol-3-ylZkarboni triluj 0,40 g (6,20 mmolu) natriumazidu a dj.90 g ( 6,20 mmolu) triethylamiau.hydrochloridu, v 80,0 ml dime thoxy ethanu, byla zahřívána 'k varu za refluxu pod. zpětným chladičem po dobu 48,0 hodin.

Poté bylo k,reakční směsi přidáno dalších 0,40 g_. ( 6,20 mmolu) natriumazidu a 0,90 g ( 6,20 mmolu) triethylaminu.hydrochloridu a směs byla zahřívána za.refluxu pod zpětným chladičem delších 20,0 hodin.

Po ochlazení byla reakční směs za vakua zahuštěna a vzniklý· zbytek byl dále zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/ kyselina octová ( 10.: 1), jako elučního činidla^ a poté bylo rozpouštědlo odpařeno.

Bylo získáno 0,70 g ( 32%) žádaného, v nadpise uvedeného ethyl-2-acetylamino-2-ethoxykerbony1-3=/3- . (5-tetrazolyl)-5-(2-thienyl)-Í30xazol-4-yl/-propionatu.

S t u p e ň V

Příprava finální Sloučeniny 10a. t.j. hydrátu kyseliny (H,S)-2-8mino-3-/3-(5-tetrazolyl)-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl/- propionové

Směs 0,60 g (1,30 mmolu) ethyl-2-acetylamino-2ethoxykarbonyl-3-/3-(5-tetrazolyl)-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl/-propionetu, připraveného v předcházejícím Stupni IV, a 20,0 ml 47#ního vodného ro z tožřAfromo vodík. byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 30,0 minut. Po ochlazení bylo ku směsi přidáno 50,0 al vody a vodná fáze byla vytřepána 3x ae 75,0 ml diethyletheru.Spojené organické fáze byly vytřepány s 50,0 ml vody a spojené vodné fáze byla za vakua odpařeny.

Po přidání 25,0 ml vody a 0,10 M vodného roztoku hydroxidu sodného ( 16,0 ml) , byly vzniklé krystaly izolovány filtrací a poté byly za vakua vysuSeny.

Bylo získáno 0,40 g (90%) žádané Sloučeniny 10a, t.j. hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-(5-tetrazolylb -5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl/- propionové.

Teplota tání:* 209 - 211°C ( rozklad) ’η-NMR (DMSO-dg):...... .......

delta 3,27 - 3,54 (a.; 2H); 4,37 - 4,47 Cm.; IH); 7,33 (d.d.; 1H )J 7,76 (d.J 1H); 7,94 (d.J 1H ).

¹³C-NMR (DMSO-dg):

delta 24,51; 51,Qi; 108,03; 127,80; 127,95J. 128,57; 129,71; 151,63; 155,91; 161,96; 170,40.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 307 t

Příklad 11

Příprava acetátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy5-(2-oxazoly1)-isoxa zol-4-y1/- propi onové (Sloučenina 11a)

Stupeň I

Příprava 3-ethoxy-4,5-dimethyli9oxazolu rtlrt A * A*4 X Λ *** A Μ X Λ fl V« W 4Ta A rtM ( C A

VJVilUbX yj> U SjfliJUCOW

I ), t.j. 3-hydroxy-4,5-dimethylisoxazol, byla připravena dle postupu popsaného v odborném časopise Bull. Soc.Chim.Fr., 2685-2690/1970/, autor Jacquier R. se ap., jehož modifikace byla popsána v odborném časopise. Agric.

Biol.Chem.,50(7).1831-1837/1986/, autor Sáto K. se sp.

is

Suspenze výše zmíněné výchozí sloučeniny, t.ji

68,50 g (0,60 molu) 3-hydroxy-4,5-dimethyliaoxazolu a 125,60 g ( 0,90 mmolu) uhličitanu draselného, v 1000 ml acetoau,. byla. zahřáta za refluxu pod zpětným chladičem na refluxní teplotu a ku vroucí směsi bylo poté po kapkách přidáno 88,10 g ( 0,90 molu) ethylbromidu v acetonu.Reakční směs byla poté míchána po dobu dalších 8,0 hodin, poté byla ochlazena,zfiltrována a za vakua byla zahuštěna.

Získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/heptan ( 1 : 3), jako elučniho činidla.

Bylo získáno 52,70 g (62%) Žádaného, v nadpise uvedeného 3-e thoxy-4,5-dime thylisoxa zolu.

ί

Stupeň XI

Příprava 3-athoxy-5-hydroxymethyl-4-methylisox8zolu

Ku směsi 65,0 g ( 0,50 molu). 3-ethoxy-4,5-díaethylisoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni I, ve 500,0 ml tetrachlormethanu, bylo přidáno při teplotě 5°C; 150,0 g ( 0,90 molu) bromu a vzniklá reak , ční směs byla míchána po dobu 96,0 hodin v zatemnělé míatnosti.Poté bylo ku směsi přidáno 200,0 ml vody a i reakční směs byla odbarvena přídavkem siřičitanu sodného. Po oddělení organické a vodné fáze byla vodná fáze vytřepána s dichlormethanem a spojené organické fáze byly promyty s vodným, nasyceným roztokem chloridu sodného, poté byly vysušeny síranem hořečnatým a za vakua byly odpařeny.

Získaný.zbytek byl rozpuštěn v 700,0 ml směsi voda/1-methyl-2-pyrrolidinon -( 15 : 85) a tato reakční směs byla poté míchána při teplotě 100°C po dobu 24,0 hodin. Po přidání vody byl vodný roztok vytřepán s diethyletherem a spojené organické fáze byly promyty a vodou a s nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, ‘ poté byly vysušeny síranem hořečnatým a za vakua byly ' odpařeny.

Získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát/ n-heptan,2Í, jako elučního činidla.

.Bylo získáno 26,30 g (36%) žádaného, v nadpise uvedeného 3-ethoxy-5-hydroxymethy1-4-me thylisoxa zolu_e

Stupeň ΙΙΪ

Příprava kyseliny (3-ethoxy-4-methylisoxazol-5-yl)karboxylové

Ku roztoku 25,0 g (0,16 molu) 3-ethoxy-5-hydroxymethy1-4-methylisoxazolu, připraveného v předcházejí cím Stupni ΙΣ, ve 200,0 ml směsi kyselina sírová/voda/ kyselina octová (1 :2:-7), bylo přidáno 160,0 ml směsi oxid chromový/voda/kyselina octová (1:1:2)/ a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 22°C po dobu 18,0 hodin. Poté byla ku směsi přidána voda a vodná fáze by1b vytřepána s >ďie thy le therem.

Spojené organické fáze byly promyty s vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, poté byly vysušeny se síranem hořečnatým a za vakua byly odpařeny. v,

Bylo získáno 22,70 g ( 83%) žádanékc, v nadpise uve děné'??, kyše liny (3-ethoxy-4-methylisoxezol-5“yl)karboxylové, t u p e ň IV

Příprava 5^e/N-(acetaldehyddimethyl8cetal)-karboxemid/3-ethoxy-4-me thy lisoxa zolu * -Roztok 5,0 g ( 29 mmolu) kyseliny (3-ethoxy-4- * methylÍ3oxazol-5-yl)-karboxylové ve 250,0 ml dichlormethanu; 4,30 ml thi ony lchloridu a 0,20 ml disatBýlformamidu, byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 2,0 hodin. Poté byla reakční směs . za vakua odpařena a rozpuštěna ve 100,0 ml dichlormethanu a po vychlazení na teplotu 5°C byla ku směsi přidána směs 3,50 ml aminoacetaldehyddimethylacetalu (3,20 mmolu)* a 6,0 g ( 4,40 mmolu) uhličitanu draselného ve _r,

100,0.ml dichlormethanu. Výsledný roztok byl-míchán při - teplotě 22°C po dobu 4,0 hodin. Po přidání vody byly organická a vodná fáze odděleny , Organická fáze byla promyta vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuěena se síranem hořečnatým a poté byla za vakua vysušena.

Bylo získáno 7,0 g (93%) žádaného¹; .Ví.nadpise uvedeného 5-/N-(acetaldehyddimethylacetal)-karboxamid/-3-e thoxy-4-me thyli s oxa zolu.

1’

S tu pen V

Příprava 3-hydroxy-4-methyl-5-(2-oxazolyl)-isoxazolu

Směs 6,40 g ( 25 mmolu)‘5-/N-(acetaldehyddimethylacetal)-karboxamid/-3-ethoxy-4-methylisoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni IVJ 7,10 g (50 mmolů). oxidu fosforečného a 150,0 ml koncentrované kyseliny sírové, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 30,0 minut. Po ochlazení na teplotu 5°C byla reakční směs nalita na směs led/voda a vodná fáze byla vytřepána 2x s 500,0 ml diethyletheru.

Spojené organické fáze byly promyty s vodou as nasyceným vodným^roztokem chloridu sodného, poté byly vysušeny aÍránem hořečnatým a za vakua byly odpařeny.

Získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití směsi dichlormethan/ éthylacetát/methanol (1:1: 0,50%), jako elučního činidla.

Bylo získáno 340,0 mg žádaného, v nadpise uvedeného 3-hydroxy-4-methyl-5-(2-ísoxazolyl)- isoxazolujiř8,30%).

S t u p e η VI

Příprava 3-benzenaulfonyloxy-4-methy1-5-(2-oxazolyl)isoxazolu

Ku 340,0 mg (2,0 mmolů) 3-hydroxy-4-methyl-5-(2-» oxazolylí-isoxazolu, připravenému v předcházejícím Stupni V; ve aměsi 0,33 ml triethanolaminu a 40,0 ml tetrahydrofuranu, vychlazené na teplotu minus 5°C, byl přidán roztok 0,27 ml (2,10 mmolu) benzensulfonylchloridu ve 40,0 ml tetrahydrofuranu. Výsledná reakční směs byla míchána poté při teplotě 22°C po dobu 18,0 hodin, a poté bylo za vakua odpařeno rozpouštědlo a zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na siiikageiu, za použití směsi ethylacetát/n-heptan, jako elučního Činidla (i 3).

Bylo získáno 520,0 mg (85%) žádaného, v nadpise uvedeného 3-benzenaulfonyloxy-4-methy1-5-(2-oxazolyl)isoxazolu

Stupeň VII

Příprava 3-benzensulfonyloxy-4-brommethyl-5-( 2-oxazolyl)

- isoxazolu

Směs 500,0. mg ( 1,60 mmolu) 3-benzensulfonyloxy4-methyl-5-Í2-oxazolyl)-isoxazolu, připravenoho v předcházejícím Stupni VI; 300,0 mg (1,70 mmolu) N-bromsukcinimidu a 0,10 g (0,40 mmolu) dibenzoylperoxidu, ve 100,0 ml tetrachlormethanu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 24,0 hodin. Poté byla zchlazená směs zfiltrována a za vakua byla odpařena.

Bylo získáno 440,0 mg (70%) žádaného, v nadpise uvedeného 3-benzensulfonyloxy-4-brommethy 1-5- (2-oxazolyl)

- isoxazolu

Stupeň VIII.......

Příprava ethyl-2-acetylamina-2-ethoxykarbonyl-3-/3benzenaulfonyloxy-5- (2-oxazolyl) -isoxazolu

Analogickým postupem, popsaným v Příkladě 7, bylo ze 440,0 mg 3-benzensulfonyloxy-4-brommethyl-5-(269 oxazolylϊ-isoxazolu, získaného v předcházejícím Stupni VII, připraveno 120,0 mg ( 22%) Žádaného, v nadpise uvedeného ethyl-2-acetylamino-2-ethoxykarbonyl-3-/3benzensulfonyloxy-5-(2-oxazolyl)- isoxazolu.

Stupeň IX

Příprava finální Sloučeniny 11a, t.j. acetátu kyseliny (R, S)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(2-oxa zolyl )-isoxazol-4«yl/ propionové

Ku roztoku 120,0 mg (0,25 mmolu) ethyl-2-acetylamino-2-ethoxykarbonyl-3-/3-benzensúlfonyloxy-5-(2oxazolyl)-isoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni VIII, v 10,0 ml methanolu, bylo přidáno 20,0 mg ( 0,50 mmolu) hydroxidu sodného v 10,0 ml methanolu a. výsledná reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 2,0. hodin. Poté bylo rozpouštědlo ze směsi za vakua odpařeno a ku vzniklému zbytku byla přidána voda a vodná fáze byla vytřepána s dichlormethanem. Po okyselení vodné fáze s 0,10 M roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 2,0, byla znovu vytřepána a dichlormethanem. Poté byla vodná fáze za vakua odpařeni a bylo k ní přidáno 10,0 ml 1,0M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a poté byla reakční směs zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 3,0 hodin.

Poté byla reakční směs odpařena za vakua a.bylo k ní přidáno 10,0 ml diethyletheru. vzniklé krystaly byly izolovány filtrací a poté byly za vakua vysušeny.

Získaná krystalická látka byla rozpuštěna v 1,0M vodném roztoku kyseliny chlorovodíkové a vodná fáze by° la promyta diethyletherem. Po odpaření vodné fáze byl získaný zbytek zpracován na sloupci naplněném ionto« měničovou pryskyřicí / Amberlit IRA 400*, (Ci; 150 ml ), za použití 1,0M kyseliny octové, jako elučního Činid- _s la. Poté bylo rozpouštědlo odpařeno.

Bylo získáno 15,0 mg (27%) žádané, v nadpise uve-., děné Sloučeniny 11a, t.j. acetátu kyseliny (R,S)-2amino-3-/3-hydroxy-5-(2-oxazolyl)-isoxazol-4-yl/-propionové.

(D₂o; dioxan):

delta 3,26 -3,36 (m.; 2H); 4,11 - 4,21 (m.; ih); 7,40 ( a.; ih );. 8,04 (a.; ih ). . ' ¹³C-NMS (D„0; dioxan):

£. ' ....

delta 23,41; 54,17; 105,83*, 128,96; 142,16; 152,56; 171,55; 177,26; 177,74.

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 240

Příklad 12

Příprava kyseliny (R,S)-2^amino-3-/37hydroxy-5-. (2-thiazolyl)-isoxazol-4-yl/- propionové ( Sloučenina 12a )

Stupeň _I

Příprava 3-ethoxy-4-methyl-5-(2-thiazolyl)-Í30xazolu

Směs 6,50 g (25,20 mmolu) 5-/H-(acetaldehyddimethylácetal)-karboxamid/-3-ethoxy-4-methylisoxazolu, připraveného postupem popsaným v Příkladě 11, a 5,60 g ( 25,20 mmolu) sirníku fosforečného, v toluenu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 2,0 hodin. Poté byla reakční směs za vakua odpařena a získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití směsi toluen/ethyl-. acetát ( 11 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 0,50 g ( 9%) žádaného, v nadpise uvedeného 3-e thoxy-4-me thy1-5-(2-thia zoly1)-isoxazolu.

Stupeň II

Příprava 4-bromme thy1-3-e thoxy-5-(2-thia zoly1)-i soxa zolu

Smě 3 3-ethoxy-4-me thy1-5-(2-thi a z oly1) -i s oxa zolu ( 0,50 gj 2,40 mmolu) a 0,50 g ( 2,60 mmolu) N-bromsukcinimidu, ve 50,0 ml tetrachlormethanu, byle zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 36,0 hodin. Poté byla reakční směs zfiltrována a za ,< vakua odpařena.

Bylo získáno^ 0,60 g (87%) žádaného, v nadpise uvedeného 4-bromme thyl-3-e thoxy-5-(2-thiazolyl)-isoxa zolu.

Stupeň III

Příprava ethy1-2-acetylamino-2-ethoxykarbony1-3/3-ethoxy-5-(2-thiazolyl)-isoxazol-4-yl/rpropionatu

Analogickým postupem, popsaným v Příkladě 7, bylo ze 540,0 mg 4-brommethyl-3-ethoxy-5-(2-thiazolyl)isoxazolu, získaného v předcházejícím Stupni II, při« praveno 320,0 mg (41%) žádaného, v nadpise uvedeného ethy1-2-acetylamino-2-ethoxykarbonyl-3-/3-ethoxy-5( 2-thiazolyl)-isoxazol-4-yl/-propionatu.

Stupeň IV

Příprava finální Sloučeniny 12a, t.j. kyseliny (R,S)2- amino-3-/3-hydroxy-5-(2-thiazolyl)-isoxazol-4-ylApropionové ř·

Suspenze 245,0 mg (0,60 mmolů ) ethyl-2-acetylamino-2-e thoxykarbony l-3-/3-e thoxy-5 - (2-thia zolyl) isoxazol-4-yl/-propionatu, v 5,0 ml 47%ního vodného roztokMkys.bromovodílsjbyla zahřívána za refluxu pod zpět ným chladičem k varu po dobu 30,0 minut. Poté byla reakční směs za vakua odpařena a bylo k ní přidáno 30,0 ml vody. Vodný roztok byl zpracován s aktivním uhlím, zfiltrován a poté byl za vakua odpařen.

Získaný zbytek byl rozpuštěn ve vodě a vodný roztok byl zpracován na sloupci obsahujícím iontoměničovou pryskyřici /Amberlit ISA 400 (Ci; 25 ml)/, za použití 2,0M kyseliny octové, jako elučního Činidla.Poté bylo rozpouštědlo odpařeno.

Bylo získáno 66,0 mg (45%) žádané, v nadpiseuvedené Sloučeniny 12a, t.j. kyseliny (R,S)-2-amino3- /3-hydroxy-5-( 2-thia zolyl )-isoxazol-4-yl/-propionové.

¹H-NMÍE (DMSO-dg; 10«| CF^OOH); ‘ ~ / delta 3,13 - 3,27 (m.J IH); 3,30 - 3,45 (m.; IH );

4,14 - 4,28 (m.J 1H ); 8,03 (d.J IH ); 8,10 (d.J 1H).‘ ¹³C-N¥R (DMSOrdg*, 10%; CF^CQOH):

delta 22,98; 5J ,03‘, 102,43; 122,64', 144,76; 154,97;

159,81; 170,31; 1.70,50..,..............................

Hmotnostní spektroskopie(MH⁺)m/z: 256

Příprava kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(5tetrazolyl)-isoxazol-4-yí/-propionové

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena analogickým postupem, uvedeným výše, s následujícími modifikacemi:

Výše popsaným postupem připravená kyselina (3ethoxy-4-methylisoxazol-5-yl)-karboxylová, byla konvertována na příslušný karboxamid konvenčními postupy za použití thionylchloridu a 25%ního vodného roztoku amoniaku. Příslušná nitrilová sloučenina, t.j, (3ethoxy-4-meth.ylisoxazol-5-yl)-karbonitril,' byl získán dehydratací amidu a oxychloriděm fosforečným.

Broma c í (3-e thoxy-4-me thy li s oxa z ol-5-yl ).-karbonitrilu s N-bromsukcinimidem a následnou reakcí s diethylacetamidomalonatem/byl získán ethyl-2-acetylamino-.

2-e thoxykarbony1-3-(5-kyan-3-e thoxyisoxa zol-4-yl)propionát;

Pro přípravu příslušné 5-(5-tetrazolyl)-slouČeniny je‘upřednostňována reakce ethyl-2-acetylamino 2-ethoxykarbonyl-3-(5-kyan-3-ethoxyisoxszol-4-yl) propionatu s natriumažidem a triethylaminem.hydrochloride® v dimethoxyethanu.

Sejmutí chránící skupiny u ethyl-2-acetylamino2-e thoxykarbony1-3-/3-e thoxy-5-(5-1etra z oly 1)-isoxszoí4-yl/-propionatu se provádí za použití vodného,47%ního roztoku kys.bromovodík.^ytím i vzniku kyseliny (P,S)2-amino-3-/3-hydroxy-5-(5-tetrazolyl)-isoxazol-4-yl/propionové.

Příklad 13 /

Příprava hydrátu kyseliny (R,S)-2-emino-3-/3-hydroxy5-(2-pyridyl)-isoxazol-4-yl)-propionové ( Sloučenina 13a )

Stupeň I

Př í pra va 3 -me t hoxy - 5 - (2 - py r idy 1) - i s oxa z o lu

Roztok 1,14 g (7,0. mmolu) 5-(2-pyridyl)-isoxazol3-olu,(který byl připraven modifikovaným postupem popsaným v odborném časopise Ann.Sankyo Res.Lab,,25,3-5 /1973/,(autor Tomita K.); z methyl-2,3-dibrom-3-(2-pyridyl)-propanoát.hydrobromidu;) a .0,28 g (7,0 mmolu) hydroxidu sodného v 10,0 ml vody a 10,0 ml ethanolu,byl

I f odpařen do sucha a dále byl ještě sušen při 1,332 Pa. .

Získaný zbytek byl nasuspendován do 10,0 ml dimethy 1rt * formamidu a ochlazen na minus 10 CL. Poté byl k takto ''-'ΐΊ · připravené suspenzi přidán po kapkách dimethylsulfát ( 0,73 al; 7,70 mmolu) a vzniklá směs byla míchána při teplotě minus 10°C po dobu 1,0 hodiny a poté ještě 15,0 hodin při teplotě 22°C· Vzniklý roztok byl za vakua odpařen a ku získeáámujzbytku bylo přidáno 15,0 ml vody a směs byla vytřepána 3x se 30,0 ml dichlormethanu.

Spojené organické extrakty byly vysušeny a za vakua byly odpařeny.. Získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu,’ za použití směsi toluen/ ethylacetát/ledová kyselina octová (1:1:1%). *

Bylo získáno 0,73 & (5.9%). žádaného,, v.nadpise- uve- děného 3-methoxy-5-(2-pyridyl)-isoxazolu.

S t u p e ň II

Příprava 4-hydroxymethy1-3-methoxy-5-(2-pyridyl)-isoxazolu

Roztok 1,53 g (8,68 mmolů) 3-methoxy-5-(2-pyridyl)

-isoxazolu, připraveného v předcházejícím Stupni I, ve 40,0 ml tetrahydrofuranu, byl vychlazen na teplotu minus 78°0 a k takto upravenému roztoku bylo přidáno během 5 minut 9,0 ml 1,60M roztoku n-butyllithia (14,0 mmolů) v hexanu a ihned poté 2,48 g ( 83 mmolů) paraformaldehydu. Vzniklá reakční směs byla poté míchána při teplotě minus 78°C po dobu 15 minut a následně ještě 2,0 hodiny při teplotě 22°C.Poté byla reakční směa za vakua odpařena a ku zbytku bylo přidáno 25,0 ml vody a 40,0 ml dichlormethanu, a poté bylo pH směsi upraveno zředěnou kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0.

Organická a vodná fáze byly odděleny a vodná fáze byla vytřepána 2x se 30,0 ml dichlormethanu.Spojené organické extrakty byly > vysušeny a za vakua byly odpařeny. Zbytek byl zpracován urychlenou chromá- ; tografií na silikagelu za použití směsi toluen/ethyl-„ acetát ( 19 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 357,0 mg (20%) žádaného, v nadpise uvedeného 4-hydroxymethyl-3-methoxy-5-(2-pyridyl)-iso- ‘ ,· xazolu. J ./i

Stupeň III

Příprava 4-chÍormethy 1-3-méthoxy-5-(2-pyridyl)-isoxazolu

Směs 357,0 mg ( 1,73 mmolů) 4-hydroxymethyl-3methoxy-5-(2-pyridylJ-isoxazolu a 10,0 ml thionylchleridu byle zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 2,0 hodin. Poté byla vzniklá reakční směs za vakua odpařena a byl k ní přidán vodný roztok hy- . drogenuhličitanu sodného ( 5%níJ 15,0 ml) a tato aměs byla vytffispána 2x s 25,0 ml dichlormethanu.

Spojené organické extrakty byly vysušeny a za vskus byly odpařeny.

Bylo získáno 388,0 mg (100%) žádaného, v nadpise uvedeného 4-chlormethy 1-3-methoxy-5-(2-pyridyl)-isoxazolu.

Stupeň IV

Příprava methyl-2-acetylamino-2-methoxykarbonyl-3/3-methoxy-5-(2-pyridy1)-isoxazol-4-y1/propionatu

K reakční směsi, připravené přidáváním po malých částech 84,0 mg (2,09 mmolu) hydridu sodného ( 60%ní v minerálním oleji) ku roztoku 361,0 mg( 1,91 mmolu) dimethylacetamidomalonatu ve 4,0 ml vysušeného dimethylformamidu, a míchané před dále popsanou operací 45,0 minut při teplotě 22°C, byl přidán po kapkách roztok 390,0 mg (1,74 mmolu) 4-chlormethy1-3-methoxy-5-(2pyridyl)-idoxazolu,(připraveného v předcházejícím Stupni III,), ve 4,0 ml dimethylformamidu a výsledná řéakční směs byla míchána při teplotě 22°G po dobu dalš^:ích 6,0 hodin. Poté byla směs. za vakua odpařena a ku zbytku bylo přidáno 10,0 ml vody.

Tato vodná reakčníisměs byla vytřepána s dichlor* methanem a spojené organické extrakty byly poté vysušeny a za vakua byly odpařeny. j

Získaný 2bytek byl zpracován urychlenou chromatografií na siiikagelu, za použití směsi toluen/ethylacetát ( 19 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 500,0 mg (76%) žádaného, v nadpise uvedeného methyl-2-acetylamino-2-methoxykarbony1-3° /3-methoxy-5-(2-pyridyl)-isoxazol-4-yl/-propionatu

Stupeň V

Příprava finální Sloučeniny 13a, t.j. hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(2-pyridyl)-isaxazol-4-yl)-propionové

Směs 500,0 mg (1,30 mmolu) methyl-2-9cetylamino2-methoxykarbonyl-3-/3-methoxy-5-(2-pyridyl)-isoxazol4-yl/-propionatu, připraveného v předcházejícím Stupni IV, a 20,0 ml vodného 47%ního roztoku bromovodíkové kyseliny, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 1,0 hodiny. Poté byla reakční směs. za vakua odpařena a ku zbytku bylo přidáno 10,0 ml vody. Vodný ro2tok byl poté zpracován s aktivním uhlím a k filtrátu byl opatrně přidáván 2N vodný roztok uhličitanu sodného, až bylo docíleno pH 3.

Po 24,0 hodinách ,kdy byl filtrát přechováván . při teplotě 5°C, byla vzniklá sraženina izolována,promyta s vodou a za vakua byla vysušena. -

Bylo.získáno 174,0 mg ( 54%) žádané, v nadpise uvedené Sloučeniny 1-3a_t. t.j, hydrátu kyseliny (R,S)2-amino-3-/3-hydroxy-5-(2-pyridyl)-isoxazol-4-yl)-propionové.

•s '·!

Analytické hodnocení:

Vypočteno: . G-52,07; H 4,57; N 16,56 %

Nalezeno:· - C 52,03; H 4,50; N 16,38.% ¹H-NMR(200 MHz JDMSO-dg):

delta 8,70 (d.; 1H); 7,95 (m.; 1h); 7,80 (d.; IH);

7,45 (m.; IH); 3,75 (m.; 1H); 3,40 (d.ď.; IH ); 3,15 ( d.d.; IH).

¹³C-NMR (200 MHzJDMSO-dg):

delta 171,83; 171,53*, 162,88; 149,68*,. 147,64; 137,82; . 1'24,4i; 121,17; 104,86; 53,30; 24,24.

Příprava hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy- _ř

- (4-pyridy 1)-i s oxa zol-4-y l/-pr'opi onové ( Sloučenina 13b )

V nadpise uvedená Sloučenina 13b, byla připravena analogickým postupem#: popsaným výše.

Analytické hodnocení:

Vypočteno: C 49,44*, H 4,90*, N 15,72 %

Nalezeno : C 49,49*, H 4,88; N 15,83 % u xrifn / ίπλ »rTT_ , xi—Unix rnnz.

delta 8,70 (d.; 2H)J 7,65 (d.; 2H ); 3,75 (m.J 1H); 3,05 (d.d.; 1H); 2,90 ( d.d.; 1H ).

¹³H-NMR(2OO MHz;DMSO-dg): ' delta 172,97; 171,20; 161,73; 150,52; 135,30; 121,0.1; 105,39*, 52,70; 24,69.

Příklad 14

Příprava (S)-(+)-2-amino-3-(3-hydroxy-5-fenylisoxazol4-yl)- propionové kyseliny ( Sloučenina 14a )

Diaatereoiaomerní sůl kyseliny-(R,S)-2-amino-3- ........

(3-hydroxy-5-fenýlisoxazol-4-y1)-propionové.hemihydrátuí 11,0 g* 44,0 mmolu) , připravená dle postupu popsaného Chriatenaenem I.T./1989/ v odborné literatuře^citované výše, a (R)-(+)-1-fenylethylamin .(5,10 g; 44,0 mmolu)/ byly přesráženy při teplotě 0°C ze 300,0 ml ethanolu.

Vzniklá krystalická látka byla rozpuštěna ve vodě a vzniklá směs byla okyselena s Ο,ΙΟΝ vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Krystalická látka byla isolována filtrací.'

Bylo získáno 320,0 mg (6%) žádané, v nadpise uvedené Sloučeniny 14a, t.j, kyseliny (S)-(+)-2-amino-3(3-hydroxy-5-fenylisoxazol-4-yl)-propionové,

Teplota tání : 251 - 253°C

Optická otáčivost /alfa/^® (c = 0,25; 1N HCl): +35,3° Enantiomerní prebytek(e.e.): 99,0%

Analytické hodnocení:

Vypočteno: C 58,O5J Η 4,88ζ N 11,29 %

Nalezeno : C 58,03*, H 5,22; N 11,33 %

Příprava hydrátu kyseliny (R)-(-)-2-amino-3-(3-hydroxy5-fenylisoxazol-4-yl)-propionové ( Sloučenina 14b )

V nadpise uvedená Sloučenina 14b, byla připravena analogickým postupem, popsaným výše, za použití 5,10 'g ( 44,0 mmolů) (3)-(-)-1-fenylethylaminu. .....

Výtěžek hydrátu v nadpise uvedené, žádané Sloučeniny 14b, byl 1,40 g ( 26%).Obsah vody byl stanoven na 7,70%.

Teplota tání: 252 - 254°C

Optická otáčivost /alfaj^ (c = 1,0*, IN HCl): -37,8°

Enahtiomerní přebytek (e.e.): 99,8% ,/

- 80 Analytické hodnocení:

Vypočteno: C 54,12*/H 5,31N 10,52 %

Nalezeno : O 54,10*, H 5,27; /N 10,54 %

Příprava kyseliny (-)-2-amino-3-/5-(4-fluorfenyl)-3hydroxyisoxazol-4-yl)- propionové ( Sloučenina 14c )

V nadpise uvedená Sloučenina 14c, byla připravena analogickým postupem popdaným výše^ z kyseliny (R,S)2-amino-3-/5-(4-fluorfe ny1)-3-hydroxyi s oxa z ol-4-y1/propionové, připravené analogickým postupem jako kyselina (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxazol4-yl/-propionová, popsaném v Příkladě 1.

Teplota tání : 247°C ( rozklad )

Enantiomerní přebytekíe.e.): 99,6%

Analytické hodnocení:

Vypočteno: 0.54,1.2; H 4,16;. N 10,56 %,

Nalezeno : C 54,16; lí 4,12; N 10,48 % ¹H-NMR( 200 MHz; DgO; NaOH; dioxan):

delta 2,56 (d.d.*, 1H )J 3,40 ( d.d.*, 1H); 7,22 (d.d.;

2H )*, 7,67 (d.d.; 2H ).

Příprava kyseliny (+)-2-amino-3-/5-(4-fluorfenyl)-3hydroxyisoxa zol-4-y1/-propionové ( Sloučenina 14d )

Iv

V nadpise uvedená Sloučenina 14d, byla připravefaa atíťogickým postupem popsaným výše,z kyseliny (R,S)2-emino-3-/5-(4-fluorfenyl)-3-hydroxyisoxazol-4-yl/propionové, připravené srlíogickým postupem, jako kyselina (R,S)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxazol4-yl/-propiohová, popsaném v Příkladě 1.

Teplota tání: 246°C ( rozklad )

Optická otáčivost/slfa/^⁰ (c = 0,25;IN HCl): +37,9°

Enantiomerní přebytekíe.e.): 99,80%

Analytické hodnocení:

Vypočteno: 54,12; H 4,16; N 10,56 %

Nalezeno. : 54,12; H 4,06; N 10,45 % ^H-NMS (200 MfízJDgO JNeODJdioxan):

delta hodnoty, jsou identické jako u Sloučeniny 14c

Příklad 15

Příprava kyseliny (-)-2-amino-3-/3-hydroxy-5-(2-thienyl) isox8zol-4-yl/-propionové · . ... _t ( Sloučenina 15a )

Stupeň I

Příprava kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-ethoxy-5-(2thienyl)-isoxazol-4-yl/-propionové

Sloučenina 1a, t.j. kyselina (R,S)-2-amino-3-/3hydroxy-5- (2-thienyl)-i soxa zol-4-yl/-propionová, připravená postupem popsaným v Příkladě 1,. (20,80 £ J 81,80 mmolu)/byla přidána ku směsi 350,0 ml ethanolu a 35,0 ml acetylchloridu při teplotě 25°C a výsledná reakční směs hýla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 3,50 hodiny.Poté byla směs ochlazena a za vakua byla odpařena.

Bylo získáno 25,0 g (96%) žádané, v nadpise uvedené kyseliny (R,S)-2-amino-3-/3-ethoxy-5-(2-thienyl)i soxa z ol-4-yl/-propi onové.

Stupeň 'II a

Příprava (R,S}-ethy1-2-/N- (2-me thoxy-2-f eny láce tamido )/3-/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl/-propionatu .

Roztok 24,90 g ( 78,10 mmolu) kyseliny (R,S)-2- amiao-3-/3-e thoxy-5-(2-thienyl )-isoxazol-4-yl/-prócÍonové, připravené v předcházejícím Stupni I, v 1200^0 ml dichlormethanu a 45,0 ml triethanolaminu, byla zahřívána po. dobu 40 minut za refluxu pod zpětným chladičem k varu a k této reakční směsi. bylo. poté za horka při—- dáno 16,20 g (87,90 mmolu) (S)-( + )-2-methoxy-2- fenylacetylchloridu ( připraveného konvenčními postupy ze (S)-(+)-2-methoxy-2-fenyloctové kyseliny), ve 250,0 ml dichlormethanu. Takto připravená reakční směs byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu ještě 1,0 hodinu, poté byla ochlazena a za vakua byla odpařena.

Získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografii na siiikageiu, za použití směsi n-heptan/ethylacetát/kyselina octová (55:45:1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 27,20 g (81%) (R,S)-ethy1-2-/N(2-ae thoxy-2-f eny láce tamido) /-3-/3-hydroxy-5- (2-thienyl- isoxazol-4-yl/-propionatu.

Stupeň lib

Příprava finální Sloučeniny 15a, t.j.kyseliny ¢-)2-amino-3-/3-/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxszol-4-ylA propionové ( isomer 1)

Ku roztoku (R,S)-ethyl-2-/N-(2*methoxy-2-fenylacetamido)/-/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl/ propionatu (připraveného v předcházející části Stupně lib,popsaném výše) (27,20 gj 61,10 mmolu);-ve 600,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu a 10,0 ml triethanolaminu, vychlazeného na teplotu 0°G, bylo po 160 minutách přidáno 12,50 g (70,80 mmolu) benzensulfonylchioridu, ve 300,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu.Vzniklá reakční směs byla poté míchána při teplotě 22°C po dobu 18,0 hodin, poté byla za vakua odpařena a ku zbytku byla přidána voda a dichlormethan. Organická a vodná fáze byly odděleny a organická fáze byla vysušena síranem hořeČnatým a poté byla.za vakua odpařena.

Získaný zbytek, obsahující 2 diastereoisomery (B,S)-e thyl-2-/N-(2-me thoxy-2-fenyláce tamido)/-3-/3benzensulfonyloxy-5-(2-thienyl)-isoxa zol-4-yl/-pro — pionatu, byl dále zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití směsi toluen/ethylacetát (7 : 1), jako elučního činidla.

Výtěžek prvého eluovaného isomeruí ísómér 1) byl 10,40 g (60%) a výtěžek druhého eluovaného isomeru ( isomer 2), byl 9,0 g (51%).

Ku 10,40 g (18,20 mmolu) isomeru 1,(zmíněného výše) , rozpuštěného v 600,0 ml methanolu, bylo přidáno 0,80 g (20,0 mmolu) hydroxidu sodného ve 20,0 ml methanolu, a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 22°C. po dobu 10,0 minut. Po přidání 5000,0 ml vody ku směsi^ bylo pH vodného roztoku upraveno s kon34 centrovanou kyselinou chlorovodíkovou na pH 1,0 a po této operaci byl vodný roztok vytřepán s diethyletherem a dichlormethanem. Spojené organické výtřepky byly vysušeny a za vakua byly odpařeny.

Urychlenou chromatografií získaného zbytku na silikagelu za použití směsi ethylácetát/n-heptan/kyselina octová ( 50 : 50 : 1), bylo získáno 5,80 g ( 74%) iaomeru 1 (R,S)-ethyl-2-/N-(2-methoxy-2-fenylacetamido)/-3-/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxazol-4-yl/propionatu ( 13,50 mmolu), ku kterému bylo přidáno 250,0 ml 47%ní vodné kyseliny bromovodíkové a tato směs byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem k varu po dobu 1,0 hodiny.

Poté byla reakční směs za vakua odpařena a ku zbytku byla přidána voda a vzniklý vodný roztok byl promyt s dichlormethanem a poté byl zpracován s aktivním uhlím. Poté byl objem vodného roztoku za vakua' zredukován na 200,0 ml a zwiterion iaomeru 1 byl z,_yv ⁴ W vodného roztoku překrystalizován přidáním vodného roztoku hydroxidu sodného a úpravě pH na pH 3,0.

Vzniklá krystalická látka byla izolována filtrací. Byl získán' 1,0 g (30%)/ v nadpise uvedené, žádané' finální Sloučeniny 15a, t.j. kyseliny (-)-2-amino-3/3-hydroxy-5- (2-thienyl)-isoxazol-4-yl/-propionové, teplota tání: 258 - 26O°C (rozklad)

Optická otáčivost/alfa/2°(_c= 0,25; 1NHC1): -26,8°

Enantiomerní ..přebytek(e,e...)- . .96,90% -.......- -..............

Analytické hodnocení:

Vypočteno: Nalezeno :

G 47,23;

C 46,88*,

H 3,97; N 11,02 % H 3,97*, N 10,89 %

Hmotnostní spektroskopie(MH+)m/z: 255,20

Příprava kyseliny (4)- 2-amino-3-/3-hydroxy-5-(2thieny1)-i3oxazol-4-yl/-propionové ( isomer-2 ) ( Sloučenina 15b )

Analogickým postupem, popsaným výše, byla připravena i v nadpise uvedená, žádaná Sloučenina 15b, t.j.isomer 2.

* Teplota tání: 259 - 261°C( rozklad)

Optická otáčivost/alfa^ ( c = 0,25J1N HC1): +24,4°

Enantiomerní přebytek(e,e.): 98,90%

Analytické hodnocení:

Vypočteno: 047,23; H 3,97; N 11,02 %

Nalezeno : C 47,15; H 4,05J N 10,88 %

Hmotnostní.spektroskopie(MH+)m/z: 255,20

Příprava kyseliny (-)-2-amino-4-/3-hydroxy-5-(2-thienyl) -isoxazol-4-yl/-butanové ( Sloučenina 15e )

Analogickým postupem, popsaným výše, byla za použití Sloučeniny 4c, t.j. hydrátu kyseliny (R,S)-2-amino w4«/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-isoxazoÍ-4-yl/-butanové_f připravena v nadpise uvedená, žádaná Sloučenina 15c. Teplota tání: 217 - 219°C( rozklad)

Optická otáčivost/alfa^ (c = 0,25', 1N H01): -16,3°

Enantiomerní prebytek(e.e,): 85,10%

Příprava kyseliny (+)-2-amino-4-/3-hydroxy-5-(2-thienyl) -isoxazol-4-yl/-butanové ( Sloučenina 15d )

Analogickým postupem, popsaným výše, byla ζβ použití Sloučeniny 4c, t.j.hydrátu kyseliny (R,S)-2-smino4-/3-hydroxy-5-(2-thienyl)-i soxa zol-4-yl/-butanové,připravena v nadpise uvedená, Žádaná Sloučenina 15d.

Teplota tání: * 217 - 219°C( rozklad)

Optická otáčivost/alfa^⁰ (_c = O,25f IN HCl): +15,6° Enantiomerní přebytekíe.e.): 81,90%

Farmakologie _ '

Sloučeniny podle vynálezu byly podrobeny zkouškám při použití běžně užívaných a uznávaných postupů. Šlo o vazbu na receptory, výsledky této zkoušky jsou uvedeny v tabulce 1., mimoto byly provedeny také elektrofyzíologické 'zkoušky ha ‘preparátu krysí mozkové' kůry, tyto výsledky jsou shrnuty v tabulce 2.

Vazba /^H/AMPA

Při této zkoušce se stanoví afinita účinné látky ,.k receptorům AMPA měřením schopnosti této látky nahradit 73tf/AMPA na těchto receptorech.

Zkouška byla prováděna modifikací způsobu, uvedeného v publikaci Honoré T. a Nielsen Μ., Neurosci. Lett.,

1985, 54, 27 - 32. Zkouška byla prováděna v přítomnosti thiokyanidu draselného. To znamená, že došlo k označení jen v případě míst vazby / H/AMPA s vysokým stupněm afinity v této látce.

Použité preparáty membrán byly připraveny způsobem podle publikace Ransom R. W. a Stec, J. Neurochem., 1988, * 51, 830 - 836.

Vazba /°H/CPP

Jde o zkoušku ke stanovení afinity určité látky pro receptor NMDA. Zkoumá se schopnost této látky nahradit / H/CPP, kyselinu 4-(3-fosfonopropyl)piperazin-2-karboxylovou na místě vazby na receptor NMDA.

Zkouška byla provedena podle publikace Murphy D. E. a další·;· J. Phárm.· Exp;; Ther., 1987, 240, 778 -784. Prepa ráty membrány byly připraveny svrchu uvedeným způsobem.

Zkouška s použitím úseku mozkové kůry

Zkouška s úsekem mozkové kůry je zkouška, při níž se ......sledují úseky-moz-kové kůry in vitro. tak,.aby bylo možno kvantitativně zhodnotit vliv vazných látek na receptorech τ Glu a.tak vyhodnotit farmakologícký profil těchto látek, zejména skutečnost, zda jde o agonisty nebo antagonisty, n' Zkouška byla provedena podle publikace Harrison N. L. a

Simmonds M. A., Br. J. Pharmacol., 1985, 84, 381 - 391 v modifikaci podle'publikace Wheatley P. L., Br. J. Pharmacol. , 1986, 87, 159P.

Tabulka 1

Údaje o vazbě na receptorech

sloučenině	vazba /3H/AMPA hodnoty ΙΟ^θ V yUM	vazba / H/CPP hodnoty IC^ V yUM
1a	0.28	>100
1b	3.5	>100
2a	43.0	7.5 ’
3a	9.0	21.0
4a	>100	0.76
4b	>100	2.5
4c	>100	0.19
4d	>100	0.7
5a	33.0	22.0
5b	38.0	6.9
14a	5,5	>100

n'

Tabulka 2

Elektrofyziologické údaje (preparát krysí mozkové kůry)

slouČ;	. Profil l	EC=o v (uM)	!CS0 v (μΜ)	Receptor(subtyp)
la	| Agonist	| 5.8		AMPA
1b	Agonist	43.0		AMPA
1f	Agonist	130		AMPA
2a	Part. Ago.	300		NMDA
2b	Agonist	30.0		NMDA
3a	Agonist	' 240		AMPA
[ 4a	Antagonist		9.0	NMDA
4b	Antagonist		18.0	NMDA
4c	Antagonist		2.5	NMDA-
4d	Antagonist		8.5	NMDA
5a	Antagonist		ND	NMDA/AMPA/KAÍN
5b	Antaconist		30 !	.NMDA
5c |	Antagonist		ND	NMDA/AMPA
13a |	Agonist	55.0	-	AMPA
13b	Agonist	7.4		AMPA
14a	Agonist	230		AMPA
14b	Antagonist		290.7950’	AMPA/KAIN
14c	Antagonist		337’	AMPA
14d	Agonist . j	170		AMPA
15a	Antagonist		300	AMPA
15b	Agonist	2.7		AMPA

Vysvětlivky:

Agonist = agonista

Antagonist = antagonista

Part. Ago = částečný antagonista jí = hodnota

ND = nebylo stanoveno

Při zkouškách na preparátu mozkové kůry krysy bylo prokázáno, že některé Látky mají agonístický účinek na receptorech AMPA a NMDA, jiné látky však jsou selektivními antagonisty NMDA a další látky jsou neselektivními antagonisty receptorů AMPA a NMDA. Sloučeniny byly účinné v množství řádu ^uM.

i>

Výsledky 'i

Z tabulky 1 je zřejmé, že některé sloučeniny podle vy'3 nálezu selektivně nahradí / H/AMPA na receptorech AMPA in vitro-při afinitě v oblasti mikromolárních koncentrací.

Některé další sloučeniny jsou schopné selektivně nahradit' / H/CPP na receptorech NMDA in vitro..Ještě další sloučeni3 3 ny jsou schopné in vitro nahradit / H/AMPA a / H/CPP na receptorech AMPA a NMDA in vitro.

Při zkouškách na preparátu mozkové kůry bylo prokázá- no, že některé sloučeniny podle vynálezu jsou agonisty nebo částečnými agonisty, kdežto jiné sloučeniny mají antagonistický účinek. Vynález tedy zahrnuje sloučeniny s odlišným profilem agonistů i'antagonistů na receptorech kyseliny glutamové v oblasti nízkých mikromolárních koncentrací.

Farmaceutické prostředky li

Farmaceutické prostředky podle vynálezu je možno připravit běžnými postupy.

Například tablety je možno připravit smísením účinné složky s běžnými pomocnými látkami a/nebo ředidly s následným slisováním směsi na běžném tabletovacím stroji. Jako příklad pomocných látek nebo ředidel je možno uvést 'kukuřičný škrob, laktosu, mastek, stearan hořečnatý, želatinu, různé pryže a podobně. Mimoto je možno užít ještě jakékoliv další přísady, například barviva, aromatické látky, konzervační prostředky a podobně za předpokladu, že tyto složky jsou kompatibilní s účinnou složkou.

Roztoky pro injekční podání je možno připravit rozpuštěním účinné složky a přísad v části rozpouštědla, s výhodou ve sterilní vodě a úpravou roztoku na požadovaný objem s následnou sterilizací a plněním do vhodných ampulí nebo lahviček. I v tomto případě je možno použít jakoukoliv běžně užívanou přísadu, jako jsou Látky pro úpravu tonicity, konzervační prostředky, antioxidační látky a podobně.

Dále budou uvedeny některé typické příklady složení farmaceutických prostředků podle vynálezu.

1) Tablety s obsahem 5 mg sloučeniny ia:

sloučenina la	5,0 mg
laktosa-	60,0 mg
kukuřičný škrob	30,0 mg
hydroxypropylcelulosa	2,4 mg
mikrokrystalická celulosa	19,2 mg
sodná sůl zesítěné karmelosy typA	2,4 mg

stearan hořečnatý 0,84 mg

2) Tablety s obsahem 1 mg sloučeniny 4c:

	sloučenina 4c	1,0 mg
	laktosa	46,9 mg
	kukuřičný škrob	23,5 mg
-	polyvinylpyrrolidon	1,8 mg
	mikrokrystalická celulosa	14,4 mg
	sodná slk zesítěné karmelosy	typ A 1,8 mg
	stearan hořečnatý	0,63mg

4)

Sirup, obsahující v 1 ml	následující složky:
sloučenina la	5,0 mg
sorbitol	.500,0 mg
hy droxyp ropy1c e i u i o sa	15,0 mg
glycerol	50,0 mg
methylparaben	1,0 mg
propylparaben	0,1 mg
ethanol	0,005 ml
látka pro úpravu chuti	0,05 mg
sodná sůl sachatinu	0,5 mg
voda	do 1,0 ml

,»^1,

Roztok pro injekční podání, obsahující v 1 ml sloučenina 4a sorbitol kyselina octová voda pro injekční podání

0,5 mg 5,1 mg 0,08mg do 1,0 ml.

Claims (11)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   LZ

   Γ3 “í <

   <

   ΠΤ»

   S C

   Ty- -c o o k&u i OC OC —„ C/X *h** u_. co r~ O oc σ> —4

   1. Deriváty (5-arylisoxa2ol-4-yl)-substituovaných
2. 2-aminokarboxylových kyselin obecného vzorce I

   S—A kae znamená chemickou vazbu nebe alkylenovou skupinu o 1 až δ atomech uhlíku, alkenyler.ovou skupinu o 2 až c atomech uhlíku, alkinylenovou skupinu c 2 až δ atomech uhlíku nebo.cykloalkylenovou skupinu, znamená skupinu -CH(NR”R)-COOK, kde R' a R se nezávisle volí z atomu vodíku nebo alkylové skupiny o 1 až S atomech uhlíku, nebo skupinu obecného vzorce 11 °v ,θ v_/

   Ri— N /

   R₂

   II kde R^, R, a R^ se nezávisle volí ze skupiny

   a) atom vodíku, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 6 atomech uhlíku, alkinyl o 2 až 6 atomech uhlíku, cykloalk(en)yl, cykLoalk(en)ylalk(en/in)yl o L až 6 atomech uhlíku v alk(en/injyiové části, fenylalkyl nebo thienylalkyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, nebo 'o) alkyl o 1 az 6 atomech uhlíku, alkenyl nebo alkinyl vždy o 2 až 5 atomech uhlíku, přičemž nejméně jeden atom uhlíku v těchto zbytcích je .nahrazen N, 0 a/nebo S nebo

   Rg a R^ spolu tvoří alkylenový, alkenylenový nebo alkinylenový zbytek vždy o 2 až 6 atomech uhlíku něco

   R^ a Rg spolu tvoří alkylenový zbytek o i až 3 atomech uhlíku, alkenylenový nebo alkinylenový zbytek o 2 ač 3 atomech uhlíku, popřípadě mono- nebo disubstituovaný hydroxyskupinou nebo methylovou skupinou nebo skupinu

   CH,-O-CH~, <l 2 znamená 0, Ξ, S-(CRg)_n-COC, 5-tetrazolyl, ku v alkylové xyisoxazolyla

   C00, (CH.) -C00, O-(CH-) -COQ nebo 2 m 2 n kde n znamená celé Číslo 1 až 6, dále

   5-tetrazolylalkyl o 1 až 5 atomech uh části, 3-hydroxyisoxa'zolyl nebo 3-hyd Ikyl o 1 až S atomech uhlíku v alkyiov části,

   D znamená atom kyslíku nebo síry 'a

   R^ znamená arylovou nebo heteroarylovou skupinu, popřípadě substituovanou nejméně jedním substituentem ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, hydroxyskupina, alkylthioskupina, alkylsulfonyl, alkylaminoskupina nebo dialkylaminoskupina vždy o 1 až 5 atomech uhlíku v alkylových částech, kyanoskupina, nitroskupina, trifluormethyl nebo trifluormethyLthioskupina, za předpokladu, Že v případě, že A znamená methylenovou skupinu, 3'znamená skupinu -CH(NHg)-CQOK, E znamená atom kyslíku, D znamená atom kyslíku a R^ znamená fenyL, popřípadě substituovaný atomem halogenu nebo methoxyskupinou, pak se musí sloučenina nacházet v, enanciomerně čisté formě, a farmaceuticky přijatelné soli těchto látek.

   - 95 2. Deriváty podle nároku 1, v nichž A znamená chemickou vazbu nebo alkylenovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku a ostatní symboly mají význam, uvedený v hlavním nároku.

   í
3. 3. Deriváty podle nároku 1, v nichž B znamená skupinu -CH(NR'R)-COOH nebo skupinu obecného vzorce II, v němž R ,

   Rg a R^ znamenají atomy vodíku nebo nižší alkylové zbytky

   Jř nebo spolu tvoří R^ a Rg alkylenovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku, popřípadě substituovanou hydroxyskupinou, ostatní symboly mají význam, uvedený v hlavním nároku.
4. 4. Deriváty podle nároku 3, v nichž B znamená skupinu -CH(NHg)-COOH nebo skupinu obecného vzorce II, v němž Rg,

   R^ a R₄ znamenají-atomy vodíku.
5. 5. Deriváty podle nároku 1, v nichž E znamená 0, COO, -0-(CHg)^-000, kde n = 1, 2 nebo' 3, nebo tetrazolylovou skupinu, D znamená atom kyslíku a ostatní symboly mají význam, uvedený v hlavním nároku.
6. 6. Deriváty podle nároku 1, v nichž R znamená arylovou nebo heteroarylovou skupinu, a to pětičlennou aromatickou heteroarylovou skupinu s obsahem 1 až 4 heteroatomů ze skupiny dusík, kyslík a síra, například thienyl, furyl, pyrrolyl,

   .....oxazolyl,’ isoxazolyl, th-iazolyl, isothiazolylp.yrazoly.l, ..

   imidazolyl, triazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, tetrazo*, lyl, benzothienyl, benzofuranyl, indolyl, fenyl, bifenyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazinyl, naftyl, chi> nolyl, chinazolinyl, chinoxalinyl a chinolinyl, přičemž arylové nebo heteroarylové skupiny mohou být dále substituovány nejméně jedním substituentem ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, hydroxyskupina, alkylthioskupina, alkylsulfony1, alkylaminoskupina nebo dialkylaminoskupina vždy o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylových Částech, kyanoskupina, nitroskupina, trifluor1

   - 96 methyl, nebo trif luormethylthioskupina -a os-tatní symboly mají význam, uvedený v hlavním nároku.

   /
7. 7. Deriváty podle nároku 6, v nichž R^ znamená thienyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, tetrazolyl, triazolyl, pyridyl, fenyl, bifenyl, naftyl nebo také thienyl, naftyl, oxadiazolyl nebo fenyl, substituovaný atomem halogenu nebo $ methylovou skupinou. ....
8. 8. Deriváty podle nároku 7, v nichž R, znamená 2-thiei nyl,· 3-thíenyl, fenyl, 2-pyridyl nebo 4-pyridyl nebo 2-thienýl nebo fenyl, substituovaný atomem halogenu nebo methylovou skupinou.
9. 9. Deriváty podle nároku 1, v nichž A znamená chemickou vazbu nebo alkylenovou 'skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku,·

   B znamená skupinu -CH()-COOH nebo skupinu obecného vzorce II, v němž R^, R^ a R₂ znamenají atom vodíku, E a D znamenají atomy kyslíku a R^ znamená 2-pyridyl, 4-pyridyl, thienyl, fenyl., substituovaný thienyl nebo substituovaný fenyl.
10. 10. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ic í se t i m , že jako svou účinnou složku obsahuje derivátpodle některého z nároků 1 až 9 spolu s‘farmaceutickým nosičem nebo ředidlem.
11. 11. Použití derivátů podle některého z nároku 1 až 9 pro výrobu farmaceutických prostředků pro léčení mozkové ischernie, Huntingtonovy choroby, epileptických poruch, Parkinsonovy choroby, Alzheimerovy choroby, schizofrenie, bolestivých stavů, deprese nebo úzkostných stavů.