CN105682656A - 调节法尼醇x受体的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I化合物、其立体异构体、对映体、可药用的盐或氨基酸轭合物，在式(I)中，各变量如本文所定义；本发明还涉及它们的药用组合物，本发明的化合物和药用组合物可以用作法尼醇X受体(FXR)活性的调节剂。

Description

调节法尼醇X受体的组合物和方法
相关申请的交叉参考
本申请要求提交于2013年11月5日的美国临时申请序列号61/900,013的优先权，将其全部内容引入本文作为参考。
技术领域
本发明涉及调节法尼醇X受体(FXRs)的组合物和方法。
背景技术
法尼醇X受体(FXR)是核激素受体超级家族的成员，主要在肝、肾和肠内表达(参见，例如，Seol等，(1995)Mol.Endocrinol.9:72－85和Forman等，(1995)Cell81:687－693)。其作为与视黄醇X受体(RXR)的杂二聚体，与靶基因的启动子中的反应元件结合以调节基因转录。FXR-RXR杂二聚体以最高的亲和力与反向重复序列-1(IR-1)反应元件结合，其中共有序列受体-结合六聚体通过一个核苷酸分隔。FXR是该相关过程的一部分，因为FXR通过胆汁酸(胆固醇代谢的终产物)激活(参见，例如，Makishima等，(1999)Science284:1362－1365；Parks等，(1999)Science284:1365－1368；Wang等，(1999)Mol.Cell.3:543－553)，其可以用于抑制胆固醇分解代谢。参见，Urizar等，(2000)J.Biol.Chem.275:39313－39317。
FXR是胆固醇平衡、甘油三酯合成和脂肪生成的关键调节者。(Crawley,ExpertOpinionTher.Patents(2010),20(8):1047－1057)。除了治疗血脂异常之外，FXR的多种适应症已有报道，包括治疗肝病、糖尿病、维生素D-相关疾病、药物诱导的副作用和肝炎。(Crawley,见上)。尽管新的FXR激动剂的研发已经取得了进展，但是仍然有提高改进的巨大空间。
发明概述
本发明涉及调节法尼醇X受体(FXRs)的组合物和方法。例如，本发明提供了新的化合物，它们是FXR的激动剂或部分激动剂，可以用作治疗FXR介导的疾病的药物。
一方面，本发明化合物或其可药用的盐如式(I)所定义：
其中：
R0为环A或C1-6烷基；
环A为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；所述环A为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；所述环B为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–或–C(O)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–、*–O(CR4R5)–或–NR–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–或*1–(CR4R5)-C(O)-NR–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–、*2–(CR4R5)2-SO2–、*2–(CR4R5)2-NR-C(O)–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
L3为–(CR4R5)–或–C(O)–；
每个R2独立为卤素、羟基、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
在一个实施方案中，本发明化合物或其可药用的盐如式(II)所定义：
其中：
R0为环A或C1-6烷基；其中环A为苯基、吡啶基或环丙基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和C3-7环烷基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–或*–O(CR4R5)–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
每个R2独立为卤素、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
在一个实施方案中，本发明化合物或其可药用的盐通过式(III)表示：
其中：
环A为苯基或吡啶基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和环戊基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
L1为–(CR4R5)–；
L2为选自–(CH2)–、*2–CH2C(O)NH–、*2–CH(CH3)C(O)NH–、*2–CH2C(O)NHCH2–、*2–(CH2)2O–和*2–(CH2)2NH–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
X为CH2；
Y选自–O–、–CH2–、–C(CH3)2–和*–O-CH2–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1为CR3或N；
Z2为CR3；
Z3为CR3；
Z4为CR3或N；
每个R2独立选自卤素、甲基和三氟甲基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
每个R4和R5独立为氢或甲基。
在另一个实施方案中，本发明化合物或其可药用的盐由式(IV)表示：
其中：
每个苯基环任选被1－2个由R2独立代表的取代基进一步取代，其中R2为氟或甲基；
L2选自–CH2–、*2–CH2CH2NH–、*2–CH2CH2O–和*2–CH2C(O)NH–，其中“*2”表示L2与N的连接点；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3。
本发明也提供了由式(V)表示的化合物：
其中每个苯基环任选被1－2个由R2独立代表的取代基进一步取代，其中R2为氟或甲基；
L2选自–CH2–、*2–CH2CH2NH–、*2–CH2CH2O–和*2–CH2C(O)NH–，其中“*2”表示L2与N的连接点；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
R6为C1-6烷基。
当在体外无细胞激酶试验和细胞试验中测试时，式I、II、III、IV和V化合物及其可药用的盐具有有价值的药理学特性，因此可以用作药物。
一方面，本发明涉及在细胞中调节FXR的方法，该方法包括使得细胞与有效量的式I、II、III、IV或V化合物或其可药用的盐接触；所述化合物可以任选与第二种治疗药物组合。
另一方面，本发明涉及在患病个体中治疗、改善或预防FXR-介导的疾病的方法，该方法包括给予所述个体治疗有效量的式I、II、III、IV或V化合物或其可药用的盐；所述化合物可以任选与第二种治疗药物组合。本发明还提供了式I、II、III、IV或V化合物或其可药用的盐在生产用于治疗FXR-介导的疾病的药物中的用途；所述化合物可以任选与第二种治疗药物组合。另一方面，本发明涉及组合产品，其包含治疗有效量的式I、II、III、IV或V化合物或其可药用的盐以及第二种治疗药物。当使用第二种治疗药物时，第二种治疗药物也可以用于治疗FXR-介导的疾病。
在一个实施方案中，化合物(单独或与第二种治疗药物组合)用于治疗肝病或胃肠道疾病，包括但不限于选自下列的肝病：肝内胆汁淤积、雌激素诱导的胆汁淤积、药物引起的胆汁淤积、妊娠胆汁淤积、肠外营养相关的胆汁淤积、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、Alagille综合征、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎、ductopenic肝移植排斥、肝移植相关的移植物抗宿主病、囊肿性纤维化肝脏疾病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、酒精性肝病和肠胃外营养相关的肝脏疾病；以及选自下列的胃肠道疾病：胆汁酸吸收不良(包括一级胆汁酸腹泻和二级胆汁酸腹泻)、胆汁返流性胃炎和炎性肠病，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、不确定性结肠炎和白塞氏病。
发明详述
定义
采用下列定义用于解释本说明书，在适当的时候，单数使用的术语也包括复数形式，反之亦然。
本文中使用的“C1-6烷基”表示具有1至多6(在某些情况下1至多4)个碳原子的烷基，该基团可以是直链的，或者也可以是具有单个或多个分支的支链。例如，“C1-6烷基”包括但不限于正-丁基、仲-丁基、异丁基、叔-丁基；丙基、例如正-丙基、2-甲基丙基或异丙基；乙基或甲基。
本文中使用的术语“亚烷基”是指具有1－4个碳原子的本文中所定义的二价烷基。亚烷基的代表性实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚异丙基、亚正丁基、亚仲丁基、亚异丁基、亚叔丁基等。
本文中使用的“C3-7环烷基”是指3－7个碳环原子的非芳族饱和的或部分不饱和的单环、双环、桥连或螺环烃基。典型的单环烃基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基和环己烯基等。
本文中使用的“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴和碘；更特别的是氟或氯。
本文中使用的“卤代C1-6烷基”或“卤素-取代的C1-6烷基”是指被如上文所定义的一或多个卤代基团取代的如上文所定义的烷基，特别是氟C1-6烷基，更特别的是三氟甲基。
本文中使用的“立体异构体”是指由通过相同的键结合的相同原子组成的但是具有不同三维结构的化合物，它们不能互换。本发明包括各种立体异构体及其混合物以及“对映体”，对映体是指其分子彼此为不可重叠的镜像的两个立体异构体。
本文中使用的术语“氨基酸轭合物”是指式I、II、III、IV或V化合物与任何适当的氨基酸的轭合物。优选此类适当的式I、II、III、IV或V化合物的氨基酸轭合物应当具有在胆汁或肠液中增加其完整性的额外的优点。适当的氨基酸包括但不限于甘氨酸、牛磺酸和酰基葡糖苷酸。因此，本发明应当包括式I、II、III、IV或V化合物的甘氨酸、牛磺酸和酰基葡糖苷酸轭合物。
本文中使用的术语“可药用的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等及其组合，它们是本领域技术人员公知的(参见，例如Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明顿药物科学),第18版,MackPrintingCompany,1990,第1289－1329页)。除了与活性成分不相容的任何常规载体外，其他均可以用于治疗或药用组合物中。
本文中使用的术语“治疗有效量”是指足以达到规定效果的式(I)化合物的量。因此，用于治疗由FRX介导的疾病的式(I)化合物的治疗有效量应当是足以治疗由FRX介导的疾病的量。
本文中使用的术语“个体”是指动物。所述动物通常为哺乳动物。个体也是指例如灵长类(例如，人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，个体为灵长类。在另一个实施方案中，个体为人类。
在一个实施方案中，本文中使用的术语任何疾病或病症的“治疗”是指缓解疾病或病症(即减慢或中止或减轻疾病的发展或其至少一种临床症状)。在另一个实施方案中，“治疗”是指缓解或改善至少一种体检参数，包括那些患者自己不能辨别的参数。在另一个实施方案中，“治疗”是指调节疾病或病症，包括机体上的(例如可辨别症状的稳定)、生理学上的(例如身体参数的稳定)或它们两者的调节。在另一个实施方案中，“治疗”是指防止或延迟疾病或病症的发作或发展或进程。
如本文所用的那样，如果个体通过此类治疗在生物学上、医学上或生活质量方面获益，那么该个体是“需要”治疗的。
本文中使用的术语“血脂异常”是指血液中脂肪和脂蛋白的异常或异常量以及此类异常产生的、导致的、加重的或并发的疾病状态(参见，Dorladn’sIllustratedMedicalDictionary,第29版或其后续版本,W.B.SaundersPublishingCompany,NewYork,NY)。本文中使用的血脂异常定义中所包含的疾病状态包括高脂血症、高甘油三酯血症、低血浆HDL、高血浆LDL、高血浆VLDL、肝胆汁淤积和高胆固醇血症。
本文中使用的短语“与血脂异常有关的疾病”是指包括但不限于下列的疾病：动脉粥样硬化、血栓形成、冠状动脉疾病、中风和高血压。与血脂异常相关的疾病还包括代谢性疾病如肥胖、糖尿病、胰岛素抵抗及其并发症。
本文中使用的术语“胆汁淤积”是指其中胆汁从肝脏的流动受到阻塞的任何情况，可以是发生在肝内(即出现在肝脏内部)或肝外(即出现在肝脏外部)。
本文中使用的“肝纤维化”包括任何原因导致的肝纤维化，包括但不限于：病毒诱发的肝纤维化，例如乙型肝炎和丙型肝炎；暴露于醇(酒精性肝病)、药物化合物、氧化应激、癌症放疗或工业化学品导致的肝纤维化；疾病导致的肝纤维化，如原发性胆汁性肝硬化、脂肪肝、肥胖症、非酒精性脂肪性肝炎、囊性纤维化、血色素沉着病和自身免疫性肝炎。
本文中使用的“FXR激动剂”是指能够与FXR直接结合并且上调FXR活性的成分。
除非本文中另有规定或者上下文中有明确的矛盾，本文中使用的术语“一个”、“一种”、“该”以及本发明上下文中使用的类似术语均应当涵盖单数和复数形式。
本文中的任何定义均可以与任何其它定义组合使用以表述一个复合的结构基团。按照惯例，任何此类定义的末端元素均是与母体部分连接的元素。例如，复合基团烷氧基烷基表示通过烷基与母体分子连接的烷氧基。
实施本发明的方法
本发明涉及组合物和调节FXR的方法。本文描述了本发明的各种实施方案。应当理解，在各个实施方案中说明的特征可以与其它指定的特征组合以提供其它实施方案。
在第一个实施方案中，本发明化合物或其可药用的盐由式(I)定义：
其中：
R0为环A或C1-6烷基；
环A为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；所述环A为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；所述环B为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–或–C(O)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–、*–O(CR4R5)–或–NR–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–或*1–(CR4R5)-C(O)-NR–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–、*2–(CR4R5)2-SO2–、*2–(CR4R5)2-NR-C(O)–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
L3为–(CR4R5)–或–C(O)–；
每个R2独立为卤素、羟基、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
在第二个实施方案中，本发明化合物由第一个实施方案中定义的式(I)定义，其中：
R0为环A或C1-6烷基；
环A为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；或C3-7环烷基；所述环A为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；或C3-7环烷基；所述环B为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–或*–O(CR4R5)–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
L3为–C(O)–；
每个R2独立为卤素、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
在第三实施方案中，本发明化合物或其可药用的盐由式(II)定义：
其中：
R0为环A或C1-6烷基；其中环A为苯基、吡啶基或环丙基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和C3-7环烷基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–或*–O(CR4R5)–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
每个R2独立为卤素、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
在第四个实施方案中，上述实施方案中任一项的R0选自：
*3–CH2C(CH3)2–、*3–CH2CH(CH3)–和*3–环丙烷-1,1,-二基，其中“*3”表示R0与L2的连接点。
根据上述实施方案中的任一项，Y可以选自–O–、–CH2–、–C(CH3)2–和*–O-CH2–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的六元环的连接点。
根据上述实施方案中的任一项，L1可以是–(CR4R5)–或–CH2–。在一个变通方案中，L1为–(CR4R5)–。
根据上述实施方案中的任一项，L2可以选自–(CH2)–、*2–CH2C(O)NH–-、*2–CH(CH3)C(O)NH–、*2–CH2C(O)NHCH2–、*2–(CH2)2O–和*2–(CH2)2NH–，其中“*2”表示L2与N的连接点。
根据上述实施方案中的任一项，当存在时，每个R2可以独立地选自卤素、甲基和三氟甲基。
在第五个实施方案中，本发明化合物或其可药用的盐由式(III)表示：
其中：
环A为苯基或吡啶基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和环戊基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
L1为–(CR4R5)–；
L2选自–(CH2)–、*2–CH2C(O)NH–、*2–CH(CH3)C(O)NH–、*2–CH2C(O)NHCH2–、*2–(CH2)2O–和*2–(CH2)2NH–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
X为CH2；
Y选自–O–、–CH2–、–C(CH3)2–和*–O-CH2–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1为CR3或N；
Z2为CR3；
Z3为CR3；
Z4为CR3或N；
每个R2独立选自卤素、甲基和三氟甲基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
每个R4和R5独立为氢或甲基。
在第六个实施方案中，上述实施方案中任一项的Y为–O–。在一个备选实施方案中，Y为–CH2–。在另一个备选实施方案中，Y为*–O-CH2–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点。
在第七个实施方案中，上述实施方案中任一项的L1为–CH2–。
在第八个实施方案中，上述实施方案中任一项的L2选自–(CH2)–、*2–CH2C(O)NH–、*2–(CH2)2O–和*2–(CH2)2NH–；其中“*2”表示L2与N的连接点。
在第九个实施方案中，上述实施方案中任一项的L2为–(CH2)–。
在第十个实施方案中，当存在时，上述实施方案中任一项的R2独立为氟或甲基。在一个变通方案中，每个R2为氟。在另一个变通方案中，每个R2为甲基。
在第十一个实施方案中，上述实施方案中任一项的R3选自氢、氟、氯和甲基。
在第十二实施方案中，根据上述实施方案中的任一项，Z1选自CH、CF、CCH3和N；Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；Z3选自CH、CF、CCl和CCH3；Z4为CH或N。
根据上述实施方案中的任一项，当存在时，每个R、R4、R5和R6可以独立为氢或甲基。在一个变通方案中，当存在时，R、R4、R5和R6为氢。
在第十三个实施方案中，本发明化合物由式(IV)表示：
每个苯基环任选被1－2个由R2独立代表的取代基进一步取代，其中R2为氟或甲基；
L2选自–CH2–、*2–CH2CH2NH–、*2–CH2CH2O–和*2–CH2C(O)NH–，其中“*2”表示L2与N的连接点；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3。
在一个实施方案中，上述实施方案中任一项的L2为–(CH2)–。在一个备选实施方案中，L2为*2–(CH2)2NH–。在另一个备选实施方案中，L2为*2–CH2C(O)NH–。在每个实施方案中，“*2”表示L2与N的连接点。
本发明的具体化合物包括但不限于：4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；4-氟-3-(2-(1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(N-(2-氟苄基)-1,8-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(N-(2-氟苄基)-1,6-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(7-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(7-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(6,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1,7-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1,6-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-6-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；4-氟-3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(7,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(7,8-二氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(N-苄基-7,8-二氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；4-氟-3-(2-(8-氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；4-氟-3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹啉-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；4-氟-3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-f]喹啉-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；(S)-4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)丙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[g]吲唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-7-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；4-氟-3-(2-(N-(3-氟苄基)-1,5,5-三甲基-4,5-二氢-1H-苯并[g]吲唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；4-氟-3-(2-(N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(N-苄基-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(9-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-5-氟苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-甲基苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2,2-二甲基丙酸；1-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)甲基)环丙烷甲酸；4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-甲基苯甲酸；4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二甲基苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-4-氟苯甲酸；4-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二甲基苯甲酸；4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二氟苯甲酸；4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸；4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二氟苯甲酸；3,5-二氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；4-(2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二氟苯甲酸；4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；4-(2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；4-(2-(N-苄基-7,8-二氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；3-氟-4-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；4-(2-(7,8-二氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；4-(2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；3-氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；4-(2-(7,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-((2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；3-((2-(8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；4-氟-3-((2-(8-氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；3-((2-(7,8-二氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；4-氟-3-((2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；4-氟-3-((2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；3-((2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；3-((2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；3-((2-(7,8-二氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；3-((2-(N-苄基-7,8-二氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；4-((8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(3,5-二氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；4-((8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(2,3-二氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(3-氟-5-甲基苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((N-(3,5-二氟苄基)-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；3-氟-4-((8-氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((N-((1H-吲哚-5-基)甲基)-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；5-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)吡啶甲酸；4-((8-氯代-N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-((5-氯代吡啶-3-基)甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-氟苯甲酸；4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-氟苯甲酸；N-苄基-N-(4-氨基甲酰基苄基)-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺；4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；3-氟-4-((8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-氟苯甲酸；6-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)烟酸；5-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-6-甲基吡啶甲酸；4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；和3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体。
本发明化合物的更具体的示例包括但不限于：4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(7-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；3-(2-(7,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；3-((2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；和4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体。
在一个实施方案中，本发明提供了上述实施方案中任一项的化合物，其中可药用盐形式的化合物选自TRIS(2-氨基-2-羟基甲基-1,3-丙烷二醇)的精氨酸盐、赖氨酸盐、钠盐和葡甲胺盐。
本发明还提供了式(V)化合物：
其中每个苯基环是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代，其中R2为氟或甲基；
L2选自*2-CH2-、*2-CH2CH2NH-、*2-CH2CH2O-和*2-CH2C(O)NH-，其中“*2”表示L2与N的连接点；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
R6为C1-6烷基。
另一方面，本发明提供了药用组合物，其包含治疗有效量的上述实施方案和变通方案中任一项的化合物或其可药用的盐以及可药用的载体、稀释剂或赋形剂。
另一方面，本发明提供了组合产品，其包含治疗有效量的上述实施方案和变通方案中任一项的化合物或其可药用的盐以及第二种治疗药物。
另一方面，本发明提供了在患病个体中治疗由法尼醇X受体(FXR)介导的疾病的方法，该方法包括给予个体治疗有效量的上述实施方案和变通方案中任一项的化合物或其可药用的盐；所述化合物可以任选与第二种治疗药物组合。
另一方面，本发明提供了上述实施方案和变通方案中任一项的化合物或其可药用的盐，所述化合物可以任选与第二种治疗药物组合，用于治疗由FXR介导的疾病。
另一方面，本发明提供了上述实施方案和变通方案中任一项的化合物或其可药用的盐在制备用于在个体中治疗由FXR介导的疾病的药物中的用途，所述化合物可以任选与第二种治疗药物组合。
在一个实施方案中，与任何上述方法、用途或组合产品有关的由FXR介导的疾病为肝脏疾病或胃肠道疾病。例如，本发明化合物可以治疗由FXR介导的肝脏疾病，其中上述肝脏疾病选自：胆汁淤积(例如肝内胆汁淤积、雌激素诱导的胆汁淤积、药物引起的胆汁淤积、妊娠胆汁淤积、肠外营养相关的胆汁淤积、进行性家族性胆汁淤积(PFIC))；Alagille综合征、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎、ductopenic肝移植排斥、肝移植相关的移植物抗宿主病、囊肿性纤维化肝脏疾病、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、酒精性肝病和肠胃外营养相关的肝脏疾病。本发明化合物也可以用于治疗由FXR介导的胃肠道疾病，其中上述胃肠道疾病选自：胆汁酸吸收不良(包括初级胆汁酸腹泻和次级胆汁酸腹泻)、胆汁返流性胃炎和炎性肠病，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、不确定性结肠炎和白塞氏病。
更具体地讲，由FXR介导的疾病为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。对于本发明的组合疗法而言，其它治疗药物也可以用于治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
在一个实施方案中，本发明化合物可以通过肠内给药；更特别的是，通过口服给药。
除非特别说明，术语“本发明的化合物”是指式I、II、III、IV或V化合物、其可药用的盐、前药以及天然形成的部分(例如多晶型物、溶剂化物和/或水合物)。本发明化合物可以是立体异构体(包括非对映异构体和对映体)，可以是立体异构体的混合物或单一立体异构体。本发明化合物还可以是互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代)。本发明的其它化合物在下文中实施例中详细说明。
本文中描述的某些化合物具有一或多个不对称中心或轴，因此可以产生对映体、非对映异构体和其它立体异构形式，它们可以根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-。本发明应当包括所有可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯的形式和中间体混合物。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以采用手性合成子或手性试剂制备，或者可以采用常规技术分离。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。也应当包括所有的互变异构形式。
本文中给出的任何结构式也应当代表化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文所给出的结构式所表述的结构，但是一或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子所替代。可以掺入本发明化合物中的同位素的示例包括但不限于氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125Ir。本发明应当包括本文所定义的各种同位素标记化合物，例如那些其中存在放射性的同位素(例如3H、13C和14C)的化合物。此类同位素标记化合物可以用于代谢研究(采用14C)、反应动力学研究(采用例如2H或3H)、检测或成像技术(例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布试验)，或者用于患者的放射治疗。尤其特别的是，18F标记化合物可以特别令人满意地用于PET或SPECT研究。因此，同位素标记的本发明化合物及其前药通常可以根据流程或实施例中公开的方法以及下面描述的制备方法通过易于获得的同位素标记试剂代替同位素未标记试剂而制备。
另外，由于其具有较好的代谢稳定性，采用较重同位素(特别是氘(即2H或D))的取代可以提供一定的治疗上的益处，例如增加体内半衰期或降低剂量需要或者改善治疗指数。应当理解，在本文中氘可以被视为是式(I)化合物的取代基。此类较重的同位素(特别是氘)的浓度可以用同位素富集因子来定义。本文所用的术语“同位素富集因子”意指同位素丰度与具体给定的同位素的天然丰度之比。如果本发明化合物中的取代基是所示的氘，则此类化合物对每个指定的氘原子而言具有至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。
同位素标记的式I、II、III、IV和V化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术制备，或者通过本文实施例和工艺中所述类似的方法采用适当的同位素标记试剂代替以前使用的未标记试剂而制备。
本发明的可药用的溶剂化物包括那些其中结晶溶剂可以是同位素取代的溶剂化物，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
本发明化合物，即包含能够作为氢键供体和/或受体的式I、II、III、IV和V化合物，能够与适当的共结晶形成剂形成共结晶。这些共结晶可以根据已知的共结晶形成方法制备自式I、II、III、IV和V化合物。所述方法包括研磨、加热、共升华、共融，或者在结晶条件下使得式I、II、III、IV和V化合物与共结晶形成剂在溶液中接触，然后分离由此形成的共结晶。适当的共结晶形成剂包括那些描述于WO2004/078163中的形成剂。因此，本发明还提供了含有式I、II、III、IV和V化合物的共结晶。
本发明化合物的任何不对称原子(例如碳原子等)可以存在外消旋或对映体富集，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施方案中，在(R)-或(S)-构型中每个不对称原子具有至少50％的对映体过量、至少60％的对映体过量、至少70％的对映体过量、至少80％的对映体过量、至少90％的对映体过量、至少95％的对映体过量或至少99％的对映体过量。如果可能的话，具有不饱和键的原子上的取代基可以存在顺式-(Z)-或反式-(E)-形式。
因此，本文中使用的本发明化合物可以可以是下列可能存在的形式之一：异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物，例如基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。任何获得的异构体混合物可以根据其组成成分的物理化学性质的不同分离为纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体，例如通过色谱方法和/或分步结晶的方法分离。任何获得的终产物或中间体的外消旋物可以根据已知的方法拆分为光学异构体，例如通过分离采用光学活性的酸或碱获得的其非对映体盐，释放出光学活性的酸性或碱性化合物。尤为特别的是，碱性部分可以用于将本发明化合物拆分为光学对映体，例如通过盐的分步结晶方法拆分，所述盐采用光学活性的酸形成，例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O'-对-苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消旋产物也可以通过手性色谱方法拆分，例如采用手性吸附剂的高效液相色谱(HPLC)方法。
药理学和用途
游离形式或盐形式的式I、II、III、IV和V化合物具有有价值的药理学特性，例如FXR调节特性，如下面章节中提供的体外和/或体内试验中所示，因此可以用于治疗可以通过调节FXR而治疗的病症，例如下面所述的那些病症。
随着第一个合成的FXR配体GW4064作为工具化合物(Maloney等，J.Med.Chem.2000,43(16),2971－2974；Willson等，Med.Res.Rev.2001,21(6)513-22)的发展以及半合成的人工胆汁酸配体6-α-乙基-CDCA的发展，可以分析强效激动剂对FXR的超强刺激作用。结果显示，这两种配体均可以诱导胆管结扎动物中的胆汁流动。除了促进胆汁分泌的作用之外，还证明了其具有保肝作用(Pellicciari等，J.Med.Chem.2002,45(17),3569－3572；Liu等，J.Clin.Invest.2003,112(11),1678－1687)。这种保肝作用进一步限定在由基质-金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1和2)所产生的抗纤维化作用方面，在肝星状细胞中诱导胶原蛋白-沉积物分解基质-金属蛋白酶2(MMP-2)，随后还原α-胶原蛋白mRNA并转化生长因子β(TGF-β)mRNA，它们二者均为FXR激动剂的纤维化因子(pro-fibroticfactors)(Fiorucci等，Gastroenterology2004,127(5),1497－1512；Fiorucci等，Pharmacol.Exp.Ther.2005,314(2),584－595)。
FXR的抗纤维化活性至少部分是通过PPARγ(另一种核受体)的诱导而介导的，与其抗纤维化活性有关(Fiorucci等，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005,315(1),58－68；Galli等，Gastroenterology2002,122(7),1924－1940；PinedaTorra等，Mol.Endocrinol.2003,17(2),259－272)。此外，在胆管结扎动物模型中以及雌激素诱导的胆汁淤积动物模型中证实了抗胆汁淤积活性(Fiorucci等，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005,313(2),604－612)。
遗传研究证明，在遗传形式的胆汁淤积(进行性家族性肝内胆汁淤积＝PFIC,I–IV型)中，FXR自身的核定位由于FIC1基因中的突变(在PFICI型中也称为Byler病)而降低(Chen等，Gastroenterology.2004,126(3),756－64；Alvarez等，Hum.Mol.Genet.2004；13(20),2451－60)，或者FXR靶基因编码的MDR-3磷脂输出泵(phospholipidexportpump)的水平降低(在PFICIII型中)。总之，日渐增加的数据表明，FXR结合化合物在慢性胆汁淤积病症的治疗方案中具有实质性的临床效用，所述病症例如原发性胆汁性肝硬化(PBC)或原发性硬化性胆管炎(PSC)(综述于：Rizzo等，Curr.DrugTargetsImmuneEndocr.Metabol.Disord.2005,5(3),289－303；Zollner,MoI.Pharm.2006,3(3),231－51,Cai等，ExpertOpin.Ther.Targets2006,10(3),409－421)。
此外，FXR似乎与多种不同的与病因相关的生理学过程的调节有关，可以用于治疗各种各样的疾病：胆固醇胆结石；代谢性疾病，例如Il型糖尿病、血脂异常或肥胖症；慢性炎性疾病，例如炎性肠病；或慢性肝内胆汁淤积以及多种其它疾病(Claudel等，Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.2005,25(10),2020－2030；Westin等，MiniRev.Med.Chem.2005,5(8),719－727)。
FXR也被证明是血清甘油三酯的关键调节者(Maloney等，J.Med.Chem.2000,43(16),2971－2974；Willson等，Med.Res.Rev.2001,21(6),513－22)。最近的报道显示，通过合成激动剂激活FXR能够使得血清甘油三酯显著降低，主要是VLDL形式减少，但是也可以降低总血清胆固醇(Figge等，J.Biol.Chem.2004,279(4),2790－2799；Bilz等，Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.2006,290(4),E716－22)。然而，血清甘油三酯的降低并非独立的作用。采用合成的FXR激动剂GW4064治疗db/db或ob/ob小鼠使得血清甘油三酯、总胆固醇、游离脂肪酸和酮体例如3-OH丁酸酯出现显著的、合并的降低。此外，在肝细胞内，FXR的激活与细胞内胰岛素信号通路结合，使得通过肝脏糖异生的葡萄糖输出减少，但是肝糖原相伴增加。通过FXR治疗可以正面影响胰岛素敏感性以及葡萄糖耐受性(Stayrook等，Endocrinology2005,146(3),984－91；Zhang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA2006,103(4),1006－1011；Cariou等，J.Biol.Chem.2006,281,11039－11049；Ma等，J.Clin.Invest.2006,116(4),1102－1109；Duran-Sandoval等，Biochimie2005,87(1),93－98)。
本发明化合物也可以用于治疗胃肠道疾病，包括但不限于胆汁酸吸收障碍包括原发性胆汁酸腹泻和二级胆汁酸腹泻)、胆汁返流性胃炎和炎性肠病IBD)。在患者中导致过度的粪便胆汁酸排泄和腹泻的胆汁酸吸收不良的特征在于其中的胆汁酸合成的反馈调节被中断从而导致额外的胆汁酸产生的循环。胆汁酸合成的反馈调节受到内分泌通路的控制，其中核胆汁酸受体FXR的激活在啮齿类动物中能够诱导成纤维细胞生长因子15(FGF15)的肠表达，或者在人类中诱导FGF19的表达。在肝脏中，FGF15或FGF19与FXR-介导的小杂二聚体配对物的表达一起作用以抑制胆汁酸合成(Jung等，JournalofLipidResearch48:2693－2700(2007)WaltersJR,NatRevGastroenterolHepatol.11(7):426－34(2014))。
在一个实施方案中，本发明化合物可以用于有益地改变脂质特征，包括但不限于降低总胆固醇水平、降低LDL胆固醇水平、降低VLDL胆固醇水平、提高HDL胆固醇水平和/或降低甘油三酯水平。因此，本发明提供了治疗FXR介导的疾病的方法，例如血脂异常以及与血脂异常有关的疾病，该方法包括给予需要的个体治疗有效量的本发明化合物。
在另一个实施方案中，所述化合物或药用组合物用于治疗选自下列的疾病：脂质和脂蛋白疾病，例如高胆固醇血症、高甘油三酯血症和动脉硬化症，其临床表现可以通过FXR的有益作用而获得改善的疾病，所述作用包括提高HDL胆固醇、降低血清甘油三酯、增加肝胆固醇向胆汁酸的转化、提高肝脏中VLDL和其它脂蛋白的清除和代谢转化。
在另一个实施方案中，所述化合物和药用组合物可以用于制备药物，其中FXR-靶向的药物的降低脂质、抗胆汁淤积和抗纤维化的组合作用可以被开发用于治疗脂肪肝及其相关综合征，例如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，或者用于治疗与酒精诱导的肝硬化或病毒型肝炎相关的胆汁淤积和纤维化。
FXR似乎还与肠道中抗菌防御有关(lnagaki等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2006,103(10),3920－3905)，在炎性肠病(IBD)的治疗中具有有益的作用，特别是那些影响肠道上部(回肠)的疾病形式(例如回肠克罗恩病)，因为这似乎是FXR对细菌生长控制的作用位点。在IBD中，肠道免疫系统中适应性免疫应答的脱敏可能会受到损害。然后细菌的过度生长可能会致病性地触发建立慢性炎性应答。因此，通过FXR-类型机制阻止细菌生长可能是预防急性炎症发作的重要机制。因此，本发明还涉及式(I)化合物或含有所述化合物的药用组合物，其用于治疗与炎性肠病相关的疾病，例如克罗恩病或溃疡性结肠炎。FXR-介导的肠道屏障功能的恢复和非共生菌负荷的减少被认为有助于减少细菌性抗原暴露于肠道免疫系统，因此可以减少炎性应答。
本发明还涉及化合物或药用组合物，其用于治疗肥胖症及其相关疾病，例如代谢综合征(血脂异常、糖尿病和体重指数异常的合并病症)，这些病症可以通过FXR-介导的降低血清甘油三酯、血糖和增加胰岛素敏感性以及FXR-介导的减肥而治疗。本发明的化合物或药用组合物也可以用于制备药物，所述药物用于治疗I型和II型糖尿病的临床并发症，例如糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病和周围动脉闭塞性疾病(PAOD)。
此外，本发明的化合物或药用组合物也可以用于治疗慢性肥胖和器官纤维化退化导致的病症和疾病，这些病症和疾病的原因在于强化脂质(enforcedlipid)并且特别是甘油三酯的积聚，最后纤维化通路被激活。此类病症和疾病包括肝脏中非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和慢性胆汁淤积疾病、肾脏中肾小球硬化症和糖尿病性肾病、眼睛中黄斑变性和糖尿病性视网膜病以及大脑中退行性疾病如阿尔茨海默病或者外周神经系统中糖尿病性神经病。
其它FXR-介导的疾病的示例包括药物诱导的胆管损害、胆管阻塞、胆结石、胆石病、肝纤维化、肝硬化、酒精性肝硬化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、预防核黄疸、静脉闭塞性疾病、门静脉高压、代谢综合征、高胆固醇血症、肠细菌过度生长、勃起功能障碍以及其它FXR-介导的导致肝外胆汁淤积的病症。
给药和药用组合物
另一方面，本发明提供了药用组合物，其包含本发明化合物和可药用的载体。此类药用组合物可以配制为用于特定给药途径的制剂，例如口服给药、胃肠外给药和直肠给药等。另外，本发明的药用组合物可以制成固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂或栓剂)或液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬液剂或乳剂)。所述药用组合物可以采用常规制药工艺制备(例如灭菌)和/或可以含有常规惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅助剂(例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等)。
在特定的实施方案中，所述药用组合物可以配制用于口服给药。通常，所述药用组合物为片剂或明胶胶囊，它含有活性成分，以及：
a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂而言，还可以含有：
c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还可以含有：
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和/或
e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。
用于口服给药的适当的组合物包括有效量的本发明化合物，以下列形式存在：片剂、锭剂、水性或油性混悬液、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊或糖浆或酏剂。用于口服的组合物可以根据本领域中用于生产药用组合物的已知方法制备，此类组合物可以含有一或多种选自下列的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，从而可以提供药学上可接受的美观和适口的制剂。片剂可以含有活性成分以及与之混合的适合于生产片剂的无毒的可药用赋形剂。这些赋形剂为：例如，惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；颗粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂是未包衣的，或者根据本领域已知方法包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长的期间提供持久的作用。例如，可以采用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服的制剂可以为硬明胶胶囊剂，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或者可以为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油性介质混合，例如花生油、液体石蜡或橄榄油。
某些注射用组合物为等张水溶液或混悬液，栓剂最好制备自脂肪乳或混悬液。所述组合物可以是无菌的和/或含有辅助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。另外，它们也可以含有其它具有治疗价值的物质。所述组合物可以分别根据常规混合、制粒或包衣方法制备，含有约0.1－75％或含有约1－50％的活性成分。
透皮应用的适当的组合物包含有效量的本发明化合物以及适当的载体。适合于透皮传递的载体包括可吸收的、药理学上可接受的溶剂从而有助于通过宿主的皮肤。例如，透皮装置为绷带形式，它包括被膜、含有化合物以及任选的载体的储库、任选的能够以受控和预定的速度在持续较长的时间内将化合物传递通过宿主皮肤的控速屏障以及将该装置固定的皮肤上的工具。
局部应用(例如皮肤和眼睛应用)的适当的组合物包括水溶液、混悬液、软膏、霜剂、凝胶剂或通过例如气雾剂传递的喷雾制剂等。此类局部传递系统特别适合于皮肤应用，例如用于治疗皮肤癌，例如在防晒霜、洗剂、喷雾剂等中的预防性应用。因此，它们特别适合于局部使用，包括本领域中众所周知的化妆品、制剂。此类制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张力增加剂、缓冲剂和防腐剂。
本文中使用的局部应用还应当包括吸入剂或鼻腔内施用。它们可以便利地以下列形式传递：干粉吸入器中的干粉(单独应用，作为混合物应用，例如与乳糖的干混合物，或混合成分颗粒，例如与磷脂的混合颗粒)，或者压力容器、泵、喷雾器或雾化器中的气溶胶喷雾剂，它可以使用或者不使用适当的抛射剂。
用于本发明化合物局部或透皮给药的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。活性化合物可以在无菌条件下与药用的载体以及需要的任何防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。
除了本发明活性化合物之外，软膏、糊剂、霜剂和凝胶剂可以含有赋形剂，例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合物。
除了本发明化合物之外，粉剂和喷雾剂可以含有赋形剂，例如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常规抛射剂，例如氯代氟代烃类以及挥发性未取代的烃类，例如丁烷和丙烷。
透皮贴剂具有将本发明化合物以受控形式传递至机体的额外的优点。此类剂型可以通过将化合物溶解或分散在适当的介质中而制备。也可以采用吸收促进剂以增加化合物通过皮肤的流量。此类流速可以通过控速膜而控制，或者将活性化合物分散在聚合物基质或凝胶中而控制。
眼用制剂、眼膏、粉剂、溶液剂等也应当包含在本发明的范围内。
本发明还提供了包含作为活性成分的本发明化合物的无水药用组合物和剂型，因为水可能会促进某些化合物的降解。本发明的无水药用组合物和剂型可以在低水分或低湿度条件下采用无水材料或低水分材料制备。无水药用组合物可以以保持其无水特性的方式制备和储存。因此，无水组合物可以采用已知的能够防止暴露于水的材料包装，它们可以包含在适当的规定的套盒中。适当的包装的示例包括但不限于密封的铝箔、塑料、单位剂量容器(如安瓿)、泡罩包装和条带包装(strippacks)。
本发明还提供了药用组合物和剂型，其含有能够降低作为活性成分的本发明化合物的降解速度的一或多种成分。在本文中称为“稳定剂”的此类成分包括但不限于抗氧剂(例如抗坏血酸)、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
对于约50－70kg的个体而言，本发明的药用组合物或组合产品可以含有约1－1000mg的活性成分的单位剂量，或约1－500mg或约1－250mg或约1－150mg或约0.5－100mg或约1－50mg的活性成分。化合物、药用组合物或其组合产品的治疗有效量取决于个体的种类、体重、年龄和个体健康情况、待治疗的病症或疾病或其严重程度。医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制疾病或病症发展所必需的各个活性成分的有效量。
上述剂量特性可以采用合适的哺乳动物通过体外和体内试验进行证明，所述动物例如小鼠、大鼠、犬、猴或离体器官、组织及其制品。本发明化合物在体外可以以溶液的形式应用，例如水溶液；在体内可以以例如混悬液或水溶液的形式在肠内、胃肠外(最好是静脉内)应用。体外剂量范围在约10-3摩尔浓度至10-9摩尔浓度之间。体内治疗有效量取决于给药途径，在约0.1－500mg/kg或约1－100mg/kg的范围内。
本发明化合物可以与一或多种其它治疗药物同时给药或者在其给药之前或之后给药。本发明化合物与其它药物可以通过相同或不同的给药途径分别给药，或者在同一药用组合物中一起给药。
在一个实施方案中，本发明提供了作为组合制品的一种产品，它包含式I、II、III、IV或V化合物和至少一种其它治疗药物，在治疗中可以同时、分别或按顺序使用。在一个实施方案中，所述治疗为对由FXR介导的疾病或病症的治疗。作为组合制品提供的产品包括在同一药用组合物中包含式I、II、III、IV或V化合物和其它治疗药物的组合物，或者式I、II、III、IV或V化合物和其它治疗药物为单独分开的形式，例如套盒形式。
在一个实施方案中，本发明提供了药用组合物，其包含式I、II、III、IV或V化合物和另一种治疗药物。本发明提供了药用组合物，其包含式I、II、III、IV或V化合物以及与之组合的天然存在的无毒胆汁酸(例如熊去氧胆酸)，其作为辅助剂以防止采用FXR激动剂治疗所可能继发的脂溶性维生素的消耗。因此，本发明化合物可以与天然存在的无毒胆汁酸同时给药，既可以作为独立的实体给药，也可以作为包含式I、II、III、IV或V化合物和天然存在的胆汁酸的单一制剂给药。
任选所述药用组合物可以含有上述可药用的赋形剂。
在一个实施方案中，本发明提供了套盒，它包含两种或多种不同的药用组合物，其中至少一种含有式I、II、III、IV或V化合物。在一个实施方案中，所述套盒包括分别盛放所述组合物的工具，例如容器、分开的瓶子或分开的铝箔袋。此类套盒的一个示例为泡罩包装，通常用于包装片剂、胶囊等。
本发明的套盒可以用于给予不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型，用于以不同的剂量间隔给予不同的组合物，或者用于彼此独立的不同组合物的间隔给药。为了顺应性的需要，本发明的套盒通常包含给药说明书。
在本发明的组合疗法中，本发明化合物和其它治疗药物可以由相同或不同的生产商生产和/或配制。此外，本发明化合物和其它治疗药物在组合疗法中可以汇集到一起使用：(i)在将组合产品发放给医师之前汇集(例如，在套盒包含本发明化合物和其它治疗药物的情况下)；(ii)在即将给药之前由医师自己(或者在医师的监督下)汇集；(iii)由患者自己汇集，例如本发明化合物和其它治疗药物按顺序给药期间。
因此，本发明提供了式I、II、III、IV或V化合物用于治疗由FXE介导的疾病或病症的用途，其中所述药物被制备用于给药，或者与其它治疗药物一起给药。本发明还提供了式I、II、III、IV或V化合物，用于治疗由FXE介导的疾病或病症的方法中，其中式I、II、III、IV或V化合物被制备用于给药，或者与其它治疗药物一起给药。本发明还提供了其它治疗药物，用于治疗由FXE介导的疾病或病症的方法中，其中其它治疗药物被制备用于给药，或者与式I、II、III、IV或V化合物一起给药。
本发明还提供了式I、II、III、IV或V化合物用于治疗由FXE介导的疾病或病症的用途，其中所述患者先前(例如24小时内)已经采用其它治疗药物进行了治疗。或者，本发明也提供了其它治疗药物在治疗由FXR介导的疾病或病症中的用途，其中所述患者先前(例如24小时内)已经采用式I、II、III、IV或V化合物进行了治疗。
其它实施方案
本发明还包括本文中所述的其它实施方案。
实施方案1.式(I)化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，
其中：
R0为环A或C1-6烷基；其中
环A为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；它们每一个是未取代的或者被1－2个每个由R2独立代表的取代基取代；其中L3和R0可以与环A的相同和不同的环原子连接；C1-6烷基任选被1－2个C1-6烷基取代；
环B为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；它们每一个是未取代的或者被1－2个每个由R2独立代表的取代基取代；
X为(CR4R5)或C(O)；
Y为O、(CR4R5)、*O(CR4R5)或NR，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为CR3或N；
L1为*1-(CR4R5)1-2-或*1–(CR4R5)-C(O)-NR-，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2-(CR4R5)1-2-、*2-(CR4R5)-C(O)、*2-(CR4R5)-C(O)-NR、*2-(CR4R5)2-O-、*2-(CR4R5)2-NR-、*2-(CR4R5)2-SO2-、*2-(CR4R5)2-NR-C(O)-或*2-(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)；其中“*2”表示L2与N的连接点；
L3为–(CR4R5)-或–C(O)-；
每个R2独立为卤素、羟基、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
实施方案2.实施方案1的化合物或其盐、互变异构体或立体异构体，其中所述化合物由式(II)表示，
其中：
R0为环A或C1-6烷基；其中：
环A选自苯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基和C3-7环烷基，它们每一个是未取代的或者被1－3个每个由R2独立代表的取代基取代；其中L3和R0可以与环A的相同和不同的环原子连接；C1-6烷基任选被1－2个C1-6烷基取代；
环B选自苯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1H-吲哚基和C3-7环烷基，它们每一个是未取代的或者被1－2个每个由R2独立代表的取代基取代；
X为(CR4R5)；
Y为O、(CR4R5)或*O(CR4R5)，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为CR3或N；
L1为-(CR4R5)1-2-，
L2为*2-(CR4R5)1-2-、*2-(CR4R5)-C(O)-NR-、*2-(CR4R5)2-O-或*2-(CR4R5)2-NR-；其中“*2”表示L2与N的连接点；并且
每个R2独立为卤素、羟基、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
实施方案3.实施方案1或2的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中R0选自*3-CH2C(CH3)2-、*3-CH2CH(CH3)-和*3-环丙烷-1,1-二基-，其中“*3”表示R0与L2的连接点。
实施方案4.实施方案1或2的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中所述化合物由式(III)表示：
其中：
环A为苯基或吡啶基，它们每一个是未取代的或者被1－2个每个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和环戊基，它们每一个是未取代的或者被1－2个每个由R2独立代表的取代基取代；
L1为-(CR4R5)-；
L2选自*2-(CH2)-、*2-CH2C(O)NH-、*2-CH(CH3)C(O)NH-、*2-CH2C(O)NHCH2-、*2-(CH2)2O-和*2-(CH2)2NH-；其中“*2”表示L2与N的连接点；
X为CH2；
Y选自O、CH2、C(CH3)2和*O-CH2，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1为CR3或N；
Z2为CR3；
Z3为CR3；
Z4为CR3或N；和
每个R2独立选自卤素、甲基和三氟甲基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
每个R4和R5独立为氢或甲基。
实施方案5.实施方案1－4中任一项的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中Y为O。
实施方案6.实施方案1－5中任一项的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中L1为-CH2-。
实施方案7.实施方案1－6中任一项的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中L2选自*2-(CH2)-、*2-CH2C(O)NH-、*2-(CH2)2O-和*2-(CH2)2NH-；其中“*2”表示L2与N的连接点。
实施方案8.实施方案1－6中任一项的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中L2为*2-(CH2)-。
实施方案9.实施方案1－8中任一项的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中每个R2独立为氟或甲基。
实施方案10.实施方案1－9中任一项的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中每个R3独立选自氢、氟、氯和甲基。
实施方案11.实施方案1－9中任一项的化合物或其可药用的盐、互变异构体或立体异构体，其中：
Z1选自CH、CF、CCH3和N；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
Z4为CH或N。
实施方案12.药用组合物，其包含治疗有效量的实施方案1－11中任一项的化合物以及可药用的载体。
实施方案13.组合产品，其包含治疗有效量的实施方案1－11中任一项的化合物和第二种治疗药物，用于治疗胆汁郁积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积症、肠胃外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精性肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸的预防、静脉-闭塞症、门静脉高血压、代谢综合征、高胆固醇血症、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。
实施方案14.在患病个体中治疗由法尼醇X受体(FXR)介导的疾病的方法，该方法包括给予个体治疗有效量的实施方案1－11中任一项的化合物或其药用组合物，所述化合物可以任选与第二种治疗药物组合。
实施方案15.含有实施方案1－11中任一项的化合物的药用组合物，用于由FXR介导的疾病。
实施方案16.式(VI)化合物，
其中：
环A为苯基或吡啶基，它们每一个是未取代的或者被1－2个每个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和环戊基，它们每一个是未取代的或者被1－2个每个由R2独立代表的取代基取代；
L1为-(CR4R5)-；
L2选自*2-(CH2)-、*2-CH2C(O)NH-、*2-CH(CH3)C(O)NH-、*2-(CH2)2O-和*2-(CH2)2NH-；其中“*2”表示L2与N的连接点；
X为CH2；
Y选自O、CH2、C(CH3)2和*O-CH2，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1为CR3或N；
Z2为CR3；
Z3为CR3；
Z4为CR3或N；
每个R2独立选自卤素、甲基和三氟甲基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；
每个R4和R5独立为氢或甲基；并且
R6为C1-6烷基。
实施方案17.实施方案16的化合物，其中Y为O。
实施方案18.实施方案16的化合物，其中L1为-CH2-。
实施方案19.实施方案16的化合物，其中L2选自*2-(CH2)-、*2-CH2C(O)NH-、*2-(CH2)2O-和*2-(CH2)2NH-；其中“*2”表示L2与N的连接点；更具体地讲，其中L2为-CH2-。
实施方案20.实施方案16的化合物，其中每个R2独立为氟或甲基。
实施方案21.实施方案16的化合物，其中每个R3独立选自氢、氟、氯和甲基。
实施方案22.制备结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸的方法，该方法包括使得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸与2-氨基-2-羟基甲基-丙烷-1,3-二醇在溶剂中反应的步骤，所述溶剂例如甲醇:二氯甲烷溶剂(体积比1:1)。
实施方案23.根据实施方案22生产的结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；更具体地讲，其中所述结晶形式的熔点为约125℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案24.制备结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸的方法，该方法包括下列步骤：(i)使得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸在溶剂(例如甲醇)中与L-精氨酸水溶液反应；和(ii)任选将获自(i)的固体在溶剂中进一步结晶，所述溶剂例如乙腈:甲醇溶剂(体积比2:1)。
实施方案25.根据实施方案24生产的结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；更特别的是，其中所述结晶形式的熔点为约206℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案26.制备结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸的方法，该方法包括下列步骤：(i)使得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸在溶剂(例如甲醇与L-赖氨酸水溶液反应；和(ii)任选将获自(i)的固体在溶剂例如乙腈中进一步结晶。
实施方案27.根据实施方案26生产的结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸。
实施方案28.制备结晶形式的4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸的方法，该方法包括使得4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸与2-氨基-2-羟基甲基-丙烷-1,3-二醇在溶剂例如甲醇中反应的步骤。
实施方案29.根据实施方案28生产的结晶形式的4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；更特别的是，其中所述结晶形式的熔点为约160℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案30.制备结晶形式的4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸的方法，该方法包括下列步骤：(i)使得4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸在溶剂(例如甲醇)中与L-精氨酸水溶液反应；和(ii)任选将获自(i)的固体在溶剂例如乙腈中进一步结晶。
实施方案31.根据实施方案30生产的结晶形式的4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；更特别的是，其中所述结晶形式的熔点为约161℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案32.制备结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸的方法，该方法包括使得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸在溶剂(例如甲醇)中与L-精氨酸反应的步骤。
实施方案33.根据实施方案32生产的结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；更特别的是，其中所述结晶形式的熔点为约206℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案34.制备结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸的方法，该方法包括下列步骤：(i)使得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸在溶剂(例如甲醇)中与氢氧化钠反应；和(ii)任选将获自(i)的固体在溶剂例如乙腈中进一步结晶。
实施方案35.根据实施方案34生产的结晶形式的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；更特别的是，其中所述结晶形式的熔点为约161℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案36.制备结晶形式的4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸的方法，该方法包括使得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸与2-氨基-2-羟基甲基-丙烷-1,3-二醇在溶剂(例如甲醇)中反应的步骤。
实施方案37.根据实施方案36生产的结晶形式的4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；更特别的是，其中所述结晶形式的熔点为约195.6℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案38.制备结晶形式的4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸的方法，该方法包括下列步骤：(i)使得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸在溶剂(例如丙酮)中与葡甲胺水溶液反应；和(ii)任选将获自(i)的固体于60－90℃(例如约80℃)加热。
实施方案39.根据实施方案38生产的结晶形式的4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸，步骤(i)的脱水点为约71℃，通过差示扫描量热法测定；或者在步骤(ii)中进一步加热获得，熔点为约167.5℃，通过差示扫描量热法测定。
实施方案40.制备结晶形式的4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸的方法，该方法包括下列步骤：(i)使得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸和葡甲胺在溶剂(例如甲醇)中反应；和(ii)将反应物于60－90℃进一步加热。
实施方案41.根据实施方案40生产的结晶形式的4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；更特别的是，其中结晶形式的熔点为约180.6℃，通过差示扫描量热法测定。
制备本发明化合物的方法
本发明化合物可以通过下面流程中或实施例中描述的路线制备。除非另有说明或者上下文中有明显的矛盾，本文中描述的所有方法均可以以任何适合的顺序进行。
其中L1为甲基、L2为*2-CH2C(O)NH-、L3为C(O)并且R0为环A的式(I)化合物可以根据流程1制备：
其中L1为甲基、L2为*2-CH2C(O)NH-、L3为C(O)并且R0为环A的式(I)化合物可以根据流程2制备：
其中L1为甲基、L2为*2-(CH2)2NH-、L3为C(O)并且R0为环A的式(I)化合物可以根据流程3制备：
其中L1为甲基、L2为*2-(CH2)2O-、L3为C(O)并且R0为环A的式(I)化合物可以根据流4程制备：
其中L1为甲基、L2为*2-CH2C(O)NH-、L3为C(O)并且R0为C1-6烷基的式(I)化合物可以根据流程5制备：
其中L1为甲基、L2为*2-(CH2)-C(O)NH(CH2)、L3为C(O)并且R0为环A的式(I)化合物可以根据流程6制备：
在每个上述流程1－6中，X、Y、Z1、Z2、Z3、Z4、A和B如上述实施方案任一项中所定义。通常，在使用或不使用适当的酰胺偶合试剂例如HATU的情况下，三环核(VI)与酰胺侧链(VIIa、VIIb、VIIc、VIId或VIIe)偶合；随后水解，获得式(I)化合物。
在每个上述流程1－5中，三环核(VI)可以根据流程7制备，其中X、Y、Z1、Z2、Z3和Z4如上述实施方案任一项中所定义。典型的条件如下文2-(6-氯代-4-氧代苯并二氢吡喃-3-基)-2-氧代乙酸乙酯(I-1)、8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸乙酯(I-3)和8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)的合成中所例示。
在上述流程中，酰胺侧链(VIIa)可以根据流程8制备，其中A和B如上述实施方案任一项中所定义。典型的条件如下文4-氟-3-(2-((3-氟苄基)氨基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(I-16)的合成中例示。
在上述流程2中，酰胺侧链(VIIb)可以根据流程9制备，其中A和B如上述实施方案任一项中所定义。典型的条件如下文4-((苄基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(I-23)的合成中例示。
在上述流程3中，酰胺侧链(VIIc)可以根据流程10制备，其中A和B如上述实施方案任一项中所定义。典型的条件如下文3-((2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-44)、3-((2-氨基乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-45)和4-氟-3-((2-((3-氟苄基)氨基)乙基)氨基)苯甲酸甲酯(I-46)的合成中例示。
在上述流程4中，酰胺侧链(VIId)可以根据流程11制备，其中B如上述实施方案任一项中所定义。典型的条件如下文2-((2-氟苄基)氨基)乙醇(I-72)的合成中例示。
每个反应步骤可以根据本领域技术人员已知的方法进行。例如，反应可以在适当的溶剂或稀释剂或其混合物中进行。如果需要，反应也可以在酸或碱的存在下进行，可以在冷却或加热下进行，例如温度范围约-30℃至约150℃。在具体的示例中，反应的温度范围为约0℃－100℃，更特别的是，温度范围为室温至约80℃，反应可以在开放或密封的反应容器中和/或在惰性气体(例如氮气)环境中进行。
本发明还涉及下列类型的方法：其中在该方法的任意阶段作为中间体获得的化合物可以用作原料并进行其余的工艺步骤，或者其中原料可以在反应条件下形成，或者可以以衍生物的形式使用，例如以被保护的形式或为盐的形式，或者根据本发明的方法获得的化合物可以在工艺条件下生产并进一步在位处理。本发明化合物和中间体也可以根据本领域技术人员众所周知的方法彼此转化。中间体和终产物可以根据标准方法处理和/或纯化，例如采用色谱方法、分配方法、(重)结晶方法等。
在所述反应中，如果需要反应性官能团(例如羟基、氨基、亚氨基、巯基或羧基)存在于终产物中，则其可以被保护以避免其不需要地参与反应。保护基团特性在于它们可以容易地除去(即不会发生不需要的次级反应)，例如通过溶剂分解、还原、光解或生理条件下(例如通过酶的裂解)除去。常规的保护基团可以根据标准实践使用(参见例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“有机化学中的保护基团(ProtectiveGroupsinOrganicChemistry),”第4版,Wiley-Interscience,2006及其后续版本)。
本文上下文中所述的所有上述工艺步骤可以在本领域技术人员公知的反应条件下进行，包括那些下面具体描述的条件：在无或通常有溶剂或稀释剂存在下，包括例如对使用的并且溶解它们的试剂是惰性的溶剂或稀释剂；在有或无催化剂、缩合剂或中和剂存在下，例如离子交换剂，如H+形式的交换剂，这取决于反应和/或待还原的反应物的性质；低温、常温或高温，例如温度范围约-100℃至约190℃，包括例如约-80℃至约150℃，如-80℃至-60℃、于室温下、-20至40℃或于回流温度下；在大气压下或密闭容器中，处于适当的压力下；和/或在惰性环境中，例如在氩气或氮气环境中。
在反应的所有阶段，形成的异构体混合物均可以分离为单一异构体，例如非对映异构体或对映异构体，或者分离为任何需要的异构体混合物，例如外消旋物或非对映异构体的混合物。本发明获得的异构体混合物可以根据本领域技术人员已知的方法分离为单一异构体；非对映异构体可以通过例如如下方法分离：在多相溶剂混合物之间的分配方法、重结晶方法和/或色谱分离方法(例如硅胶色谱)，或者通过例如在反相柱上的中压液相色谱方法；外消旋体可以通过例如下列方法分离：采用光学纯的盐形成试剂形成盐并分离由此获得的非对映异构体混合物，例如通过分步结晶的方法，或通过采用光学活性柱填料的色谱方法。
除非工艺方法的描述中另有说明，可以自那些适合于任何特定反应的溶剂中选择的溶剂包括那些特别指明的溶剂，或者例如水；酯类，例如低级烷基-低级烷酸酯，如乙酸乙酯；醚类，例如脂肪族醚类，如乙醚；或环醚类，例如四氢呋喃或二氧六环；液体芳族烃类，例如苯或甲苯；醇类，例如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈类，例如乙腈；卤代烃类，例如二氯甲烷或氯仿；酰胺类，例如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺；碱类，例如杂环或杂芳族氮碱类，例如吡啶或N-甲基吡咯烷-2-酮；羧酸酐类，例如低级烷酸酐类，如乙酸酐；环状、直链或支链烃类，例如环己烷、己烷或异戊烷、甲基环己烷；或这些溶剂的混合物，例如水溶液。所述溶剂混合物也可以用于处理步骤中，例如色谱或分配步骤。
本发明化合物可以以游离形式获得，作为其盐或作为其前药衍生物获得。当碱性基团和酸性基团存在于同一分子中时，本发明化合物也可以形成内盐，例如两性离子分子。在许多情况下，由于存在氨基和/或羧基或类似的基团，本发明化合物能够形成酸盐和/或碱盐。本文中使用的术语“盐”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指能够保留本发明化合物的生物学效力和特性的盐，其通常不为生物学或其它方面所不欢迎的。
具有至少一个盐形成基团的本发明化合物的盐可以根据本领域技术人员已知的方法制备。例如，具有酸性基团的本发明化合物的盐可以通过例如采用下列物质处理化合物而形成：金属化合物，例如适当的有机羧酸的碱金属盐，如2-乙基己酸的钠盐；有机碱金属或碱土金属化合物，例如其相应的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，如氢氧化钠或钾、碳酸钠或钾或碳酸氢钠或钾；相应的钙化合物或者氨或适当的有机胺，优选采用化学计量的或稍微过量的盐形成试剂。本发明化合物的酸加成盐可以以常规方法获得，例如通过用酸或适当的阴离子交换剂处理化合物。含有酸性和碱性盐形成基团(例如游离羧基和游离氨基基团)的本发明化合物的内盐可以通过如下方法形成：例如，采用例如弱碱将盐(例如酸加成盐)中和至等电点，或者采用离子交换剂处理。盐可以根据本领域技术人员已知的方法转化为游离化合物。金属和铵盐可以例如通过采用适当的酸处理而转化，酸加成盐可以通过例如采用适当的碱性试剂处理。
药学上可接受的酸加成盐可以用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙烷二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘化盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐(napsylate)、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
可以形成盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以形成盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
药学上可接受的碱加成盐可以采用无机和有机碱形成。
可以形成盐的无机碱包括例如铵盐和元素周期表中第I–XII族的金属。在某些实施方案中，所述盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌、铜等，特别适宜的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。
可以形成盐的有机碱包括例如伯、仲和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代胺)、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星青霉素、胆酸盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、甲葡胺、哌嗪和氨丁三醇。
其它可药用的盐可以衍生自L-精氨酸、TRIS(2-氨基-2-羟基甲基-1,3-丙二醇)、脂肪酸(己二酸盐)、L-抗坏血酸(抗坏血酸盐)、羊蜡酸(癸酸盐)、癸二酸(癸二酸盐)、1-羟基-2-萘酸(昔萘酸)、L-谷氨酸(谷氨酸盐)、戊二酸(戊二酸盐)、三苯基乙酸(三苯基乙酸盐)和粘酸/粘液酸(粘酸盐)。
本发明的可药用的盐可以通过常规化学方法合成自母体化合物，碱性或酸性基团。通常，此类盐可以通过使得这些化合物的游离酸形式与化学计量的适当的碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应来制备，或者通过使得这些化合物的游离碱形式与化学计算量的适当的酸反应进行制备。此类反应通常在水或有机溶剂中或在这两者的混合物中进行。一般而言，如果可行的话，可以采用非水性介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。其它适合的盐的名单可以参考例如“Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明顿药物科学)”,第21版,PharmaceuticalPress2011；和“PharmaceuticalSalts:Properties,SelectionandUse(药用盐：性质、选择和使用)”,StahlandWermuth(2ndRev.Ed.,Wiley-VCH2011及其后续版本)。
本发明还提供了能够在体内转化为本发明化合物的本发明化合物前药。前药是有活性或无活性的化合物，在前药施用于个体后，它可以通过体内生理学作用(例如水解、代谢等)的化学修饰而转化为本发明化合物。与前药的制备和使用相关的适用性和技术在本领域中是公知的。前药在概念上可以分为两种非排他性的类别，生物前体前药和载体前药。(参见，ThePracticeofMedicinalChemistry(医用化学实践),Ch.第31－32版.Wermuth,AcademicPress,SanDiego,Calif.,2001及其后续版本)。通常，生物前体前药是与相应的活性药物化合物相比没有活性或活性较低的化合物，它含有一或多个保护基团并且可以通过代谢或溶剂分解而转化为活性形式。两种活性药物形式和任何释放的代谢产物均具有可接受的低毒性。
载体前药是含有传递部分的药物化合物，其例如可改善摄取和/或定位传递至作用位点。对于此类载体前药而言，药物部分和传递部分的最佳的连接方式为共价键，前药与药物化合物相比是无活性的或活性很低，任何释放的传递部分均为可接受的无毒的。对于其中传递部分意欲增强摄取的前药而言，传递部分的释放通常是迅速的。在其它情况下，采用能够提供缓释作用的部分是合乎需要的，例如某些聚合物或其它部分(例如环糊精)。载体前药可以例如用于改善一或多个下列特性：增加亲脂性、增加药理学作用的持续时间、提高位点-特异性、降低毒性和副作用和/或改善药物配方(例如稳定性、水溶性、抑制不受欢迎的感官特性或理化特性)。例如，通过(a)羟基与脂肪酸(例如具有至少一个亲脂性部分的羧酸)的酯化或(b)羧酸与脂肪醇(例如具有至少一个亲脂性部分的醇，如脂肪醇)的酯化可以提高亲脂性。
前药的示例为例如游离羧酸的酯、硫醇的S-酰基衍生物以及醇或酚的O-酰基衍生物，其中酰基如本文中所定义。适当的前药通常为可药用的酯衍生物，其可以在生理学条件下通过溶剂分解转化为母体羧酸，例如，烷基酯、环烷基酯、链烯基酯、苄基酯、单-或二-取代的烷基酯，例如(ω-(氨基、单-或二-烷基氨基、羧基、烷氧基羰基)烷基酯)、α-(烷酰基氧基、烷氧基羰基或二-烷基氨基羰基)烷基酯，如本领域中常用的新戊酰基甲酯等。此外，胺可以掩蔽为芳基羰基氧基甲基取代的衍生物，其可以在体内通过酯酶裂解释放出游离药物和甲醛(Bundgaard,J.Med.Chem.2503(1989)及其后续版本)。另外，含有酸性NH基团的药物(例如咪唑、酰亚胺、吲哚等)常用N-酰氧基甲基基团掩蔽(Bundgaard,DesignofProdrugs(前药的设计),Elsevier(1985)及其后续版本)。羟基可以掩蔽为酯和醚。EP039,051(Sloan和Little)公开了Mannich-类异羟肟酸前药、其制备和用途。
此外，本发明化合物(包括其盐)还可以以水合物的形式获得，或者它们的结晶可以例如包含用于结晶的溶剂。可以存在不同的结晶形式。本发明化合物在本性上可以或者通过设计可以与可药用的溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本发明应当包括溶剂化的和未溶剂化的两种形式。术语“溶剂化物”是指本发明化合物(包括其可药用的盐)与一或多个溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是制药领域中常规使用的那些，已知其对于受体而言是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子为水的复合物。因此，本发明化合物(包括其盐、水合物和溶剂化物)在本性上可以或者通过设计可以形成多晶型物。
通过采用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)在适当的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、二氧六环水溶液等)于0－80℃处理，可以自本发明化合物的N-氧化物制备未氧化形式的本发明化合物。
实施例
本文中提供的实施例用于说明而非限定本发明化合物以及此类化合物和中间体的制备。应当理解，如果具体化合物的命名和结构之间存在差异时，由于化合物名称源自该结构，所以该结构应当被认为是正确的。所有的变量如本文所定义。
用于合成本发明化合物的所有的原料、构建模块、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂均可以获自商业，或者可以通过本领域技术人员已知的有机合成方法制备(Houben-WeylScienceofSynthesis第1－48卷,GeorgThiemeVerlag及其后续版本)。此外，本发明化合物可以如下面实施例所示通过本领域技术人员已知的有机合成方法制备。
给出的温度均为摄氏度。如果没有另外说明，所有的蒸发均在减压下进行，通常在约15mmHg至100mmHg(20－133mbar)的压力下。终产物、中间体和原料的结构通过标准分析方法确证，例如微量分析和光谱特征分析，例如MS、IR、NMR。使用的缩写为本领域中的常规缩写。
除非另有说明，熔点可以通过差示扫描量热法(DSC)采用TAQ2000或TADiscovery差示扫描量热仪以10℃/min的扫描速度测定。被检测样品温度的准确度通常在约±1℃。
NMR和LC-MS方法在本领域中是众所周知的。本文中描述的方法仅用于说明而非限定。
NMR：NMR光谱记录于以质子频率为400.13MHz操作的BrukerAVANCE-400上，其配备5mmQNP冷冻探针(1H/13C/19F/31P)；或记录于以质子频率为600.13MHz操作的BrukerAVANCE-600光谱仪上，其配备5mmZ-梯度TCI冷冻探针或5-mmTXI冷冻探针。除非另有说明，样品于300°K获得，光谱以适当的溶剂峰作参比。
LC-MS方法：质谱在LC-MS系统上采用电喷雾、化学和电子轰击离子化方法在多种仪器上获取。典型的方法如下文所述。
方法1：
WatersAcquity二元梯度泵；WatersAcquityPDA检测器。Waters自动进样器；WatersQuattromicroAPI质谱仪，配备ESI和APCI离子源；UPLC柱：WatersAcquity；BEH；C181.7um50×2.1mm；流动相：(A)H2O+0.025％TFA和(B)乙腈+0.025％TFA。梯度洗脱：0.4mL/min，最初3.0mins由15％B逐渐升高至95％B，然后保持至4.0mins，4.1mins时回返至15％B直到运行结束，然后将柱平衡2.0mins。MS扫描：每个通道在0.5秒内100－1000amu；二极管阵列检测器：200nm和400nm。
方法2：
WatersAcquity二元梯度泵；WatersAcquityPDA检测器。Waters自动进样器；WatersQuattromicroAPI质谱仪，配备ESI和APCI离子源；UPLC柱：WatersAcquity；BEH；C181.7um50×2.1mm；流动相：(A)H2O+0.025％TFA和(B)乙腈+0.025％TFA。梯度洗脱：0.4mL/min，最初2.0mins由20％B逐渐升高至90％B，然后保持至4.0mins，4.1mins时回返至20％B直到运行结束，然后将柱平衡2.0mins。MS扫描：每个通道在0.5秒内100－1000amu；二极管阵列检测器：200nm和400nm。
方法3：
Agilent1200sl/6140系统；UPLC柱：WatersAcquity；HSST3；C181.8um50×2.0mm；流动相：(A)H2O+0.05％TFA和(B)乙腈+0.035％TFA。梯度洗脱：0.9mL/min，最初1.95mins由10％B逐渐升高至100％B，然后在2.00mins内返回至10％B直到运行结束。MS扫描：每个通道在0.5秒内100－1000amu；二极管阵列检测器：190nm和400nm；漂移管温度：50℃；N2气流速：40Psi，ELSD检测器。
方法4：
Agilent1100sl/1946系统；UPLC柱：WatersAtlantis；C181.8um50×2.0mm；流动相：(A)H2O+0.05％TFA和(B)乙腈+0.035％TFA。梯度洗脱：1.0mL/min，最初3.00mins由10％B逐渐升高至90％B，然后在3.5mins时返回至10％B直到运行结束。MS扫描：每个通道在0.5秒内100－1000amu；二极管阵列检测器：190nm和400nm；漂移管温度：50℃；N2气流速：40Psi，ELSD检测器。
分析方法：WatersZQSHIMADZULEAPCTC，ZORBAXSB-C830*4.6mm,3.5um，UV1：220nm，UV2：254nm,；A:H2O(0.03％TFA)，B:CH3CN(0.05％TFA)；流速：2.000(ml/min)；时间/％B:0/5,1.90/95,2.30/95,2.31/5,2.50/5。
缩写
Boc叔丁基羧基
br宽峰
d双峰
dd双双峰
DIAD偶氮二甲酸二异丙基酯
DIEA二乙基异丙基胺
DMFN,N-二甲基甲酰胺
DMSO二甲基亚砜
ESI电喷雾离子化
EtOAc乙酸乙酯
HATU2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)--1,1,3,3-四甲基鎓六氟磷酸盐
hr(s)小时
HPLC高效液相色谱
LCMS液相色谱和质谱
MeOH甲醇
MS质谱
m多重峰
mg毫克
min(s)分钟
ml毫升
mmol毫摩尔
m/z质荷比
NaHDMS二(三甲基甲硅烷基)氨化钠
NMMN-甲基吗啉
NMR核磁共振
PPh3三苯膦
r.t.保留时间
s单峰
t三重峰
TFA三氟乙酸
THF四氢呋喃
TRIS(2-氨基-2-羟基甲基-1,3-丙烷二醇)
Tris·HCl氨基三(羟基甲基)甲烷盐酸盐
中间体
2-(6-氯代-4-氧代苯并二氢吡喃-3-基)-2-氧代乙酸乙酯(I-1)
于–78℃、氮气环境中，将6-氯代-2,3-二氢苯并吡喃-4-酮(109mmol)的THF溶液采用NaHMDS(60mL,120mmol,1.1eq.,2M的THF溶液)的THF溶液处理。搅拌30min后，于–78℃滴加草酸二乙酯(22mL,163mmol,1.5eq.)，然后于室温下搅拌1hr。随后将反应物用1NHCl骤冷直到pH值调节至3。将获得的混合物用EtOAc萃取(200mL×3)。合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥。真空蒸发溶剂，获得I-1，为黄色固体。MS(m/z):283(M+H)+。
8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸乙基酯(I-3)
向温热的I-1(109mmol)的乙醇溶液中加入1-甲基肼(109mmol)，将溶液于室温下搅拌12hrs。真空蒸发溶剂后，残留物通过柱色谱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝95:5)，获得I-2和需要的产物I-3，为黄色固体。1H-NMR:(300MHz,CDCl3):δ7.69(d,J＝2.7Hz,1H),7.13(dd,J＝2.4Hz,J＝8.7Hz,1H),6.86(d,J＝8.7Hz,1H),5.43(s,2H),4.38(q,J＝7.2Hz,2H),4.22(s,3H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(m/z):293(M+H)+。
8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)
向I-3(44mmol)的100mL的THF/水(4:1)溶液中加入NaOH(89mmol,2eq.)，将混合物于60℃加热8hrs。随后过滤获得白色固体，用甲醇洗涤，将固体用100mL的1NHCl处理。过滤收集获得的固体，用甲醇充分洗涤，真空干燥，获得I-4，为白色固体。1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ13.05(brs,1H),7.72(d,J＝2.7Hz,1H),7.34(dd,J＝2.7Hz,J＝8.7Hz,1H),7.06(d,J＝8.7Hz,1H),5.41(s,2H),4.19(s,3H)。MS(m/z):265(M+H)+。
下列中间体根据I-4的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
4-氟-3-(2-((3-氟苄基)氨基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(I-16)
于0℃将溴代乙酰基溴(1.1mL,12.5mmol滴加至3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯(10.9mmol)和二异丙基乙基胺(2.8mL,16.4mmol)的二氯甲烷溶液中。于0℃搅拌30mins后，将反应混合物用二氯甲烷和水稀释。分层，水层用二氯甲烷洗涤(2×)。合并的有机层经硫酸镁干燥并浓缩(抽吸)，获得深棕色液体。LCMS显示酰胺为主要成分，苯胺为次要成分。将混合物溶于DMF(30mL)，加入碳酸钾(12.3mmol)。向混合物中加入3-氟苄基胺(10.9mmol)，将反应物于室温下搅拌16hrs。将反应物用水稀释(300mL)，水溶液用乙酸乙酯萃取(3×)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥。将混合物过滤并浓缩，粗品残留物经快速层析纯化(硅胶，0－60％的乙酸乙酯/己烷)，获得I-16。1HNMR(400MHz,d4-MeOH):δ8.80(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),7.89-7.85(m,1H),7.56-7.51(m,1H),7.38-7.29(m,3H),7.25(appdt,J＝8.3,6.0Hz,1H),4.35(s,2H),4.09(s,2H),3.91(s,3H)。
下列中间体根据I-6的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-22)
步骤1
于0℃向8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(1.9mmol)的CH2CL2(10mL)悬浮液中加入催化量的DMF(25uL)并滴加草酰氯(0.78mL,8.9mmol)。将获得的悬浮液温热至室温并搅拌1hr。真空除去溶剂至完全干燥(需要完全除去草酰氯)。将获得的残留物溶于CH2CL2(10mL)，然后滴加至存在DIEA(0.56mL,3.8mmol)的2-((3-氟苄基)氨基)乙酸甲酯(1.9mmol)的CH2CL2(10mL)溶液中。将反应混合物于室温下搅拌30min，然后加入50mL水。分离有机层，水层用CH2CL2(50mL)萃取。合并的有机层用H2O和盐水顺序洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，将其通过柱色谱纯化(0－60％的EtOAc己烷)，得到2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸甲酯(I-21)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.47–7.43(m,2H),7.34–7.29(m,1H),7.23–7.19(m,1H),7.18–7.04(m,2H),6.97(dd,J＝2.3,8.7Hz,1H),5.57–4.12(m,9H),3.77–3.74(m,3H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):444.1(M+H)+。
步骤2
将2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸甲酯(I-21)(1.62mmol)溶于THF/MeOH/H2O(3:2:1,10mL)，随后加入LiOH单水合物(0.408g,9.72mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1hr，用10ml水稀释，酸化至pH＝2.0。收集固体，干燥，得到2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-22)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.73(s,1H),7.71(t,J＝2.6Hz,1H),7.42–7.30(m,3H),7.24–7.15(m,2H),7.07–7.02(m,1H),5.41–4.10(m,9H)。旋转异构体混合物。MS(m/z)430.0(M+H)+。
4-((苄基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(I-23)
将苄基胺(8.65mL,79mmol)(Aldrich)和4-甲酰基苯甲酸甲酯(79mmol)(Aldrich)溶于甲醇(体积：350mL)，将混合物于室温下搅拌2hr，获得白色沉淀物。将反应混合物冷却至0℃，15分钟内分次加入硼氢化钠(158mmol)(Aldrich)。于0℃搅拌1hr后，将混合物温热至室温。再搅拌1hr后，将混合物在冰浴中冷却，反应物用水(15mL,833mmol)缓慢骤冷。将获得的混合物搅拌15min。除去溶剂(抽吸)后，将混合物溶于EtOAc，用水洗涤。水层用EtOAc萃取，将合并的有机层干燥(MgSO4)。粗品产物通过色谱纯化(硅胶，无水上样，DCM冲洗，0－40％DCM/(10％的MeOHDCM溶液))，获得I-23。1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.17(bs,2H),7.95-7.96(m,2H),7.56–7.54(m,2H),7.44–7.34(m,5H),4.19(s,1H),4.12(s,1H),3.78(s,3H)。
下列中间体根据I-23的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
3-((2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-44)
将3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯(8.4mmol)和(2-氧代乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(12.6mmol)溶于MeOH(100mL)和AcOH(10mL)。于室温下搅拌1hr后，将反应混合物采用NaCNBH3(16.6mmol)处理并搅拌2hrs。除去溶剂(抽吸器)后，将混合物溶于EtOAc，用NaHCO3(sat.,1×)洗涤。水层用EtOAc萃取(1×)，将合并的有机层干燥(MgSO4)。产物(I-44)作为粗品直接用于下一步骤。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.40-7.38(m,2H),7.02(dd,J＝8.8Hz,11.1,1H),4.88(s,1H),3.91(s,3H),3.40-3.38(m,4H),1.47(s,9H)。MS(m/z):313.1(M+H)+。
3-((2-氨基乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-45)
将3-((2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(1.57g)溶于二氯甲烷(10mL)，采用TFA(10mL)处理。将反应物于室温下搅拌1hr。将溶剂与二氯甲烷共沸除去，奶油色固体(I-45)可以直接用于下一步骤。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.78(s,3H),7.24(m,3H),5.93(s,1H),3.83(s,3H),3.50–3.22(m,5H),3.04(s,2H)。MS(m/z):213.1(M+H)+。
4-氟-3-((2-((3-氟苄基)氨基)乙基)氨基)苯甲酸甲酯(I-46)
将3-((2-氨基乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(5.0mmol)、碳酸氢钠(5.0mmol)和甲醇(30mL)的混合物于室温下搅拌30mins。加入3-氟-苯甲醛(5.0mmol)，于室温下搅拌2hrs。分次加入硼氢化钠(7.4mmol)。将反应物于室温下搅拌30mins。LCMS显示反应完成。除去溶剂，残留物用乙酸乙酯(50mL)稀释。有机溶液用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(硅胶，5－40％乙酸乙酯/己烷)，获得(I-46)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.33(td,J＝6.3,8.1Hz,1H),7.25(dd,J＝1.9,8.6Hz,1H),7.23–7.10(m,4H),7.08–6.98(m,1H),5.67(s,1H),3.82(s,3H),3.74(s,2H),3.20(q,J＝6.2Hz,2H),2.72(t,J＝6.3Hz,2H)。MS(m/z):321.1(M+H)+。
下列中间体根据I-46的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
4-(2-氨基乙氧基)-3-氟苯甲酸甲酯(I-51)
向3-氟-4-羟基苯甲酸甲酯(17mmol)、碳酸铯(25mmol)和DMF(30mL)的混合物中加入(2-溴乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(20mmol)。将获得的悬浮液于60℃搅拌4hrs。将反应物用水稀释(100mL)，真空过滤收集获得的沉淀物。滤饼用水洗涤，真空干燥，获得纯的I-50。将I-50(17mmol)溶于二氯甲烷(12mL)，采用TFA(5mL)处理。将反应物于室温下搅拌30mins。LCMS显示反应完成。将反应物浓缩至干。将粗品产物溶于二氯甲烷，与固体碳酸氢钠一起搅拌8hrs以除去任何残留的TFA。过滤混合物，干燥滤液，获得I-51，为无色油状物。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.79(d,J＝9.4Hz,1H),7.73(dd,J＝1.6,11.8Hz,1H),7.33(t,J＝8.6Hz,1H),4.22(t,J＝5.4Hz,2H),3.84(s,3H),3.12(t,J＝5.4Hz,2H)。
4-(2-(苄基氨基)乙氧基)-3-氟苯甲酸甲酯(I-52)
将4-(2-氨基乙氧基)-3-氟苯甲酸甲酯(I-51)(1.4mmol)和碳酸氢钠(1.4mmol)的甲醇(5mL)混合物于室温下搅拌30mins。加入乙酸(1.0mL)和乙醛，将反应物于室温下搅拌2hrs。分三次加入NaCNBH3(2.1mmol)。将反应物于室温下再搅拌15mins。LCMS显示反应完成。将反应物用水稀释，用乙酸乙酯除去。合并有机萃取物，用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩，获得I-52。无需进一步纯化。MS(m/z):304.1(M+H)+.
下列中间体根据I-52的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
4-(2-((叔-丁氧基羰基)(2-氟苄基)氨基)乙氧基)-3-氟苯甲酸甲酯(I-55)
于室温下，将二碳酸二-叔-丁基酯(3.0mmol)加入2-((2-氟苄基)氨基)乙醇(3.0mmol)的二氯甲烷(25mL)和NaOH(1M的H2O溶液,9.6mL,9.6mmol)溶液中。将反应混合物搅拌16hrs，然后用H2O(50mL)和二氯甲烷(25mL)稀释。分离各层后，水层用二氯甲烷洗涤(2×,50mL)，合并的有机萃取物用H2O(1×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩(抽吸器)。粗品产物通过色谱纯化(硅胶，0－60％EtOAc/己烷)，获得I-54，为油状物。于0℃将偶氮二甲酸二异丙基酯(0.41mL,2.1mmol)滴加至I-54(1.0mmol)、3-氟-4-羟基苯甲酸甲酯(2.0mmol)和PPh3(2.0mmol)的THF(15mL)混合物中。搅拌10mins后，将反应混合物自身慢慢温热至室温，再搅拌4hrs。反应混合物用Et2O(50mL)和H2O(50mL)稀释，分层。水层用Et2O(2×,50mL)洗涤，将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，然后浓缩(抽吸器)。粗品产物通过色谱纯化(硅胶，0－25％EtOAc/己烷)，获得I-55和3-氟-4-羟基苯甲酸甲酯的不可分离的混合物。将混合物浓缩，用EtOAc(100mL)稀释，然后用NaOH(×2,1M,25mL)洗涤，自混合物中除去3-氟-4-羟基苯甲酸甲酯。将有机相干燥(MgSO4)并浓缩(抽吸器)，获得I-55。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.69–7.55(m,2H),7.23–7.06(m,2H),7.00–6.86(m,2H),6.86–6.71(m,1H),4.56–4.45(m,2H),4.14–3.99(m,2H),3.75(s,3H),3.59–3.44(m,2H),1.40–1.25(m,9H)。
3-氟-4-(2-((2-氟苄基)氨基)乙氧基)苯甲酸甲酯(I-56)
于室温下，将三氟乙酸(2mL)加入I-55(0.9mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液中。搅拌1hr后，浓缩反应混合物(抽吸器)，用MeOH稀释，通过使混合物通过SPE-碳酸盐聚合物键合的短柱中和(6个短柱,每个100mg单位)。除去溶剂(抽吸器)，获得I-56。MS(m/z):322.1(M+H)+；r.t.＝0.981。
3-(2-氨基乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-58)
将HATU(8.2mmol)加入N-Boc甘氨酸(6.8mmol)、3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯(6.2mmol)、二异丙基乙基胺(3.6mL,20.5mmol)和DMF(15mL)的混合物中。将反应物于室温下搅拌1hr。LCMS显示反应完成。将反应物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经硫酸镁干燥并浓缩。无需进一步纯化。将粗品酰胺(I-57)(9.2mmol)溶于二氯甲烷(15mL)，采用三氟乙酸(8mL)处理。将反应物于室温下搅拌1hr。LCMS显示反应完成。将反应物浓缩至干，粗品产物通过制备性HPLC纯化，获得I-58。1HNMRNMR(400MHz,d4-MeOH)δ8.71(brd,J＝8.0Hz,1H),7.79-7.75(m,1H),7.21(dd,J＝10.3,8.2Hz,1H),3.87(s,2H),3.82(s,3H)。MS(m/z):227.1(M+H)+。
4-氟-3-(2-((3-甲基苄基)氨基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(I-59)
将3-(2-氨基乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-58)(1.5mmol)和碳酸氢钠(1.5mmol)的甲醇(5mL)混合物于室温下搅拌30mins。加入乙酸(1.0mL)和3-甲基苯甲醛，将反应物于室温下搅拌2hrs。分三次加入NaCNBH3(2.2mmol)。将反应物于室温下再搅拌15mins。LCMS显示反应完成。将反应物浓缩，通过制备性HPLC纯化，获得I-59。MS(m/z):331.1(M+H)+；r.t.＝1.51。
下列中间体根据I-59的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
(S)-3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲基酯(I-60)
于0℃将氯代甲酸异-丁基酯(5.3mmol)加入N-(叔-丁氧基羰基)-L-丙氨酸(5.0mmol)和N-甲基吗啉(5.3mmol)的THF(25mL)溶液中。搅拌30min后，加入固体3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯(5.3mmol)，将获得的混合物于室温下搅拌16hrs。除去溶剂(抽吸器)后，将残留物溶于EtOAc(50mL)，用NaHCO3(sat.,50mL)、HCl(0.1M的H2O溶液,50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机部分干燥(MgSO4)并浓缩(抽吸器)。粗品产物通过色谱纯化(硅胶，0－40％EtOAc/己烷)，获得I-60。1HNMR(600MHz,CDCl3):δ8.96(dd,J＝2.0,7.6Hz,1H),8.67(brs,1H),7.83–7.75(m,1H),7.17–7.11(m,1H),4.94(brs,1H),4.36(brs,1H),3.90(s,3H),1.50–1.43(m,12H)。
(S)-4-氟-3-(2-((2-氟苄基)氨基)丙酰胺基)苯甲酸甲基酯(I-62)
于室温下，将三氟乙酸(1.0mL)加入I-60(0.9mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中。搅拌30mins后，除去溶剂(抽吸器)，将残留物溶于二氯甲烷(25mL)，用NaHCO3(sat.,25mL)洗涤。水层用二氯甲烷(2×,25mL)洗涤，将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并浓缩(抽吸器)，获得190mg的I-61，为油状物。将2-氟苯甲醛(94mg,0.8mmol)加入I-61(0.8mmol)的MeOH(9mL)和AcOH(1mL)溶液中。于室温下搅拌1hr后，将反应混合物用NaBH4(1.6mmol)处理并搅拌30mins。除去溶剂(抽吸器)后，将混合物溶于EtOAc(25mL)，用NaHCO3(sat.,25mL)洗涤。水层用EtOAc(2×,25mL)萃取，将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并浓缩(抽吸器)。产物通过色谱纯化(硅胶,0－60％EtOAc/己烷)，获得I-62。MS(m/z):349.2(M+H)+；r.t.＝1.097。
1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酸(I-64)
中间体I-64根据中间体I-4制备中所述方法制备，采用3,4-二氢苯并[b]氧杂-5(2H)-酮(I-63,得自商业的)作为起始原料。1HNMR(400MHz,DMSO):1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.77(s,1H),7.80(d,J＝2.6Hz,1H),7.44(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H),7.22(d,J＝8.7Hz,1H),4.33(t,J＝6.3Hz,2H),4.05(s,3H),3.12(t,J＝6.3Hz,2H)。MS(m/z):279.0/281.0(M+H)+(氯同位素模式)；r.t.＝1.302。
2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-66)
步骤1
向20mL反应容器中按下列顺序加入试剂：甘氨酸(10mmol)、AcOH(2mL)、MeOH(12mL)、水(2mL)。将其搅拌直到完全溶解。随后加入2-氟苯甲醛(5.0mmol)。20mins后，加入氰基硼氢化钠(3.0mmol)。将反应物搅拌10mins，此时加入另一份氰基硼氢化钠(3.0mmol)。将反应物搅拌10mins，过滤，然后通乙酸改性(0.05％)的反相色谱纯化(10－50％，水-ACN)，随后通过MeOH/水1:5(2mL)重结晶，获得2-((2-氟苄基)氨基)乙酸(I-65)，为白色粉末。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.61(t,J＝8.1Hz,1H),7.54(appq,J＝7.8Hz,1H),7.36-7.28(m,2H),4.24(s,2H),3.92(s,2H)。MS(m/z):184.1(M+H)+。
步骤2
向100mL反应容器中按下列顺序加入试剂：8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(1.5mmol)、THF(15mL)和N-甲基吗啉(NMM)(1mL,6.9mmol)。将其搅拌直到完全溶解。随后加入2-氯代-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(1.6mmol)，将该溶液于50℃搅拌40mins直到白色沉淀充分形成。将沉淀物快速物理搅拌以保证所有固体充分混合。随后加入2-((2-氟苄基)氨基)乙酸(I-65)(2.3mmol)，将反应物于50℃搅拌30mins，然后用5mL的MeOH稀释，再通乙酸改性(0.05％)的反相色谱纯化(30－80％，水-ACN)，随后通过MeOH/水1:1(20mL)重结晶，获得白色粉末(I-66)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ10.05(brs,1H),7.39(appt,J＝7.8Hz,2H),7.23-7.20(m,1H),7.14(d,J＝8.3Hz,1H),7.09(t,J＝8.2Hz,1H),7.02(t,J＝8.2Hz,1H),6.84(d,J＝8.3Hz,2H),5.44-5.40(m,2H),4.82(brs,1H),4.59(brs,1H),4.05-4.02(m,1H),4.01(s,3H)。MS(m/z):430.1/432.1(M+H)+(氯同位素模式)。
2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-68)
步骤1
向8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(1.9mmol)的CH2CL2(10mL)悬浮液中加入催化量的DMF(25uL)，于0℃滴加草酰氯(0.78mL,8.9mmol)。将获得的悬浮液温热至室温并搅拌1hr。真空除去溶剂至完全干燥(需要完全除去草酰氯)。将获得的残留物溶于CH2CL2(10mL)，然后在DIEA(0.56mL,3.8mmol)存在下滴加至2-((3-氟苄基)氨基)乙酸甲酯(1.9mmol)的CH2CL2(10mL)溶液中。将反应混合物于室温下搅拌30min，然后加入50mL水。分离有机层，水层用CH2CL2(50mL)萃取。合并的有机层用H2O和盐水顺序洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，将其通过柱色谱纯化(0－60％的EtOAc己烷)，获得2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸甲酯(I-67)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.47–7.43(m,2H),7.34–7.29(m,1H),7.23–7.19(m,1H),7.18–7.04(m,2H),6.97(dd,J＝2.3,8.7Hz,1H),5.57–4.12(m,9H),3.77–3.74(m,3H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):444.1(M+H)+。
步骤2
将2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸甲酯(I-67)(1.6mmol)溶于THF/MeOH/H2O(3:2:1,10mL)，随后加入LiOH单水合物(0.408g,9.72mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1hr，用10ml的水稀释并酸化至pH＝2.0。收集固体并干燥，得到2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-68)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.73(s,1H),7.71(t,J＝2.6Hz,1H),7.42–7.30(m,3H),7.24–7.15(m,2H),7.07–7.02(m,1H),5.41–4.10(m,9H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):430.0(M+H)+。
3-(2-((环戊基甲基)氨基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-70)
步骤1
向40mL反应容器中按下列顺序加入试剂：N-(叔-丁氧基羰基)甘氨酸(1.0mmol)、THF(4.0mL)、N-甲基吗啉(约0.2mL,2.0mmol)。将其搅拌直到完全溶解。随后加入2-氯代-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(1.0mmol)，将该溶液于50℃搅拌20mins直到白色沉淀充分形成。将沉淀物物理搅拌以保证所有固体充分混合。随后加入3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯(1.3mmol)，将反应物于50℃搅拌30mins，然后于室温下搅拌2hrs，随后用5mL的MeOH稀释，然后通过倒入水(快速搅拌,25mL)中纯化。收集白色固体，采用二氯甲烷(5mL)和TFA(5mL)处理，加热至34℃约1hr直到完全除去Boc基团(通过LCMS监测)。将产物浓缩至干，通过反相色谱纯化(10－40％的水/ACN)，获得I-69。然后将需要的组分通过聚合物键合的离子－交换游离碱短柱以除去任何残留的TFA(采用产物StratoSpheres,SPEPLHCO3MPSPE0.9mmol额定负载(nominalload)×2单位)。流动洗脱液为MeOH(洗脱总体积10mL)。1HNMRNMR(400MHz,d4-MeOH):δ8.71(brd,J＝8.0Hz,1H),7.79-7.75(m,1H),7.21(dd,J＝10.3,8.2Hz,1H),3.87(s,2H),3.82(s,3H)。MS(m/z):227.1(M+H)+。
步骤2
向20mL反应容器中按下列顺序加入试剂：3-(2-氨基乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-69)(0.63mmol)、AcOH(1mL)、MeOH(4mL)和环戊烷甲醛(1mmol)。30mins后，加入氰基硼氢化钠(0.80mmol)。将反应物搅拌10mins，此时加入另一份氰基硼氢化钠(0.40mmol)。将反应物搅拌2hrs，过滤，然后通过TFA改性的(0.05％)反相色谱纯化(20－60％,水-CAN)，随后采用聚合物键合的离子交换短柱(SPEPLHCO3MPSPE0.9mmol额定负载×1单位，8mLMeOH作为流动洗脱液)除去TFA，获得胺(I-70)，为玻璃样固体。1HNMRNMR(400MHz,d4-MeOH):δ8.80(brd,J＝8.0Hz,1H),7.91-7.86(m,1H),7.32(dd,J＝11.0,8.0Hz,1H),4.08(s,2H),3.92(s,3H),3.08(appd,J＝8.1Hz,2H),2.31-2.22(m,1H),1.97-1.92(m,2H),1.77-1.64(m,4H),1.36-1.30(m,2H)。MS(m/z):309.1(M+H)+。
下列中间体根据I-70的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
8-氯代-N-(2-氟苄基)-N-(2-羟基乙基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺(I-73)
步骤1
向250mL反应容器中按下列顺序加入试剂：乙醇胺(40.0mmol)、AcOH(8mL)、MeOH(60mL)和2-氟苯甲醛(20.0mmol)。30mins后，在30mins内分次加入氰基硼氢化钠(20.0mmol)。将反应物搅拌1hr，然后部分浓缩(真空中)，随后通过乙酸改性的(0.05％)反相色谱纯化(5－15％,水-ACN)，干燥后获得为半固体的2-((2-氟苄基)氨基)乙醇(I-72)。1HNMR(400MHz,d4-MeOH):δ7.61(dt,J＝7.9,1.8Hz,1H),7.41-7.35(m,1H),7.21(appt,J＝7.9Hz,1H),7.13(appt,J＝8.9Hz,1H),4.00(s,2H),3.73(t,J＝6.2Hz,1H),2.87(t,J＝6.2Hz,1H)。MS(m/z):170.1(M+H)+。
步骤2
向100mL反应容器中按下列顺序加入试剂：8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(2.0mmol,THF(10mL)和N-甲基吗啉(0.72mL,5.0mmol)。将其搅拌直到完全溶解。随后加入2-氯代-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(2.2mmol)，将溶液于50℃搅拌20mins直到白色沉淀完全形成。将沉淀物快速物理搅拌以保证所有固体充分混合。随后加入2-((2-氟苄基)氨基)乙醇(I-72)(2.4mmol)，将反应物于50℃搅拌30mins，然后用5mL的MeOH稀释，通过乙酸改性(0.05％)的反相色谱纯化(30－80％,水/ACN)，随后通过MeOH/水1:3(10mL)重结晶，获得白色粉末(I-73)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.74-7.70(m,1H),7.38-7.28(m,5H),7.04(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),5.40-5.35(m,3H),4.80-4.75(m,2H),4.20(s,3H),3.93(t,J＝6.2Hz,1H)3.63(q,J＝6.2Hz,1H),3.55(q,J＝6.2Hz,1H),3.41(t,J＝6.5Hz,1H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):416.1/418.1(M+H)+(氯同位素模式)。
下列中间体根据I-73的合成中所述方法采用适当的试剂制备。
1,5,5-三甲基-4,5-二氢-1H-苯并[g]吲唑-3-甲酸(I-78)
中间体I-78根据中间体I-4制备中所述方法制备，采用4,4-二甲基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮作为原料。MS(m/z):257.1(M+H)+。
实施例1
4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(化合物1)
步骤1
向4-氟-3-(2-((2-氟苄基)氨基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(I-17)(8.2mmol)和HATU(8.2mmol)的DMF(30mL)溶液中加入二异丙基乙基胺(30mmol)和8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-5)(7.4mmol)，获得淡黄色溶液。将反应混合物于室温下搅拌3hr。将反应混合物倒入300mL冰中获得沉淀物，真空过滤收集该沉淀物。将固体再溶于EtOAc(600mL)，用5％Na2CO3、水、盐水洗涤，干燥并浓缩。将固体通过在热MeOH中研磨纯化。将获得的过滤并干燥。1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.14(m,1H),8.79–8.46(m,1H),7.80–7.66(m,1H),7.56(m,1H),7.50–7.29(m,3H),7.22(m,3H),7.06(m,1H),5.38(m,3H),4.82(d,J＝41.7Hz,3H),4.35–4.03(m,3H),3.85(m,3H)。旋转异构体混合物。
步骤2
将获得的酯(5mmol)溶于4:1THF-MeOH(100mL)，采用1NKOH(20mL)处理。将白色悬浮液于室温下搅拌2hrs，获得澄清的溶液。将反应物于室温下再搅拌16hrs直到LCMS显示反应完成。真空除去有机溶剂，获得白色悬浮液。将获得的悬浮液用水(100mL)稀释，将pH调节至～5w/AcOH。过滤收集白色固体，用水洗涤，真空干燥24hrs。将羧酸产物通过在8:2MeOH-水溶液(200mL)中于70℃搅拌2hrs进一步纯化。冷却至室温后，真空过滤收集固体，获得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.06-10.01(m,1H),8.58-8.56(m,1H),8.51-8.49(m,1H),7.72-7.69(m,1H),7.58-7.53(m,1H),7.46-7.33(m,3H),7.24-7.12(m,3H),7.08-7.04(m,1H),5.40-5.37(m,3H),4.86-4.76(m,3H),4.24-4.12(m,4H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):551.1(M+H)+。
在一个实施方案中，将L-精氨酸(0.82mmol)的去离子水(6mL)溶液加入4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(0.82mmol)的MeOH(50mL)悬浮液中。将澄清的混合物于室温下搅拌0.5hr，然后浓缩，获得白色半固体残留物。将残留物溶于无水乙腈(25mL)中，将白色悬浮液缓慢减压干燥。将该过程重复数次(5×)，获得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸L-精氨酸盐。熔点(157℃)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.88–9.77(m,1H),8.37–8.26(m,1H),8.03–7.68(m,5H),7.66–7.51(m,2H),7.48–7.31(m,3H),7.15(m,6H),5.43–5.35(m,2H),4.86–4.72(m,3H),4.22–4.10(m,4H),3.26–3.18(m,1H),3.17–2.99(m,2H),1.76–1.52(m,4H)。
在一个实施方案中，将4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(0.84mmol)的MeOH(20mL)悬浮液加热至70℃。滴加1N的NaOH溶液(0.84mmol)。将澄清的溶液于室温下搅拌1hr，然后减压除去溶剂。粗品产物用MeOH研磨，通过在乙腈(5mL)中浆化结晶，获得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸钠盐。熔点(161℃)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.86–9.60(m,1H),8.27–8.17(m,1H),7.63–7.55(m,2H),7.48–7.31(m,2H),7.26–7.04(m,5H),5.42–5.37(m,2H),4.84–4.74(m,3H),4.20–4.12(m,4H)。
4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(化合物2)
4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸根据化合物1的方法制备。熔点(246℃)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.14–10.04(m,1H),8.71–8.58(m,1H),7.79–7.69(m,1H),7.62–7.51(m,1H),7.47–7.36(m,2H),7.29–7.02(m,5H),5.42–5.32(m,2H),4.84–4.72(m,2H),4.23–4.08(m,3H),3.88–3.80(m,3H)。旋转异构体混合物。MS(m/z)(M+H)+,551.3。C28H21F3N4O5*0.15CH4O的分析计算值：C,61.09；H,3.85；N,10.18。实测值：C,60.97；H,4.02；N,10.16。
将甲醇(500mL)和二氯甲烷(500mL)加入4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(22mmol)和2-氨基-2-羟基甲基-丙烷-1,3-二醇(TRIS；22mmol)的混合物中。将反应物于25℃搅拌3hrs。真空除去溶剂，将二氯甲烷(500mL)加入固体并浓缩(重复2×)。将固体悬浮于100mL二氯甲烷中，真空过滤收集，获得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸TRIS盐。熔点(125℃)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.01–9.65(m,1H),8.59–8.30(m,1H),7.76–6.95(m,10H),5.53–4.00(m,9H),3.58–3.10(m,10H)。C32H32F3N5O8*1H2O的分析计算值：C,55.73；H,4.97；N,10.16。实测值：C,55.74；H,4.99；N,10.12。
在一个实施方案中，将L-精氨酸(0.73mmol)的去离子水(5.8mL)溶液加入4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(0.73mmol)的甲醇(70mL)悬浮液中。将混合物加热至70℃0.5hrs。冷却至室温后，真空除去溶剂。将2:1的乙腈和甲醇混合物(20mL)加入固体中并浓缩(重复2×)。将固体通过在2:1的乙腈和甲醇混合物(5mL)中浆化固体残留物而结晶，将悬浮液于室温下搅拌24hrs，获得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸L-精氨酸盐，为白色沉淀物。熔点(206℃)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.88–9.78(m,1H),8.41–8.31(m,1H),8.08–7.82(m,5H),7.68–7.52(m,2H),7.47–7.36(m,1H),7.28–7.04(m,6H),5.43–5.30(m,3H),4.81–4.70(m,3H),4.14(s,4H),3.26–3.21(m,2H),3.16–3.01(m,2H),1.78–1.52(m,4H)。
在一个实施方案中，将L-赖氨酸(0.20mmol)的去离子水(3mL)溶液加入热的4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(0.20mmol)的甲醇(25mL)悬浮液中。将混合物于室温下搅拌16hrs。真空除去溶剂，粗品产物通过在乙腈(5mL)浆化而结晶。将混合物于室温下再搅拌24hrs，获得4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸L-赖氨酸盐，为白色沉淀物。1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.86–9.77(m,1H),8.40–8.28(m,1H),7.68–7.51(m,2H),7.48–7.36(m,1H),7.29–7.02(m,7H),5.43–5.36(m,2H),5.36–5.31(m,1H),4.80–4.71(m,3H),4.19–4.11(m,4H),3.17–3.09(m,1H),2.76–2.64(m,2H),1.77–1.31(m,7H)；某些峰受到溶剂峰影响。
下列化合物根据实施例1中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例2
3-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸(化合物29)
步骤1
向8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(0.20mmol)的CH2CL2(1mL)悬浮液中加入催化量的DMF(2.5μL)，于0℃滴加草酰氯(0.60mmol)。将获得的悬浮液温热至室温并搅拌1hr。真空除去溶剂至完全干燥(需要完全除去草酰氯)。将获得的残留物溶于CH2CL2(1mL)，然后在DIEA(0.38mmol)存在下滴加至3-(2-(苄基氨基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-19)(0.2mmol)的CH2CL2(1mL)溶液中。将反应混合物于室温下搅拌15mins，然后加入50mL水。分离有机层，水层用CH2CL2(50mL)萃取。合并的有机层用H2O和盐水顺序洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，将其通过柱色谱纯化(0－60％的EtOAc己烷溶液)，获得3-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(29-Int)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.94(s,1H),9.10–8.85(m,1H),7.82(s,1H),7.54–7.30(m,6H),7.26–7.21(m,1H),7.21–7.10(m,1H),7.01(d,J＝8.3Hz,1H),5.64–4.45(m,5H),4.36–4.06(m,4H),3.95(s,3H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):563.1(M+H)+。
步骤2
将3-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(29-Int)(0.14mmol)溶于THF/MeOH/H2O(3:2:1,5.0mL)，随后加入LiOH单水合物(0.85mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2hrs。真空除去溶剂，通过加入3NHCl酸化至pH＝3.0。收集固体并干燥，获得3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-5-氟苯甲酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.11–9.96(m,1H),8.67–8.53(m,1H),7.78–7.66(m,2H),7.43–7.26(m,7H),7.11–7.03(m,1H),5.48–4.10(m,9H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):549.1(M+H)+。
下列化合物根据实施例2中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例2A
3-(2-(9-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸(化合物34)
步骤1
向9-氯代-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酸(1.8mmol)的CH2Cl2(10mL)悬浮液中加入催化量的DMF(25uL)，于0℃滴加草酰氯(8.9mmol)。将获得的悬浮液温热至室温并搅拌1hr。真空除去溶剂至完全干燥。将获得的残留物溶于CH2Cl2(10mL)，然后在DIEA(3.6mmol)存在下滴加至4-氟-3-(2-((2-氟苄基)氨基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(I-17)(1.8mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中。将反应混合物于室温下搅拌30mins，然后加入50mL水。分离有机层，水层用CH2Cl2(50mL)萃取。合并的有机层用H2O和盐水顺序洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，将其通过柱色谱纯化(0－60％的EtOAc己烷)，获得N-(2-((5-乙酰基-2-氟苯基)氨基)-2-氧代乙基)-9-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酰胺。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ10.11(s,1H),8.74(s,1H),7.72(s,1H),7.38–7.31(m,3H),7.27–7.22(m,1H),7.12–6.97(m,3H),5.28–4.79(m,2H),4.38(t,J＝6.4Hz,3H),4.05–3.94(m,4H),3.84(s,3H),3.13(t,J＝6.4Hz,2H)。MS(m/z):595.1(M+H)+。
步骤2
将N-(2-((5-乙酰基-2-氟苯基)氨基)-2-氧代乙基)-9-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酰胺(1.6mmol)溶于THF/MeOH/H2O(3:2:1,10mL)，随后加入LiOH单水合物(9.7mmol)。将反应混合物于室温下搅拌4hr，用10ml的水稀释，酸化至pH＝3.0。收集固体并干燥，得到3-(2-(9-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.03(s,1H),8.69–8.48(m,1H),7.84–7.66(m,2H),7.52–7.30(m,4H),7.28–7.12(m,3H),5.18–4.20(m,6H),4.05–3.92(m,3H),3.11–2.93(m,2H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):581.1(M+H)+。
实施例3
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(化合物35)
向40mL反应容器中按下列顺序加入试剂：2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-22)(0.10mmol)、THF(2mL)和N-甲基吗啉(1.4mmol)。将其搅拌直到完全溶解。随后加入2-氯代-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(0.20mmol)，将该溶液于50℃搅拌20mins直到白色沉淀充分形成。将沉淀物物理搅拌以保证所有固体充分混合。随后加入3-氨基苯甲酸甲酯(0.30mmol)，将反应物于50℃搅拌30mins，随后用5mL的MeOH稀释，然后通过乙酸改性(0.05％)的反相色谱直接纯化(30－80％,ACN/水)。酯中间体无需进一步纯化可以直接使用，将其溶于2mL的MeOH、2mL的THF中，采用1mL的1NKOH水溶液(1.0mmol)处理。将该均匀的溶液加热至60℃30mins，将反应物冷却至室温，用AcOH(17N,约0.06mL)骤冷至约pH6。将反应物用乙酸乙酯(30mL)稀释，用2×5mL的水洗涤，将乙酸乙酯组分部分浓缩，获得3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸，为白色固体。1HNMRNMR(400MHz,DMSO):δ11.91(brs,1H),10.15(brs,1H),8.26-8.20(m,1H),7.85–7.62(m,3H),7.48-7.29(m,4H),7.20(appq,J＝7.5Hz,2H),7.05(dd,J＝1.7,8.7Hz,1H),5.39-5.35(m,2H),4.84-4.70(m,2H),4.23-4.10(m,5H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):549.2/551.2(M+H)+(氯同位素模式)。
实施例4
3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸(化合物36)
向40mL反应容器中按下列顺序加入试剂：8-氯-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(0.10mmol)、THF(3mL)和N-甲基吗啉(1.0mmol)。将其搅拌直到完全溶解。随后加入2-氯代-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(0.11mmol)，将该溶液于50℃搅拌20mins直到白色沉淀充分形成。将沉淀物快速物理搅拌以保证所有固体充分混合。随后加入3-(2-((环戊基甲基)氨基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-70)(0.10mmol)，将反应物于50℃搅拌30mins，然后用5mL的MeOH稀释，随后通过乙酸改性(0.05％)的反相色谱纯化(30－80％,水/ACN)。中间体酯无需进一步纯化可以直接使用，将其溶于2mL的MeOH、2mL的THF中，采用1mL的1NKOH水溶液(1.0mmol)处理。将该均匀的溶液加热至60℃30mins，将反应物冷却至室温，用AcOH(17N,约0.06mL)骤冷至约pH-6。将反应物用30mL乙酸乙酯稀释，用2×5mL的水洗涤，将乙酸乙酯组分部分浓缩，获得3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.06-10.01(m,1H),8.46-8.40(m,1H),7.82-7.78(m,2H),7.36-7.32(m,2H),7.03-7.00(m,1H),5.32-5.20(m,2H),4.89(brs,1H),4.29(brs,2H),4.24-3.90(m,4H),2.10-2.05(m,1H),1.87-1.67(m,6H),1.09-1.02(m,2H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):541.2/542.2(M+H)+(氯同位素模式)。
实施例5
3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸(化合物37)
3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸根据实施例4中所述方法制备，但是采用3-(2-((环戊基甲基)氨基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(I-71)替代3-(2-((环戊基甲基)氨基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸甲酯(I-70)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.66(brs,1H),10.18-10.14(m,1H),8.23(appd,J＝10.0Hz,1H),7.89-7.12(m,5H),7.06-7.02(m,1H),5.35-5.25(m,2H),4.89(brs,1H),4.72(brs,2H),4.43(brs,1H),4.14-4.00(m,3H),1.99-0.96(m,9H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):523.2/525.2(M+H)+(氯同位素模式)。
实施例6
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-5-氟苯甲酸(化合物38)
步骤1
向2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-22)(0.032mmol)、DIEA(0.16mmol)和3-氨基-5-氟苯甲酸乙酯(0.05mmol)的EtOAc(0.5mL)混合物中加入T3P(50％wt的EtOAc溶液,0.5mL)，于室温下搅拌30mins。通过HPLC纯化，获得3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-5-氟苯甲酸乙酯(38-Int)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.38–8.71(m,1H),7.95–7.69(m,1H),7.59(s,1H),7.49–7.39(m,3H),7.26–7.22(m,1H),7.14(td,J＝1.1,7.5Hz,1H),7.08–7.02(m,1H),7.00(d,J＝8.7Hz,1H),5.53(s,2H),5.08–4.81(m,1H),4.67–4.47(m,1H),4.40(q,J＝7.1Hz,2H),4.17(s,3H),1.42(t,J＝7.1Hz,3H)。MS(m/z):595.1(M+H)+。
步骤2
将3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-5-氟苯甲酸乙酯(38-Int)(8mg,0.0134mmol)溶于THF/MeOH/H2O(3:2:1,5.0mL)，随后加入LiOH单水合物(0.08mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2hrs。真空除去溶剂，通过加入3NHCl酸化至pH＝3.0，获得固体3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-5-氟苯甲酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.59–10.47(m,1H),7.99(s,1H),7.87–7.79(m,1H),7.79–7.72(m,1H),7.53–7.43(m,1H),7.43–7.36(m,3H),7.32–7.23(m,2H),7.14–7.08(m,1H),5.51–4.13(m,9H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):567.0(M+H)+。
下列化合物根据实施例6中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例7
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸(化合物40)
步骤1
向2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酸(I-22)(0.15mmol)、DIEA(0.45mmol)和HATU(0.18mmol)的DMF(1mL)混合物中加入3-氨基-2-甲基丙酸甲酯(0.22mmol)，于室温下搅拌10mins。然后将反应物用20mL水稀释，用EtOAc萃取(20mL,二次)。合并的有机层用H2O和盐水顺序洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，将其通过柱色谱纯化(0－80％的EtOAc己烷)，得到3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸乙酯(40-Int)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.47(d,J＝2.4Hz,1H),7.43–7.33(m,1H),7.33–7.29(m,1H),7.22(dd,J＝2.4,8.7Hz,1H),7.14(dt,J＝3.8,7.5Hz,1H),7.08(t,J＝9.2Hz,1H),6.98(d,J＝8.7Hz,1H),5.60–4.74(m,5H),4.25–3.89(m,6H),3.62–3.39(m,1H),3.40–3.24(m,1H),2.72–2.61(m,1H),1.23–1.14(m,6H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):543.1(M+H)+。
步骤2
将3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸乙酯(40-Int)(0.125mmol)溶于THF/MeOH/H2O(3:2:1,5.0mL)，随后加入LiOH单水合物(0.75mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2hr。真空除去溶剂，然后加入水(5mL)，通过加入3NHCl酸化至pH＝3.0，获得3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.26(s,1H),8.10–7.99(m,1H),7.73–7.67(m,1H),7.40–7.29(m,3H),7.24–7.16(m,2H),7.09–7.02(m,1H),5.43–3.89(m,9H),3.32–3.06(m,2H),1.06–0.97(m,3H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):515.0(M+H)+.
下列化合物根据实施例7中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例8
4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸(化合物43)
步骤1
向8-氯代-N-(2-氟苄基)-N-(2-羟基乙基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺(I-73)(0.45mmol)中加入THF(7mL)和3-氟-4-羟基苯甲酸甲酯(0.88mmol)、三苯基膦固体(0.90mmol)，将获得的溶液冷却至0℃，最后滴加DIAD(偶氮二甲酸二异丙基酯)(0.20mL,AldrichTM商业储备液，95％重量比,0.96mmol)。将反应物的内部温度保持于0℃10mins，然后20分钟内温热至室温。于室温下完整的1小时后，将反应物用THF(5mL)稀释，过滤，通过TFA改性(0.05％)的反相色谱直接纯化(40－90％,水/ACN)。将所有组分真空蒸发至干，采用聚合物固化的碳酸盐(SPE-CO3HVarian短柱,0.90额定负载，MeOH流动相,10mL)进行游离碱处理(freebaseevent)，获得为灰白色粉末的甲基乙基中间体(43-Int)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.78-7.69(m,2H),7.63(brs,1H),7.42-7.38(m,3H),7.18(appdt,J＝12.3,8.0Hz,3H),7.04(appd,J＝8.0Hz,1H),5.40-5.35(m,2H),5.29(brs,1H),4.83(brs,1H),4.52-4.38(m,2H),4.15-4.10(m,2H),3.93(s,3H)3.73(s,3H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):568.2/570.2(M+H)+(氯同位素模式)。
步骤2
然后，将前述步骤中制备的酯4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸甲酯(43-Int)溶于THF(10mL)、MeOH(2mL)和1.0MKOH(2.0mmol)。将获得的均匀溶液加热至60℃2hrs。此时将反应物冷却至室温，采用0.12mL的AcOH骤冷(2mmol,调节至PH-6，采用Whatman-4色带试纸监测)。然后将反应物用水稀释(20mL)，用乙酸乙酯萃取(3×100mL)。有机萃取物用水进一步洗涤(2×15mL)。除去有机萃取物至干，使其在MeOH/水(10mL,9:1)中沉淀，获得4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.51(brs,1H),7.89-7.19(m,9H),7.07(dd,J＝1.7,8.7Hz,1H),5.30-5.15(m,3H),4.85(brs,1H),4.43-4.18(m,3H,4.04-3.99(m,3H),3.78(m,1H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):554.1/556.1(M+H)+(氯同位素模式)。
下列化合物根据实施例8中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例9
4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸(化合物55)
步骤1
向8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(0.16mmol)的无水DMF(1mL)溶液中加入HATU(0.18mmol)、DIEA(0.48mmol)和4-(2-(苄基氨基)乙氧基)-3-氟苯甲酸甲酯(I-52)(0.16mmol)，将获得的混合物于室温下搅拌直到完成(2hrs)。然后将反应混合物用水稀释(10mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)。有机相用1NHCl、水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗品残留物用MeOH研磨，获得4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸甲酯，为白色固体(55-Int)。MS(m/z):550.1/552.1(M+H)+(氯同位素模式)。
步骤2
将4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸(61-int)(20mg,0.036mmol)在3:2:1的THF-MeOH-H2O溶液(2mL)中的悬浮液用6MLiOH溶液(100uL)处理，将获得的混合物于35℃搅拌直到完全转化(3hrs)。然后减压浓缩反应混合物。将粗品残留物溶于水中，加入50％乙酸直到pH为5，此时白色固体析出。过滤收集固体，用水洗涤，真空干燥，获得4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.75–6.98(m,11H),5.44-5.30(m,5H),4.45–3.99(m,6H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):536.2/538.2(M+H)+(氯同位素模式)。
下列化合物根据实施例9中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例10
3-氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸(化合物61)
步骤1
于室温下，将HATU(0.22mmol)加入8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-5)(0.20mmol)、N,N-二异丙基胺(0.44mmol)和DMF(2mL)的混合物中。搅拌20mins后，加入胺(I-56)(0.20mmol)的DMF(1mL)溶液，将反应混合物于室温下搅拌4hrs。将混合物用H2O(10mL)和EtOAc(10mL)稀释，分层，水层用EtOAc洗涤(×2,10mL)。合并的有机萃取物用H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)。除去溶剂后，粗品产物通过色谱纯化(固体上样，硅胶，0－60％的EtOAc/己烷)，获得3-氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸甲酯(61-Int)，为白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.84–7.64(m,2H),7.43–7.29(m,1H),7.21–7.13(m,1H),7.13–7.02(m,2H),7.01–6.87(m,3H),5.60–5.54(m,1H),5.50–5.43(m,2H),5.30(s,3H),5.01–4.94(m,1H),4.45–4.37(m,2H),4.37–4.30(m,1H),4.09–4.06(m,3H),3.91–3.84(m,2H)。
步骤2
将KOH(1.0M的H2O溶液,1.0mmol)加入3-氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸甲酯(61-Int)(0.2mmol)的THF(4.0mL)和MeOH(1.0mL)溶液中，将溶液于50℃搅拌2hrs。除去溶剂(抽吸器)后，粗品残留物用水(10mL)稀释，溶液用乙酸酸化(至pH～5)。真空过滤收集获得的白色沉淀物，用H2O(20mL)洗涤，高真空干燥过夜，获得3-氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢色满并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.75–7.64(m,1H),7.57–7.01(m,9H),5.51–5.23(m,3H),4.89–4.80(m,1H),4.49–4.29(m,3H),4.13–3.98(m,3H),3.83–3.72(m,1H)。MS(m/z):538.2(M+H)+.旋转异构体混合物。
下列化合物根据实施例10中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例11
3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸(化合物63)
步骤1
向40mL反应容器中加入8-氯代-N-(2-氟苄基)-N-(2-羟基乙基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺(I-73)(0.10mmol)和CH2CL2(10mL)，随后加入商业Dess-Martin氧化剂(Sigma-Aldrich,1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰(benziodoxol)-3-(1H)-酮,0.20mmol)，采用固体碳酸氢钠(0.20mmol)缓冲。将该奶白色悬浮液快速搅拌2hrs，然后将反应物用乙酸乙酯(150mL)直接稀释，用水洗涤(3×15mL)。将获得的有机萃取物浓缩至残留物(真空中)，无需进一步处理可以直接使用。将残留物溶于9:1MeOH/AcOH(5mL)，采用3-氨基苯甲酸甲酯(0.40mmol)处理。然后将获得的反应物于室温下搅拌30mins，然后用氰基硼氢化钠(1.0mmol，30mins内分次)处理，随后于室温下再搅拌1hr。将获得的反应物用乙酸乙酯(150mL)稀释，用水洗涤(3×25mL)。将获得的有机萃取物真空浓缩，然后通过反相色谱直接纯化，采用TFA-改性(0.05％)的水/CAN(35－80％)纯化。将所有组分真空蒸发至干，采用聚合物固化的碳酸盐(SPE-CO3HVarian短柱,0.90额定负载，MeOH流动相,10mL)进行游离碱处理，获得3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸甲酯(63-Int)，为白色固体。1HNMR(400MHz,d4-MeOH):δ7.48-7.19(m,8H),7.03-6.92(3H),7.18(appd,J＝8.0Hz,1H),6.62(appdt,J＝12.2,8.0Hz,1H),5.30-5.20(m,2H),4.83(brs,2H),4.21(t,J＝5.0Hz,2H),3.85(s,3H),3.74(s,3H),3.38(t,J＝5.0Hz,2H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):549.2/551.2(M+H)+(氯同位素模式)。
步骤2
将3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(63-Int)(0.075mmol)溶于THF(3mL)、MeOH(2mL)和1.0MKOH(1.0mmol)。将获得的均匀溶液加热至60℃2hrs。此时将反应物冷却至室温，采用AcOH骤冷(1.2mmol,调节至pH＝6，采用Whatman-4色带试纸监测)。然后将反应物用水稀释(5mL)，用乙酸乙酯萃取(3×20mL)。有机萃取物进一步用水稀释(2×5mL)。除去有机萃取物至干，将其在MeOH/水(3mL,9:1)中沉淀，获得3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸，为白色固体。1HNMR(400MHz,d4-MeOH):δ7.48-7.10(m,7H),7.02-6.90(m,3H),6.61(brd,J＝8.0Hz,1H),5.40-5.20(m,2H),4.80(brs,2H),4.21(t,J＝7.5Hz,2H),3.91(brs,3H),3.38(t,J＝7.5Hz,2H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):535.2/537.2(M+H)+(氯同位素模式)。
实施例12
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸(化合物64)
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸根据用于3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸的实施例3中所述方法制备，在步骤1中采用3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯替代3-氨基苯甲酸甲酯。MS(m/z):567.2/569.1(M+H)+(氯同位素模式)；r.t.＝1.734。
实施例13
3-((2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸(化合物65)
步骤1
将HATU(1.2mmol)加入8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(1.1mmol)、Hunigs碱(2.4mmol)和DMF(5mL)的混合物中。加入4-氟-3-((2-((3-氟苄基)氨基)乙基)氨基)苯甲酸甲酯(I-46)(1.1mmol)的DMF(3mL)溶液，将反应混合物于室温下搅拌4hrs。将混合物用水和乙酸乙酯稀释。分层，水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用水、盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥。产物通过色谱纯化(硅胶,0－60％的乙酸乙酯/己烷)，获得3-((2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(65-Int)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.61–7.29(m,2H),7.23–6.86(m,8H),6.20–5.89(m,1H),5.45–4.65(m,4H),4.14–3.95(m,4H),3.84–3.77(m,3H),3.58–3.46(m,1H),3.46–3.37(m,2H)。
步骤2
将1NKOH(4mmol,5equiv.)加入3-((2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸甲酯(65-Int)(0.80mmol)的THF(4mL)和MeOH(2mL)溶液中，将溶液于50℃搅拌2hrs。除去溶剂，将粗品残留物用水稀释。将水溶液用乙酸酸化(pH～5)，获得为白色沉淀的目标化合物。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.61–6.76(m,10H),6.21–5.77(m,1H),5.46–3.94(m,9H),3.56–3.38(m,2H)。旋转异构体混合物。MS(m/z):537.2(M+H)+。
下列化合物根据实施例13中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例14
4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸(化合物75)
步骤1
于室温下，将HATU(43.1mmol)(Oakwood)加入8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-4)(39mmol)和DIEA(15mL)(Aldrich)的DMF(300mL)溶液中。搅拌20mins后，加入为净(neat)油的4-((苄基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(I-23)(39mmol)，通过DMF(20mL)洗涤，将反应混合物搅拌2hrs。将混合物倒入冰上，过滤获得的沉淀物，用H2O(～200mL)洗涤。将固体溶于DCM(～300mL)，用NaHCO3(sat.)、H2O洗涤，干燥(MgSO4)。粗品产物通过色谱纯化(硅胶，纯品上样，DCM冲洗，10－100％EtOAc/己烷)，除去溶剂后，获得油状物。将该油状物悬浮于EtOH(～100mL)，将混合物加热至回流，同时搅拌。搅拌1hr后，将混合物冷却至室温，过滤获得的固体，用冷的EtOH(～50mL)洗涤。浓缩滤液(抽吸器)，重复结晶，获得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸甲酯。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.99–7.87(m,2H),7.75–7.65(m,1H),7.45–7.22(m,8H),7.12–7.02(m,1H),5.48–5.41(m,2H),5.30–5.21(m,2H),4.64–4.55(m,2H),4.19–4.05(m,3H),3.85(s,3H)。MS(m/z):502.0/504.0(M+H)+(氯同位素模式)。
步骤2
将1.0M氢氧化钾(53mmol)加入4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸甲酯(17.5mmol)的THF(56mL)和甲醇(14mL)溶液中，将混合物加热至50℃2hr。冷却至室温后，除去溶剂(抽吸器)。粗品产物用水稀释，水溶液用乙酸酸化(至pH～6)，获得沉淀物。真空过滤收集沉淀物，高真空干燥过夜。收集固体，加入EtOH(125mL)。将混合物于85℃搅拌2hrs后，然后冷却至室温。过滤固体，用冷EtOH(～75mL)洗涤，高真空干燥过夜，获得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.96–7.85(m,2H),7.74–7.67(m,1H),7.42–7.20(m,8H),7.12–6.97(m,1H),5.46–5.42(m,2H),5.28–5.21(m,2H),4.62–4.49(m,2H),4.18–4.07(m,3H)。旋转异构体混合物。MS(m/z)488.2/490.2(M+H)+(氯同位素模式)。
将甲醇(400mL)加入4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸(8.20mmol)和TRIS(8.20mmol)的混合物中。将反应物加热至70℃0.5hr。冷却至室温后，真空除去溶剂。将残留物在二氯甲烷(10mL)中超声并再次浓缩。将获得的白色固体采用真空泵干燥过夜。粗品产物通过将固体残留物在4:1的乙腈和甲醇混合物(5mL)中浆化结晶。将混合物于室温下搅拌24hrs，获得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸TRIS盐，为白色沉淀物。熔点(195.6℃)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.92–7.80(m,2H),7.78–7.64(m,1H),7.41–7.19(m,8H),7.13–7.00(m,1H),5.44(s,2H),5.25–5.14(m,2H),4.61–4.48(m,2H),4.18–4.03(m,3H),3.39(s,7H)。
在一个实施方案中，将4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸(30.6mmol)加入150mL丙酮中，获得白色悬浮液。向悬浮液中逐渐加入75mL葡甲胺(34mmol)水溶液。将获得的混合物于50℃搅拌4h，然后于室温下搅拌12hrs，获得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸葡甲胺单水合物盐，为白色固体，将其于71℃脱水，通过DSC测定。
在一个实施方案中，将葡甲胺单水合物盐在烘箱中于80℃、相对湿度0％的条件下进一步加热30min，获得白色结晶固体，熔点(Tm起始点)为167.5℃。或者，将4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸葡甲胺单水合物盐(0.1mmol)加入1mL的1:1(v/v)丙酮/水中。将获得的混合物于50℃平衡一周，获得白色固体，将其于约61℃脱水，通过DSC测定。
在另一个实施方案中，将甲醇(100mL)加入4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸(4.1mmol)和葡甲胺碱(4.1mmol)中。将获得的悬浮液于80℃回流24hrs，然后冷却至室温，获得4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸葡甲胺盐，为白色固体。熔点(180.6℃)。
下列化合物根据实施例14中所述方法采用适当的中间体制备。
实施例15
4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸(化合物100)
步骤1
将HATU(1.2mmol)加入8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酸(I-5)(1.1mmol)、Hunigs碱(2.4mmol)和DMF(5mL)的混合物中。加入4-氟-3-((2-((3-氟苄基)氨基)乙基)氨基)苯甲酸甲酯(I-46)(1.1mmol)的DMF(3mL)溶液，将反应混合物于室温下搅拌4hrs。将混合物用水和乙酸乙酯稀释。分层，水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用水、盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥。产物通过色谱纯化(硅胶,0－60％的乙酸乙酯/己烷)，获得4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸甲酯(100-Int)。
步骤2
将1NKOH(4mmol,5equiv.)加入4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸甲酯(100-Int)(0.80mmol)的THF(4mL)和MeOH(2mL)溶液中，将溶液于50℃搅拌2hrs。除去溶剂，粗品残留物用水稀释。水溶液用乙酸酸化(至pH～5)，获得4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸，为白色沉淀物。1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.61–7.26(m,2H),7.20–6.82(m,9H),6.11–5.81(m,1H),5.43–4.70(m,4H),4.15–3.94(m,4H),3.53(t,J＝6.6Hz,1H),3.44–3.39(m,2H)。MS(m/z):537.2(M+H)+；r.t.＝1.618；元素分析：0.50,C28H22F3N4O*0.52H2O的计算值：C,61.65；H,4.43；N,10.45)；实测值：C:61.75；H:4.21；N:10.31。
将4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸(7.5mmol)加入TRIS(7.5mmol)的MeOH(400mL)溶液中。将反应物于60℃搅拌30mins。冷却至室温后，除去溶剂，粗品产物与二氯甲烷共沸(2×)。将获得的玻璃样固体在乙酸乙酯(200mL)中浆化。将浆液于室温下搅拌24hrs。过滤收集获得固体，获得固体4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸TRIS盐。熔点(160℃)。1HNMR(600MHz,DMSO):δ7.62–6.70(m,10H),5-90-5.80(m,1H),5.45–5.15(m,2H),4.75-4.55(m,2H),4.16–3.5(m,4H),3.41-3.39(m,1H),3.30–3.25(m,13H)。C32H34F3N5O7*1.3H2O的分析计算值：C,56.36；H,5.42；N,10.27*1H2O；实测值：C,56.25；H,5.29；N,10.32。
将L-精氨酸(0.20mmol)的去离子水(3mL)溶液加入4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸(0.20mmol)的MeOH(12mL)悬浮液中。将混合物于70℃搅拌0.5hr，然后于室温下搅拌2hrs。真空除去溶剂，粗品产物通过将固体残留物在乙腈(5mL)中浆化结晶。将混合物于室温下再搅拌24hrs，获得4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸L-精氨酸盐，为白色沉淀物。熔点(161℃)。
实施例16
3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸(化合物101)
3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸根据实施例13中所述方法采用适当的中间体制备。MS(m/z):553.2/555.2(M+H)+(氯同位素模式)；r.t.＝1.871.
生物学分析
人GST-FXRLBD共激活因子(Co-activator)相互作用试验
FXRHTRF试验是测定FXR与共激活因子蛋白(SRC1)之间相互作用的生化试验。配体诱导的与共激活因子蛋白之间的相互作用是通过FXR的转录激活中的关键步骤。因此，它是被设计用于测定试验化合物的FXR激动活性的试验。
购买与谷胱甘肽S-转移酶(GST)纯化的蛋白(GST-FXRLBD)融合的重组人法尼醇X受体(FXR)配体结合域(氨基酸193-472)(Invitrogen)。GST-FXRLBD和衍生自甾体受体共激活因子-1(SRC-1)的肽之间的配体依赖性相互作用通过荧光共振能量转移(FRET)监测。将GST-FXRLBD与生物素标记的SRC-1肽(序列：Biotin-CPSSHSSLTERHKILHRLLQEG-SPS-CONH2,AmericanPeptide)在试验缓冲液(50mMTris·HCl,pH7.4,50mMNaCl,1mMTCEP和0.2％牛血清白蛋白)中混合，涂布于384黑色Proxi板(GreinerBio-One)。将试验化合物(在DMSO溶液中)和检测试剂(抗-GST-Cryptate标记的抗体和链霉亲和素-XL665缀合物；CisBio)加至含有50mMKF的试验缓冲液中。将板于室温下、黑暗中温育2.5hrs，然后在Envision(PerkinElmer)上于665nm和590nm读数。HTRF试验结果计算自665nm/590nm的比例(比例＝(A665nm/A590nm)×104)，表示为ΔF％＝(样品比率–阴性对照比率)/阴性对照比率×100.
每个试验均进行阴性对照(没有链霉亲和素-XL665)，表示背景荧光。在每个试验中均包含作为阳性对照的参比FXR激动剂(E)-3-(2-氯代-4-((3-(2,6-二氯代苯基)-5-异丙基异噁唑-4-基)甲氧基)苯乙烯基)苯甲酸(化合物GW4064)。将每个试验化合物的效力与GW4064的效力进行对比。对于每个浓度，试验化合物的相对活性表示为：响应％＝(R样品–RDMSO)/(R阳性–RDMSO)，其中R样品为试验化合物的HTRF响应(表示为ΔF％)，R阳性为饱和浓度的GW4064的最大响应，RDMSO为DMSO对照的响应。EC50值采用GraphPadPrism(GraphPadSoftware)通过非线性回归曲线拟合(log(激动剂)与响应-变量斜率(四参数))计算。
表1总结了本发明化合物在人GST-FXRLBD共激活因子相互作用试验中的EC50值。
表1
n.d.＝未测定
应当理解，本文中所述的实施例和实施方案仅用于说明性目的，建议本领域技术人员对其进行各种修改或变化，这些修改或变化应当包含在本申请的精神和范围内以及本申请权利要求的范围内。本文中引用的所有出版物、专利和专利申请为了各种目的引入本文作为参考。

Claims (25)

1.式(I)化合物或其可药用的盐：
其中：
R0为环A或C1-6烷基；
环A为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；所述环A为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；含有1－2个N、O或S的杂原子的4－6元杂环；或C3-7环烷基；所述环B为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–或–C(O)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–、*–O(CR4R5)–或–NR–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–或*1–(CR4R5)-C(O)-NR–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–、*2–(CR4R5)2-SO2–、*2–(CR4R5)2-NR-C(O)–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
L3为–(CR4R5)–或–C(O)–；
每个R2独立为卤素、羟基、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
2.权利要求1的化合物，其中：
R0为环A或C1-6烷基；
环A为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；或C3-7环烷基；所述环A为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B为芳基；含有1－3个N、O或S的杂原子的5－10元杂芳基；或C3-7环烷基；所述环B为未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–或*–O(CR4R5)–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
L3为–C(O)–；
每个R2独立为卤素、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
3.权利要求1或2的化合物或其可药用的盐，其中所述化合物为式(II)化合物：
其中：
R0为环A或C1-6烷基；其中环A为苯基、吡啶基或环丙基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和C3-7环烷基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
X为–(CR4R5)–；
Y为–O–、–(CR4R5)–或*–O(CR4R5)–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1、Z2、Z3和Z4每一个独立为–CR3–或–N–；
L1为*1–(CR4R5)1-2–，其中“*1”表示L1与N的连接点；
L2为*2–(CR4R5)1-2–、*2–(CR4R5)-C(O)-NR–、*2–(CR4R5)2-O–、*2–(CR4R5)2-NR–或*2–(CR4R5)-C(O)-NR-(CR4R5)–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
每个R2独立为卤素、C1-6烷基或卤素-取代的C1-6烷基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R、R4和R5独立为氢或C1-6烷基。
4.权利要求1－3中任一项的化合物，其中R0选自：
*3–CH2C(CH3)2–、*3–CH2CH(CH3)–和*3–环丙烷-1,1,-二基，其中“*3”表示R0与L2的连接点。
5.权利要求1－3中任一项的化合物或其可药用的盐，其中所述化合物为式(III)化合物：
其中
环A为苯基或吡啶基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
环B选自苯基、吡啶基、1H-吲哚基和环戊基，它们每一个是未取代的或者被1－2个由R2独立代表的取代基取代；
L1为–(CR4R5)–；
L2选自–(CH2)–、*2–CH2C(O)NH–、*2–CH(CH3)C(O)NH–、*2–CH2C(O)NHCH2–、*2–(CH2)2O–和*2–(CH2)2NH–；其中“*2”表示L2与N的连接点；
X为CH2；
Y选自–O–、–CH2–、–C(CH3)2–和*–O-CH2–，其中“*”表示Y与含有Z环原子的环的连接点；
Z1为CR3或N；
Z2为CR3；
Z3为CR3；
Z4为CR3或N；
每个R2独立选自卤素、甲基和三氟甲基；
每个R3独立为氢、卤素或C1-6烷基；并且
R4和R5中每一个独立为氢或甲基。
6.权利要求1－5中任一项的化合物，其中Y为–O–。
7.权利要求1－6中任一项的化合物，其中L1为–CH2–。
8.权利要求1－7中任一项的化合物，其中L2选自–(CH2)–、*2–CH2C(O)NH–、*2–(CH2)2O–和*2–(CH2)2NH–；其中“*2”表示L2与N的连接点。
9.权利要求1－8中任一项的化合物，其中L2为–CH2–。
10.权利要求1－9中任一项的化合物，其中每个R2独立为氟或甲基。
11.权利要求1－10中任一项的化合物，其中每个R3独立选自氢、氟、氯和甲基。
12.权利要求1－10中任一项的化合物，其中：
Z1选自CH、CF、CCH3和N；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
Z4为CH或N。
13.权利要求1的化合物或其可药用的盐，其中所述化合物为式(IV)化合物：
其中：
每个苯基环任选被1－2个由R2独立代表的取代基进一步取代，其中R2为氟或甲基；
L2选自–CH2–、*2–CH2CH2NH–、*2–CH2CH2O–和*2–CH2C(O)NH–，其中“*2”表示L2与N的连接点；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3。
14.权利要求1－13中任一项的化合物或其可药用的盐，所述化合物选自：
4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
4-氟-3-(2-(1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(N-(2-氟苄基)-1,8-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(N-(2-氟苄基)-1,6-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(7-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(7-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(6,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1,7-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1,6-二甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-6-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
4-氟-3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(7,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(7,8-二氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(N-苄基-7,8-二氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
4-氟-3-(2-(8-氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
4-氟-3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹啉-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
4-氟-3-(2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-f]喹啉-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
(S)-4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)丙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[g]吲唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-7-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
4-氟-3-(2-(N-(3-氟苄基)-1,5,5-三甲基-4,5-二氢-1H-苯并[g]吲唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
4-氟-3-(2-(N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(N-苄基-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(9-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-苯并[2,3]氧杂并[4,5-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-5-氟苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-甲基苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-2,2-二甲基丙酸；
1-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)甲基)环丙烷甲酸；
4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；
4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；
N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-甲基苯甲酸；
4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二甲基苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-4-氟苯甲酸；
4-(2-(8-氯代-N-(环戊基甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二甲基苯甲酸；
4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二氟苯甲酸；
4-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸；
4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二氟苯甲酸；
3,5-二氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；
4-(2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3,5-二氟苯甲酸；
4-(2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；
4-(2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；
4-(2-(N-苄基-7,8-二氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；
3-氟-4-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；
4-(2-(7,8-二氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；
4-(2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；
3-氟-4-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；
4-(2-(7,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)-3-氟苯甲酸；
3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-((2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
3-((2-(8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
4-氟-3-((2-(8-氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；
3-((2-(7,8-二氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
4-氟-3-((2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；
4-氟-3-((2-(N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；
3-((2-(N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
3-((2-(N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
3-((2-(7,8-二氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
3-((2-(N-苄基-7,8-二氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；
4-((8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(3,5-二氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((N-苄基-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；
4-((8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(2,3-二氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(3-氟-5-甲基苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((N-(3,5-二氟苄基)-8-氟-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；
3-氟-4-((8-氟-1-甲基-N-(3-甲基苄基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((N-((1H-吲哚-5-基)甲基)-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
5-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)吡啶甲酸；
4-((8-氯代-N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-((5-氯代吡啶-3-基)甲基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-氟苯甲酸；
4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-氟苯甲酸；
N-苄基-N-(4-氨基甲酰基苄基)-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺；
4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸；
3-氟-4-((8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-3-氟苯甲酸
4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-氟苯甲酸；
6-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)烟酸；
5-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)-6-甲基吡啶甲酸；
4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；和
3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸。
15.权利要求1的化合物或其可药用的盐，所述化合物选自：
4-氟-3-(2-(8-氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
4-氟-3-(2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(7-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)苯甲酸；
3-(2-(7,8-二氟-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙酰胺基)-4-氟苯甲酸；
3-(2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸；
3-((2-(8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸；
3-((2-(8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氟苯甲酸；
4-((N-苄基-8-氯代-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(2-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((8-氯代-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；和
4-氟-3-((2-(8-氟-N-(3-氟苄基)-1-甲基-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺基)乙基)氨基)苯甲酸。
16.式(V)化合物：
其中每个苯基环任选被1－2个由R2独立代表的取代基进一步取代，其中R2为氟或甲基；
L2选自–CH2–、*2–CH2CH2NH–、*2–CH2CH2O–和*2–CH2C(O)NH–，其中“*2”表示L2与N的连接点；
Z2选自CH、CF、CCl和CCH3；
Z3选自CH、CF、CCl和CCH3；并且
R6为C1-6烷基。
17.药用组合物，该药用组合物包含治疗有效量的权利要求1－16中任一项的化合物或其可药用的盐和可药用的载体。
18.组合产品，该组合产品包含治疗有效量的权利要求1－16中任一项的化合物或其可药用的盐和第二种治疗药物。
19.治疗个体由法尼醇X受体(FXR)介导的疾病的方法，该方法包括给予所述个体治疗有效量的权利要求1－16中任一项的化合物或其可药用的盐以及任选与之组合的第二种治疗药物。
20.权利要求1－16中任一项的化合物或其可药用的盐以及任选与之组合的第二种治疗药物，用于治疗由FXR介导的疾病。
21.权利要求1－16中任一项的化合物或其可药用的盐以及任选与之组合的第二种治疗药物在制备用于在个体中治疗由FXR介导的疾病的药物中的用途。
22.权利要求20的用途中的化合物或者权利要求21中的化合物在制备药物中的用途，其中所述由FXR介导的疾病为肝脏疾病或胃肠道疾病。
23.权利要求22的用途中的化合物或者权利要求22中的化合物在制备药物中的用途，其中所述由FXR介导的疾病为选自下列的肝脏疾病：肝内胆汁淤积、雌激素诱导的胆汁淤积、药物引起的胆汁淤积、妊娠胆汁淤积、肠外营养相关的胆汁淤积、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、Alagille综合征、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎、ductopenic肝移植排斥、肝移植相关的移植物抗宿主病、囊肿性纤维化肝脏疾病、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、酒精性肝病和肠胃外营养相关的肝脏疾病。
24.权利要求22的用途中的化合物或者权利要求22中的化合物在制备药物中的用途，其中所述由FXR介导的疾病为选自下列的胃肠道疾病：初级胆汁酸腹泻、次级胆汁酸腹泻、胆汁返流性胃炎以及炎性肠病。
25.权利要求20的用途中的化合物或者权利要求21中的化合物在制备药物中的用途，其中所述由FXR介导的疾病为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
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