CN114008040A

CN114008040A - 用于调节fxr的化合物

Info

Publication number: CN114008040A
Application number: CN202080043051.6A
Authority: CN
Inventors: 张军波; 朱曙灏; 齐晓昕
Original assignee: Nanjing Ruijie Pharma Co ltd
Current assignee: Nanjing Ruijie Pharma Co ltd
Priority date: 2019-06-14
Filing date: 2020-06-12
Publication date: 2022-02-01
Anticipated expiration: 2040-06-12
Also published as: CN114008040B; US20220227745A1; WO2020249064A1

Abstract

本发明涉及一种式(I)化合物，或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐，其中，所述基团如定义所示；以及其组合物，其具有良好的调节法尼醇X受体(FXRs)活性的作用。

Description

用于调节FXR的化合物

技术领域

本发明涉及药物化学、药理学和医学领域。具体地，本发明涉及用于调节法尼醇X受体(FXRs)活性的新型化合物。

背景技术

法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR)是核激素受体超级家族成员之一，主要在肝脏、肾脏和肠道中表达(参见，例如，Seol等人(1995)Mol.Endocrinol.(《分子内分泌学》)9:72-85和Forman等人(1995)Cell(《细胞》)81:687-693)。它与类视黄醇X受体(RXR)一起作为异二聚体发挥作用，并与靶基因启动子中的反应元件结合，以便调节基因转录。FXR-RXR异二聚体以最高亲和力与倒位重复-1(IR-1)反应元件结合，其中共有的受体结合六聚体由一个核苷酸分离。FXR因为被胆汁酸(胆固醇代谢的最终产物)激活，所以构成了相关过程的一部分(参见，例如，Makishima等人(1999)Science(《科学》)284:1362-1365，Parks等人(1999)Science(《科学》)284:1365-1368，Wang等人(1999)Mol.Cell(《分子细胞》).3:543-553)，用于抑制胆固醇分解代谢。另见Urizar等人(2000)J.Biol.Chem.(《生物化学杂志》)275:39313-39317。

FXR是胆固醇内稳态、甘油三酯合成和脂肪生成的关鍵调节剂。(Crawley,ExpertOpinion Ther.Patents(《治疗术专利专家评论》)(2010),20(8):1047-1057)。除了治疗血脂异常之外，已对FXR的多种适应症进行了介绍，包括治疗肝病、糖尿病、维生素D相关疾病、药物诱发的副作用和肝炎。(Crawley，同上)。

奥贝胆酸(obeticholic acid，6α-乙基-鹅去氧胆酸，缩写为OCA，又称INT-747)由Intercept公司开发，是美国食品及药物管理局(FDA)于2016年5月31日批准的第一种FXR激动剂。它是天然胆汁酸鹅去氧胆酸的类似物。在临床研究中，OCA在原发性胆汁性肝硬化(PBC)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)受试者中均显示出疗效；然而，OCA治疗可能会伴随瘙痒增加。在PBC受试者或NASH受试者中，以5mg-50mg的剂量对OCA进行了测试。GSK开发的GW4604(WO2000037077)是一种异恶唑FXR激动剂，其对FXR具有强激动活性，但对光不稳定，而且生物利用度较低。LY-2562175(WO2009012125A1)是一种新型强效、具有选择性、不完全的FXR激动剂，其最初由礼来制药厂(Eli Lilly)开发，后来被授权给TERN并重新编号为TERN-101，LY-2562175不会促进其他核受体的转录激活，而是在提高临床前物种中的高密度脂蛋白(HDL)的同时，降低低密度脂蛋白(LDL)和甘油三酯。PX-I04(W02011020615Al)也是一种异恶唑FXR激动剂，其最初由菲尼克斯公司(Phenex)开发，后来被授权给吉利德公司(Gilead)。目前正处于临床II期。Tropifexor，又称LJN-452(WO2012087519A1)，是一种非甾体FXR激动剂，目前正处于临床II期，用于治疗NASH、脂肪肝和原发性胆汁性胆管炎，并且预期在2019年完成。它最初由诺华制药公司(Novartis Pharmaceuticals)开发，后来被授权给辉瑞公司(Pfizer)进行合作研究和开发。2016年，诺华公司发布了LJN452的第一批临床数据(95人)，结果令人满意。在高达3mg的单剂量下，LJN452在安全性和耐受性方面表现良好。未观察到药物相关的不良反应。多次剂量之后，未观察到药物相关的瘙痒。在个体受试者中ALT/AST增加，但这未引起临床后遗症。其他正在开发的FXR激动剂包含LMB-763、GS-9674、TERN-101、MET-409等等。

尽管已在开发新型FXR激动剂方面取得了进展，但仍有很大的改进空间。本发明的目的在于提供作为FXR的激动剂或部分激动剂的新型化合物，其展现出比已知FXR激动剂更优的物理化学、体外和/或体内ADME(吸附、分配、代谢和排泄)特性，和/或出众的体内药代动力学。

发明内容

本发明提供了一种式(I)化合物：

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐；

R¹、R²和R³独立地选自H、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、或环丙基；

R⁴选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基或任选被C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基取代的环丙基；

R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；

A选自C＝O或CR⁷R⁸；

R⁷和R⁸独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

B是CH或N；

E环是取代的或未被取代的6-8元杂环或桥连杂环；

Ar是亚苯基、C_5-7环亚烷基或含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-14元单环或双环杂芳基；其中每个任选被R¹⁰和R¹¹取代，

R¹⁰和R¹¹独立地选自H、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、或环丙基；

m是0或1。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I)定义，其中，R¹、R²和R³独立地选自H、Cl、F、CH₃、OCF₃、CF₃和OMe。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I)定义，其中，R⁴是C_1-3烷基或环丙基。

更特别地，其中，R⁴是环丙基、甲基或异丙基。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I)定义，其中，R⁵和R⁶独立地选自H或Me。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I)定义，其中，R⁷和R⁸独立地选自H或Me。

在一些实施方案中，其中，Ar是亚苯基、亚吡啶、亚嘧啶、亚吡嗪、亚哒嗪、亚噻唑、苯并噻唑基、苯并[d]异噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹啉基、1H-吲哚基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并[d]异恶唑基、喹唑啉基、1H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基；其中每个任选被R¹⁰和R¹¹取代，R¹⁰和R¹¹独立地选自H、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基或环丙基。

更特别地，其中，Ar选自亚苯基、苯并噻唑基、喹啉基、1H-吲哚基、1H-吲唑基，其中每个任选被0-2个Me或F基团取代。

更特别地，其中，Ar是亚苯基或选自以下结构：

在一些实施方案中，其中，E环选自任选被0-2个Me基团取代的以下结构：

更特别地，其中，E环选自以下结构：

在一些实施方案中，其中，E环选自以下结构：

在一些实施方案中，其中，所述化合物选自由以下构成的组：

其中，R¹、R²和R³独立地选自H、Cl、F、CH₃、OCF₃、CF₃和OMe；R⁴是环丙基或异丙基；

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐。

特别优选的如上所定义的式(I)化合物选择以下一种结构：

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了一种式(I')化合物:

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐；

R¹、R²和R³独立地选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、或环丙基；

R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；

A选自C＝O、CR⁷R⁸、O或NR⁹；

R⁷和R⁸独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R⁹选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

B是CR¹³或N；

D是CR¹⁴或N；

E环是取代的或未被取代的6-8元杂环或桥联杂环；D和B是E环上的原子或基团。

R¹²选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R¹³选自H、OH、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R¹⁴选自H、OH、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基。

m是0或1。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中

A选自C＝O或CR⁷R⁸；

B是CR¹³或N；

D是N；

R¹²是H；

R¹³是H。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中

A选自O或NMe；

B是CR¹³或N；

D是N或CH；

R¹²是H或Me；

R¹³是H或OH。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中，R¹、R²和R³独立地选自H、Cl、F、CH₃、OCF₃、CF₃和OMe。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中R⁴是C_1-3烷基或环丙基，更特别地，其中，R⁴是环丙基、甲基或异丙基。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中，R⁵和R⁶独立地选自H或Me。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中R⁷和R⁸独立地选自H或Me。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中R⁹选自H、Me、Et、正丙基或异丙基；R¹²和R¹³独立地选自H、Me、Et、正丙基或异丙基。

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中，Ar选自取代的或未被取代的亚苯基、亚吡啶、亚嘧啶、亚吡嗪、亚哒嗪、亚噻唑、苯并噻唑基、苯并[d]异噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹啉基、1H-吲哚基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并[d]异恶唑基、喹唑啉基、1H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基；其中每个任选被选自H、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、或环丙基的R¹⁰和R¹¹取代。

更特别地，其中，Ar是亚苯基或选自以下结构：

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中E环选自任选被0-2个OH或Me基团取代的以下结构：

更特别地，其中，E环选自以下结构：

在一些实施方案中，本发明化合物由式(I')定义，其中所述化合物选自以下结构：

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐。

本发明化合物是FXR的激动剂。本发明还提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的本发明化合物和药学上可接受的载体。

本发明还提供了一种组合，其包括治疗有效量的本发明的化合物，用于治疗胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。

本发明还提供了一种用于在患有FXR介导的病状的受试者中治疗FXR介导的病状的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药物组合物。

包括根据本发明的化合物的药物组合物在治疗由FXR介导的病状中的用途。

本发明的任一化合物或其药物组合物用于制备用于治疗受试者中由FXR介导的病状的药物的用途。

其中，所述病症为胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。

定义

出于解释本说明书的目的，以下定义将适用，并在适当的情况下，以单数形式使用的术语也将包含复数形式，反之亦然。

如本文所用，“C_1-6烷基”表示具有1至6个、特别是1至4个碳原子的烷基基团，这些基团是直链基团或具有单分支或多分支的支链基团；例如，丁基，诸如正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基；丙基，诸如正丙基或异丙基；乙基或甲基；更特别地，甲基、丙基或叔丁基。“C_1-3烷基”是指如本文所定义的含有一至三个碳原子的烷基基团。

如本文所用，术语“亚烷基”是指如本文以上所定义的具有指定数量碳原子的二价烷基基团。亚烷基的代表性示例包括但不限于：亚甲基、乙烯、正丙烯、异丙烯、正丁烯、仲丁烯、异丁烯、叔丁烯等。

如本文所用，“芳基”是指在环部具有6-20个碳原子的芳烃基团。通常，芳基是具有6-20个碳原子的单环、双环或三环芳基。此外，如本文使用的术语“芳基”是指可以是单个芳族环或稠合在一起的多个芳族环的芳族取代基；并且可以涵盖单价和二价芳基，这对本领域技术人员而言是显而易见的。非限制性示例包括苯基、亚苯基、萘基、亚萘基、四氢萘基或四氢萘基。

如本文所用，“杂芳基”是指具有1至8个碳原子的5-14元单环或双环或三环芳族环系。通常，杂芳基是5-10元环系(例如，5-7元单环或8-10元双环)或5-7元环系。此外，如本文所用的术语“杂芳基”可以涵盖单价或二价杂芳基，这对本领域技术人员而言是显而易见的。典型的单环杂芳基基团包括2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-、4-或5-咪唑基、3-、4-或5-吡唑基、2-、4-、或5-噻唑基、3-、4-、或5-异噻唑基、2-、4-、或5-恶唑基、3-、4-、或5-异恶唑基、3-或5-1,2,4-三唑基、4-或5-1,2,3-三唑基、四唑基、2-、3-或4-吡啶基、3-或4-哒嗪基、3-、4-或5-吡嗪基，2-吡嗪基、2-、4-或5-嘧啶基，以及其单价或二价形式。典型的双环杂芳基基团包括苯并呋喃基、苯并[d]异噻唑基、苯并[d]异恶唑基、苯并噻唑基、苯并[b]噻吩基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、1H-吲唑基、1H-吲唑基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、1H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、喹唑啉基等，以及其单价或二价形式。

如本文所用，“C_1-6烷氧基”是指C_1-6烷基-O-，并且特别是甲氧基、乙氧基、异丙氧基或叔丁氧基。

如本文所用，“卤素”或“卤代”是指氟代、氯代、溴代和碘代；并且更特别是氟代或氯代。

如本文所用，“C_1-6卤代烷基”是指被一个或多个如上所定义的卤代基团取代的如上所定义的烷基基团，并且特别是C_1-6氟代烷基，更特别是三氟甲基。

如本文所用，“C_1-6卤代烷氧基”是指被一个或多个如上所定义的卤代基团取代的如上所定义的烷氧基基团，并且特别是C_1-6氟代烷氧基，更特别是三氟甲氧基或二氟甲氧基。

如本文所用，“立体异构体”是指由相同的原子通过相同的键结合而构成的化合物，但三维结构不同且不可互换。本发明考虑了各种立体异构体及其混合物并包括“对映异构体”，对映异构体是指分子为彼此的不可重叠的镜像图像的两个立体异构体。

a)如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐类、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等，以及其组合，如本领域技术人员所了解的(参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences(《雷明登氏药学全书》)，第18版Mack Printing Company(麦克印刷公司)，1990，第1289-1329页)。任何常规载体除非与活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗或药物组合物中。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物足以实现所述效果的量。相应地，用于治疗由FXR介导的病状的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物的治疗有效量将是足以治疗由FXR介导的病状的量。

如本文所用，术语“受试者”是指动物。通常，上述动物是哺乳动物。受试者还指例如灵长类动物(例如，人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔子、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，受试者是灵长目动物。在其他实施例中，受试者是人。

如本文所用，术语“治疗”(treat，treating或treatment)任何疾病或病症在一个实施方案中是指减轻疾病或病症(即，减缓或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”是指缓解或减轻至少一种身体参数，包括那些患者可能无法辨别的参数。在又一个实施方案中，“治疗”是指在身体上(例如，稳定可辨别的症状)、心理上(例如，稳定身体参数)或二者调节疾病或病症。在又一个实施方案中，“治疗”是指预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展。

如本文所用，如果受试者将在生物学上、医学上或生活质量上从治疗获益，受试者则需要此类治疗。

如本文所用，术语“血脂异常”是指血液中的脂质和脂蛋白出现的异常或数量异常，以及此类异常引起、导致、加重或伴随的疾病状态(参见Dorland's IllutratedMedical Dictionary(《道兰氏图解医学词典》)，29版，W.B.Saunders Publishing Company(桑德斯出版公司)，纽约州纽约市)。如本文所用的血脂异常的定义所涵盖的疾病状态包括动脉粥样硬化、高甘油三酯血症、低血浆高密度脂蛋白(HDL)、高血浆低密度脂蛋白(LDL)、高血浆极低密度脂蛋白(VLDL)、肝脏胆汁淤积和高胆固醇血症。

如本文所用，如本文使用的短语“血脂异常相关疾病”是指包括但不限于动脉粥样硬化、血栓形成、冠状动脉疾病、中风和高血压的疾病。与血脂异常相关的疾病还包括代谢疾病，诸如肥胖症、糖尿病、胰岛素耐受性以及其并发症。

如本文所用，术语“胆汁淤积”是指胆汁从肝脏流出受阻的任何病状，并且可能是肝内胆汁淤积(即发生在肝脏内)也可能是肝外胆汁淤积(即，发生在肝脏外)。

如本文所用，“肝纤维化”包括由任何原因引起的肝纤维化，包括但不限于：病毒诱发的肝纤维化，诸如由乙型肝炎和丙型肝炎引起；接触酒精(酒精性肝病)、药物化合物、氧化应激、癌症放射疗法或工业化学品；以及诸如原发性胆汁性肝硬化、脂肪肝、肥胖症、非酒精性脂肪性肝炎、囊性纤维化、血色沉着病和自身免疫性肝炎之类的疾病。

如本文使用的“FXR激动剂”是指直接与FXR结合并上调其活性的药剂。

a)如本文所用，除非本文另有指明或与上下文明显矛盾，否则在本发明上下文中(特别是在权利要求的上下文中)使用的术语“一”、“一个”和“所述”以及类似术语应被解释为涵盖单数和复数。

本文使用的化学命名协议和结构图采用并依赖Chem Draw程序(可从马萨诸塞州剑桥Cambridge Soft Corp.(剑桥软件公司)获得)所采用的化学命名特征。特别地，化合物结构和名称使用Chemdraw Ultra(10.0版)和/或Chem Axon名称生成器(J Chem 5.3.1.0)获得。

具体实施方式

本发明涉及可用于调节FXR活性的化合物和组合物。本文描述本发明的各个实施方案。将认识到，在每个实施例中详细说明的特征可以和其他具体说明的特征组合来提供进一步的实施方案。

一方面，本发明化合物由式(I)定义：

或其立体异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或氨基酸缀合物；

R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；

A选自C＝O或CR⁷R⁸；

R⁷和R⁸独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

B是CH或N；

E环是取代的或未被取代的6-8元杂环或桥连杂环；

m是0或1。

另一方面，本发明化合物由式(I')定义：

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐；

R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；

A选自C＝O、CR⁷R⁸、O或NR⁹；

R⁷和R⁸独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R⁹选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

B是CR¹³或N；

D是CR¹⁴或N；

E环是取代的或未被取代的6-8元杂环或桥连杂环；

R¹²选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R¹³选自H、OH、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R¹⁴选自H、OH、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

m是0或1。

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括式I、I'和(I-A)至(I-G)的化合物和药学上可接受的载体。本发明还提供了一种用于治疗由FXR介导的病状的药物组合物，其包括式I和(I-A)至(I-G)的化合物。

在体外无细胞激酶试验中测试时，式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物及其药学上可接受的盐展现出重要的药理学特性，并因此可有效作为药品使用。特别地，本发明化合物是FXR的激动剂，并且可有效作为药品用于治疗FXR介导的病状，诸如，胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长、勃起功能障碍、由以上任一疾病或由传染性肝炎导致的进行性肝纤维化、或其他造成肝外胆汁淤积的FXR介导的病状。本发明化合物还可用于降低总胆固醇，降低低密度脂蛋白胆固醇、降低极低密度脂蛋白胆固醇，提高高密度脂蛋白水平和/或降低甘油三酯水平。

在另一方面，本发明提供了用于在细胞中调节FXR的方法，该方法包括使细胞与有效量的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物或其药物组合物接触。

在另一方面，本发明提供了用于在患有FXR介导的病状的受试者中治疗、改善或预防FXR介导的病症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物或其药物组合物，并任选地与第二治疗剂组合。本发明还提供了式I、式I'和(I-A)至(I-G)的化合物并任选地结合第二治疗剂在制造用于治疗FXR介导的病状的药剂中的用途，FXR介导的病状诸如胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。

在又一方面，本发明提供了一种组合，其包括治疗有效量的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物，以及可用于治疗上述FXR介导的病状病症的第二治疗剂。

除非另有说明，否则术语“本发明化合物”是指式I、式I’和(I-A)至(I-G)化合物、其前药、该化合物的盐类和/或前药、该化合物的水合物或溶剂化物、盐类和/或前药、以及所有的立体异构体(包含非对映异构体和对映异构体)、互变异构体和同位素标记的化合物(包含氘取代物)、以及固有而形成的部分(例如，多形体、溶剂化物和/或水合物)。

本文描述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并因此可以产生对映异构体、非对映异构体、以及可以在绝对立体化学方面定义为(R)-或(S)-的其他立体异构形式。本发明意在包含有所可能的异构体，包含外消旋混合物、光学纯形式和中间混合物。可选地，活性(R)-或(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备或使用常规技术分解。如果该化合物含有双键，取代基可以是E或Z构型。如果该化合物含有双取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式构型或反式构型。还旨在包含所有互变异构形式。

本文给出的任何化学式也旨在表示化合物的未标记形式及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文给出的化学式所描绘的结构，其中一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替换的情况除外。可并入本发明化合物的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，诸如分别为²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl和¹²⁵I。本发明包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中存在诸如³H、¹³C和¹⁴C之类的放射性同位素的那些化合物。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(使用¹⁴C)、反应动力学研究(使用例如²H或³H)、检测或成像技术(诸如包括药物或基体组织分布测定的正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT))、或患者的放射治疗。特别地，¹⁸F或标记的化合物可能特别适用于PET或SPECT研究。本发明的同位素标记的化合物及其前药一般可以通过实施方案或实施例中公开的步骤和以下描述的制备方法，通过用易获得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂进行制备。

进一步的，用更重的同位素、特别是氘(即，²H或D)取代，由于代谢稳定性更高，可以提供某些治疗优势，例如延长体内半衰期或降低剂量要求或提高治疗指数。应当理解，在这种情况下，氘被视为式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物的取代基。这种较重同位素(特别是氘)的浓度可以由同位素富集因子定义。如本文使用的术语“同位素富集因子”意指特定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明化合物中的取代基表示氘，该化合物针对每个指定氘原子的同位素富集因子为至少3500(每个指定氘原子为52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)、或至少6633.3(99.5％氘掺入)。

同位素标记的式I、式I’和(I-A)至(I-Y)的化合物一般可以通过本领域技术人员已知的常规技术制备，或通过与所附实施例和方法中描述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂替代以前采用的未标记的试剂进行制备。

根据本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些溶剂合物，例如被同位素取代的溶剂合物，例如D₂O、d⁶-丙酮、d⁶-二甲基亚砜(DMSO)。

本发明化合物，即含有能够用作氢键的供体和/或受体的基团的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物，可以与合适的共晶形成剂形成共晶。这些共晶可以通过已知的共晶形成程序由式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物制备。此类程序包括研磨、加热、共升华、共融、或在结晶条件下使式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物在溶液中与共晶形成剂接触并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成剂包括WO 2004/078163中描述的那些共晶形成剂。因此，本发明还提供了包括式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物的共晶。

本发明的一种或多种化合物的任何不对称原子(例如，碳原子等)能够以外消旋构型或对映体富集构型存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施方案中，每个不对称原子在(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％对映体过量、或至少99％对映体过量。如果可以，具有不饱和键的原子上的取代基能够以顺式-(Z)-或反式-(E)-的形式存在。

相应地，如本文所用，本发明化合物可以是以下一种形式：异构体、选择异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物，例如，作为基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、旋光异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。任何得到的异构体混合物都可以基于成分的理化差异，例如通过色谱法和/或分级结晶，分离成纯的或基本上纯的几何或旋光异构体、非对映异构体、外消旋体。最终产物和中间体的任何所得外消旋体可以通过已知方法解离成旋光对映体，例如，通过分离其使用旋光酸或碱获得的非对映体盐，并释放出旋光酸性或碱性化合物。特别地，因此可以采用碱性部分将本发明化合物解离成其旋光对映体，例如，通过对使用旋光酸形成的盐进行分级结晶，旋光酸例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二-0,0’-对甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消旋产物也可以通过手性色谱法解离，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC)。

药理学和效用

游离形式或盐形式的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物展现出重要的药理学特性，例如，如在接下来的部分提供的体外和/或体内试验中所指出的FXR调节特性，因此表明其适用于治疗可以通过调节FXR进行治疗的病症的疗法，诸如下文所述的那些。

FXR调节肝脏中对多种生理过程产生影响的反应基因的复杂模式。FXR通过上调编码SHP的mRNA，抑制Cyp7Al的诱导，SHP是对LRH-1起主要抑制作用的另外的核受体。与通过SHP抑制胆汁酸合成并行，FXR诱导一些列所谓的ABC(ATP结合盒)转运蛋白，这些转运蛋白负责将有毒胆汁酸从肝细胞胞质溶胶导出到微管(即产生胆汁的小胆管分支)中。FXR的这种保肝作用在分析FXR基因敲除小鼠时首次变得明朗，其中显示肝脏中的几种ABC转运蛋白出现低表达或过表达(Sinai等人,Cell(《细胞》)2000,102(6),731-744)。进一步的详细分析表明，主要的胆汁盐排泄泵(BSEP)或ABCB11，以及介导脂质从脂蛋白向磷脂转移的关键的酶PLTP，以及磷脂的两个关键微管膜转运蛋白MRP-2(ABCC4)和MDR-3(ABCB4)，都是FXR进行配体定向转录激活的直接靶标。FXR似乎在胆汁酸的合成、导出和再循环中充当主要的代谢物传感器和调节剂，这一事实表明可使用FXR配体诱导胆汁流动并将胆汁酸组成更改为更具亲水性的组成。

随着作为工具化合物的第一个合成FXR配体GW4064的开发(Maloney等人,J.Med.Chem.(《生物化学杂志》)2000,43(16),2971-2974；Willson等人,Med.Res.Rev.(《医学研究评论》)2001,21(6)513-22),并随着半合成人工胆汁酸配体6-α-乙基-鹅去氧胆酸(CDCA)的开发，可以针对强效激动剂对FXR的过度刺激开展效应分析。结果显示，两种配体均在胆管结扎动物中诱导了胆汁流动。除了利胆作用，还可以证实具有保肝作用(Pellicciari等人,J.Med.Chem.(《生物化学杂志》)2002,45(17),3569-3572；Liu等人,J.Clin.Invest.(《临床调查杂志》)2003,112(11),1678-1687)。这种保肝作用进一步缩小为抗纤维化(antI-Gibrotic)作用，具体表现在通过FXR激动剂，抑制基质金属蛋白酶组织抑制物TIMP-1和2，在肝脏星状细胞中诱导胶原沉积分解性基质金属蛋白酶2(MMP-2)，并且随后减少α胶原蛋白mRNA和转化生长因子β(TGF-β)mRNA，二者均为促纤维化因子(Fiorucci等人,Gastroenterology(《肠胃病学》)2004,127(5),1497-1512；Fiorucci等人,Pharmacol.Exp.Ther.(《药理学实验治疗杂志》)2005,314(2),584-595)。

FXR的抗纤维化活性至少部分通过诱导PPARy而介导，PPARy是另一种核受体，与抗纤维化活性相关(Fiorucci等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.(《药理学实验治疗杂志》)2005,315(1),58-68；Galli等人,Gastroenterology(《肠胃病学》)2002,122(7),1924-1940；Pineda Torra等人,Mol.Endocrinol.(《分子内分泌学》)2003,17(2),259-272)。此外，在胆管结扎动物模型中以及在雌激素诱导胆汁淤积的动物模型中，均证实了存在抗胆汁淤积活性(Fiorucci等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.(《药理学实验治疗杂志》)2005,313(2),604-612)。

遗传研究表明，在胆汁淤积的遗传形式上(进行性家族性肝内胆汁淤积，PFIC，I-IV型)，由于FICl基因突变(在PFIC I型中，又称拜勒病)，FXR本身的核定位减少(Chen等人,Gastroenterology(《肠胃病学》).2004,126(3),756-64；Alvarez等人,Hum.Mol.Genet.(《人类分子遗传学》)2004；13(20),2451-60)，或者编码MDR-3磷脂输出泵的FXR靶基因水平下降(在PFIC III型中)。综合起来，越来越多的证据表明，FXR结合化合物将在诸如原发性胆汁性肝硬化(PBC)或原发性硬化性胆管炎(PSC)等慢性胆汁郁积症的治疗方案中彰显出重大的临床效用(综述于:Rizzo等人,Curr.Drug Targets ImmuneEndocr.Metabol.Disord.(《目前药物靶标-免疫、内分泌和代谢紊乱》)2005,5(3),289-303；Zollner,Mol.Pharm.(《分子药理学》)2006,3(3),231-51，Cai等人,ExpertOpin.Ther.Targets(《治疗靶点专家评论》)2006,10(3),409-421)。

此外，FXR似乎参与了许多不同生理过程的调节，这些生理过程与病因和各种疾病的治疗有关，如胆固醇系结石、代谢紊乱(诸如，II型糖尿病、血脂异常或肥胖症)、慢性炎性疾病(诸如炎性肠病或慢性肝内形式的胆汁淤积)以及许多其他疾病(Claudel等人,Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.(《动脉硬化、血栓形成和血管生物学》)2005,25(10),2020-2030；Westin等人,Mini Rev.Med.Chem.(《生物化学杂志》)2005,5(8),719-727)。

胆固醇系结石的形成是由于低溶解度的胆固醇从肝细胞被主动泵出到微管腔中。胆汁酸、磷脂和游离胆固醇这三种主要成分的相对百分比决定了混合胶束的形成并由此决定了游离胆固醇在胆汁中的表观溶解度。FXR多态性将数量性状座位映射为造成胆结石病的一种因子(Wittenburg,Gastroenterology(《肠胃病学》)2003,125(3),868-881)。使用合成的FXR工具化合物GW4064，可以证实激活FXR改善了胆固醇饱和指数(CSI)并直接消除了C57L胆结石易感小鼠中胆结石的形成，而FXR基因敲除小鼠的药物治疗显示对胆结石的形成没有影响(Moschetta等人,Nature Medicine(《自然医学》)2004,10(12),1352-1358)。这些结果表明FXR可作为良好靶标，用于开发可用于预防胆固醇系结石形成或预防手术切除或冲击波碎石术后胆结石再次形成的小分子激动剂(论述于：S.Doggrell"New targets inand potential treatments for cholesterol gallstone disease"(胆固醇系结石病的新靶标和潜在治疗)Curr.Opin.Investig.Drugs(《药物调研新见》)2006,7(4),344-348)。

FXR也被证明是一种关键的血清甘油三酯调节剂(Maloney等人,J.Med.Chem.(《生物化学杂志》)2000,43(16),2971-2974；Willson等人,Med.Res.Rev.(《医学研究评论》)2001,21(6),513-22)。最近的报告指出，通过合成激动剂激活FXR显著减少了血清甘油三酯，主要表现为超低密度脂蛋白减少，还降低了血清总胆固醇(Kast等人,Mol.Endocrinol.(《分子内分泌学》)2001,15(10),1720-1728；Urizar等人,Science(《科学》)2002,296(5573),1703-1706；Lambert等人,J.Biol.Chem.(《生物化学杂志》)2003,278,2563-2570；Watanabe等人,J.Clin.Invest.(《临床研究杂志》)2004,113(10),1408-1418；Figge等人,J.Biol.Chem.(《生物化学杂志》)2004,279(4),2790-2799；Bilz等人,Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.(《美国生理内分泌和新陈代谢杂志》)2006,290(4),E716-22)。

然而，降低血清甘油三酯并非一个单独的效果。使用合成的FXR激动剂GW4064治疗db/db或ob/ob小鼠，明显导致血清甘油三酯、总胆固醇、游离脂肪酸、酮体(诸如3-OH丁酸盐)联合降低。而且，FXR激活与肝细胞中的细胞内胰岛素信号传导通路相结合，减少了肝脏葡糖异生的葡萄糖输出，但伴随着肝脏糖原的增加。通过FXR治疗，胰岛素敏感度以及葡萄糖耐量均受到积极影响(Stayrook等人,Endocrinology(《内分泌学》)2005,146(3),984-91；Zhang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(《美国国家科学院院刊》)2006,103(4),1006-1011；Cariou等人,J.Biol.Chem.(《生物化学杂志》)2006,281,11039-11049；Ma等人,J.Clin.Invest.(《临床研究杂志》)2006,116(4),1102-1109；Duran-Sandoval等人,Biochimie(《生物化学》)2005,87(1),93-98)。

最近，在过度喂食高脂食物的小鼠中，还观察到存在减轻体重的作用(Lihong等人,美国糖尿病协会(ADA)第66届科学年会,2006年6月,摘要编号856-P)。这种减轻体重的作用可能是由于FXR诱导FGF-19所致，FGF-19是一种已知可导致体重减轻并具有运动表型的纤维母细胞生长因子(Holt等人,Genes Dev.(《基因与发育》)2003,17(13),1581-1591；Tomlinson等人,Endocrinology(《内分泌学》)2002,143(5),1741-1747)。综合看来，FXR结合化合物由于其胰岛素敏化作用、糖原生成(glycogenogenic)作用和降脂作用，被认为是治疗II型糖尿病的良好候选物。

在一个实施方案中，所述化合物和药物组合物用于制备用于治疗慢性肝内胆固醇病症以及一些形式的肝外胆固醇病症，诸如原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、酒精诱发的肝硬化和伴发的胆汁淤积、或慢性胆汁淤积性病症导致的肝纤维化、或急性肝内胆汁淤积性病症，诸如雌激素或药物诱发的胆汁淤积。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物和包括所述化合物的药物组合物用于治疗II型糖尿病，其可以通过以下方式治疗：通过FXR的介导上调全身胰岛素敏感度并上调肝脏中的细胞内胰岛素信号传导，增加外周葡萄糖摄取和代谢，增加肝脏中糖原存储，减少葡萄糖因肝源性糖异生输出到血清中。

本发明还涉及式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物或包括所述化合物的药物组合物，用于治疗对膳食脂肪和脂溶性膳食维生素的摄取减少的胃肠道疾病，这种疾病可以通过增加胆汁酸和磷脂的肠道水平来医治。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物可用于有益地改变脂质分布，包括但不限于降低总胆固醇水平，降低低密度脂蛋白胆固醇水平，降低极低密度脂蛋白胆固醇水平，提高高密度脂蛋白胆固醇水平，和/或降低甘油三酯的水平。因此，本发明提供了一种用于治疗FXR介导的病症(诸如血脂异常和与血脂异常相关的疾病)的方法，该方法包括：向有需要的受试者施用有效量的本发明化合物。

在又一个实施方案中，所述化合物或药物组合物用于治疗选自由以下各项构成的组的疾病：脂质和脂蛋白紊乱，诸如高胆固醇血症、高甘油三酯血症和动脉粥样硬化，其中动脉粥样硬化作为一种临床表现病状，可以通过FXR的以下有益作用而缓解，即增加高密度脂蛋白胆固醇，减少血清甘油三酯，增加肝脏胆固醇向胆汁酸的转化，以及增加肝脏中极低密度脂蛋白和其他脂蛋白的清除和代谢转化。在又一个实施方案中，所述化合物和药物组合物用于制备一种药物，其中，可以利用FXR靶向药物的联合降脂、抗胆汁淤积和抗纤维化作用，治疗脂肪肝和伴发综合征，诸如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，或用于治疗与酒精诱发的肝硬化或病毒性肝炎相关的胆汁淤积和纤维化作用。

与降血脂作用相结合，还表明缺失功能性FXR导致ApoE基因敲除小鼠中动脉粥样硬化增加(Hanniman等人,J.Lipid Res.2005,46(12),2595-2604)。因此，FXR激动剂可以作为抗动脉粥样硬化药物和心脏保护药物发挥临床效用。血管平滑肌细胞中内皮素1的下调也可能有助于获得此类有益的治疗效果(He等人,Circ.Res.(《循环研究》)2006,98(2),192-9)。

本发明还涉及根据式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物或包括所述化合物的药物组合物，用于预防和创伤后治疗心血管疾病，诸如急性心肌梗塞、急性中风或血栓形成，这些疾病会作为慢性阻塞性动脉粥样硬化的终点发生。在一些选定的出版物中，已经对FXR和FXR激动剂对癌症和非恶性细胞的增殖和细胞凋亡的影响进行了评估。从这些初步结果中看来，FXR激动剂也可以对癌细胞系(Niesor等人,Curr.Pharm.Des.(《当今制药》)2001,7(4),231-59)以及血管平滑肌细胞(VSMC)(Bishop-Bailey等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U SA.2004,101(10),3668-3673)的细胞凋亡产生影响。

此外，FXR似乎在转移性乳腺癌细胞和结肠癌中表达(Silva,J.Lipid Res.(《脂类研究杂志》)2006,47(4),724-733；De Gottardi等人,Dig.Dis.Sci.(《消化疾病与科学》)2004,49(6),982-989)。其他主要专注于FXR对代谢影响的出版物通过叉头/无翼(FOXO)家族的转录调节剂，从FXR到三磷酸磷脂酰肌醇(PI3)-激酶/Akt信号转导通路划定了细胞内信号传导路线(Duran-Sandoval等人,J.Biol.Chem.(《生物化学杂志》)2005,280(33),29971-29979；Zhang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2006,103(4),1006-1011)，该通路类似地用于胰岛素细胞内信号传导以及肿瘤转化细胞。因此，FXR也可以作为潜在靶标用于治疗增殖性疾病，尤其是过度表达FXR的转移性癌症形式或FOXO/PI3-激酶/Akt通路负责促进增殖的癌症形状。因此，根据式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物或包括所述化合物的药物组合物适用于治疗非恶性过度增殖性病症，诸如球囊血管扩张和支架应用后由于血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖增加而导致内膜增生增加，或良性前列腺增生(BPH)(一种过度增殖的肿瘤前形式)，其他形式的疤痕组织形成或纤维化，这些可以通过例如FXR介导干预PI-3激酶/AKT/mTOR细胞内信号传导通路，降低基质金属蛋白酶活性和α胶原沉积而加以克服。

在又一个实施方案中，所述化合物和药物组合物用于治疗恶性过度增殖性病症，诸如癌症(例如某些形式的乳腺癌或前列腺癌)，其中干扰PI-3-激酶/AKT/mTOR信号传导和/或诱导p27kip和/或诱导细胞凋亡将产生有益的影响。

FXR似乎也参与了肠道中抗菌防御的控制(lnagaki等人,Proc.Natl.Acad.Sci.(《美国国家科学院院刊》)USA.2006,103(10),3920-3905)，尽管并未提供一种确切的机制。然而，从这些已发表的数据中，可以得出以下结论，用FXR激动剂治疗可以对炎性肠病(IBD)的疗法产生有益影响，特别是那些肠道上部(回肠)受影响的病症形式(例如，回肠克罗恩氏病)，因为此处似乎是FXR控制细菌生长的作用部位。在炎性肠病中，适应性免疫反应的脱敏在肠道免疫系统中受到某种程度的影响。那么细菌过度生长可能是建立慢性炎性反应的致病诱因。因此，FXR源机制抑制细菌生长可能是预防急性炎症发作的关键机制。因此，本发明还涉及根据式I和式I’的化合物或包括所述化合物的药物组合物，用于治疗与诸如克罗恩病或溃疡性结肠炎之类的炎性肠病有关的疾病。通过FXR介导恢复肠道屏障功能并减少非共生性细菌负荷，这被认为有助于减少细菌抗原暴露于肠道免疫系统，因此可以减少炎症反应。

本发明还涉及一种化合物或药物组合物，用于治疗肥胖症和伴发病症，诸如代谢综合征(血脂异常、糖尿病和体重指数异常高的合并症)，这些可以通过FXR介导而降低血清甘油三脂、血糖并增加胰岛素敏感度以及FXR介导的体重减轻而克服。

在一个实施方案中，所述化合物或药物组合物用于治疗由细胞内细菌或寄生性原生动物引起的持续感染，诸如分支杆菌(Mycobacterium spec.，治疗结核病或麻风病)、单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes，治疗李斯特菌病)，利什曼原虫(Leishmania spec.)(利什曼病)、锥体虫(Trypanosoma spec.，锥虫病；嗜眠病；昏睡症)。

在又一个实施方案中，本发明的化合物或药物组合物可用于制备治疗I型和II型糖尿病的临床并发症的药物。此类并发症的示例包括糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病变、外周动脉闭塞病(PAOD)。本发明还涵盖糖尿病的其他临床并发症。

此外，通过应用本发明的化合物或药物组合物，也可以治疗器官出现慢性脂肪变性和纤维化变性所造成的的病症和疾病，这种慢性脂肪变性和纤维化变性是由强制性脂质且具体是甘油三脂的积聚以及促纤维化通路之后被激活所致。此类病症和疾病涵盖肝脏中的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和慢性胆汁淤积病、肾脏中的肾小球硬化症和糖尿病性肾病、眼部的黄斑变性和糖尿病性视网膜病、大脑中的诸如阿尔茨海默病之类的神经退行性疾病、或外周神经系统中的糖尿病性神经病变。

施用与药物组合物

另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括本发明化合物和药学上可接受的载体。该药物组合物可以配制为特定的施用途径，诸如口服施用，肠胃外施用和直肠施用等。另外，本发明的药物组合物可以制成固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)或液态形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳液)。该药物组合物可以进行诸如灭菌之类的常规药物操作，和/或可以包含常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。

通常，该药物组合物为片剂或明胶胶囊，其包括活性成分以及

a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；同样适用于片剂

c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要

d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐，或泡腾混合物；和/或

e)吸附剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。

适于口服施用的组合物包括有效量的以下形式的本发明化合物：片剂、锭剂、水性或油型悬浮液、可分散粉剂或颗粒剂、乳液、硬质或软质胶囊、或糖浆或酏剂。

适于口服使用的组合物是根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法制备的，并且此类组合物可以含有一种或多种选自由甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂构成的组中的制剂，以便提供药学上精致可口的配制剂。片剂可以含有活性成分并掺混适于制造片剂的药学上可接受的无毒赋形剂。这些赋形剂为例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂未包衣或通过已知技术包衣，以便延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供更长时间的缓释作用。例如，可以使用延时材料，诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的配制剂可以呈现为硬质明胶胶囊的形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或呈现为软质明胶胶囊的形式，其中活性成分与水或油类介质混合，例如花生油、液体石蜡或橄榄油。

某些可注射组合物是等渗水溶液或悬浮液，并且栓剂有利地由脂肪乳液或悬浮液制备。所述组合物可以进行灭菌和/或含有佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调剂渗透压的盐类和/或缓冲剂。另外，所述组合物还可以含有其他具有治疗价值的物质。所述组合物是分别根据常规混合、制粒或包衣方法制备的，并且含有约0.1-75％、或含有约1-50％的活性成分。

适用于经皮应用的组合物包含有效量的本发明化合物及合适的载体。适用于经皮递送的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂，用于辅助穿过宿主皮肤传递。例如，经皮装置采用绷带的形式，该绷带包括背衬构件、含有该组合物及任选载体的储库、任选的速率控制隔离件以及用于将该装置固定至皮肤的器件，该速率控制隔离件用于在一段较长的时间内以受控的预定速率递送宿主皮肤的化合物。

适用于局部涂抹(例如涂抹到皮肤和眼睛)的组合物包括水溶液、悬浮液、软膏、乳膏、凝胶或可喷雾配制剂(例如，用于通过气雾剂等递送)。此类局部递送系统将特别适用于皮肤涂抹，例如用于治疗皮肤癌，例如用于防晒霜、涂剂、喷雾剂等中的预防性使用。因此，它们特别适合于本领域所熟知的外敷(包括化妆品)配制剂。此类配制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。

如本文所用，外敷应用也可以涉及吸入或鼻内应用。它们可以方便地以干粉的形式(单独使用；作为混合物，例如与乳糖的干混物，或混合组分颗粒，例如与磷脂一起使用)从干粉吸入器递送，或者在使用或不适用合适的推进剂的情况下，以气雾剂喷雾形式从加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷瓶递送。

本发明化合物的外敷或经皮施用的剂型包括粉剂、喷雾、软膏、糊剂、乳膏、涂剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。活性化合物可以在无菌条件下与药学上可接受的载体以及可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

除了本发明的活性化合物外，软膏、糊剂、乳膏和凝胶还可以含有赋形剂，诸如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌，或其混合物。

除了本发明化合物之外，粉剂和喷雾可以含有赋形剂，诸如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾可以另外含有常规推进剂，诸如氯氟烃和挥发性未被取代的烃类，诸如丁烷和丙烷。

透皮贴剂具有以受控递送的方式向身体提供本发明化合物的附加优势。此类剂型可以通过将化合物溶解或分散在适当的介质中制得。吸收促进剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。这种通量的速率可以通过提供速率控制膜或将活性化合物分散在聚合物基质或凝胶中来进行控制。

眼用配制剂、眼膏、粉剂、溶液等也视为处于本发明的范围内。

本发明还提供了包括本发明化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可以推进某些化合物的降解。本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水或低水分成分以及低水分或低湿度条件来制备。无水药物组合物能够以保持其无水性质的方式进行制备和储存。因此，无水组合物采用已知用于防止暴露于水的材料进行包装，使得其可以包含在合适的规定试剂盒中。合适的包装示例包括但不限于：密封箔、塑料、单位剂量容器(例如，小瓶)、吸塑包装、条形包装。

本发明还提供包括一种或多种制剂的药物组合物和剂型，该制剂可降低本发明化合物作为活性成分的分解速率。此类制剂在本文中称为“稳定剂”，包括但不限于诸如抗坏血酸等抗氧化剂、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。

本发明的药物组合物或组合用于约50-70kg受试者时的单位剂量可以为约1-1000mg活性成分，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg或约1-50mg的活性成分。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的物种、体重、年龄和个体状况、正在治疗的病症或疾病或其严重程度。具有普通技术的医师、临床医师或兽医可以很容易地确定预防、治疗或抑制病症或疾病进展所需的每种活性成分的有效量。

上述剂量特性可有利地使用哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴或其分离的器官、组织和其制品)在体外和体内试验中证实。本发明化合物可以以溶液(例如水溶液)的形式在体外应用，以及例如作为悬浮液或水溶液以肠内、肠胃外、有利的静脉内的方式在体内应用。体外剂量的范围可以介于10^-3摩尔和10^-9摩尔浓度之间。体内治疗有效量的范围取决于施用途径，介于约0.1-500mg/kg之间，或介于约1-100mg/kg之间。

本发明化合物可以与一种或多种其他治疗剂同时、或在之前或在之后施用。本发明化合物可以通过相同或不同的施用途径单独施用，或在同一药物组合物中与其他药剂一起施用。

在一个实施方案中，本发明提供了一种产品，其包括式I、式I’和(TA)-(I-G)的化合物和至少一种其他治疗剂，二者作为组合配制剂在疗法中同时、单独或按顺序使用。在一个实施方案中，疗法是治疗由FXR介导的疾病或病症。以组合配制剂的形式提供的产品包含一种例如试剂盒形式的组合物，该组合物包括式I、式I’和(TA)-(I-G)的化合物以及同一药物组合物中的其他一种或多种治疗剂，或式I、式I’、(TA)-(I-Y)、(Γ)、II和(I A)-(II-K)的化合物以及一种或多种单独形式的其他治疗剂。

在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包括式I、式I'和(I-A)至(I-G)的化合物和一种或多种另外的治疗剂。本发明预期提供一种药物组合物，其包括式I、式I’和(I-A)-(I-G)的化合物与天然存在的无毒胆汁酸(诸如熊去氧胆酸)的组合，熊去氧胆酸是一种助剂，用于防止用FXR激动剂治疗后可能继发的脂溶性维生素耗损。相应地，本发明化合物可以与天然存在的无毒胆汁酸同时施用，即可作为单独的实体施用，也可作为包括式I、式I’和(IA)-(IG)的化合物和天然存在的胆汁酸的单一配制剂施用。

任选地，该药物组合物可以包括如上所述的药学上可接受的赋形剂。

在一个实施方案中，本发明提供了一种试剂盒，其包括两种或更多种单独的药物组合物，其中至少一种含有含I、式I’和(IA)-(IG)的化合物。在一个实施方案中，该试剂盒包括用于单独保留所述组合物的器件，诸如容器、分区瓶或分区箔包。这种试剂盒的示例为吸塑包装，如通常用于包装片剂、胶囊等。

本发明的试剂盒可用于施用不同的剂型(例如口服和肠胃外)，用于以不同的剂量间隔施用单独的组合物，或用于相互滴定单独的组合物。为了有助于合规性，本发明试剂盒通常包括施用说明。

在本发明的组合疗法中，本发明化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。而且，本发明化合物和其他治疗剂可以在以下情况下一起组合成组合疗法：(i)在将组合产品发布给医师之前(例如，在试剂盒包括本发明化合物和其他治疗剂的情况下)；(ii)在施用前不久由医师自己(或在医师指导下)进行；(iii)患者本身进行，例如在本发明化合物和其他治疗剂按顺序施用时。

相应地，本发明提供了式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物用于治疗由FXR介导的疾病或病症的用途，其中药物制备成与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由FXR介导的疾病或病症的用途，其中该药物与式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物一起施用。

本发明还提供了在用于治疗由FXR介导的疾病或病症的方法中使用的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物，其中式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物制备成与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了在用于治疗由FXR介导的疾病或病症的方法中使用的另一种治疗剂，其中该另一种治疗剂制备成与式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物一起施用。本发明还提供了在用于治疗由FXR介导的疾病或病症的方法中使用的式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物，其中式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了在用于治疗由FXR介导的疾病或病症的方法中使用的另一种治疗剂，其中该另一种治疗剂与式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物一起施用。

本发明还提供了式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物在治疗由FXR介导的疾病或病症中的用途，其中患者之前(例如，24小时内)已经使用另一种治疗剂进行了治疗。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由FXR介导的疾病或病症的用途，其中患者之前(例如，24小时内)已经使用式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物进行了治疗。

在一个实施方案中，另一种治疗剂可用于治疗血脂异常、胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、PBC、PSC、PFIC、酒精诱发的肝硬化、囊胞性纤维化、胆囊结石、肝硬化，动脉粥样氧化或糖尿病，特别是II型糖尿病。

本发明组合物制作方法

当Pg为H时，式I、式I’和(I-A)至(I-G)的化合物可以通过偶联式II和式III的化合物来制备；否则，需要进行另一个脱保护步骤来获得化合物(方案I)。

方案1

其中R¹-R⁶、Ar和E环如式I或式I’中所定义的；L是H、Me或OH；Pg是H或羧基保护基，诸如甲基，m＝0或1。

任选地，本发明包括将式I化合物转化为所定义的另一种式I化合物，其中取代基具有所定义的含义；以游离形式或盐的形式回收所得式I化合物；并且任选地，将以游离形式获得的式I化合物转化为所需的盐，或将获得的盐转化为游离形式。

每个反应步骤都可以按照本领域技术人员已知的方式进行。

本发明还涉及以下方法形式：使用在方法的任何阶段可以作为中间体获得的化合物作为起始材料并进行剩余的方法步骤，或者在反应条件下形成起始材料或使用衍生物形式(例如以受保护的形式或以盐的形式)的起始材料，或者在工艺条件下生产可通过根据本发明方法获得的化合物并在原位对其进一步处理。本发明的化合物和中间体也可以根据本领域技术人员公知的方法相互转化。中间体和最终产物可以例如使用色谱法、分布法、(重)结晶等，根据标准方法进行后处理和/或纯化。

在本文的范围内，除非上下文另外指出，否则“保护基”仅仅指并非本发明化合物的特定所需最终产物的组成部分的易于去除的基团。此类保护基对官能基团的保护、保护基团本身以及其裂解反应例如均在标准参考文献中进行了描述，诸如J.F.W.McOmie,"Protective Groups in Organic Chemistry"(有机化学中的保护基团),Plenum出版社,伦敦和纽约1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,"Protective Groups in Organic Synthesis"(有机合成中的保护基团),第三版,Wiley,纽约1999,收录于"The Peptides"(肽)；第3卷(编辑:E.Gross和J.Meienhofer),学术出版社,伦敦和纽约1981；"Methoden derorganischen Chemie"(有机化学方法),Houben Weyl,第4版,第15/1卷,Georg ThiemeVerlag,斯图加特1974；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit,"Aminosauren,Peptide,Proteine"(氨基酸、肽、蛋白质),Verlag Chemie,魏因海姆,迪尔菲尔德比奇和巴塞尔1982；以及Jochen Lehmann,"Chemie der Kohlenhydrate:Monosaccharide und Derivate"(糖类化学：单糖及衍生物),Georg Thieme Verlag,斯图加特1974。保护基团的一个特点是例如通过溶剂溶解、还原、光解或另选地在生理条件下(例如通过酶切)可以很容易去除(即，不会发生不需要的次级反应)。

上文和下文提到的所有上述方法步骤都可以在不存在或通常在存在溶剂或稀释剂的情况下，在本领域技术人员已知的反应条件下进行，包括具体提到的那些条件。

在反应的所有阶段，形成的异构体混合物可以分离成单独的异构体，例如非对映异构体或对映异构体，或分离成任何所需的异构体混合物，例如外消旋体或非对应异构体混合物。根据本发明可获得的异构体的混合物可以根据本领域技术人员已知的方式分离成单独的异构体；非对映异构体可以例如通过多相溶剂混合物间分配、重结晶和/或色谱分离(例如在硅胶上或通过例如反相柱上的中压液相色谱)来分离；外消旋体可以例如通过与旋光纯成盐试剂形成盐并分离如此获得的非对应异构体混合物来分离，例如借助于分级结晶，或者通过在旋光柱材料上进行色谱分析。

除非在方法描述中另外指明，否则可以从中选择适用于任何特定反应的那些溶剂的溶剂包括特别提到的那些溶剂，或者例如水，酯类(诸如低级烷基-低级链烷酸酯，例如乙酸乙酯)，醚类(诸如脂肪酸酯，例如二乙醚，或环醚，例如四氢呋喃或二恶烷)，液体芳香烃(诸如苯或甲苯)，醇类(诸如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇)，腈类(诸如乙腈)，卤代烃类(诸如，二氯甲烷或氯仿)，酰胺类(诸如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺)，碱类(诸如杂环氮碱，例如吡啶或N-甲基吡咯烷-2-酮)，羧酸酐类(诸如低级链烷酸酐，例如乙酸酐)，环状、直链或支链烃类(诸如环己烷、己烷或异戊烷、甲基环己烷)，或这些溶剂的混合物，例如水溶液。此类溶剂混合物还可例如通过色谱法或分配法用于后处理。本发明化合物以游离形式、其盐的形式、或其前药衍生物的形式获得。当同一分子中同时存在碱性基团和酸性基团时，本发明化合物还可以形成内盐，例如两性离子分子。在许多情况下，借助于存在的氨基和/或羧基或与其相似的基团，本发明的化合物能够形成酸式盐和/或碱式盐。如本文所用，术语“盐”或“盐类”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐类”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物学有效性和特性的盐，其通常在生物学上或在其他方面符合需要。

使用本领域技术人员已知的方式，可以制备本发明化合物的具有至少一个成盐基团的盐。例如，本发明化合物具有酸性基团的盐类可以例如通过使用金属化合物处理该化合物来形成，诸如使用合适的有机羧酸的碱金属盐(例如，2-乙基己酸的钠盐)，使用有机碱金属或碱土金属化合物(诸如对应的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，诸如氢氧化钠或氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾，或碳酸氢钠或碳酸氢钾)，使用对应的钙化合物，或使用氨或适当的有机胺，其中，特别是使用化学计量或仅略微过量的成盐剂。本发明化合物的酸加成盐以常规方式获得，例如通过使用酸或合适的阴离子交换试剂处理化合物。例如，通过例如使用弱碱，或通过用离子交换剂处理，将盐(诸如酸加成盐)中和至等电点，可以形成本发明化合物的含有酸性或碱性成盐基团(例如游离羧基和游离氨基)的内盐。根据本领域技术人员已知的方法，可以将盐转化为游离化合物。例如，通过用合适的酸处理，可以转化为金属盐和铵盐，并且例如通过使用合适的碱性试剂处理，可以转化为酸加成盐。

药学上可接受的酸加成盐可以使用无机酸和有机酸形成，例如，乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱酸盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、碱式水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐以及三(羟甲基)氨基甲烷盐。

可以由其衍生盐的无机酸例如包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以由其衍生盐的有机酸例如包括乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。

可以由其衍生盐的无机碱例如包括铵盐和来自元素周期表的第I-XII族的金属。在某些实施方案中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适宜的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。

可以由其衍生盐的有机碱例如包括伯、仲和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)、环胺、碱性离子交换树脂等。一些有机胺包括异丙胺、二苄乙二胺(benzathine)、胆碱酸盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。

本发明的药学上可接受的盐可以由碱性或酸性部分通过常规化学方法来合成。一般，这类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计算量的适当碱(例Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应来制备，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计算量的适当酸反应来制备。此类反应通常在水或有机溶剂或这二者的混合物中进行。一般，当可行时,需要使用非水介质如(乙)醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。另外适宜的盐类的目录可以例如在Remington's Pharmaceutical Sciences(《雷明登氏药学全书》),第20版,Mack出版公司,Easton,Pa.,(1985)和Stahl和Wermuth的Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(《药物盐类手册：特性、选择和使用》)(Wiley-VCH，德国魏因海姆，2002)中找到。

本发明还提供了本发明化合物的前药，其在体内转化为本发明化合物。前药是一种活性或无活性化合物，该化合物在向受试者施用前药之后，通过体内生理作用(诸如水解、代谢等)被化学修饰成本发明化合物。前药的制造和使用中所涉及的适用性和技术是本领域技术人员所熟知的。前药在概念上可以分为两个非排他性类别，即生物前体前药和载体前药。参见The Practice of Medicinal Chemistry(《实用药物化学》),第31-32章(编辑Wermuth,学术出版社,圣地亚哥,加利福尼亚州,2001)。一般，生物前体前药是不具有活性或与对应的活性药物化合物相比活性较低的化合物，该对应的活性药物化合物含有一种或多种保护基团并通过代谢或溶剂分解转化成活性形式。活性药物形式和任何释放的代谢产物都应具有可接受的低毒性。

载体前药是含有转运部分的药物化合物，其例如可改善摄取和/或改善到一个或多个作用位点的局部递送。对于这样的载体前药，理想的是，药物部分和转运部分之间由共价键连接，前药没有活性或者比药物化合物的活性低，并且任何释放的转运部分均是可接受的无毒性。对于其中的转运部分用于增强摄取的前药，转运部分的释放通常应当较快。在其他情况下，需要使用实现缓慢释放的部分，例如某些聚合物或其他部分，诸如环糊精。例如，可以使用载体前药改善以下一种或多种特性：增加亲脂性，延长药理作用持续时间，提高位点特异性，减少毒性和不良反应，和/或改进药物配制剂(例如，稳定性、水溶性、抑制不期望的感官特性或理化特性)。例如，通过(a)羟基基团与亲脂性羧酸(例如，具有至少一个亲脂性部分的羧酸)、或(b)羧酸基团与亲脂性醇(例如，具有至少一个亲脂性部分的醇，例如脂肪醇)的酯化，可以增加亲脂性。

示例性的前药为例如游离羧酸的酯类和硫醇的S-酰基衍生物以及醇类和酚类的O-酰基衍生物，其中酰基具有如本文所定义的含义。合适的前药通常是可以在生理条件下通过溶剂分解转化为母体羧酸的药学上可接受的酯衍生物，例如低级烷基酯、环烷基酯、低级烯基酯、苄酯、单取代或双取代的低级烷基酯，诸如(氨基、单-或二-低级烷氨基、羧基、低级烷氧基羰基)-低级烷基酯共聚物，(低级烷酰氧基、低级烷氧基羰基或二-低级烷基氨基羰基)-低级烷基酯共聚物，诸如本领域通常使用的匹伐酸酯(pivaloyloxymethyl ester)。另外，胺类已被掩蔽(masked)为芳基羰基氧甲基取代的衍生物，其在体内被酯酶裂解，释放出游离的药物和甲醛(Bundgaard,J.Med.Chem.(《生物化学杂志》)2503(1989))。而且，含有酸性NH基团的药物，诸如咪唑、酰亚胺、吲哚等，已使用N-酰氧基甲基掩蔽(Bundgaard,Design of Prodrugs(《前药的设计》),Elsevier(爱思唯尔出版公司)(1985)).羟基基团已被掩蔽为酯和醚。EP 039,051(Sloan和Little)公开了曼尼希碱异羟肟酸前药及其制备和用途。

此外，本发明化合物，包含其盐类，也可以以水合物的形式获得，或者其晶体可以例如包含用于结晶的溶剂。可以存在不同的结晶形式。本发明化合物可以固有地或通过设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此本发明旨在涵盖溶剂化和非溶剂化形式。术语“溶剂化物”是指本发明化合物(包含其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是制药领域常用的那些已知对接受者无害的溶剂分子，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指溶剂分子为水的复合物。本发明化合物(包含其盐类、水合物和溶剂化物)可以固有地或通过设计形成多晶型物。

未氧化的形式的本发明化合物可以由本发明化合物的N-氧化物通过以下方式制备：在0-80℃下，使用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化物等)在合适的惰性溶剂(例如乙腈、乙醇、二恶烷水溶液等)中处理。

用于合成本发明化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂均可商购，或通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备(Houben-Weyl第4版1952,Methods of Organic Synthesis(《有机合成方法》),Thieme,第21卷)。除非本文另有说明或者除非与上下文明显相矛盾，否则，本文所描述的所有方法均可以以任何合适的顺序进行。除非另有声明，否则，本文提供的任何及所有示例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，不会对本发明的范围构成限制。

实施例

实施例1：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I1)

步骤1：合成4：

在室温下向化合物3(31g,122.0mmol)的乙腈(ACN，300mL)溶液中加入K₂CO₃(33.7g，244.0mmol)，之后加入碘甲烷(MeI)(43.3g，305.0mmol)。反应混合物搅拌过夜，然后浓缩。残余物用水稀释，用丙烯酸乙酯(EA)萃取，并合并有机层，用盐水洗涤、干燥、浓缩并通过硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到所需产物，即化合物4(12.1g，白色固体，三个步骤的总产率为15％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]⁺＝268.0,270.0；¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm：8.15(s,1H)、7.92(d,J＝8.8Hz,1H)、8.84(s,1H)、7.38(s,1H)、3.85(s,3H)、3.80(s,3H)。

步骤2：合成5：

在氮气条件下，向甲苯(110mL)中依次加入化合物4(9.4g，35.1mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.8g，42.1mmol)、叔丁醇钠(5.1g，52.6mmol)、联萘二苯膦(BINAP)(2.2g,3.5mmol)、Pd₂(dba)₃(1.6g,1.7mmol)的混合物。混合物在80℃搅拌过夜，然后过滤。滤饼用EA洗涤，浓缩滤液、干燥并通过硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到所需产物5(4g，黄色固体，产率30.1％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]⁺＝374.2；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：8.04(d,J＝8.8Hz,1H)、7.68(s,1H)、7.04-7.02(m,1H)、6.80(s,1H)、3.90(s,3H)、3.79(s,3H)、3.65-3.64(m,4H)、3.18-3.17(m,4H)、7.68(s,9H)。

步骤3：合成6：

向化合物5(4g,10.7mmol)的二氯甲烷(DCM，40mL)溶液中加入三氟乙酸(TFA)(10mL)。在室温下搅拌反应物2小时。反应完成后，浓缩反应溶液；用MTBE(20mL)稀释并过滤。滤饼用甲基叔丁基醚(MTBE)(10mL×2)洗涤，干燥，得到化合物6。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]⁺＝274.1；¹H NMR(300MHz,DMSO)δppm：7.99(s,1H)、7.86(d,J＝8.4Hz,1H)、7.05-7.02(m,2H)、3.81(s,3H)、3.78(s,3H)、3.36-3.29(m,8H)。

步骤4：合成8：

在0℃下向氢氧化钠(7g,175mmol)的水(120mL)溶液中加入NH₂OH·HCl(11.8g,170mmol)的水溶液(120mL)。所得溶液在0℃下搅拌10分钟，然后加入化合物7(25.8g,147.3mmol)的乙醇(120mL)溶液，并在室温下再搅拌1小时。反应物用水稀释，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到所需产物，即化合物8，该产物在下一步直接使用。

步骤5：合成9：

在<25℃下，将N-氯代丁二酰亚胺(NCS)(23.9g,179mmol)缓慢加入到化合物8(28.3g,149mmol)在二甲基甲酰胺(DMF，300mL)中的搅拌溶液中。之后在室温下搅拌反应混合物1小时。用水稀释，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到所需产物，即化合物9，该产物在下一步直接使用。¹H NMR(DMSO-d6)δppm：12.68(br,1H)、7.67-7.55(m,3H)。

步骤6：合成10：

将三乙胺(24.1g,240.6mmol)加入到3-环丙基-3-氧代丙酸甲酯(17.2g,120.3mmol)中，并在室温下搅拌混合物30分钟。然后，将混合物冷却至大约10℃，并在低于24℃的条件下缓慢加入化合物9(27g,120.3mmol)在乙醇(550mL)中的悬浮液中。之后在室温下搅拌反应物过夜。用水稀释，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩到其总体积的大约10％。过滤所形成的沉淀物，用乙醚(200mL)研磨并真空干燥，获得化合物10。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]⁺＝312.0；¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：7.44-7.35(m,3H)、3.87(s,3H)、2.95-2.90(m,1H)、1.45-1.40(m,2H)、1.37-1.28(m,2H)。

步骤7：合成11：

在10℃下，将二异丁基氢化铝(DIBAL-H 1.5M)(90.8mL,136.2mmol)逐滴加入到化合物10(17g,54.5mmol)在四氢呋喃(THF，150mL)中的搅拌溶液中。在室温下搅拌混合物2小时，然后用甲醇(MeOH)淬灭。反应混合物用水稀释，用EA萃取。合并有机层，干燥并通过硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到所需产物，即化合物11(13.2g，白色固体，产率84.2％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝284.0；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm：7.44-7.33(m,3H)、4.41(s,2H)、2.22-2.15(m,1H)、1.30-1.26(m,2H)、1.17-1.13(m,2H)。

步骤8：合成12：

在0℃下，向化合物11(5.68g,20mmol)的THF(60mL)溶液中分批加入戴斯马丁试剂(12.7g,30mol)。然后，在室温下搅拌反应混合物3小时。反应完成后，向反应物中加入NaHCO₃和Na₂S₂O₃的饱和溶液，并搅拌30分钟。然后，溶液用EA萃取，合并有机层，干燥、浓缩并通过硅胶柱(庚烷/EA＝20:1)纯化，得到所需产物，即化合物12(4.4g，白色固体，产率78％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝282.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm：9.67(s,1H)、7.47-7.40(m,3H)、2.84-2.80(m,1H)、1.50-1.47(m,2H)、1.39-1.34(m,2H)。

步骤9：合成13：

在氮气条件下，将CH₂OMeCl(3.43g，10mmol)的四氢呋喃(35mL)溶液冷却至-10℃，然后逐滴加入2N NaHMDS(5mL，10mmol)。反应混合物在-10℃下搅拌20分钟，然后将化合物12(1.41g，5mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液逐滴加入到反应混合物中。反应混合物在室温下搅拌过夜，用水淬灭，用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，干燥、浓缩并通过硅胶柱(庚烷/EA＝50:1)纯化，得到化合物13(1.45g，白色固体，产率93％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝310.1。1H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：7.45-7.32(m,3H)、6.44(d,J＝13.2Hz,1H)、6.44(d,J＝13.2Hz,1H)、3.56(s,3H)、2.10-2.03(m,1H)、1.24-1.18(m,2H)、1.16-1.08(m,2H)。

步骤10：合成14：

在室温下，向化合物13(500mg,1.61mmol)的THF(6mL)溶液中加入2N HCl(3mL)。将反应混合物加热至回流过夜。反应完成后，用EA萃取，合并有机层，用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，干燥、浓缩并通过硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到化合物14(320mg，白色固体，产率67％)。LCMS：[M+H]+＝296.0。¹H NMR(CDCl₃)δppm：9.59(s,1H)、7.46-7.34(m,3H)、3.35(s,2H)、2.06-1.92(m,1H)、1.27-1.25(m,2H)、1.20-1.13(m,2H)。

步骤11：合成15：

在室温下，向化合物14(320mg,1.1mmol)的THF(5mL)溶液中加入化合物6(426mg,1.1mmol)。然后，反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后用NaHB(AcO)₃(700mg，3.3mmol)处理，在室温下再搅拌30分钟。反应完成后，反应物用水淬灭，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤，干燥，浓缩并通过硅胶柱(庚烷/EA＝2:1)纯化，得到化合物15(150mg，白色固体，产率:25％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝553.1。1H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.93(d,J＝8.8Hz,1H)、7.59(s,1H)、7.37-7.35(m,2H)、7.30-7.28(m,1H)、7.28(s,1H)、6.91-6.89(m,1H)、6.67(s,1H)、3.81(s,3H)、3.69(s,3H)、3.15(s,4H)、2.56-2.47(m,8H)、2.02-1.95(m,1H)、1.21-1.15(m,2H)、1.05-1.03(m,2H)。

步骤12：合成I1：

向化合物15(150mg，0.27mmol)的甲醇/THF/H₂O(＝1:1:1，3mL)溶液中加入LiOH(97mg，4.1mmol)。然后，将反应混合物加热至回流并搅拌过夜。反应完成后，反应物用2N水溶液酸化并形成沉积物。然后，反应物用水(5mL)稀释，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤、干燥并使用EA通过硅胶柱纯化，得到化合物I1(22mg，白色固体，产率15％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝539.1.1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm：11.80(br,1H)、7.83-7.77(m,2H)、7.69-7.57(m,3H)、6.92-6.88(m,2H)、3.76(s,3H)、3.06(s,4H)、2.54-2.50(m,2H)、2.50-2.43(m,4H)、2.33-2.28(m,3H)、1.13-1.05(m,4H)。

实施例2：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-乙酰基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I2)

步骤1：合成16：

向化合物11(460mg，1.62mmol)的DCM(10mL)溶液中加入三苯基膦(PPh3，637mg，2.43mmol)。然后，向混合物中逐滴加入CBr₄(805mg，2.43mmol)，并在室温下搅拌1小时。反应完成后，反应溶液经浓缩，通过硅胶柱(庚烷/EA＝10:1)纯化，得到所需产物，即化合物16(360mg，白色固体，产率64％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝347.9；1H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：7.47-7.37(m,3H)、4.24(s,2H)、2.17-2.12(m,1H)、1.32-1.29(m,2H)、1.24-1.20(m,2H)。

步骤2：合成17：

向化合物16(320mg,0.92mmol)的THF(5mL)溶液中加入TBAF 1M/THF(1.84mL，1.84mmol)。向混合物中缓慢地逐滴加入三甲基氰基硅烷(TMSCN,182.5mg，1.84mmol)同时保温在25℃以下，并在室温下搅拌过夜。反应物用水稀释，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤、干燥并通过硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到所需产物，即化合物17(320mg，白色固体，产率90％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝293.0；1H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.47-7.37(m,3H)、3.39(s,2H)、2.14-2.09(m,1H)、1.31-1.28(m,2H)、1.26-1.1(m,2H)。

步骤3：合成18：

在室温下向化合物17(300mg，1.02mmol)的乙醇溶液中加入NaOH 4M/H₂O(1mL，4.08mmol)。然后，将反应混合物加热至75℃，持续3小时。反应物用2N水溶液酸化并形成沉积物。然后，反应物用水稀释，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤、干燥并使用EA通过硅胶柱纯化，得到所需产物，即化合物18(200mg，白色固体，产率62.8％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝312.0；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：7.64-7.54(m,3H)、4.06(s,2H)、3.28(br,1H)、2.30-2.24(m,1H)、1.14-1.04(m,4H)。

步骤4：合成19：

依次向二甲基甲酰胺(DMF，7mL)中加入化合物18(200mg，0.6mmol)、化合物6(256g，0.6mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，368mg，0.9mmol)和N,N-二异丙基乙胺(DIEA，332mg，2.4mmol)。混合物在室温下搅拌4小时。反应完成后，反应物用水稀释，用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，干燥并通过硅胶柱(庚烷/EA＝2:1)纯化，得到所需产物，即化合物19(240mg，白色固体，产率70％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝567.1；¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：8.06(d,J＝7.5Hz,1H)、7.71(s,1H),7.47-7.34(m,4H)、6.99(d,J＝8.4Hz,1H)、3.91(s,3H)、3.81-3.80(m,5H)、3.70-3.45(m,4H)、3.30-2.99(m,4H)、2.20-2.19(m,1H)、1.28-1.20(m,2H)、1.15-1.12(m,2H)。

步骤5：合成I2：

按照I1的合成步骤操作得到化合物I2。LCMS：[M+H]＝553.1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm：11.83(br,1H)、7.86-7.81(m,2H)、7.62-7.51(m,3H)、6.95-6.92(m,2H)、3.78(s,3H)、3.49-3.48(m,6H)、3.02-3.01(m,4H)、2.08-2.07(m,1H)、1.13-1.08(m,2H)。

实施例3

6-(4-(2-(3-(2,6-二氯苯基)-5-异丙基异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I3)

步骤1：合成22

按照10的合成步骤操作得到化合物21。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：7.73-7.58(m,3H)、3.93-3.81(m,1H)、3.69(s,3H)、1.43(d,J＝6.8Hz,6H)。

步骤2：合成22：

在0℃下，向化合物21(6.0g,22mmol)的THF(40mL)溶液中加入氢化铝锂(LAH)(88mL，88mmol，THF中为1M)。反应物在室温下搅拌2小时，然后加入100mL的1N NaOH水溶液。形成的沉淀物过滤通过寅式盐，真空去除所有溶剂。残余物用快速色谱法(PE:EA＝1:2)纯化，得到产物22(2.11g白色固体，产率:33.5％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δppm：7.71-7.51(m,3H)、4.96-4.91(m,1H)、4.22(d,J＝4.8Hz,2H)、3.41-3.35(m,1H)、1.31(d,J＝6.4Hz,6H)。

步骤3：合成23：

按照12的合成步骤操作得到产物23。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δppm 9.97(s,1H)、7.73-7.58(m,3H)、3.93-3.82(m,1H)、3.41-3.35(m,1H)、1.42(d,J＝6.4Hz,6H)。

步骤4：合成24：

按照13的合成步骤操作得到产物24(1.3所需异构体混合物(E:Z＝2:1))。

步骤5：合成25：

按照14的合成步骤操作得到粗产物25,该产物在下一步直接使用，无需进一步纯化。

步骤6：合成26：

按照15的合成步骤操作得到产物26。

步骤7：合成I3：

按照I1的合成步骤操作得到61mg期望产物I3，产率为65.1％。LCMS：[M-1]＝541.1.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 7.98-7.96(m,1H)、7.69(s,1H)、7.39-7.37(m,2H)、7.34-7.32(m,1H)、6.87-6.85(m,1H)、6.75(s,1H)、3.71(s,3H)、3.66-3.33(m,6H)、3.16-3.15(m,1H)、2.91-2.65(m,6H)、1.31(d,J＝6.4Hz,6H)。

实施例4：

2-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸(I4)

步骤1：合成29：

将化合物28(450mg，1.65mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(384mg.2.06mmol)和K₂CO₃(456mg，3.3mmol)悬浮在乙腈(20mL)中并回流过夜。然后将所得混合物真空浓缩至大约2mL，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机层经干燥和真空浓缩，并通过硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到化合物29(500mg，白色固体，80％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝378.1；¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：8.33(s,1H)、8.02(d,J＝9.3Hz,1H)、7.57(d,J＝8.4Hz,1H)、3.92(s,3H)、3.70-3.68(m,4H)、3.62-3.61(m,4H)、1.50(s,9H)。

步骤2：合成30：

按照6的合成步骤操作得到产物30。LCMS：[M+H]+＝278.1；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：9.04(s,2H)、8.48(s,1H)、7.92-7.90(m,1H)、7.55(d,J＝8.8Hz,1H)、3.85(s,7H)、3.30-3.28(m,4H)。

步骤3：合成31：

按照15的合成步骤操作得到产物31。LCMS：[M+H]+＝557.1；¹H NMR(400MHz,CDCl3)δppm：8.30(s,1H)、7.99(d,J＝8.7Hz,1H)、7.51(d,J＝8.1Hz,1H)、7.44-7.33(m,3H)、3.91(s,3H)、3.62(s,4H)、2.50(s,8H)、2.08-2.05(m,1H)、1.29-1.15(m,4H)。

步骤4：合成I4：

按照I1的合成步骤操作得到化合物I4。LCMS：[M+H]+＝543.1.¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm：8.41(s,1H)、8.03-8.01(m,1H)、7.66-7.55(m,4H)、3.96(s,4H)、3.48(s,4H)、3.33-3.25(m,2H)、2.91-2.87(m,2H)、2.30-2.26(m,1H)、1.24-1.20(m,4H)。

实施例5

2-(4-(2-(5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-4-氟代苯并[d]噻唑-6-羧酸(I5)

步骤1：合成33：

在室温下，向化合物32(5g，29.5mmol)的AcOH(50mL)溶液中一次性加入KSCN(11.5g，118.2mmol)，所得混合物在室温下搅拌直到变成透明溶液。然后，在室温下在45分钟内加入Br₂(4.7g，175mmol)的AcOH(30mL)溶液，整个反应混合物在室温下搅拌20小时。过滤去除反应期间形成的沉淀物。滤液倒入水中，并用浓NH₃·H₂O碱化至pH8-9。抽滤收集所得沉淀物，并在60℃下真空干燥，得到化合物33粗产物(4.1g)，该产物在下一步中直接使用。LCMS：[M+H]+＝227.0。

步骤2：合成34：

在0℃下，在10分钟的时间内向CuBr₂(2.9g，13.3mmol)在乙腈种的悬浮液中逐滴加入亚硝酸正丁酯(t-BuONO，2g，17.7mmol)。向该溶液中加入33(2g，8.8mmol)，反应混合物在30℃下搅拌48小时。反应混合物然后用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩。粗残余物通过硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到所需产物，即化合物34。LCMS：[M+H]+＝290.0,292.0；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：8.12(s,1H)、7.72(d,J＝6.9Hz,1H)、3.95(s,3H)。

步骤3：合成35：

按照29的合成步骤操作得到35。LCMS：[M+H]+＝396.1。

步骤4：合成化合物36：

按照6的合成步骤操作得到产物36。LCMS：[M+H]+＝296.0；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.06(br,2H)、8.37(s,1H)、7.69-7.66(m,1H)、3.88-3.86(m,7H)、3.32-3.29(m,4H)。

步骤5：合成38：

按照8的合成步骤操作得到产物38，该产物在下一步直接使用。LCMS：[M+H]+＝206.0。

步骤6：合成39：

按照9的合成步骤操作得到产物39，该产物在下一步直接使用。

步骤7：合成40：

按照10的合成步骤操作得到产物40(10.5g，白色固体)；LCMS：[M+H]+＝328.0；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.56-7.50(m,2H)、7.40-7.35(m,2H)、3.78(s,3H)、2.92-2.83(m,1H)、1.39-1.37(m,2H)、1.32-1.25(m,2H)。

步骤8：合成41：

按照11的合成步骤操作得到产物41；LCMS：[M+H]+＝300.1。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.51-7.43(m,2H)、7.34-7.31(m,2H)、4.42(s,2H)、2.13-2.09(m,1H)、1.19-1.15(m,2H)、1.07-1.05(m,2H)。

步骤9：合成42：

按照12的合成步骤操作得到产物42。LCMS：[M+H]+＝298.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.75(s,1H)、7.61-7.57(m,2H)、7.46-7.41(m,2H)、2.90-2.85(m,1H)、1.44-1.41(m,2H)、1.38-1.29(m,2H)。

步骤10：合成43：

按照13的合成步骤操作得到产物43。LCMS：[M+H]+＝310.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.36-7.34(m,2H)、7.29-7.26(m,2H)、6.35(d,J＝13.2Hz,1H)、5.26(d,J＝13.2Hz,1H)、3.47(s,3H)、2.01-1.97(m,1H)、1.17-1.13(m,2H)、1.05-1.02(m,2H)。

步骤11：合成44：

按照14的合成步骤操作得到产物44。LCMS：[M+H]+＝312.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.54(s,1H)、7.48-7.43(m,2H)、7.35-7.30(m,2H)、3.39(s,2H)、1.86-1.79(m,1H)、1.15-1.12(m,2H)、1.11-1.05(m,2H)。

步骤12：合成45：

按照15的合成步骤操作得到产物45。LCMS：[M+H]+＝591.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：8.23(s,1H)、7.92(d,J＝7.6Hz,1H)、7.45-7.42(m,1H)、7.37-7.31(m,2H)、7.29-7.27(m,1H)、3.84(s,3H)、3.54(s,4H)、2.44-2.41(m,8H)、1.98-1.94(m,1H)、1.21-1.15(m,4H)。

步骤13：合成I5：

按照I1的合成步骤操作得到化合物I5。LCMS：[M+H]+＝539.1；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm：8.24(s,1H)、7.73-7.69(m,2H)、7.60-7.56(m,3H)、3.99(s,4H)、3.34-3.33(m,4H)、3.32-3.21(m,2H)、3.02-2.97(m,2H)、2.26-2.23(m,1H)、1.23-1.20(m,4H)。

实施例6

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)喹啉-2-羧酸(I6)

步骤1：合成47：

化合物46(10g，45.03mmol)和乙酸钠(20.3g，247.7mmol)在乙酸(100mL)在75℃下加热，搅拌至形成溶液。在15分钟内，加入Br₂(7.5mL，148.6mmol)的乙酸(25mL)溶液，与此同时将反应温度升高至86℃。所得悬浮液在120℃下加热1小时。将悬浮液冷却至80℃，边搅拌边加入到冰水(200mL)中。过滤收集所得白色固体，用水洗涤并干燥，得到化合物47(18g，白色固体，产率87％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝459；(400MHz,DMSO-d6)δppm：8.57(d,J＝8.8Hz,1H)、8.42(s,1H)、8.34(d,J＝8.8Hz,1H)、8.05-7.99(m,2H)。

步骤2：合成48：

在15分钟内，向47(18g，39.2mmol)在水(90mL)中的搅拌悬浮液加入浓硫酸(38mL)。所得悬浮液在150℃下加热5小时。冷却混合物，过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到化合物48(4.9g，白色固体，产率58％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝251.9,253.9；(400MHz,DMSO-d6)δppm：8.53(d,J＝8.8Hz,1H)、8.42(s,1H)、8.15(d,J＝8.4Hz,1H)、8.10(d,J＝8.8Hz,1H)、7.80-7.97(m,1H)。

步骤3：合成49：

化合物48(4.9g，19.4mmol)和甲磺酸(490mg，5.05mmol)在甲醇(40mL)中回流6小时。反应完成后，反应混合物降温至室温，然后用饱和碳酸氢钠溶液稀释，用EA萃取，合并有机层，用盐水洗涤，干燥，浓缩并用硅胶柱(庚烷/EA＝5:1)纯化，得到化合物49(4.2g，白色固体，产率81％)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝265.9,267.9；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：8.15-8.09(m,3H)、7.99(s,1H)、7.80-7.78(m,1H)、4.02(s,3H)。

步骤4：合成50：

在氮气条件下，向甲苯(55mL)中依次加入化合物49(4.2g，15.8mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.53g，18.9mmol)、叔丁醇钠(2.3g，23.7mmol)、BINAP(983mg,1.6mmol)、Pd2(dba)3(7.23mg,0.8mmol)的混合物。然后，将混合物加热至80℃并搅拌过夜。反应完成后，过滤悬浮液，用EA洗涤滤饼。浓缩滤液，干燥并用硅胶柱(庚烷/EA＝2:1)纯化，得到化合物50(1.2g，黄色固体，产率14％)，和51(800mg，白色固体，产率13％)。LCMS：[M+H]+＝526.3；¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：8.09(d,J＝8.1Hz,1H)、7.97(d,J＝9.6Hz,1H)、7.70(d,J＝8.4Hz,1H)、7.53(d,J＝9.9Hz,1H)、7.05(s,1H)、6.80(s,1H)、3.84(s,2H)、3.76(s,2H)、3.66-3.64(m,4H)、3.60(s,2H)、3.52(s,2H)、3.34-3.33(m,4H)、1.52-1.50(m,18H)。

步骤5：合成52：

在室温下向化合物50(742mg，1.4mmol)的乙醇(15mL)溶液中加入NaOH(560mg，14mmol)过夜。反应完成后，反应物用2N HCl酸化，并通过制备性HPLC纯化，得到化合物52(200mg，黄色固体，产率40％)。LCMS：[M+H]+＝358.2。

步骤6：合成53：

按照6的合成步骤操作得到产物53。LCMS：[M+H]+＝258.1。

步骤7：合成I6：

按照15的合成步骤操作得到粗产物，并通过制备性HPLC纯化，得到得到化合物I6。LCMS：[M+H]+＝537.1；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm：8.37(d,J＝8.0Hz,1H)、8.17-8.15(m,2H)、7.75(d,J＝8.8Hz,1H)、7.64-7.58(m,3H)、7.35(s,1H)、3.67-3.53(m,8H)、3.33(s,2H)、2.94-2.89(m,2H)、2.31-2.29(m,1H)、1.26-1.23(m,4H)。

实施例7

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I7)

步骤1：合成54：

按照5的合成步骤操作得到产物54。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.88(d,J＝8.7Hz,1H)、7.51(s,1H)、6.73(d,J＝8.4Hz,1H)、6.43(s,1H)、3.81(s,3H)、3.66(s,3H)、3.58(t,J＝7.0Hz,6H)、3.26(s,1H)、3.15(s,1H)、1.96(d,J＝10.2Hz,2H)、1.37(s,5H)、1.28(s,4H)。LCMS:[M+H]+＝388.3。

步骤2：合成55：

按照6的合成步骤操作得到产物55。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.51(s,1H)、8.01-7.95(m,1H)、7.61(d,J＝9.3Hz,1H)、6.68-6.76(m,1H)、3.82(s,3H)、3.70(s,3H)、3.68-3.56(m,2H)、3.43(d,J＝16.0Hz,1H)、3.36–3.17(m,1H)、2.68(s,4H)、2.31(s,3H)。LCMS：[M+H]+＝288.2。

步骤3：合成56：

按照15的合成步骤操作得到产物56。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(s,1H)、7.51(s,1H)、7.29(s,2H)、7.20(s,1H)、6.67(s,1H)、6.36(s,1H)、3.81(s,3H)、3.65(s,3H)、3.47(d,J＝32.5Hz,4H)、2.77(s,2H)、2.16(s,3H)、1.97(s,4H)、1.19-1.12(m,6H)；LCMS:[M+H]+＝569.2。

步骤4：合成I7：

按照I1的合成步骤操作得到化合物I7。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.96(d,J＝8.8Hz,1H)、7.65(s,1H)、7.37(d,J＝7.5Hz,2H)、7.33-7.28(m,1H)、6.73(d,J＝8.0Hz,1H)、6.45(s,1H)、3.73(s,3H)、3.63(s,2H)、3.51(t,J＝6.0Hz,2H)、2.91(s,2H)、2.67(s,6H)、2.08(s,4H)、1.18(d,J＝4.2Hz,2H)、1.06(d,J＝5.9Hz,2H)。LCMS：[M+H]+＝553.2。

实施例8

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I8)

步骤1：合成57：

在氮气条件下，向甲苯(15mL)中依次加入化合物4(1.5g，5.59mmol，1.0eq)、2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.34g，6.71mmol，1.2eq)、叔丁醇钠(5.1g，8.39mmol，1.5eq)、BINAP(348mg,0.55mmol，0.1eq)和Pd2(dba)3(256mg,0.28mmol，0.05eq)的混合物。然后，将混合物加热至80℃并搅拌过夜。反应完成后，过滤悬浮液，滤饼用EA(50mL×2)洗涤，浓缩滤液、干燥并通过硅胶柱(PE/EA＝10:1)纯化，得到所需产物，即化合物57(360mg，黄色固体，产率16.5％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(d,J＝8.7Hz,1H)、7.60(s,1H)、6.92(d,J＝8.5Hz,1H)、6.68(s,1H)、4.27(d,J＝27.6Hz,1H)、3.92(d,J＝12.9Hz,1H)、3.82(s,3H)、3.70(s,3H)、3.45(d,J＝11.3Hz,1H)、3.31(t,J＝12.0Hz,2H)、1.97(s,1H)、1.41(d,J＝8.5Hz,1H)、1.30(d,J＝6.5Hz,9H)、1.19(t,J＝7.1Hz,3H)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝388.3。

步骤2：合成58：

向化合物57(360mg,0.927mmol,1.0eq)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三氟乙酸(TFA)(1mL)。然后，在室温下搅拌反应物1小时。反应完成后，浓缩反应溶液，残余物用甲基叔丁基醚(MTBE，5mL)稀释，过滤悬浮液，滤饼用甲基叔丁基醚(5mL×2)洗涤，干燥，得到化合物58(260mg，白色固体，产率69.7％)。

1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.97(s,1H)、9.28(s,1H)、8.00(d,J＝8.7Hz,1H)、7.65(s,1H)、6.93(d,J＝8.4Hz,1H)、6.80(s,1H)、3.83(s,3H)、3.73(s,3H)、3.55-3.42(m,4H)、3.30-3.15(m,2H)、3.00(t,J＝12Hz,1H)、1.40(d,J＝6.1Hz,3H)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝288.2。

步骤3：合成59：

在室温下向化合物14(192mg，0.65mmol，1.0eq)的THF(5mL)溶液中加入化合物58(260mg，0.65mmol，1.0eq)。然后，反应混合物在室温下搅拌30分钟并用NaBH(OAc)3(412mg，1.94mmol，3.0eq)处理，在室温下再搅拌30分钟。反应完成后，用水淬灭，用EA(10mL×2)萃取，并合并有机层，用盐水(20mL)洗涤、干燥并通过硅胶柱(PE/EA＝2:1)纯化，得到所需化合物59(180mg，白色固体，产率48.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(s,1H)、7.58(s,1H)、7.42-7.32(m,1H)、7.29-7.23(m,1H)、6.90(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H)、6.65(d,J＝1.9Hz,1H)、3.81(s,3H)、3.63(s,3H)、3.41-3.26(m,3H)、2.62-2.34(m,6H)、2.14(d,J＝9.8Hz,3H)、2.03-1.96(m,2H)、1.19-1.12(m,6H)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝567.2。

步骤4：合成I8：

在室温下，向化合物59(180mg，0.32mmol，1.0eq)的甲醇/THF/H₂O(＝1:1:1，5mL)溶液中加入LiOH(200mg，4.77mmol，15.0eq)。然后，将反应混合物加热至75℃过夜。反应完成后，反应物用2N水溶液酸化，并在溶液冷却到室温时形成沉积物。然后，反应物用水(5mL)稀释，用EA(15mL×2)萃取；合并有机层，用盐水洗涤，干燥并通过制备性TLC(DCM:甲醇＝10:1)纯化，得到化合物I8(27mg，白色固体，产率15.4％)。1NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝8.7Hz,1H)、7.67(s,1H)、7.37(d,J＝7.8Hz,2H)、7.33–7.24(m,1H)、6.94–6.82(m,1H)、6.68(s,1H)、3.71(s,3H)、3.37(s,3H)、2.88(s,4H)、2.55(s,6H)、2.03(s,3H)、1.17(d,J＝11.8Hz,4H)、1.05(s,5H)。LCMS：(ESI-MS)：[M+H]+＝553.2。

实施例9：

6-(4-(2-(3-(2-氯苯基)-5-环丙基异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I9)

步骤1：合成62：

按照9的合成步骤操作得到产物62，该产物在下一步直接使用。¹H NMR(400MHz、DMSO-d6)δppm：12.68(br,1H)、7.60-7.47(m,3H)、7.50-7.43(m,1H)。

步骤2：合成63：

按照10的合成步骤操作得到63。LCMS：[M+H]+＝278.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.50-7.45(m,1H)、7.45-7.35(m,3H)、3.72(s,3H)、2.93-2.87(m,1H)、1.41-1.37(m,2H)、1.35-1.28(m,2H)。

步骤3：合成64：

按照11的合成步骤操作得到64。LCMS：[M+H]+＝250.1；¹H NMR(CDCl₃)δppm：7.43-7.26(m,4H)、4.40(s,2H)、2.13-2.10(m,1H)、1.20-1.15(m,2H)、1.07-1.03(m,2H)。

步骤4：合成65：

按照12的合成步骤操作得到65。LCMS：[M+H]+＝248.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.63(s,1H)、7.47-7.45(m,1H)、7.42-7.39(m,2H)、7.35-7.31(m,1H)、2.84-2.80(m,1H)、1.38-1.34(m,2H)、1.28-1.24(m,2H)。

步骤5：合成66：

按照13的合成步骤操作得到66。LCMS：[M+H]+＝276.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.41-7.25(m,4H)、6.43(d,J＝13.2Hz,1H)、5.29(d,J＝13.2Hz,1H)、3.48(s,3H)、2.04-1.93(m,1H)、1.13-1.10(m,2H)、1.03-0.99(m,2H)。

步骤6：合成67：

按照14的合成步骤操作得到67。LCMS：[M+H]+＝262.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.53(s,1H)、7.43-7.40(m,3H)、7.37-7.28(m,3H)、3.39(s,2H)、1.85-1.81(m,1H)、1.14-1.11(m,2H)、1.05-1.01(m,2H)。

步骤7：合成68：

按照15的合成步骤操作得到68。LCMS：[M+H]+＝519.2。

步骤8：合成I9：

按照I1的合成步骤操作得到化合物I9。LCMS：[M+H]+＝505.1；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：11.78(br,1H)、7.83-7.80(m,2H)、7.77-7.67(m,1H)、7.64-7.50(m,3H)、6.92-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.04(s,4H)、2.56(s,2H)、2.39(s,4H)、2.29-2.25(m,3H)、1.11-1.04(m,4H)。

实施例10：

6-(4-(2-(3-(2-氯代-6-氟苯基)-5-环丙基异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I10)

步骤1：合成71：

按照9的合成步骤操作得到71，该产物在下一步直接使用。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：12.82(br,1H)、7.61-7.60(m,1H)、6.48(d,J＝8.0Hz,1H)、7.41-7.39(m,1H)。

步骤2：合成72：

按照10的合成步骤操作得到72。LCMS：[M+H]+＝296.0；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.44-7.38(m,1H)、7.32(d,J＝8.0Hz,1H)、7.14-7.10(m,1H)、3.87(s,3H)、2.95-2.90(m,1H)、1.45-1.40(m,2H)、1.37-1.28(m,2H)。

步骤3：合成73：

按照11的合成步骤操作得到73。LCMS：[M+H]+＝268.0；¹H NMR(CDCl₃)δppm：7.35-7.29(m,1H)、7.24(d,J＝8.0Hz,1H)、7.06-7.02(m,1H)、4.35(s,2H)、2.14-2.07(m,1H)、1.19-1.15(m,2H)、1.13-1.11(m,2H)。

步骤4：合成74：

按照12的合成步骤操作得到74。LCMS：[M+H]+＝266.0；¹H NMR(CDCl₃)δppm：9.74(s,1H)、7.50-7.47(m,1H)、7.38(d,J＝8.0Hz,1H)、7.24-7.16(m,1H)、2.87-2.82(m,1H)、1.51-1.47(m,2H)、1.40-1.35(m,2H)。

步骤5：合成75：

按照13的合成步骤操作得到75。LCMS：[M+H]+＝294.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.31-7.23(m,2H)、7.06-7.21(m,2H)、6.43(d,J＝13.2Hz,1H)、5.25(d,J＝13.2Hz,1H)、3.48(s,3H)、2.02-1.93(m,1H)、1.50-1.12(m,2H)、1.04-1.00(m,2H)。

步骤6：合成76：

按照14的合成步骤操作得到76。LCMS：[M+H]+＝280.0；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.51(s,1H)、7.36-7.31(m,1H)、7.26-7.24(m,1H)、7.07-7.03(m,1H)、3.32(s,2H)、1.89-1.85(m,1H)、1.16-1.14(m,2H)、1.07-1.03(m,2H)。

步骤7：合成77：

按照15的合成步骤操作得到77。LCMS:[M+H]+＝537.2。

步骤8：合成I10：

按照I1的合成步骤操作得到I10。LCMS：[M+H]+＝523.2；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：11.77(br,1H)、7.83-7.77(m,2H)、7.68-7.64(m,1H)、7.56-7.53(m,1H)、7.47-7.42(m,1H)、6.92-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.04(s,4H)、2.52(s,2H)、2.40(s,4H)、2.33-2.28(m,3H)、1.12-1.05(m,4H)。

实施例11：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氟苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I11)

步骤1：合成80：

按照9的合成步骤操作得到80，该产物在下一步直接使用。¹H NMR(400MHz、DMSO-d6)δppm：12.88(br,1H)、7.65-7.61(m,1H)、7.27-7.23(m,2H)。

步骤2：合成81：

按照10的合成步骤操作得到81。LCMS：[M+H]+＝280.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.49-7.41(m,1H)、7.04-7.00(m,2H)、3.75(s,3H)、2.93-2.89(m,1H)、1.42-1.38(m,2H)、1.31-1.30(m,2H)。

步骤3：合成82：

按照11的合成步骤操作得到82。LCMS：[M+H]+＝252.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.40-7.33(m,1H)、6.98-6.94(m,2H)、4.40(s,2H)、2.15-2.08(m,1H)、1.19-1.16(m,2H)、1.15-1.06(m,2H)。

步骤4：合成83：

按照12的合成步骤操作得到83。LCMS：[M+H]+＝250.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.81(s,1H)、7.54-7.50(m,1H)、7.11-7.07(m,2H)、2.87-2.81(m,1H)、1.49-1.45(m,2H)、1.39-1.35(m,2H)。

步骤5：合成84：

按照13的合成步骤操作得到84。LCMS：[M+H]+＝278.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.33-7.29(m,1H)、6.96-6.89(m,2H)、6.52(d,J＝12.8Hz,1H)、5.26(d,J＝12.8Hz,1H)、3.50(s,3H)、1.98-1.96(m,1H)、1.14-1.10(m,2H)、1.03-0.97(m,2H)。

步骤6：合成85：

按照14的合成步骤操作得到85。LCMS：[M+H]+＝264.1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：9.54(s,1H)、7.39-7.35(m,1H)、6.98-6.94(m,2H)、3.37(s,2H)、1.88-1.83(m,1H)、1.18-1.14(m,2H)、1.06-1.01(m,2H)。

步骤7：合成86：

按照15的合成步骤操作得到86。LCMS：[M+H]+＝521.2；

步骤8：合成I11：

按照I1的合成步骤操作得到I11。LCMS：[M+H]+＝507.2；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：11.78(br,1H)、7.83-7.77(m,2H)、7.70-7.65(m,1H)、7.35-7.30(m,2H)、6.92-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.02(s,4H)、2.55-2.50(m,2H)、2.40(s,4H)、2.35-2.25(m,3H)、1.15-1.02(m,4H)。

实施例12：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I12)

步骤1：合成87：

在氮气条件下，向DMF(15mL)中依次加入化合物4(1.5g，5.59mmol)、3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.34g，6.71mmol)、Cs₂CO₃(5.46g，16mmol)、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(X-Phos，0.477g,1.1mmol)和Pd₂(dba)₃(256mg,0.28mmol)的混合物。然后，将混合物加热至90℃并搅拌过夜。反应完成后，过滤悬浮液；用EA洗涤滤饼。浓缩滤液，干燥并通过硅胶柱(PE/EA＝10:1)纯化，得到化合物87(1.0g，黑色油脂，产率47％)。LCMS：[M+H]+＝388.3。

步骤2：合成88：

按照6的合成步骤操作得到88。LCMS：[M+H]+＝288.2。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.22(d,J＝8.6Hz,1H)、7.83(s,1H)、7.66(s,1H)、7.35(d,J＝8.5Hz,1H)、4.31(s,1H)、4.19–4.08(m,1H)、3.86(s,3H)、3.81(s,3H)、3.71(dd,J＝21.7,8.1Hz,2H)、3.61(d,J＝12.0Hz,4H)、1.10(d,J＝6.4Hz,3H)。

步骤3：合成89：

按照15的合成步骤操作得到89。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.95(d,J＝8.6Hz,1H)、7.62(s,1H)、7.36(d,J＝7.9Hz,1H)、7.32–7.25(m,1H)、6.96(dd,J＝8.7,1.6Hz,1H)、6.82(s,1H)、3.82(s,3H)、3.69(s,3H)、3.50(s,1H)、3.03(s,2H)、2.56(m,8H)、1.16(dt,J＝6.2,5.2Hz,3H)、1.04(dt,J＝7.2,4.3Hz,2H)、0.85(d,J＝6.2Hz,3H)。LCMS：[M+H]+＝569.2。

步骤4：合成I12：

按照I1的合成步骤操作得到I12。¹H NMR(400MHz,MeOD+D₂O)：δ7.98(d,J＝8.6Hz,1H)、7.85(s,1H)、7.62–7.49(m,3H)、7.13(s,1H)、7.06(d,J＝8.7Hz,1H)、3.82(s,3H)、3.49(s,1H)、3.09(d,J＝4.2Hz,2H)、2.72(d,J＝8.8Hz,1H)、2.67–2.54(m,4H)、2.48(dd,J＝10.3,6.3Hz,2H)、2.35–2.19(m,2H)、1.22–1.11(m,4H)、0.89(d,J＝6.3Hz,3H)；LCMS：[M+H]+＝555.2.

实施例13：

2-(4-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙酸(I13)

步骤1：合成90：

按照87的合成步骤操作得到90。LCMS：[M+H]+＝335.2。

步骤2：合成91：

按照6的合成步骤操作得到91。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ9.22(s,2H)、7.39(d,J＝8.6Hz,2H)、7.31(d,J＝8.6Hz,2H)、3.78-3.71(m,10H)、3.68(s,3H)。LCMS：[M+H]+＝235.1。

步骤3：合成92：

按照15的合成步骤操作得到92。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.37–7.32(m,2H)、7.27(dd,J＝9.1,6.9Hz,1H)、7.08(d,J＝8.6Hz,2H)、6.77(d,J＝8.6Hz,2H)、3.60(s,3H)、3.47(s,2H)、3.41(s,1H)、3.07(s,4H)、2.59–2.32(m,8H)、1.16–1.12(m,2H)、1.02(dt,J＝7.3,4.3Hz,2H)。LCMS:[M+H]+＝516.2。

步骤4：合成I13：

按照I1的合成步骤操作得到I13。¹H NMR(400HMz,MeOD)δ7.61–7.51(m,3H)、7.18(d,J＝8.6Hz,2H)、6.90(d,J＝8.6Hz,2H)、3.49(s,2H)、3.18–3.10(m,4H)、2.73–2.54(m,8H)、2.24(m,1H)、1.23–1.13(m,4H)。LCMS：[M+H]+＝502.1。

实施例14：

4-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)苯甲酸(I14)

步骤1：合成95：

按照15的合成步骤操作得到95。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.83(d,J＝9.0Hz,2H)、7.44–7.22(m,3H)、6.74(t,J＝5.9Hz,2H)、3.79(s,3H)、3.21(s,4H)、2.62–2.30(m,8H)、1.99(d,J＝3.4Hz,1H)、1.19–1.10(m,2H)、1.03(ddd,J＝11.3,6.9,4.4Hz,2H)。LCMS：[M+H]+＝502.1。

步骤2：合成I14：

按照I1的合成步骤操作得到I14。¹H NMR(400HMz,MeOD)δ7.95(d,J＝8.9Hz,2H)、7.69–7.51(m,3H)、7.04(d,J＝9.0Hz,2H)、3.95–3.34(m,8H)、3.28–3.17(m,2H)、2.88(dd,J＝10.5,6.8Hz,2H)、2.29(td,J＝8.0,4.0Hz,1H)、1.27–1.18(m,4H)。

实施例15：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1H-吲哚-3-羧酸(I15)

步骤1：合成97

在氮气条件下，将96(2.54g，10mmol)的四氢呋喃(25mL)溶液冷却至0℃，然后逐滴加入1.3N LiHMDS(9.3mL，12mmol)。反应混合物在0℃下搅拌15分钟。然后将三异丙基氯硅烷(TIPSCl，2.3g，12mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液逐滴加入到反应混合物中。然后，使反应混合物恢复到室温并搅拌过夜。反应完成后，用水淬灭，用EA萃取，并合并有机层，用盐水洗涤、干燥并通过硅胶柱(庚烷/EA＝50:1)纯化，得到97。LCMS：[M+H]+＝253.9,255.9；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.06(d,J＝8.4Hz,1H)、7.92(s,1H)、7.63(s,1H)、7.37(d,J＝8.4Hz,1H)、3.92(s,3H)、1.72-1.67(m,3H)、1.17-1.14(m,18H)。

步骤2：合成98：

在氮气条件下，向二甲苯(40mL)中依次加入化合物97(4.1g，10mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.24g，12mmol)、叔丁醇钠(1.44g，15mmol)、2-(二叔丁基膦)联苯(CAS：224311-51-7，600mg,2mmol)、Pd(OAc)₂(224mg,1mmol)的混合物。然后，将混合物加热至120℃并搅拌4小时。反应完成后，过滤悬浮液，用EA洗涤滤饼。浓缩滤液并通过硅胶柱(庚烷/EA＝50:1)纯化，得到98。LCMS：[M+H]+＝360.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.04(d,J＝8.7Hz,1H)、7.85(s,1H)、7.03-6.70(m,2H)、3.90(s,3H)、3.65-3.60(m,4H)、3.10-3.06(s,4H)、1.72-1.67(m,3H)、1.50(s,9H)、1.17-1.15(m,18H)。

步骤3：合成99：

按照6的合成步骤操作得到99。LCMS：[M+H]+＝416.3。

步骤4：合成100：

按照15的合成步骤操作得到100。LCMS：[M+H]+＝697.2；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.01(m,1H)、7.84(s,1H)、7.44-7.42(m,2H)、7.37-7.35(m,2H)、7.00-6.97(m,2H)、3.90(s,3H)、3.10(s,4H)、2.58-2.48(m,6H)、1.72-1.70(m,3H)、1.68-1.66(m,2H)、1.26-1.21(m,4H)、1.16-1.14(m,18H)。

步骤5：合成I15：

按照I1的合成步骤操作得到I15。LCMS：[M+H]+＝225.1；¹H NMR(4DMSO-d6)δppm：11.60(br,1H)、7.85-7.83(m,2H)、7.70-7.62(m,3H)、6.96-6.92(m,2H)、3.72-3.70(m,2H)、3.58-3.57(m,2H)、3.34-3.07(m,6H)、2.86(s,2H)、2.49(br,1H)、1.23-1.17(m,4H)。

实施例16：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,4-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I16)

步骤1：合成102：

按照8的合成步骤操作得到102，该产物在下一步直接使用。LCMS：[M+H]+＝190；¹HNMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.84(br,1H)、8.30(s,1H)、7.81-7.79(m,1H)、7.63-7.62(m,1H)、7.44-7.41(m,1H)。

步骤2：合成103：

按照9的合成步骤操作得到103，103在下一步直接使用。¹H NMR(DMSO-d6)δppm：12.67(s,1H)、7.79-7.78(m,1H)、7.62-7.60(m,1H)、7.56-7.53(m,1H)。

步骤3：合成104：

按照10的合成步骤操作得到104。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm:7.52(s,1H)、7.36-7.28(m,2H)、3.74(s,3H)、2.89-2.88(m,1H)、1.41-1.37(m,2H)、1.31-1.26(m,2H)。

步骤4：合成105：

按照11的合成步骤操作得到105。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm:7.45(s,1H)、7.33-7.26(m,2H)、4.41(s,2H)、2.14-2.07(m,1H)、1.19-1.15(m,2H)、1.08-1.03(m,2H)。

步骤5：合成106：

按照12的合成步骤操作得到106。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.73(s,1H)、7.56(s,1H)、7.44-7.27(m,2H)、7.89-7.80(m,1H)、1.60(s,2H)、1.44-1.26(m,2H)。

步骤6：合成107：

按照13的合成步骤操作得到107。LCMS：[M+H]+＝309.9。

步骤7：合成108：

按照14的合成步骤操作得到108。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.62(s,1H)、7.52(s,1H)、7.35(s,2H)、3.47(s,2H)、1.93-1.87(m,1H)、1.26-1.10(m,4H)。

步骤8：合成109：

按照15的合成步骤操作得到109。LCMS：[M+H]+＝553.1；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：7.89(s,1H)、7.83(s,1H)、7.75(d,J＝8.7Hz,1H)、7.58-7.48(m,2H)、6.93-6.86(m,2H)、3.77(s,6H)、2.54(s,4H)、2.38(s,2H)、2.30(s,4H)、2.27-2.23(m,3H)、1.06-0.85(m,4H)。

步骤9：合成I16：

按照I1的合成步骤操作得到I16。LCMS：[M+H]+＝539.1；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.80(br,1H)、7.86-7.78(m,3H)、7.60-7.52(m,2H)、6.92-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.03(s,4H)、2.58-2.55(m,2H)、2.40(s,4H)、2.32-2.25(m,3H)、1.11-1.09(m,4H)。

实施例17：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-羧酸(I17)

步骤1：合成113：

按照87的合成步骤操作得到113。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ8.01(d,J＝9.0Hz,1H)、7.02(dd,J＝9.0,1.6Hz,1H)、6.74(s,1H)、4.03(d,J＝5.0Hz,3H)、3.95(s,3H)、3.64-3.52(m,4H)、3.22-3.14(m,4H)、1.43(s,9H)。LCMS：[M+H]+＝375.2。

步骤2：合成114：

按照6的合成步骤操作得到114。¹H NMR(CDCl₃)δ8.13(d,J＝8.9Hz,1H)、7.06(dd,J＝9.0,1.7Hz,1H)、6.81(s,1H)、4.14(s,3H)、4.05(s,3H)、3.58(s,4H)、3.48(s,4H)。LCMS：[M+H]+＝275.1。

步骤3：合成115：

按照15的合成步骤操作得到115。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.95(d,J＝9.0Hz,1H)、7.41-7.24(m,3H)、6.95(dd,J＝9.0,1.8Hz,1H)、6.57(s,1H)、4.00(s,3H)、3.94(s,3H)、3.19(s,4H)、2.70-2.32(m,8H)、1.26-1.11(m,3H)、1.07-0.96(m,2H)。LCMS:[M+H]+＝556.2。

步骤4：合成I17：

按照I1的合成步骤操作得到I17。¹H NMR(400HMz,MeOD)δ8.01(d,J＝9.0Hz,1H)、7.69–7.51(m,3H)、7.15(dd,J＝9.1,1.8Hz,1H)、7.01(s,1H)、4.09(s,3H)、3.52(s,4H)、3.35(s,4H)、3.15(dd,J＝10.3,6.8Hz,2H)、2.87(dd,J＝10.3,6.8Hz,2H)、2.35–2.25(m,1H)、1.27–1.12(m,4H)。

实施例18：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基-2H-吲唑-3-羧酸(I18)

步骤1：合成116：

按照87的合成步骤操作得到116。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.83(d,J＝9.2Hz,1H)、7.14–6.97(m,2H)、4.39(s,3H)、3.95(s,3H)、3.65–3.53(m,4H)、3.12(s,3H)、1.42(s,9H)。LCMS：[M+H]+＝375.2。

步骤2：合成117：

按照6的合成步骤操作得到117。¹H NMR(CDCl₃)δ9.70(s,1H)、7.85(d,J＝9.1Hz,1H)、7.04–6.91(m,2H)、4.40(s,3H)、3.96(s,3H)、3.38(d,J＝26.4Hz,8H)。LCMS：[M+H]+＝275.1。

步骤3：合成118：

按照15的合成步骤操作得到118。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.78(d,J＝9.2Hz,1H)、7.40–7.34(m,2H)、7.28(dd,J＝9.0,6.9Hz,1H)、6.99(dd,J＝9.2,1.8Hz,1H)、6.91(s,1H)、4.37(s,3H)、3.95(d,J＝5.7Hz,3H)、3.15(s,4H)、2.51(d,J＝31.6Hz,8H)、1.22-1.11(m,3H)、1.08-0.98(m,2H)。LCMS:[M+H]+＝556.2。

步骤4：合成I18：

按照I1的合成步骤操作得到I18。¹H NMR(400HMz,MeOD)：δ7.97(d,J＝9.2Hz,1H)、7.65–7.59(m,2H)、7.55(dd,J＝9.4,6.6Hz,1H)、7.16(dd,J＝9.2,1.8Hz,1H)、7.00(s,1H)、4.42(s,3H)、3.48-3.35(m,8H)、3.17(dd,J＝10.4,6.7Hz,2H)、2.87(dd,J＝10.4,6.7Hz,2H)、2.35-2.25(m,1H)、1.30-1.17(m,4H)。LCMS：[M+H]+＝539.8。

实施例19

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2-氟苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I19)

步骤1：合成121：

按照9的合成步骤操作得到121，该产物在下一步直接使用，无需进一步纯化。¹HNMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：12.62(br,1H)、7.67-7.56(m,1H)、7.55-7.52(m,1H)、7.37-7.30(m,2H)。

步骤2：合成122：

按照10的合成步骤操作得到122。LCMS：[M+H]+＝262.1；1H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：7.47-7.41(m,2H)、7.31-7.27(m,2H)、3.62(s,3H)、2.81-2.77(m,1H)、1.31-1.25(m,2H)、1.23-1.16(m,2H)。

步骤3：合成123：

按照11的合成步骤操作得到123。LCMS：[M+H]+＝234.1；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.47-7.40(m,2H)、7.31-7.27(m,2H)、4.38(s,2H)、2.10-2.06(m,1H)、1.14-1.10(m,2H)、1.03-0.98(m,2H)。

步骤4：合成124：

按照12的合成步骤操作得到124。LCMS：[M+H]+＝232.1；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.74(s,1H)、7.53-7.45(m,2H)、7.24-7.14(m,2H)、2.84-2.80(m,1H)、1.35-1.33(m,2H)、1.27-1.22(m,2H)。

步骤5：合成125：

按照13的合成步骤操作得到125。LCMS：[M+H]+＝260.1；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.43-7.36(m,2H)、7.19-7.08(m,2H)、6.57(d,J＝12.8Hz,1H)、5.31(d,J＝12.8Hz,1H)、3.51(s,3H)、1.98-1.97(m,1H)、1.11-1.08(m,2H)、1.02-0.95(m,2H)。

步骤6：合成126：

按照14的合成步骤操作得到126。LCMS:[M+H]+＝246.1。

步骤7：合成127：

按照15的合成步骤操作得到127。LCMS：[M+H]+＝503.2。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.94-7.92(m,1H)、7.58(s,1H)、7.43-7.36(m,2H)、7.19-7.01(m,3H)、6.92-6.90(m,2H)、6.67(s,1H)、3.81(s,3H)、3.67(s,3H)、3.12(s,4H)、2.66-2.45(m,7H)、1.97(s,2H)、1.21-1.13(m,2H)、1.11-1.05(m,2H)。

步骤8：合成I19：

按照I1的合成步骤操作得到I19。LCMS：[M+H]+＝489.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.78(br,1H)、7.83-7.78(m,2H)、7.61-7.42(m,2H)、7.39-7.34(m,2H)、6.92-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.03(s,4H)、2.64-2.60(m,2H)、2.22(s,4H)、2.33-2.27(m,2H)、2.27-2.24(m,1H)、1.11-1.02(m,4H)。

实施例20：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I20)

步骤1：合成136：

按照15的合成步骤操作得到136。LCMS：[M+H]+＝569.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：7.89(s,1H)、7.75(d,J＝8.7Hz,1H)、7.66-7.64(m,1H)、7.56-7.53(m,2H)、6.92-6.86(m,2H)、5.72(s,1H)、3.74(s,6H)、3.02(s,4H)、2.55-2.53(m,2H)、2.48(s,4H)、2.30-2.23(m,3H)、1.20-1.12(m,2H)、1.09-0.99(m,2H)。

步骤2：合成I20：

按照I1的合成步骤操作得到I20。LCMS：[M+H]+＝555.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.82(br,1H)、7.83-7.77(m,2H)、7.71-7.67(m,1H)、7.61-7.54(m,3H)、6.92-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.04(s,4H)、2.58-2.51(m,2H)、2.41(s,4H)、2.32-2.26(m,3H)、1.12-1.04(m,4H)。

实施例21：

6-(4-(2-(3-(2-氯代-6-甲氧基苯基)-5-环丙基异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I21)

步骤1：合成138：

按照8的合成步骤操作得到138，138在下一步直接使用。LCMS：[M+H]+＝186.1。

步骤2：合成139：

按照9的合成步骤操作得到139，139在下一步直接使用。

步骤3：合成140：

按照10的合成步骤操作得到140。LCMS：[M+H]+＝308.0。

步骤4：合成141：

按照11的合成步骤操作得到141。LCMS:[M+H]+＝280.1。

步骤5：合成142：

按照12的合成步骤操作得到142。LCMS：[M+H]+＝278.0。

步骤6：合成143：

按照13的合成步骤操作得到143。LCMS：[M+H]+＝306.1。

步骤7：合成144：

按照14的合成步骤操作得到144。LCMS：[M+H]+＝292.0。

步骤8：合成145：

按照15的合成步骤操作得到145。LCMS：[M+H]+＝549.2。

步骤9：合成I21：

按照I1的合成步骤操作得到I21。LCMS：[M+H]+＝535.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：10.07(br,1H)、7.89-7.84(m,2H)、7.58-7.53(m,1H)、7.24-7.20(m,2H)、7.47-7.42(m,1H)、7.01-6.98(m,2H)、3.85-3.79(m,8H)、3.58-3.56(m,2H)、3.18-3.13(m,4H)、3.02-2.96(m,2H)、2.79-2.67(m,2H)、2.36-2.32(m,1H)、1.16-1.07(m,4H)。

实施例22：

6-(4-(2-(3-(2-氯代-6-甲基苯基)-5-环丙基异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I22))

步骤1：合成150：

按照8的合成步骤操作得到150，150在下一步直接使用。LCMS：[M+H]+＝170；¹HNMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.46(s,1H)、7.20-7.06(m,3H)、2.40(s,3H)。

步骤2：合成151：

按照9的合成步骤操作得到151，151在下一步直接使用。

步骤3：合成152：

按照10的合成步骤操作得到152。LCMS：[M+H]+＝292.07；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.33-7.19(m,3H)、3.66(s,3H)、2.98-2.89(m,1H)、2.09(s,3H)、1.47-1.20(m,4H)。

步骤4：合成153：

按照11的合成步骤操作得到153。LCMS：[M+H]+＝264；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.26-7.19(m,2H)、7.14-7.12(m,1H)、4.30(s,2H)、2.11(s,3H)、1.48(s,1H)、1.21-1.17(m,2H)、1.09-1.05(m,2H)。

步骤5：合成154：

按照12的合成步骤操作得到154。LCMS：[M+H]+＝262；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.50(s,1H)、7.28-7.15(m,3H)、2.82-2.78(m,1H)、2.15(s,3H)、1.40-1.38(m,2H)、1.29-1.27(m,2H)。

步骤6：合成155：

按照13的合成步骤操作得到155。LCMS:[M+H]+＝290。

步骤7：合成156：

按照14的合成步骤操作得到156。LCMS：[M+H]+＝276.1。

步骤8：合成157：

按照15的合成步骤操作得到157。LCMS：[M+H]+＝533.2。

步骤9：合成I22：

按照I1的合成步骤操作得到I22。LCMS：[M+H]+＝519.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.78(br,1H)、7.80-7.77(m,2H)、7.46-7.44(m,2H)、7.37-7.36(m,1H)、6.91-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.05-3.04(m,4H)、2.50-2.25(m,9H)、2.13(s,3H)、1.23-1.02(m,4H)。

实施例23：

6-(4-(1-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)丙烷-2-基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I23)

步骤1：合成158：

在冰水浴中冷却化合物14(500mg，1.69mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，在氮气条件下在0℃下通过注射器在5分钟内加入甲基溴化镁(3.0M在二乙醚中，1.13mL，3.39mmol)。反应物在0℃下搅拌40分钟。LCMS指示反应完成后，在0℃下用饱和氯化铵(10mL)处理反应物。然后，反应物用水稀释(25mL)，形成分层。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩得到158。LCMS：[M+H]+＝313.8。

步骤2：合成159：

在0℃下，向化合物158(1.3g，4.16mmol)的DCM(20mL)溶液中分批加入戴斯-马丁试剂(2.65g,6.24mol)。然后，使反应混合物恢复到室温并搅拌3小时。LCMS指示反应完成后，向反应物中加入NaHCO₃(30mL)和Na₂S₂O₃(30mL)的饱和水溶液，并搅拌10分钟。然后，溶液用二氯甲烷萃取；并合并有机层，用盐水洗涤，干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱法(PE/EA＝5:1)纯化，得到159(491mg，白色固体，产率38％)。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.37-7.34(m,2H)、7.28(dd,J＝9.1,6.9Hz,1H)、3.28(s,2H)、2.00(s,3H)、1.93-1.87(m,1H)1.25-1.12(m,2H)、1.04(m,2H)。LCMS：[M+H]+＝311.7。

步骤3：合成160：

按照15的合成步骤操作得到160。LCMS：[M+H]+＝554.9

步骤4：合成I23：

按照I1的合成步骤操作得到I23。¹H NMR(400HMz,MeOD)δ7.96(d,J＝9.3Hz,1H)、7.82(s,1H)、7.66-7.58(m,2H)、7.57(d,J＝7.7Hz,1H)、7.01(d,J＝5.9Hz,2H)、3.82(s,3H)、3.42-3.39(m,4H)、3.30-3.21(m,4H)、3.04(d,J＝11.9Hz,2H)、2.79(d,J＝12.0Hz,1H)、2.29(s,1H)、1.36(d,J＝6.6Hz,3H)、1.22(dd,J＝10.4,4.6Hz,4H)。[M+H]+＝552.9。

实施例24：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)丙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I24)

步骤1：合成161：

按照158的合成步骤操作得到161。LCMS：[M+H]+＝300.0

步骤2：合成162：

按照159的合成步骤操作得到162。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.49-7.30(m,3H)、3.07-2.95(m,1H)、2.03(s,3H)、1.47-1.37(m,2H)、1.34-1.23(m,2H)。LCMS：[M+H]+＝298.0

步骤3：合成163：

按照13的合成步骤操作得到163。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.33-7.28(m,3H)、7.26-7.20(m,1H)、5.82(d,J＝1.1Hz,1H)、3.24(s,3H)、1.99-1.90(m,1H)、1.61(s,3H)、1.16-1.12(m,2H)、0.98(dt,J＝7.3,4.3Hz,2H)。LCMS：[M+H]+＝326.0。

步骤4：合成164：

按照14的合成步骤操作得到164。LCMS：[M+H]+＝312.0。

步骤5：合成165：

按照15的合成步骤操作得到165。LCMS：[M+H]+＝569.2

步骤6：合成I24：

按照I1的合成步骤操作得到化合物I24(11.7mg，灰白色固体，产率21％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.85(d,J＝8.6Hz,1H)、7.74-7.69(m,1H)、7.54-7.42(m,3H)、6.91(dd,J＝10.7,1.8Hz,2H)、3.72(s,3H)、3.31-3.20(m,4H)、3.13-2.96(m,5H)、2.95-2.86(m,1H)、2.24-2.15(m,1H)、1.27(d,J＝6.9Hz,3H)、1.11(dd,J＝10.2,7.6Hz,4H)。[M+H]+＝552.8。

实施例25：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2,2-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I25)

步骤1：合成166：

在氮气条件下，向甲苯(8mL)中依次加入6-碘代-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸叔丁酯(166)(0.75g，2.12mmol)、3,3-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.5g，2.33mmol)、叔丁醇钠(0.51g，5.3mmol)、2-双环己基膦-2'-(N,N-二甲基氨基)联苯(DAVE Phos，37.5mg,0.1mmol)和Pd2(dba)3(98mg，0.1mmol)的混合物。然后，将混合物加热至100℃并搅拌过夜。反应完成后，过滤悬浮液，用EA洗涤滤饼。浓缩滤液，干燥并通过硅胶柱(PE/EA＝5:1)纯化，得到167。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ7.92(d,J＝8.4Hz,1H)、7.62(s,1H)、7.00(d,J＝12.1Hz,2H)、3.71(s,3H)、3.53(s,2H)、3.29(s,2H)、3.08(s,2H)、1.53(d,J＝16.5Hz,9H)、1.43(s,9H)、0.97(s,6H)。LCMS：[M+H]+＝443.9.

步骤2：合成168：

按照6的合成步骤操作得到产物168，该产物在下一步直接使用。LCMS：[M+H]+＝343.9。

步骤3：合成I25：

按照15的合成步骤操作得到I25。¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δ9.78(s,1H)、8.02(s,1H)、7.89(d,J＝8.2Hz,1H)、7.77-7.67(m,2H)、7.67-7.62(m,1H)、7.21(s,1H)、7.01(s,1H)、3.82(s,3H)、3.69-3.36(m,1H)、3.51-3.48(m,2H)、3.10-3.05(m,2H)、2.99-2.94(m,2H)、2.81-2.78(m,2H)、2.39(t,J＝19.6Hz,2H)、1.31-1.08(m,8H)、1.03(s,2H)。LCMS：[M+H]+＝567.2。

实施例26：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2-(三氟甲基)苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I26)

步骤1：合成171：

按照9的合成步骤操作得到171，171在下一步直接使用。

步骤2：合成172：

按照10的合成步骤操作得到172。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.81-7.78(m,1H)、7.64-7.62(m,2H)、7.43-7.40(m,1H)、3.65(s,3H)、2.93-2.86(m,1H)、1.43-1.38(m,2H)、1.32-1.27(m,2H)。

步骤3：合成173：

按照11的合成步骤操作得到173。LCMS：[M+H]+＝284.1；¹H NMR(CDCl₃)δppm：7.74-7.72(m,1H)、7.57-7.50(m,2H)、7.39-7.37(m,1H)、4.31(s,2H)、2.11-2.04(m,1H)、1.51(s,1H)、1.19-1.15(m,2H)、1.07-1.04(m,2H)。

步骤4：合成174：

按照12的合成步骤操作得到174。LCMS：[M+H]+＝282.1；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.53(s,1H)、7.78-7.76(m,1H)、7.61-7.58(m,2H)、7.41-7.39(m,1H)、2.79-2.74(m,1H)、1.39-1.36(m,2H)、1.30-1.26(m,2H)。

步骤5：合成175：

按照13的合成步骤操作得到175。LCMS：[M+H]+＝310.1；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.81-7.76(m,1H)、7.63-7.56(m,2H)、7.41-7.39(m,1H)、6.42(d,J＝13.2Hz,1H)、5.27(d,J＝13.2Hz,1H)、3.51(s,3H)、2.07-2.03(m,1H)、1.21-1.17(m,2H)、1.11-1.10(m,2H)。

步骤6：合成176：

按照14的合成步骤操作得到176。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.49(s,1H)、7.73-7.71(m,1H)、7.56-7.52(m,2H)、7.30-7.28(m,1H)、3.30(s,2H)、1.85-1.78(m,1H)、1.19-1.05(m,4H)。

步骤7：合成177：

按照15的合成步骤操作得到177。LCMS：[M+H]+＝553.2。

步骤8：合成I26：

按照I1的合成步骤操作得到I26。LCMS：[M+H]+＝539.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.83(br,1H)、7.96-7.95(m,1H)、7.88-7.79(m,4H)、7.64-7.62(m,1H)、7.00-6.96(m,2H)、3.79(s,5H)、3.55-3.53(m,2H)、3.33(s,6H)、3.13-3.11(m,2H)、2.41(s,1H)、1.17-1.09(m,4H)。

实施例27：

6-(4-(2-(3-(2,6-二氯苯基)-5-甲基异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I27)

步骤3：合成181：

按照10的合成步骤操作得到181。LCMS：[M+H]+＝286.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.35-7.34(m,1H)、7.29-7.25(m,2H)、3.62(s,3H)、2.72(s,3H)。

步骤4：合成182：

按照11的合成步骤操作得到182。LCMS：[M+H]+＝258.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.37-7.27(m,3H)、4.28(s,2H)、2.48(s,3H)、1.44(s,1H)。

步骤5：合成183：

按照12的合成步骤操作得到183。LCMS：[M+H]+＝256.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.58(s,3H)、7.38-7.35(m,3H)、2.76(s,2H)。

步骤6：合成184：

按照13的合成步骤操作得到184。LCMS：[M+H]+＝284.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.35-7.22(m,3H)、6.25(d,J＝12.8Hz,1H)、5.16(d,J＝12.8Hz,1H)、3.46(s,3H)、2.42(s,3H)。

步骤7：合成185：

按照14的合成步骤操作得到185。LCMS：[M+H]+＝270.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：9.47(s,1H)、7.37-7.29(m,3H)、3.22(s,2H)、2.41(s,3H)。

步骤8：合成186：

按照15的合成步骤操作得到186。LCMS：[M+H]+＝527.1；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.06(d,J＝8.4Hz,1H)、7.72(s,1H)、7.51-7.44(m,3H)、6.96-6.95(m,1H)、6.84(s,1H)、3.91(s,3H)、3.80(s,3H)、3.56-3.54(m,4H)、2.95-2.91(m,4H)、2.63(s,3H)、1.30-1.28(m,4H)。

步骤9：合成I27：

按照I1的合成步骤操作得到I27。LCMS：[M+H]+＝513.1；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.71(br,1H)、7.82-7.77(m,2H)、7.69-7.67(m,2H)、7.62-7.58(m,1H)、6.92-6.87(m,2H)、3.76(s,3H)、3.06-3.05(m,4H)、2.49(s,3H)、2.41-2.39(m,6H)、2.29-2.25(m,2H)。

实施例28：

6-((1R,4R)-5-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I28)

步骤1：合成188：

按照5的合成步骤操作得到188。LCMS：[M+H]+＝385.2；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.92-7.89(m,1H)、7.52(s,1H)、6.60-6.58(m,1H)、6.30(s,1H)、4.58-4.38(m,2H)、3.81(s,3H)、3.66(s,3H)、3.62-3.20(m,4H)、1.87(s,1H)、1.38-1.31(m,9H)、0.81-0.78(m,1H)。

步骤2：合成189：

按照6的合成步骤操作得到189。LCMS：[M+H]+＝286.1。

步骤3：合成190：

按照15的合成步骤操作得到190。LCMS：[M+H]+＝565.1。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.94-7.92(m,1H)、7.61(s,1H)、7.19-7.16(m,2H)、6.84(s,1H)、6.44-6.42(m,1H)、6.21(s,1H)、4.25(s,1H)、3.85(s,3H)、3.71(s,3H)、3.48-3.46(m,1H)、3.27-3.24(m,2H)、2.79-2.64(m,2H)、2.50-2.32(m,2H)、2.10(s,3H)、2.08-1.92(m,2H)、1.19-1.10(m,2H)、0.90-0.85(m,2H)。

步骤4：合成I28

按照I1的合成步骤操作得到I28。LCMS：[M+H]+＝551.1；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.76(br,1H)、7.76-7.74(m,2H)、7.54(s,1H)、7.24-7.20(m,1H)、7.04(s,1H)、6.51(d,J＝1.6Hz,1H)、6.49-6.43(m,1H)、4.23(s,1H)、3.74(s,3H)、3.40-3.27(m,2H)、3.07-3.05(m,1H)、2.68-2.66(m,1H)、2.50-2.09(m,6H)、1.73(s,2H)、1.04-0.98(m,4H)。

实施例29：

6-(5-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I29)

步骤1：合成192：

按照5的合成步骤操作得到192。LCMS：[M+H]+＝385.2；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.92-7.89(m,1H)、7.52(s,1H)、6.60-6.58(m,1H)、6.30(s,1H)、4.58-4.38(m,2H)、3.81(s,3H)、3.66(s,3H)、3.62-3.20(m,4H)、1.87(s,1H)、1.38-1.31(m,9H)、0.81-0.78(m,1H)。

步骤2：合成193：

按照6的合成步骤操作得到193。LCMS：[M+H]+＝286.1。

步骤3：合成194：

按照15的合成步骤操作得到194。LCMS：[M+H]+＝565.1。

步骤4：合成I29：

按照I1的合成步骤操作得到I29。LCMS：[M+H]+＝551.1；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：11.76(br,1H)、7.80(s,2H)、7.61-7.54(m,1H)、7.22(s,1H)、7.04(s,1H)、6.67-6.44(m,1H)、4.68-4.23(m,1H)、3.74(s,3H)、3.40(s,1H)、3.07(s,1H)、2.67(s,1H)、2.40-2.08(m,5H)、1.74(s,1H)、1.05-0.99(m,4H)。

实施例30：

6-(3-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I30)

步骤1：合成196：

在氮气条件下，向1,4-二恶烷(5mL)中依次加入化合物4(224mg，0.83mmol)、化合物195(212mg，1mmol)、Cs₂CO₃(524mg，1.66mmol)、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(X-Phos，40mg,0.08mmol)、Pd₂(dba)3(40mg,0.04mmol)的混合物。然后，将混合物加热至80℃并搅拌过夜。反应完成后，过滤悬浮液，用EA洗涤滤饼。浓缩滤液，干燥并通过硅胶柱(庚烷/EA＝3:1)纯化，得到196。LCMS：[M+H]+＝400.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.93-7.91(m,1H)、7.55(s,1H)、6.82-6.79(m,1H)、6.57(s,1H)、4.21-4.16(m,2H)、3.81(s,3H)、3.72-3.67(m,4H)、3.57-3.54(m,1H)、3.31-3.22(m,2H)、1.99-1.98(m,2H)、1.81-1.78(m,2H),1.38(s,9H)。

步骤2：合成197：

按照6的合成步骤操作得到197。LCMS:[M+H]+＝300.1。

步骤3：合成198：

按照15的合成步骤操作得到198。LCMS：[M+H]+＝578.9；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.88-7.86(m,1H)、7.52(s,1H)、7.34-7.25(m,3H)、6.77-6.74(m,1H)、6.51(s,1H)、4.10(s,2H)、3.80(s,3H)、3.65(s,3H)、3.42(s,1H)、2.48-2.33(m,4H)、2.21-2.17(m,2H)、1.97-1.94(m,2H)、1.85(s,4H)、1.14-1.11(m,2H)、1.02-0.98(m,2H)。

步骤4：合成I30：

按照I1的合成步骤操作得到I30。LCMS：[M+H]+＝564.9；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：9.55(br,1H)、7.85-7.74(m,2H)、7.67-7.57(m,3H)、6.96-6.88(m,2H)、4.51(s,1H)、3.76(s,3H)、3.43-3.41(m,2H)、3.17-3.01(m,4H)、2.70(s,2H)、2.33-2.30(m,1H)、2.03-1.95(m,4H)、1.12-1.06(m,4H)。

实施例31：

2-(3-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)-4-氟代苯并[d]噻唑-6-羧酸(I31)

步骤2：合成202：

按照29的合成步骤操作得到202。¹H NMR(400HMz,MeOD)δ8.18(s,1H)、7.68(d,J＝11.5Hz,1H)、4.52(s,2H)、3.98-3.92(m,2H)、3.91(s,3H)、3.26-3.19(m,2H)、2.21-2.08(m,2H)、1.88(d,J＝7.6Hz,2H)、1.47(s,9H)。LCMS：[M+H]+＝422.0。

步骤3：合成203：

按照6的合成步骤操作得到产物化合物203(670mg，粗产物)，该产物在下一步直接使用，无需进一步纯化。LCMS：[M+H]+＝322.1

步骤4：合成204：

按照15的合成步骤操作得到204(302mg，粗产物)，该产物在下一步直接使用，无需进一步纯化。LCMS：[M+H]+＝602.8。

步骤5：合成I31：

按照I1的合成步骤操作得到I31。¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δ13.07(s,0.7H)、9.77(s,0.5H)、8.31(s,1H)、7.82-7.46(m,4H)、4.57(s,3H)、3.75-3.46(m,1H)、3.10(s,1H)、2.91-2.66(m,3H)、2.31(s,2H)、2.08-1.91(m,5H)、1.17-0.94(m,4H)。LCMS：[M+H]+＝415.19。

实施例32：

2-(3-(2-(5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)-4-氟代苯并[d]噻唑-6-羧酸(I32)

步骤1：合成204：

按照15的合成步骤操作得到204(315mg，粗产物)，该产物在下一步直接使用。LCMS：[M+H]+＝617.2。

步骤2：合成I32：

按照I1的合成步骤操作得到I32。¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δ13.06(s,0.7H)、9.51(s,1H)、8.31(s,1H)、7.72-7.56(m,5H)、4.78-4.16(m,3H)、3.60(s,1H)、3.13(s,1H)、2.81-2.62(m,2H)、2.33-2.18(m,3H)、2.07-1.78(m,4H)、1.24(s,1H)、1.15-0.92(m,4H)。LCMS：[M+H]+＝603.1。

实施例33：

2-(3-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸(I33):

步骤1：合成206：

按照29的合成步骤操作得到206。LCMS：[M+H]+＝404.0；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.32(s,1H)、8.03-7.99(m,1H)、7.56-7.53(m,1H)、4.43(s,2H)、4.01-3.93(m,4H)、3.85-3.81(m,1H)、3.78-3.24(m,2H)、2.11(s,2H)、1.94-1.91(m,2H)、1.47(s,9H)。

步骤2：合成207：

按照6的合成步骤操作得到207。LCMS：[M+H]+＝304.0；

步骤3：合成208：

按照15的合成步骤操作得到208。LCMS：[M+H]+＝582.8；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.21(s,1H)、7.92-7.89(m,1H)、7.44-7.25(m,4H)、4.25(s,2H)、3.84(s,3H)、2.61-2.58(m,2H)、2.38-2.36(m,4H)、2.29-2.26(m,2H)、1.94-1.90(m,5H)、1.19-0.99(m,4H)。

步骤4：合成I33：

按照I1的合成步骤操作得到I33。LCMS：[M+H]+＝568.8；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：12.80(br,1H)、8.44(s,1H)、7.90-7.88(m,1H)、7.69-7.52(m,4H)、4.57(s,2H)、3.57-3.12(m,6H)、2.73-2.67(m,2H)、2.33-2.31(m,2H)、2.07-2.01(m,3H)、1.13-1.07(m,4H)。

实施例34：

2-(3-(2-(5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸(I34)

步骤3：合成209：

按照15的合成步骤操作得到209。LCMS：[M+H]+＝598.9；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：8.20(s,1H)、7.91-7.89(m,1H)、7.44-7.38(m,3H)、7.31-7.30(m,2H)、4.22(s,2H)、3.83(s,3H)、2.50-2.47(m,4H)、2.38-2.36(m,4H)、2.36-2.25(m,4H)、1.90-1.80(m,5H)、1.11-0.98(m,4H)。

步骤4：合成I34：

按照I1的合成步骤操作得到I34。LCMS：[M+H]+＝585.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：12.75(br,1H)、8.45(s,1H)、7.90(s,1H)、7.73-7.70(m,1H)、7.69-7.54(m,4H)、4.61(s,2H)、3.57-3.11(m,5H)、2.78(s,2H)、2.33-2.31(m,2H)、2.29-2.02(m,4H)、1.12-1.05(m,4H)。

实施例35：

(R)-6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I35)

LCMS：[M+H]+＝553.17

实施例36：

6-(1-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I36)

步骤1：合成211：

在氮气条件下，向二恶烷/H₂O(15/1.5mL)中依次加入化合物4(1.0g，3.7mmol)、叔丁基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二恶硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.27g，4.1mmol)、K₂CO₃(1.03g，7.4mmol)和Pd(dppf)Cl₂(273mg，0.37mmol)的混合物。然后，将混合物加热至90℃并搅拌过夜。反应完成后，过滤悬浮液，用EA洗涤滤饼。浓缩滤液，干燥并通过硅胶柱(PE/EA＝2:1)纯化，得到211。¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δ8.02(d,J＝8.4Hz,1H)、7.68(s,1H)、7.33–7.20(m,2H)、6.01(s,1H)、4.04(s,2H)、3.83(s,3H)、3.75(s,3H)、3.60(t,J＝5.4Hz,2H)、2.55(s,2H)、1.43(s,9H)。LCMS：[M-56+1]+＝315.1。

步骤2：合成212：

向化合物211(1.1g，2.97mmol)在15mL甲醇中的溶液中加入Pd/C(0.5g)，并在氢气气氛中，在室温下搅拌混合物2小时。在HPLC显示没有起始材料后，过滤清除固体，并浓缩滤液得到得到黑色油脂状的212。LCMS：[M+Na]+＝395.2。

步骤3：合成213：

按照6的合成步骤操作得到213。LCMS：[M+H]+＝273.1。

步骤4：合成214：

按照15的合成步骤操作得到214，该产物在下一步直接使用，无需进一步纯化。¹HNMR(400HMz,CDCl₃)δ7.99(d,J＝8.2Hz,1H)、7.66(s,1H)、7.42-7.26(m,3H)、7.16-7.00(m,2H)、3.82(s,3H)、3.72(s,3H)、3.06-2.91(m,3H)、2.54(dt,J＝8.3,5.6Hz,3H)、2.49-2.39(m,2H)、2.01(m,3H)、1.88-1.71(m,4H)、1.17-1.15(m,2H)、1.05-1.03(m,2H)。LCMS：[M+H]+＝554.2。

步骤5：合成I36：

按照I1的合成步骤操作得到I36。¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H)、8.00(s,1H)、7.95(d,J＝8.3Hz,1H)、7.78–7.61(m,3H)、7.31(s,1H)、7.08(d,J＝8.3Hz,1H)、3.83(s,3H)、3.56(d,J＝10.7Hz,3H)、3.08(s,4H)、2.91(s,1H)、2.84(s,2H)、2.01(s,4H)、1.18(d,J＝7.9Hz,2H)、1.13(s,2H)。LCMS：[M+H]+＝538.1。

实施例37：

(S)-6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I37)

步骤1：合成216：

按照87的合成步骤操作得到216。LCMS：[M+H]+＝388.2；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.95-7.93(m,1H)、7.57(s,1H)、6.91-6.88(m,1H)、6.66(s,1H)、4.30(s,1H)、3.92-3.89(m,1H)、3.80(s,3H)、3.68(s,3H)、3.45-3.33(m,3H)、2.88-2.85(m,1H)、2.73-2.66(m,1H)、1.42(s,9H)、1.29-1.27(m,3H)。

步骤2：合成217：

按照6的合成步骤操作得到217。LCMS:[M+H]+＝288.2。

步骤3：合成218：

按照15的合成步骤操作得到218。LCMS：[M+H]+＝567.2。

步骤4：合成I37：

按照I1的合成步骤操作得到I37。LCMS：[M+H]+＝553.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：9.75(br,1H)、7.89-7.84(m,2H)、7.74-7.63(m,3H)、7.01-6.99(m,2H)、3.86(s,2H)、3.78(s,3H)、3.73-3.70(m,1H)、3.48(s,1H)、3.31(s,1H)、3.20-2.93(m,4H)、2.78-2.62(m,2H)、2.50(s,1H)、1.23-1.19(m,7H)。

实施例38：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,3-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I38)

LCMS：[M+H]+＝567.51。

实施例39：

(S)-6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I39)

步骤1：合成220：

按照87的合成步骤操作得到220。LCMS：[M+H]+＝388.2；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.97-7.94(m,1H)、7.61(s,1H)、6.97-6.94(m,1H)、6.75(s,1H)、3.84(s,3H)、3.82(s,3H)、3.79-3.71(m,2H)、3.70-3.68(m,2H)、3.50-3.49(m,1H)、3.07-3.03(m,2H)、1.42(s,9H)、0.88-0.87(m,3H)。

步骤2：合成221：

按照6的合成步骤操作得到221。LCMS:[M+H]+＝288。

步骤3：合成222：

按照15的合成步骤操作得到222。LCMS：[M+H]+＝567.2；

步骤4：合成I39：

按照I1的合成步骤操作得到I39。LCMS：[M+H]+＝553.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：9.56(br,1H)、8.02-7.87(m,2H)、7.72-7.62(m,3H)、7.25-6.95(m,2H)、3.81(s,3H)、3.78(s,2H)、3.55-3.18(m,6H)、2.79(s,3H)、2.37(s,1H)、1.22-1.10(m,4H)、1.06-0.86(m,3H)。

实施例40：

(R)-6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I40)

步骤1：合成224：

按照87的合成步骤操作得到224。LCMS：[M+H]+＝388.2；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.97-7.94(m,1H)、7.61(s,1H)、6.97-6.94(m,1H)、6.75(s,1H)、3.84(s,3H)、3.82(s,3H)、3.79-3.71(m,2H)、3.70-3.68(m,2H)、3.50-3.49(m,1H)、3.07-3.03(m,2H)、1.42(s,9H)、0.88-0.87(m,3H)。

步骤2：合成225：

按照6的合成步骤操作得到225。LCMS:[M+H]+＝288.2。

步骤3：合成226：

按照15的合成步骤操作得到226。LCMS：[M+H]+＝565.1；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.96-7.94(m,1H)、7.61(s,1H)、7.37-7.28(m,3H)、6.98-6.95(m,1H)、6.80(s,1H)、3.81(s,3H)、3.69(s,3H)、3.48(s,1H)、3.02(s,2H)、2.52-2.34(m,8H)、2.00(s,1H)、1.16-1.01(m,4H)、0.86-0.79(m,3H)。

步骤4：合成I40：

按照I1的合成步骤操作得到I40。LCMS：[M+H]+＝553.2；¹H NMR(400HMz,DMSO-d6)δppm：9.56(br,1H)、8.02-7.87(m,2H)、7.72-7.62(m,3H)、7.25-6.95(m,2H)、3.81(s,3H)、3.78(s,2H)、3.55-3.18(m,6H)、2.79(s,3H)、2.37(s,1H)、1.22-1.10(m,4H)、1.06-0.86(m,3H)。

实施例41：

6-(8-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I41)

LCMS:[M+H]+＝565.5。

实施例42：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-5-氟代-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I42)

步骤1：合成229：

向228(1.15g,5.4mmol)的DMF(15mL)溶液中加入三氟乙酸酐(TFAA，2.2mL)。2小时候，将反应混合物倒入10％碳酸氢钠溶液(40mL)中，并过滤沉淀物，用水洗涤(60mL)。将固体溶解在乙酸乙酯(50mL)中，经Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到中间产物。将中间产物置于5N NaOH(35mL)中，在140℃下加热1小时。使反应混合物冷却，用水稀释(50mL)并用醚(50mL)萃取。使用浓盐酸将水相层调节至pH＝1，并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，干燥并真空浓缩，得到化合物229(1.0g，白色固体状粗产物)。LCMS：[M+H]+＝255.3,257.3。

步骤2：合成230：

在室温下向化合物229(1.0g，3.88mmol)的DMF(15mL)溶液中加入K₂CO₃(1.6g，11.6mmol)。然后，将碘甲烷(1.4g，9.69mmol)逐滴加入到混合物中。在室温下搅拌反应混合物过夜。反应完成后，浓缩反应混合物，然后用水稀释，用EA萃取，并合并有机层，用盐水(50mL)洗涤、干燥并通过硅胶柱(庚烷/EA＝8:1)纯化，得到化合物230(1.0g，白色固体，产率89％)。LCMS：[M+H]+＝286.0,288.0；¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：7.82-7.80(m,1H)、7.69(s,1H)、7.35-7.31(m,1H)、4.04(s,3H)、3.91(s,3H)。

步骤3：合成231：

按照87的合成步骤操作得到231(480mg，白色固体，产率61％)。LCMS：[M+H]+＝292.2；¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：7.83-7.80(m,1H)、7.65(s,1H)、6.99-6.94(m,1H)、4.01(s,3H)、3.90(s,3H)、3.65(s,4H)、3.08(s,4H)、1.51(s,9H)。

步骤4：合成232：

按照6的合成步骤操作得到232。LCMS:[M+H]+＝292.1。

步骤5：合成233：

按照15的合成步骤操作得到233。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm：7.74-7.71(m,1H)、7.56(s,1H)、7.39-7.28(m,3H)、6.87-6.83(m,1H)、3.91(s,3H)、3.81(s,3H)、3.16(s,4H)、2.76-2.65(m,6H)、2.06-1.99(m,1H)、1.98(s,2H)、1.19-1.05(m,4H)。

步骤6：合成I42：

按照I1的合成步骤操作得到I42。LCMS：[M+H]+＝557.1；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm：9.75(br,1H)、7.99(s,1H)、7.73-7.62(m,4H)、7.02-6.98(m,1H)、3.97(s,3H)、3.63-3.60(m,4H)、3.45-3.21(m,4H)、3.08-3.05(m,2H)、2.78-2.74(m,2H)、2.40-2.36(m,1H)、1.20-1.13(m,4H)。

实施例43和44：

6-((2S,6R)-4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I43)和6-((2R,6R)-4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I44)

步骤1：合成235：

在氮气条件下，向甲苯(20mL)中依次加入化合物234(1g，4.16mmol)、3,5-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.83g，5.13mmol)、叔丁醇钠(1.12g，11.65mmol)、Dave-Phos(32.9mg，0.09mmol)和Pd₂(dba)₃(43mg,0.047mmol)的混合物。然后，将混合物加热至100℃并搅拌24小时。反应完成后，加入水，干燥并浓缩有机相，并通过硅胶柱(PE/EA＝7:3)纯化，得到所需产物，即化合物235(0.35g，白色固体，产率28％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.58(s,1H)、8.25(d,J＝8.6Hz,1H)、7.77(s,1H)、6.99(d,J＝7.2Hz,1H)、4.31-4.21(m,1H)、4.06-4.02(m,2H)、3.98-3.92(m,1H)、3.84(s,3H)、3.53(s,2H)、1.56(s,9H)、1.50(s,6H)、1.44(s,9H)。LCMS：[M+1]+＝444.2。

合成236：

按照6的合成步骤操作得到236(320mg，粗产物)。LCMS：[M+H]+＝288.2。

步骤4：合成I43和I44：

按照15的合成步骤操作得到I43(49.2mg，白色固体，产率2.66％)和I44。I43:¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H)、8.00(s,1H),7.95(d,J＝8.3Hz,1H)、7.78-7.61(m,3H)、7.31(s,1H)、7.08(d,J＝8.3Hz,1H)、3.83(s,3H)、3.56(d,J＝10.7Hz,3H)、3.08(s,4H)、2.91(s,4H)、2.84(s,1H)、2.01(s,2H)、1.18(d,J＝7.9Hz,2H)、1.13(s,6H)。I44：¹HNMR(DMSO-d6)δ9.38(s,1H)、7.98(s,1H)、7.89(d,J＝8.3Hz,1H)、7.73-7.71(m,2H)、7.66(d,J＝6.8Hz,1H)、7.16(s,1H)、6.96(d,J＝7.3Hz,1H)、3.81(s,3H)、3.74(s,2H)、3.57(m,4H)、3.19(s,2H)、2.81(s,1H)、1.19(s,2H)、1.13(s,2H)、0.96(s,6H)。LCMS：[M+H]+＝567.2。

实施例45：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-5-氟代-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I45)

步骤1：合成239：

按照2的合成步骤操作得到固体状239(4.1g)，该产物在下一步直接使用。LCMS：[M+H]+＝258.0,260.0。

步骤2：合成240：

按照230的合成步骤操作得到240。LCMS：[M+H]+＝286.0,288.0；¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δppm：7.91-7.88(m,1H)、7.79(s,1H)、7.54-7.52(m,1H)、3.91(s,3H)、3.82(s,3H)。

步骤3：合成241：

按照196的合成步骤操作得到241。LCMS：[M+H]+＝392.2；¹H NMR(400HMz,CDCl₃)δppm：7.83-7.79(m,1H)、7.72(s,1H)、6.85-6.83(m,1H)、3.90(s,3H)、3.81(s,3H)、3.65(s,4H)、3.07(s,4H)、1.51(s,9H)。

步骤4：合成242：

按照6的合成步骤操作得到242。

步骤5：合成243：

按照15的合成步骤操作得到243。LCMS：[M+H]+＝571.2；

步骤6：合成I45：

按照I1的合成步骤操作得到I45。LCMS：[M+H]+＝557.1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm：9.85(br,1H)、7.99(s,1H)、7.72-7.62(m,4H)、7.20-7.18(m,1H)、3.83(s,3H)、3.62-3.50(m,4H)、3.28-3.20(m,4H)、3.01(s,2H)、2.79-2.75(m,2H)、2.40-2.36(m,1H)、1.20-1.13(m,4H)。

实施例46：

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-4-氟代-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I46)

步骤1：合成I46-4：

在0℃下，向化合物I46-3(50mg，0.224mmol)的二甲基甲酰胺(2mL)溶液中分批加入NaH(18mg，0.448mmol)，并在室温下搅拌1小时。加入碘甲烷(63mg，0.448mmol)。所得混合物在室温下搅拌3小时。反应物用H₂O(50mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(PE/EA＝6/1)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物I46-4(45mg，产率85％)。

步骤2：合成I46-5：

按照229的合成步骤操作得到呈白色固体状的I46-5。LCMS：[M-H]+＝270。

步骤3：合成I46-6：

向化合物I46-5(300mg，1.1mmol)的DMF(2mL)溶液中加入Cs₂CO₃(1.06g，3.3mmol)，并在室温下搅拌0.5小时。加入碘甲烷(468mg，3.3mmol)。所得混合物在室温下搅拌3小时。反应物用H₂O(60mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(PE/EA＝5/1)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物I46-6(200mg，产率64％)。

步骤4：合成I46-7：

向化合物I46-6(100mg，0.35mmol)的二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(195mg，1.05mmol)、Cs₂CO₃₍340mg，1.05mmol)、Pd₂(dba)₃₍50mg)和t-Buxphos(50mg)。反应混合物在N₂条件下加热至120℃，保持3小时。将反应物冷却至室温，用H₂O(100mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水(100mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(PE/EA＝1/1)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物I46-7。LCMS：[M+H]+＝392.0。

步骤5：合成I46-8：

按照6的合成步骤操作得到呈棕色油脂状的I46-8。

步骤6：合成I46-9：

向I46-8(30mg，1.034mmol)的甲醇(1mL)溶液中加入化合物8(46mg，1.55mmol)和CH₃COOH(13mg，0.207mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时。加入NaBH₃CN(13mg，0.207mmol)，所得混合物在室温下搅拌2小时。反应物用H₂O(100mL)稀释并用EA萃取.合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(PE/EA＝1/2)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物I46-9(40mg，产率59％)。

步骤7：合成I46：

向化合物I46-9(40mg,0.070mmol)的甲醇(1mL)和水(1mL)溶液中加入NaOH(28mg,0.70mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时。反应物用H₂O(100mL)稀释，用5％HCl调整pH为7，并用EA萃取。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，通过制备性HPLC纯化得到呈白色固体状的I46。LC-MS：[M+H]+＝557.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.68(s,1H)、7.48-7.39(m,3H)、6.66-6.51(m,2H)、3.65(s,3H)、3.06(s,4H)、2.65-2.45(m,6H)、2.38-2.34(m,2H)、2.14-2.09(m,1H)、1.07-1.03(m,4H)。

实施例47：

6-(1-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-4-羟基哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I47)

实施例48：

6-(5-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I48)

步骤1：合成I48-3:

按照I46-7的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I48-3。

MS计算值：385；MS实测值：386[M+H]⁺。

步骤3：合成I48-4:

按照6的合成步骤操作得到呈深色油脂状的I48-4。

步骤4：合成I48-5:

按照I46-9的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I48-5。

步骤5：合成I48:

按照I-46的合成步骤操作得到呈白色固体状的I48。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.67(s,1H)、7.78-7.74(m,2H)、7.56(d,J＝8.0Hz,1H)、7.22(t,J＝7.6Hz,1H)、7.05(d,J＝7.6Hz,1H)、6.51(d,J＝7.6Hz,1H)、6.44(s,1H)、4.24(s,1H)、3.74(s,3H)、3.40(s,1H)、3.31(s,2H)、3.07(s,1H)、2.67(s,1H)、2.43-2.38(m,2H)、2.28-2.18(m,2H)、2.11-2.07(m,1H)、1.74(s,2H)、1.05-0.99(m,4H)。MS计算值：551；MS实测值：552[M+H]⁺。

实施例49：

6-(6-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-3-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I49)

步骤1：合成I49-2:

按照I46-7的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I49-2。

MS计算值：385；MS实测值：386[M+H]⁺。

步骤2：合成I49-3:

按照6的合成步骤操作得到呈深色油脂状的I49-3。

MS计算值：285；MS实测值：286[M+H]⁺。

步骤3：合成I49-4:

按照I46-9的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I49-4。

步骤4：合成I49:

按照I46的合成步骤操作得到呈白色固体状的I49。

¹H NMR(DMSO-d6)δ：7.85(d,J＝9.2Hz,1H)、7.79(s,1H)、7.39-7.36(m,2H)、7.34-7.31(m,1H)、6.68-6.66(m,1H)、6.54-6.52(m,1H)、3.77(s,3H)、3.70(s,1H)、2.67(s,1H)、2.45-2.28(m,4H)、2.26-2.18(m,4H)、1.51(s,1H)、1.24(s,1H)、1.04-0.94(m,5H)。MS计算值：551；MS实测值：552[M+H]⁺。实施例50：

6-(3-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I50)

实施例51

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2-甲基哌嗪-1-基)喹啉-2-羧酸(I51)

步骤1：合成I51-15：

向化合物I51-13(同化合物49，760.0mg，2.86mmol)的二恶烷(20mL)溶液中加入化合物I51-14(1.14g，5.71mmol)、Cs₂CO₃(2.79g，8.57mmol)和xantphos-Pd-G2(254.0mg，0.29mmol)。反应混合物在110℃下搅拌过夜。通过LCMS检测得到的混合物。反应混合物用H₂O(30mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以去除溶液。通过硅胶色谱法(DCM:甲醇＝50:1)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物I51-15(420.0mg，产率39.6％)。MS计算值：371.4；MS实测值：372.5[M+H]+。

步骤2：合成I51-16：

按照6的合成步骤操作得到呈黄色固体状的化合物I51-16。将粗品用于之后反应，无需进一步纯化。

步骤3：合成I51：

按照I46-9的合成步骤操作得到呈黄色固体状的化合物I51。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ：8.37(d,J＝6.4Hz,1H)、8.16(d,J＝8.8Hz,2H)、7.73(dd,J＝2.4,9.6Hz,1H)、7.64-7.55(m,3H)、7.38(brs,1H)、4.49(brs,1H)、3.66-3.54(m,2H)、3.51-3.46(m,3H)、3.32-3.24(overlap,3H)、2.98-2.88(m,2H)、2.33-2.26(m,1H)、1.28-1.22(m,7H)。MS实测值：552.1[M+H]⁺。

实施例52和53

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3-甲基哌嗪-1-基)喹啉-2-羧酸(I52)和甲基6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-3-甲基哌嗪-1-基)喹啉-2-羧酸酯(I53)

步骤1：合成I52-02：

按照I51-15的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I52-02。MS计算值：385.5；MS实测值：386.5[M+H]+。

步骤2：合成I52-03：

按照6的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I52-03。将粗品用于之后反应，无需进一步纯化。

步骤3：合成I53：

按照I46-9的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I53。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ：8.22(d,J＝8.4Hz,1H)、8.03(t,J＝8.8Hz,2H)、7.64(dd,J＝2.4,9.6Hz,1H)、7.59-7.57(m,2H)、7.52(dd,J＝6.8,9.2Hz,1H)、7.14(d,J＝2.4Hz,1H)、4.02(s,3H)、3.68(t,J＝9.2Hz,2H)、3.31-3.04(m,2H)、3.01-2.98(m,1H)、2.97-2.44(m,6H)、2.25-2.19(m,1H)、1.28-1.18(m,4H)、0.86(d,J＝6.4Hz,3H)。MS计算值：565.5；MS实测值：566.1[M+H]⁺。

步骤4：合成I52：

按照I46的合成步骤操作得到呈橙色固体状的I52(52.0mg，产率53.6％)。¹H NMR(CD₃OD)δ：8.34(d,J＝8.4Hz,1H)、8.15-8.11(m,2H)、7.72(dd,J＝2.8,9.6Hz,1H)、7.65-7.62(m,2H)、7.59-7.55(m,1H)、7.33(d,J＝2.8Hz,1H)、3.97-3.91(m,2H)、3.72-3.62(m,2H)、3.48-3.37(m,3H)、3.26-3.15(m,2H)、3.03-2.98(m,1H)、2.80-2.75(m,1H)、1.27(d,J＝6.8Hz,3H)、1.26-1.17(m,4H)。MS计算值：551.5；MS实测值：552.2[M+H]⁺。

实施例54

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-7-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I54)

实施例55和实施例56

6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-5-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I55)和甲基6-(4-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-5-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸酯(I56)

步骤1：合成I55-3：

向化合物I55-2(1.0g，3.73mmol)的二甲基甲酰胺(30mL)溶液中加入化合物5-甲基-[1,4]高哌嗪A3(639mg，5.59mmol)、Cs₂CO₃(3.30g，10.11mmol)、t-Buxphos(716mg，1.69mmol)和Pd₂(dba)₃(1.55g，1.69mmol)。反应混合物在110℃下搅拌过夜。反应混合物用H₂O(50mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体状的I55-3。MS计算值：301；MS实测值：302[M+H]+。

步骤2：合成I55-4：

按照I46-9的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I56。MS计算值：581；MS实测值：582[M+H]⁺。

步骤3：合成I55：

按照I46的合成步骤操作得到呈白色固体状的化合物I55。MS计算值：567；MS实测值：568[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ：7.89(d,J＝8.8Hz,1H)、7.71(s,1H)、7.52-7.40(m,3H)、6.80-6.76(m,1H)、6.61(s,1H)、3.79(s,3H)、3.51(t,J＝5.2Hz,2H)、3.28-2.94(m,4H)、2.64-2.62(m,4H)、2.43-2.39(m,1H)、2.08-1.98(m,2H)、1.81-1.75(m,1H)、1.08-1.02(m,3H)、0.98-0.93(m,4H)。

实施例57

6-(1-(2-(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)乙基)-2-甲基哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I57)

步骤1：合成I57-2

在-70oC下，向化合物I57-1(1g，4.7mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入NaHMDS(3.5mL，7.0mmol)，混合物在-70oC下搅拌1小时。然后，在-70oC下，将1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(2.51g，7.0mmol)加入THF(5ml)中，并在室温下搅拌混合物过夜。反应混合物用H₂O(50mL)稀释并用EA萃取(50mLx 2)。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(PE/EA＝10/1)纯化残余物，得到呈黄色油脂状的化合物I57-2(0.4g，产率24.8％)。MS计算值：345；MS实测值：346[M+H]+。

步骤2：合成I57-3

向化合物I57-2(710mg，2.06mmol)的1,4-二恶烷(10mL)溶液中加入Pin₂B₂(789.5mg，3.09mmol)、K₂CO₃(854.5mg，6.19mmol)和Pd(dppf)Cl₂(150.9mg，0.21mmol)。反应混合物在N₂条件下加热至100℃并搅拌过夜。将反应物冷却至室温，用H₂O(50mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(PE/EA＝10/1)纯化残余物，得到呈黄色油脂状的化合物I57-3。MS计算值：323；MS实测值：324[M+H]⁺。

步骤3：合成I57-4

向化合物I57-3(500mg，1.3mmol)的1,4-二恶烷(50mL)和H₂O(1mL)的溶液中加入甲基6-溴代-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸酯(523.4mg，1.95mmol)、K₂CO₃(539.1mg，3.91mmol)和Pd(dppf)Cl₂(95.2mg，0.13mmol)。反应混合物在N₂条件下加热至100℃过夜。将反应物冷却至室温，用H₂O(50mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(PE/EA＝10/1)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物I57-4(100mg，产率16.8％)。MS计算值：384；MS实测值：385[M+H]⁺。

步骤4：合成I57-5

向化合物I57-5(70mg,0.18mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入Pd/C(20mg)。在H₂气氛中，反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物经过滤和浓缩，得到成黄色油脂状的化合物I57-6(50mg，产率71.1％)。MS计算值：386；MS实测值：387[M+H]⁺。

步骤5：合成I57-6

按照6的合成步骤操作得到呈黄色油脂状的I57-6。MS计算值：286；MS实测值：287[M+H]⁺。

步骤6：合成I57-7

按照I46-9的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I57-7。MS计算值：565；MS实测值：566[M+H]⁺。

步骤7：合成I57

按照I46-9的合成步骤操作得到呈白色固体状的I57(12mg，产率41.0％)。MS计算值：551；MS实测值：552[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.83(s,1H)、7.98(s,1H)、7.92(d,J＝3.4Hz,1H)、7.70(d,J＝3.8Hz,2H)、7.63(d,J＝3.4Hz,1H)、7.30(d,J＝2.8Hz,1H)、7.09-7.05(t,J＝7.4Hz,1H)、3.82(d,J＝1Hz,3H)、3.24(s,3H)、3.13-2.84(m,2H)、2.72-2.62(m,1H)、2.37-2.26(m,2H)、2.10-1.58(m,4H)、1.57-1.30(m,1H)、1.24(s,1H)、1.20-1.01(m,5H)、0.90-0.75(m,1H)。

实施例58和实施例59

6-(4-(((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)甲基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I58)和甲基6-(4-(((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)甲基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸酯(I59)

步骤1：合成I58-3:

向化合物I58-2(500mg，1.87mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)的溶液中加入2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(743mg，3.74mmol)、Cs₂CO₃(1.2g，3.74mmol)、Pd₂(dba)₃(250mg)和t-Buxphos(250mg)。反应混合物在N₂条件下加热至110℃，保持3小时。将反应物冷却至室温，用H₂O(20mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，并浓缩。通过硅胶快速色谱法(EA/PE＝5％-25％)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物I58-3(550mg，产率76％)。MS计算值：387；MS实测值：388[M+H]⁺。

步骤2：合成I58-4:

向化合物I58-3(100mg,0.25mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入HCHO(15.5mg，0.50mmol)、AcOH(两滴)。反应混合物在室温下搅拌2小时。加入NaBH₃CN(31mg，0.50mmol)，所得混合物在室温下搅拌2小时。然后用H₂O(20mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并浓缩。通过硅胶快速色谱法(EA/PE＝5％-25％)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物I58-4。MS计算值：401；MS实测值：402[M+H]⁺。

步骤3：合成I58-5:

按照6的合成步骤操作得到呈深色油脂状的I58-5。MS计算值：301；MS实测值：302[M+H]⁺。

步骤4：合成I59

按照I46-9的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I59。MS计算值：566；MS实测值：567[M+H]+。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.96(s,1H)、7.81(d,J＝9.2Hz,1H)、7.71-7.69(m,3H)、6.97(d,J＝8.8Hz,2H)、4.50(brs,1H)、4.08(brs,2H)、3.82(s,3H)、3.79(s,3H)、3.25(brs,2H)、2.67(brs,3H)、2.55(brs,3H)、1.87(brs,1H)、1.74-1.54(m,3H)、1.24(brs,4H)。

步骤5：合成I58:

按照I46的合成步骤操作得到呈白色固体状的I58(31.5mg，产率37％)。MS计算值：552；MS实测值：553[M+H]⁺¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.79(d,J＝5.6Hz,2H)、7.61-7.59(m,3H)、7.52-7.48(m,1H)、6.89-6.86(m,2H)、5.32(t,J＝4.8Hz,1H)、3.75(s,3H)、3.58(d,J＝10.8Hz,2H)、2.33-2.26(m,3H)、2.08(s,3H)、2.03-1.97(m,2H)、1.50-1.23(m,3H)、1.15-1.04(m,4H)、0.87-0.79(m,2H)。

实施例60

2-(6-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-4-氟代苯并[d]噻唑-6-羧酸(I60)

步骤1：合成I60-6

在0℃下，向化合物I60-5(0.9g,4.3mmol)的甲醇(20mL)溶液中分批加入NaBH₄(324.1mg，8.53mmol)。反应混合物在0℃搅拌3小时。反应物用H₂O(50mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色油脂状的化合物I60-6。MS计算值：213；MS实测值：214[M+H]⁺。

步骤2：合成I60-7

在0℃下，向化合物I60-6(510mg，2.39mmol)的二甲基甲酰胺(10mL)的溶液中分批加入NaH(143.7mg，3.59mmol)，并在0℃下搅拌1小时。然后加入4-(溴甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑(624.9mg，2.39mmol)。所得混合物在50℃搅拌1小时。然后，反应物用H₂O(50mL)稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(EA/PE＝10/1)纯化残余物，得到呈黄色油脂状的化合物I60-7。MS计算值：494；MS实测值：495[M+H]⁺。

步骤3：合成I60-8

按照6的合成步骤操作得到呈黄色油脂状的I60-8。MS计算值：394；MS实测值：395[M+H]⁺。

步骤4：合成I60-9

按照29的合成步骤操作得到呈无色油脂状的I60-9。MS计算值：603；MS实测值：604[M+H]⁺。

步骤4：合成I60

按照I46的合成步骤操作得到呈白色固体状的I60(12mg，产率30.7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.81(s,1H)、8.28(s,1H)、7.64-7.36(m,5H)、4.37(d,J＝8.4Hz,2H)、3.88-3.85(m,2H)、3.60-3.47(m,2H)、2.67-2.64(m,2H)、2.33-2.25(m,1H)、1.68-1.66(m,1H)、1.42(d,J＝5.2Hz,1H)、1.01-0.94(m,4H)。MS计算值：589；MS实测值：590[M+H]⁺。

实施例61

6-(6-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I61)

步骤1：合成I61-3:

向化合物I61-2(572mg，2.13mmol)的二甲基甲酰胺(10mL)的溶液中加入4-((3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑(270mg，0.71mmol)、Cs₂CO₃(698mg，2.13mmol)、Pd₂(dba)₃(140mg)和S-Phos(140mg)。反应混合物在N₂条件下加热至110℃，保持23小时。将反应物冷却至室温，用H₂O稀释并用EA萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(EA/PE＝3％-25％)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物I61-3(100mg，产率26％)。MS计算值：565；MS实测值：566[M+H]⁺。

步骤2：合成I61:

按照合成I46的步骤操作得到呈白色固体状的I61。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.80-7.76(m,2H)、7.43-7.41(m,2H)、7.37-7.34(m,1H)、6.65-6.62(m,1H)、6.47(d,J＝1.6Hz,2H)、4.25(s,2H)、3.75-3.72(m,1H)、3.75(s,3H)、3.48(d,J＝9.6Hz,2H)、3.19(d,J＝9.6Hz,2H)、2.66-2.64(m,2H)、2.24-2.20(m,1H)、1.56-1.54(m,1H)、1.43(d,J＝9.6Hz,1H)、0.98-0.94(m,2H)、0.82-0.78(m,2H)。MS计算值：551；MS实测值：552[M+H]⁺。

实施例62

6-(6-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I62)

步骤1：合成I62--1

按照I61-3的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I62-1。MS计算值：581；MS实测值：582[M+H]⁺。

步骤2：合成I62

按照I46的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I62。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.68(s,1H)、7.79(d,J＝8.4Hz,1H)、7.75(s,1H)、7.59-7.55(m,1H)、7.52-7.45(m,2H)、7.35-7.31(m,1H)、6.66-6.64(m,1H)、6.49(d,J＝1.6Hz,1H)、4.33(s,2H)、3.78-7.76(m,1H)、3.74(s,3H)、3.49(d,J＝9.6Hz,2H)、3.24(d,J＝9.6Hz,2H)、2.67(t,J＝5.2Hz,2H)、2.20-2.18(m,1H)、1.57-1.48(m,1H)、1.43(d,J＝9.2Hz,1H)、0.91-0.88(m,2H)、0.73-0.70(m,2H)。

MS计算值：567；MS实测值：568[M+H]⁺。

实施例63

6-(6-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-4-氟代-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I63)

步骤1：合成I63-8:

按照I61-3的合成步骤操作得到呈黄色油脂状的I63-8。MS计算值：583；MS实测值：584[M+H]⁺。

步骤2：合成I63:

按照改进后的I46合成步骤操作得到呈白色固体状的I63。¹H NMR(DMSO-d6)δ：11.66(s,1H)、7.81(s,1H)、7.42-7.34(m,3H)、6.34-6.30(m,1H)、6.27(d,J＝1.6Hz,1H)、4.25(s,2H)、3.75-3.72(m,1H)、3.73(s,3H)、3.44(d,J＝9.6Hz,2H)、3.15(d,J＝9.6Hz,2H)、2.65-2.62(m,2H)、2.26-2.22(m,1H)、1.57-1.54(m,1H)、1.40(d,J＝9.6Hz,1H)、1.01-0.97(m,2H)、0.88-0.84(m,2H)。MS计算值：570；MS实测值：571[M+H]⁺。

实施例64

6-(6-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-4-氟代-1-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(I64)

步骤1：合成I64-2

按照I61-3的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I64-2。MS计算值：599；MS实测值：600[M+H]⁺。

步骤2：合成I64

按照I46的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I64。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.64(s,1H)、7.60-7.45(m,3H)、7.37-7.33(m,1H)、6.29(d,J＝6.8Hz,1H)、6.27(s,1H)、4.34(s,2H)、3.79-3.76(t,J＝5.6Hz,1H)、3.70(s,3H)、3.44(d,J＝9.6Hz,2H)、3.21-3.16(m,2H)、2.67-2.65(t,J＝4.6Hz,2H)、2.22-2.09(m,1H)、1.58-1.56(m,1H)、1.40(d,J＝9.6Hz,1H)、0.94-0.91(m,2H)、0.77-0.74(m,2H)。MS计算值：585；MS实测值：586[M+H]⁺。

实施例65

2-(6-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸(I65)

步骤1：合成I65-2:

按照I60-7的合成步骤操作得到呈黄色固体状的I65-2。MS计算值：478；MS实测值：479[M+H]⁺。

步骤2：合成I65-3:

按照6的合成步骤操作得到呈深色油脂状的I65-3。MS计算值：385；MS实测值：386[M+H]⁺。

步骤3：合成I65-4:

按照29的合成步骤操作得到呈黄色油脂状的化合物I65-4。MS计算值：569；MS实测值：570[M+H]⁺。

步骤4：合成I65:

按照I46的合成步骤操作得到呈白色固体状的I65。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.38(s,1H)、7.90(d,J＝8.0Hz,1H)、7.05(d,J＝8.4Hz,1H)、7.40(s,2H)、7.32(t,J＝8.0Hz,1H)、4.30(s,2H)、3.82(t,J＝5.6Hz,1H)、3.33-3.17(m,4H)、2.64(s,2H)、2.32-2.28(m,1H)、1.64-1.62(m,1H)、1.40(d,J＝10.4Hz,1H)、1.04-0.98(m,4H)。MS计算值：555；MS实测值：556[M+H]⁺。

实施例66

2-(6-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸(I66)

步骤1：合成I66-1

按照改进后的29的合成步骤操作得到呈无色油脂状的I66-1。MS计算值：585；MS实测值：586[M+H]⁺。

步骤2：合成I66

按照改进后的I46合成步骤操作得到呈白色固体状的I66。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.37(s,1H)、7.87(d,J＝8.4Hz,1H)、7.52-7.44(m,4H)、7.36(t,J＝7.8Hz,1H)、4.38(s,2H)、3.85(t,J＝5.6Hz,1H)、3.76-3.42(m,2H)、2.64(s,2H)、2.39-2.25(m,2H)、1.65-1.62(m,1H)、1.25-1.21(m,1H)、1.40(d,J＝10.4Hz,1H)、1.04-0.90(m,4H)。MS计算值：571；MS实测值：572[M+H]⁺。

实施例67

2-(6-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸(I67)

步骤1：合成I67-2:

按照I60-7的合成步骤操作得到呈黄色固体状的化合物I67-2。MS计算值：478；MS实测值：479[M+H]⁺。

步骤2：合成I67-3:

按照6的合成步骤操作得到呈深色油脂状的化合物I67-3。MS计算值：385；MS实测值：386[M+H]⁺。

步骤3：合成I67-4:

按照改进后的29的合成步骤操作得到呈黄色油脂状的I67-4。MS计算值：587；MS实测值：588[M+H]⁺。

步骤5：合成I67:

按照合成I46的步骤操作得到呈白色固体状的I67。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.21(d,J＝1.6Hz,1H)、7.62-7.59(m,1H)、7.41(s,2H)、7.32(t,J＝8.0Hz,1H)、4.30(s,2H)、3.82(t,J＝6.0Hz,1H)、3.34-3.24(m,4H)、2.64-2.62(m,2H)、2.34-2.27(m,1H)、1.66-1.60(m,1H)、1.40(d,J＝10.0Hz,1H)、1.05-0.99(m,4H)。MS计算值：574；MS实测值：575[M+H]⁺。

测定说明

基于以下体外测定方法对新化合物的生物学特性进行研究。

FXR结合测定

通过时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)竞争实验，对本发明化合物和FXR之间的相互作用进行评价。FRET描述了两个发色团之间的无辐射能量转移，即，处于激发态的供体荧光团可以将能量传送到极为贴近(通常<10nm)的受体荧光团。与标准FRET相比，TR-FRET将时间分辨荧光(TRF)与FRET远离相结合，TRF使用寿命较长的镧系元素螯合物作为供体物种，而镧系元素螯合物的独特之处在于其激发态寿命可以在毫秒级或以上。FRET的合适的邻元素在本领域中是已知的并且可以获得。

该测定按照以下步骤进行：第一，制备a)二甲基亚砜中的1mM化合物(100X)；b)含有1X缓冲液G和10mM二硫苏糖醇(DTT)的反应缓冲液；c)1X冷冻缓冲液G中的4X FXR LBD(20nM)。第二，使用DMSO对1mM测试化合物从1mM开始进行3倍连续稀释，96孔板(249944，Nunc)中10份剂量。然后，使用完整的缓冲液G将每份100X化合物连续稀释液稀释到2X。第三，将10μl 2X化合物连续稀释液加入到384孔板(3677，Corning)中。然后，将5μl FXR LBD加入到测定板中。在室温下，在缓冲液G中制备含有2μM荧光素-SRC2-2(4X)和20nM Tb抗GST抗体(4X)的溶液，并将5μl上述溶液加入到测定板的每个孔中开始反应。以1000g离心测定板1分钟，然后在室温下避光孵育1小时。最后，在Envision 2104酶标仪(PerkinElmer)上，以520nm和495nm波长读板。

计算每个孔的比值(比值_520nm/495nm–比值_背景)。活性比计算如下：

整个板上阳性对照的平均比值。

整个板上阴性对照的平均比值。

使用GraphPad 5.0将活性值百分比(％)和化合物浓度对数值拟合到非线性回归(剂量反应-变斜率)，计算EC₅₀。

Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogEC₅₀-X)*Hill斜率))。

X：化合物浓度对数值。

Y：活性百分比(％)。

Z因子>0.5；S/B>3。

得到以下结果：

NA：不可用

FXR反式激活测定

对本发明化合物进行测试，以评估其刺激FXR反式激活活性的能力。将hFXR-LBD编码序列插入到pBIND表达载体(Promega，E1581)，以表达FXR-GAL4结合域嵌合受体。将该表达载体和报告载体(pGL4.35，其携带稳定整合的GAL4启动子驱动的荧光素酶报告基因)共转染到HEK293T宿主细胞。在激动剂与对应的FXR-GAL4嵌合受体结合后，该嵌合受体与GAL4结合并刺激报告基因。

测定按照以下步骤执行：第一，制备a)1000X阳性对照(5mM，GW4064)和1000X媒剂对照(100％DMSO)；b)参考化合物，使用DMSO从5mM开始进行3倍连续稀释，10份剂量；c)测试化合物，使用DMSO从10mM开始进行3倍连续稀释，10份剂量。所有工作原液均在板振荡仪(QILINBEIER)上振荡5分钟。第二，根据ATCC的建议培养所有细胞。在指数生长期测定HEK293T细胞。从烧瓶中去除培养基，并用PBS冲洗细胞。向烧瓶中加入TrypLE溶液，并使细胞分离。接着，细胞用完全生长培养基洗涤。然后，细胞成团并用PBS洗涤两次以去除酚红，并将其重悬浮在培养基中，直到达到适当浓度。仅使用活性大于90％的细胞进行测定。将6×10⁶个HEK293T细胞接种到100mm培养皿中，并在37℃下在5％CO₂的气氛中孵育16小时。第三，Trans-IT试剂和Opti-MEM倒置混合，并在室温下孵育5分钟。分别将DNA与试剂混合物以及6μg GAL4-FXR质粒或2μg pGL4.35荧光素酶质粒混合，进行细胞转染。将试剂混合物加入到100mm培养米中，并在37℃下在5％CO₂的气氛中孵育4-7小时。第四，将75nl化合物稀释液转移到384孔测定板(PerkinElmer)中，并使用含有5％木炭/葡聚糖处理的FBS的无酚红DMEM，以17,000个细胞/孔接种HEK293T细胞。然后，将细胞在37℃下在5％CO₂的气氛中孵育16-20小时。最后，向384孔测定板的每个孔中加入25μlSteady-Glo^TM荧光素酶测定试剂，然后在板振荡仪上避光振荡测定板5分钟。然后，在Evision 2104酶标仪(PerkinElmer)上读取发光值。

活性比计算如下：

RLU：所得发光值。

整个板中阳性对照的RLU平均值。

整个板中阴性对照的RLU平均值。

Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogEC₅₀-X)*Hill斜率))。

X：化合物浓度对数值。

Y：活性百分比(％)。

Z因子>0.5；S/B>3。

得到以下结果：

NA：未分析

在根据本发明的式(I)化合物的生物学特性的基础上，其中一些化合物作为FXR的激动剂展现出良好的特性，并且适用于治疗FXR介导的病状，FXR介导的病状诸如胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长、勃起功能障碍、由以上任一疾病或由传染性肝炎导致的进行性肝纤维化、或其他造成肝外胆汁淤积的FXR介导的病状。本发明化合物还可用于降低总胆固醇，降低低密度脂蛋白胆固醇、降低极低密度脂蛋白胆固醇，提高高密度脂蛋白水平和/或降低甘油三酯水平。

应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且本领域技术人员能够根据这些实施例和实施方案进行各种修改或变化，这些修改和变化也将包括在本申请的精神和范围内以及所附权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请均出于所有目的通过引用并入到本文中。

Claims

1.一种式(I)化合物：

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐；

R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；

A选自C＝O或CR⁷R⁸；

R⁷和R⁸独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

B是CH或N；

E环是取代的或未被取代的6-8元杂环或桥连杂环；

m是0或1。

2.根据权利要求1所述的化合物，R¹、R²和R³独立地选自H、Cl、F、CH₃、OCF₃、CF₃和OMe。

3.根据权利要求1所述的化合物，R⁴是C_1-3烷基或环丙基。

4.根据权利要求3所述的化合物，R⁴是环丙基、甲基或异丙基。

5.根据权利要求1所述的化合物，R⁵和R⁶独立地选自H或Me。

6.根据权利要求1所述的化合物，R⁷和R⁸独立地选自H或Me。

7.根据权利要求1所述的化合物，Ar是亚苯基、亚吡啶、亚嘧啶、亚吡嗪、亚哒嗪、亚噻唑、苯并噻唑基、苯并[d]异噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹啉基、1H-吲哚基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并[d]异恶唑基、喹唑啉基、1H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基；其中每个任选被R¹⁰和R¹¹取代，R¹⁰和R¹¹独立地选自H、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基或环丙基。

8.根据权利要求7所述的化合物，Ar选自亚苯基、苯并噻唑基、喹啉基、1H-吲哚基、1H-吲唑基，其中每个任选被0-2个Me或F基团取代。

9.根据权利要求8所述的化合物，Ar是亚苯基或选自以下结构：

10.根据权利要求1-9任一所述的化合物，E环选自任选被0-2个Me基团取代的以下结构：

11.根据权利要求10所述的化合物，E环选自以下结构：

12.根据权利要求1-9任一所述的化合物，E环选自以下结构：

13.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自由以下构成的组：

其中，R¹、R²和R³独立地选自H、Cl、F、CH₃、OCF₃、CF₃和OMe；R⁴是环丙基或异丙基；或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐。

14.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选择以下一种结构：

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐。

15.一种药物组合物，其包括治疗有效量的权利要求1-14任一所述的化合物和药学上可接受的载体。

16.一种组合物，其包括治疗有效量的权利要求1-14任一所述的化合物，用于治疗胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。

17.一种用于在患有FXR介导的病状的受试者中治疗FXR介导的病状的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的权利要求1-14任一所述的化合物或其药物组合物。

18.包括权利要求1-14任一所述的化合物的药物组合物在治疗由FXR介导的病状中的用途。

19.权利要求1-14任一所述的化合物或其药物组合物用于制备用于治疗受试者中由FXR介导的病状的药物的用途。

20.根据权利要求19所述的用途，所述病症为胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。

21.一种式(I')化合物:

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐；

R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；

A选自C＝O、CR⁷R⁸、O或NR⁹；

R⁷和R⁸独立地选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R⁹选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

B是CR¹³或N；

D是CR¹⁴或N；

R¹²选自H、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R¹³选自H、OH、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基；

R¹⁴选自H、OH、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基。

m是0或1。

22.根据权利要求21所述的化合物，

A选自C＝O或CR⁷R⁸；

B是CR¹³或N；

D是N；

R¹²是H；

R¹³是H。

23.根据权利要求21所述的化合物，

A选自O或NMe；

B是CR¹³或N；

D是N或CH；

R¹²是H或Me；

R¹³是H或OH。

24.根据权利要求21所述的化合物，R¹、R²和R³独立地选自H、Cl、F、CH₃、OCF₃、CF₃和OMe。

25.根据权利要求21所述的化合物，R⁴是C_1-3烷基或环丙基。

26.根据权利要求25所述的化合物，R⁴是环丙基、甲基或异丙基。

27.根据权利要求21所述的化合物，R⁵和R⁶独立地选自H或Me。

28.根据权利要求21所述的化合物，R⁷和R⁸独立地选自H或Me。

29.根据权利要求21所述的化合物，R⁹选自H、Me、Et、正丙基或异丙基；R¹²和R¹³独立地选自H、Me、Et、正丙基或异丙基。

30.根据权利要求21所述的化合物，Ar选自取代的或未被取代的亚苯基、亚吡啶、亚嘧啶、亚吡嗪、亚哒嗪、亚噻唑、苯并噻唑基、苯并[d]异噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹啉基、1H-吲哚基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并[d]异恶唑基、喹唑啉基、1H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基；其中每个任选被选自H、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、或环丙基的R¹⁰和R¹¹取代。

31.根据权利要求30所述的化合物，Ar选自亚苯基、苯并噻唑基、喹啉基、1H-吲哚基、1H-吲唑基，其中每个任选被0-2个Me或F基团取代。

32.根据权利要求31所述的化合物，Ar是亚苯基或选自以下结构：

33.根据权利要求21所述的化合物，E环选自任选被0-2个OH或Me基团取代的以下结构：

34.根据权利要求33所述的化合物，E环选自以下结构：

35.根据权利要求21所述的化合物，所述化合物选自以下结构：

或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受的盐。

36.一种药物组合物，其包括治疗有效量的权利要求21-35任一所述的化合物和药学上可接受的载体。

37.一种组合物，其包括治疗有效量的权利要求21-35任一所述的化合物，用于治疗胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。

38.一种用于在患有FXR介导的病状的受试者中治疗FXR介导的病状的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的权利要求21-35任一所述的化合物或其药物组合物。

39.包括权利要求21-35任一所述的化合物的药物组合物在治疗由FXR介导的病状中的用途。

40.权利要求21-35任一所述的化合物或其药物组合物用于制备用于治疗受试者中由FXR介导的病状的药物的用途。

41.根据权利要求40所述的用途，所述病症为胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发的胆汁淤积、药物诱发的胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积症(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发的胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石症、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸预防、静脉闭塞病、门静脉高压症、代谢综合征、血胆脂醇过多、肠道细菌过度生长或勃起功能障碍。