CN105613042B - 一种羊肚菌的液体菌种繁育方法和工厂化栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，还提供了一种羊肚菌的工厂化栽培方法。羊肚菌的液体菌种繁育方法为：先用土豆、木屑、水、葡萄糖、硫酸镁、土和琼脂制得第一培养液，将羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养液中培养得到母种；再用土豆、木屑、水、葡萄糖、硫酸镁土和维生素B1制得第二培养液，将第二培养液分装到摇瓶，将母种接入摇瓶，培养后得到第一液体菌种。羊肚菌的工厂化栽培方法主要是先将第一液体菌种接种培养后得到菌包，再将菌包栽培到土里。羊肚菌的工厂化栽培方法具有生产周期短、方法简单、感染率低等优点。
Description
技术领域
本发明涉及羊肚菌的人工培育技术领域，具体而言，涉及一种羊肚菌的液体菌种繁育方法和工厂化栽培方法。
背景技术
羊肚菌(Morchella)又称羊肚菜、羊蘑、羊肚蘑和草笠竹。羊肚菌的结构与盘菌相似，上部呈褶皱网状，既像个蜂巢，也像个羊肚，因而得名。羊肚菌也常被用于食积气滞、脘腹胀满、痰壅气逆喘咳。所以羊肚菌是一种珍贵的食用菌和药用菌。但目前仅限于野生菌，产量非常有限，难以满足人们对羊肚菌的需求，所以大家一直在寻求一种人工繁殖羊肚菌的方法。
公开号为CN104885786A的中国专利文献公开了一种尖顶羊肚菌的人工栽培方法，包括以下步骤：(1)、采集尖顶羊肚菌，制备原种；(2)、将培养基A装入菌种袋内培养后灭菌处理；(3)、将原种接种到菌种袋内的培养基A上培养20天～30天，得到种料；(4)、在种料中加入拌种剂，然后播种；所述拌种剂加入量为种料重量的5％～10％；拌种剂的配比为：尿素10g～20g，KH2PO41g～2g，MgSO41g～2g，水800g～1200g；所述步骤(4)中，播种后将拌好的菌种颗粒均匀的撒在厢面，用细土均匀覆盖，覆土厚度为3cm；覆土后将厢面用滚筒压实并浇透水一次；(5)、田间管理：所述种料播种12～15天后浸水，浸水深度不超过沟深的90％，保持2～3小时后排干水分，让土壤保持润湿；然后每隔12天～15天重复一次浸水；(6)、摆袋：播种的土壤上出现孢子后在土壤上铺设装有培养基C的折角袋，折角袋上有孔；培养基C的重量配比为高粱60％～75％，谷壳15％～20％，油饼3％～5％，过磷酸钙3％～5％，石灰1％～3％；所述原种的制备过程为：A、选择种菇：采集人工种植或者野生的尖顶羊肚菌，晾晒至含水量为60％～75％，得到种菇；B、菌种分离：用刀片将种菇的菌盖纵向切开，用接种钩钩取小块菌肉，接入分离培养基斜面上，并在15℃～20℃条件下培养9天～12天；得到菌种；C、将菌种分离出来置于培养基B内继续培养，于15℃～20℃条件下培养9天～12天；得到母种；D、将母种置于含有培养基C的原种培养瓶内培养，培养温度为18～20℃，湿度55％～65％，二氧化碳浓度低于2000ppm，每天光照2小时～3小时。
现有的人工繁殖羊肚菌的方法不仅操作复杂、生产周期长，而且感染率高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，所述的羊肚菌的液体菌种繁育方法具有生产周期短、方法简单、感染率低等优点。
本发明的另一个目的在于提供一种羊肚菌的工厂化栽培方法，该方法具有成本低、操作简单、便于推广等优点。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，包括以下步骤：
母种制作步骤：在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在15-20℃的环境下培养并得到母种；
其中，按重量份计，第一培养基由以下组分制成：180-220份土豆、45-55份木屑、1600-2400份水、18-22份葡萄糖、0.8-1.2份硫酸镁、90-110份土和18-22份琼脂；
液体菌种制作步骤：无菌环境下在第二培养液中接入母种，进行摇床培养，摇床培养的温度为20-23℃，摇床的旋转频率为350-500rpm，摇床培养3-6天后得到第一液体菌种；
其中，按重量份计，第二培养基由以下组分制成：180-220份土豆、180-220份麦麸、1600-2400份水、18-22份葡萄糖、0.8-1.2份硫酸镁和0.25-1份维生素B1。
本发明还提供了一种羊肚菌的工厂化栽培方法，包括以下步骤：
菌包制作步骤：将小麦、木屑、土、麦麸、石灰、石膏、糖、硫酸镁和谷壳混合得到混合物；混合物中，各个组分的重量百分数分别为：小麦36-40％，木屑32-38％，土8-12％，麦麸8-12％，石灰1-3％，石膏0.8-1.2％，糖0.8-1.2％，硫酸镁0.8-1.2％，谷壳1-3％；然后将混合物装袋并进行加热灭菌处理，再将第一液体菌种在无菌环境下接种到混合物，然后在15-22℃条件下培养15-20天得到菌包；
脱袋栽培步骤：先在栽培区挖掘出土坑，然后将菌包脱袋后摆放在土坑内，再向土坑内填土并且覆盖菌包，然后向栽培区浇水。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)这种羊肚菌的液体菌种繁育方法，生产周期短，固体菌种从母种到栽培种三级制种的时间为3个月，而制备液体菌种不到20天，培养固体原种或栽培种的时间需90天，而培养一批液体菌种只需3-7天。制作液体菌种大大缩短了制种时间，能够及时地供应生产需要。
(2)液体菌种制作简单，固体菌种的制作要经过从母种到原种再到栽培种三级制种过程，而且要更换培养基，手续繁杂。液体菌种的制作，只要同一种培养基，培养出来的菌种，既可作为母种使用，也可作为原种、栽培种的使用，减少了培养基的更换和培养环境的改变。
(3)接种简便，液体菌种可以用注射、拌料等多种形式接种，简便、快速、均匀、适于机械化、自动化大规模生产使用。
(4)发育快，每一个液体菌种的菌丝球都是一个生长中心，由于菌丝球数量多、分布均匀，接种后菌丝可迅速发育，短时间内完成营养生长期，避免污染的发生和危险。可提前发现菌球的生长情况至栽培种的菌丝缠绕强弱。
(5)这种羊肚菌的液体菌种繁育方法比固体菌种感染率低50％左右。
(6)工厂化栽培方法降低了投资成本，操作容易便捷，更适用于推广，带动老百姓发家致富。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，包括以下步骤：
母种制作步骤：将180-220份土豆和45-55份木屑分别用800-1200份水煮20-40min，然后过滤并将两种滤液混合得到第一混合水。为了方便过滤，可以先将180-220份土豆用800-1200份水煮20-40min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将45-55份木屑布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入800-1200份水中煮20-40min后取出并得到木屑水，将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将18-22份葡萄糖、0.8-1.2份硫酸镁、90-110份土和18-22份琼脂加入第一混合水中并煮15-25min得到第一培养液。其中维生素B1和片酵母片均呈片状，0.5片指的是半片，1.5片指的是1片加半片，依次类推。此外，为了使第一培养液内的各个营养成分混合更均匀，最好将第一培养液搅拌均匀后使用。
再将第一培养液分装在灭菌容器内进行加热灭菌处理，然后将灭菌容器静置并使第一培养液冷却凝固3-5天得到第一培养基；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在15-20℃的环境下培养并得到母种。羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织是指同时具有菌柄和菌帽的组织。
作为优选，母种制作步骤中，羊肚菌由新鲜羊肚菌处理后得到，处理过程为：采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌放入密闭容器内或者用胶布包裹后在18-22℃条件下放置3-5天。
作为优选，母种制作步骤中的加热灭菌处理的条件为：在压力为0.1-0.2Pa且温度为100-130℃的条件下灭菌40-50min。
作为优选，灭菌容器为试管，加热灭菌处理后将试管倾斜并与水平面保持15°的夹角进行冷却。试管容量小，每只试管装的第一培养液量少，便于将第一培养液内的病菌彻底杀灭。使试管保持倾斜状态是本领域的常用手段，可以增大第一培养液的液面面积，有利于在单个试管内获得更多的母种。进一步，还可以观察母种的生长情况，挑选其中长势好的母种进行提纯复壮。
液体菌种制作步骤：将180-220份土豆和180-220份麦麸分别用800-1200份水煮20-40min，然后过滤并将两种滤液混合得到第二混合水；与第一混合水的制作过程类似，为了方便过滤，可以先将180-220份土豆用800-1200份水煮20-40min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将180-220份麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入800-1200份水中煮20-40min后取出并得到麦麸水，然后将土豆水和麦麸水混合后得到第二混合水。
再将18-22份葡萄糖、0.8-1.2份硫酸镁、0.25-1份维生素B1加入第二混合水中并煮15-25min得到第二培养液；将第二培养液分装到摇瓶并进行加热灭菌处理，待第二培养液冷却至20-23℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为350-500rpm，在20-23℃下摇动培养3-6天后得到第一液体菌种。
现有的固体菌种的制作要经过从母种到原种再到栽培种三级制种过程，而且要更换培养基，手续繁杂。而本发明的液体菌种的制作，只要同一种培养基，培养出来的菌种，即克作为母种使用，也可作为原种，栽培的使用，减少了培养基的更换和培养环境的改变。
液体菌种发育快，每一个液体菌种的菌丝球都是一个生长中心，由于菌丝球数量多、分布均匀、接种后菌丝可迅速发育，短时间内完成营养生长期，避免污染的发生和危害。可提前发现菌球的生长情况至栽培种的菌丝缠绕强弱。此外，本发明的各种培养液总采用了最佳的碳氮比，采用本发明的羊肚菌的液体菌种繁育方法，菌丝球龄一致、生长旺盛、长势好、生活力好。
固体生产用种的发育是从接种的种块上蔓延开始的，整个培养瓶(袋)内的菌丝从上部到下部菌龄相差20～30天，其生活力相差较大。液体菌种的各个菌丝小球基本上是同一时间开始形成的，菌龄一致，整个菌种的培养时间非常短，若在菌丝体生长指数期(培养时间在5～7天)使用液体菌种，即最佳接种期，菌丝能很快定植，旺盛生长。
作为优选，液体菌种制作步骤中的加热灭菌处理的条件为：在压力为0.1-0.2Pa且温度为100-130℃的条件下灭菌40-50min。
若是少量生产，可以直接用第一液体菌种制作菌包并进行工厂化栽培。
一种羊肚菌的工厂化栽培方法，包括羊肚菌的液体菌种繁育方法的步骤以及以下步骤：
菌包制作步骤：小麦、木屑、土、麦麸、石灰、石膏、糖、硫酸镁和谷壳混合得到混合物；混合物中，各个组分的重量百分数分别为：小麦36-40％，木屑32-38％，土8-12％，麦麸8-12％，石灰1-3％，石膏0.8-1.2％，糖0.8-1.2％，硫酸镁0.8-1.2％，谷壳1-3％；然后将混合物装袋并进行加热灭菌处理，再将第一液体菌种在无菌环境下接种到混合物，然后在15-22℃条件下培养15-20天得到菌包；
脱袋栽培步骤：先在栽培区挖掘出土坑，然后将菌包脱袋后摆放在土坑内，再向土坑内填土并且覆盖菌包，然后向栽培区浇水。
作为优选，菌包制作步骤中的加热灭菌处理的条件为：在压力为0.1-0.2Pa且温度为100-130℃的条件下灭菌4-6h。
作为优选，土坑的深度为12-18cm的，向栽培区浇水后的栽培区的土壤的湿度为60-70％，相邻的菌包之间间隔3-5cm，再向土坑内填土并且覆盖菌包，菌包的顶部的土层厚度为3-5cm。
栽培区可以设置在培养室内，也可以设置在大棚内。
作为优选，栽培区为多个并分布在培养室内，培养室内的温度为10-22℃，培养室内的空气湿度为75-90％。
作为优选，培养室内设置有2-6层层架，每层层架的宽度为1-1.5m，长度为4-6m，层架的底部设置有漏水孔。
作为优选，栽培区为多个并分布在大棚内，大棚内的温度为10-22℃，大棚内的空气湿度为75-90％。
作为优选，大棚内设置有2-6层层架，每层层架的宽度为1-1.5m，长度为4-6m，层架的底部设置有漏水孔。
作为优选，大棚呈拱形，大棚的最高点距离地面2-2.4m，大棚覆盖了隔热保温膜，大棚覆盖了透光率为25％-35％的遮阳网或者遮阳布。
作为进一步优选，遮阳网或者遮阳布的透光率为30％。
羊肚菌喜欢在阴暗的环境下生长，所以需要通过遮阳网或者遮阳布减少阳光的照射量。行业内通俗的说法是7分阴3分阳最好。
若是产业化生产，还需要对第一液体菌种进行扩大培养，以增大液体菌种的量。
作为优选，羊肚菌的液体菌种繁育方法还包括扩大培养步骤；
扩大培养步骤为：将第一液体菌种在无菌环境下接入发酵罐，向发酵罐内通入无菌空气并对发酵罐内的第三培养液进行吹气搅拌，培养3-6天后得到第二液体菌种；
按照与发酵罐的容积的比例，发酵液由以下组分制成：麦麸40-60g/100L、淀粉1.2-1.8kg/100L、硫酸镁0.8-1.2kg/100L、磷酸二氢钾0.1-0.3kg/100L、葡萄糖0.4-0.6kg/100L、白糖0.4-0.6kg/100L、蛋白胨0.2-0.4kg/100L和食用油0.01-0.03kg/100L，余量为水。
淀粉、硫酸镁、磷酸二氢钾、葡萄糖、白糖、蛋白胨和食用油的用量均与配制得到的第三培养液的体积相关，通常发酵罐的容积为100L、200L、400L和500L，相应地第三培养液的体积通常为100L、200L、400L和500L。糊状淀粉、硫酸镁、磷酸二氢钾、葡萄糖、白糖、蛋白胨和食用油均可直接使用。麦麸相对于其他组分更特殊下，麦麸需要加水煮25-35min，然后经过过滤去除麦麸得到麦麸水，再将麦麸水加入发酵罐内和其他组分混合。淀粉最好先加适量水润湿成糊状淀粉使用。食用油可以选用菜籽油、大豆油等常见的食用油。
产业化生产时，是用第二液体菌种制作菌包，具体制作过程与用第一液体菌种制作菌包完全一样。
一种羊肚菌的工厂化栽培方法，包括以下步骤：
菌包制作步骤：将小麦、木屑、土、麦麸、石灰、石膏、糖、硫酸镁和谷壳混合得到混合物；混合物中，各个组分的重量百分数分别为：小麦36-40％，木屑32-38％，土8-12％，麦麸8-12％，石灰1-3％，石膏0.8-1.2％，糖0.8-1.2％，硫酸镁0.8-1.2％，谷壳1-3％；然后将混合物装袋并进行加热灭菌处理，再将第二液体菌种在无菌环境下接种到混合物，然后在15-22℃条件下培养15-20天得到菌包；
脱袋栽培步骤：先在栽培区挖掘出土坑，然后将菌包脱袋后摆放在土坑内，再向土坑内填土并且覆盖菌包，然后向栽培区浇水。
实施例1
本实施例提供了一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将50g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入1000mL水中煮30min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将20g葡萄糖、1g硫酸镁、100g土和20g琼脂加入第一混合水中并煮20min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固4天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在20℃条件下放置4天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在18℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将200g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入1000mL水中煮30min后取出并得到麦麸水，然后将土豆水和麦麸水混合后得到第二混合水；
再将20g葡萄糖、1g硫酸镁和1片维生素B1加入第二混合水中并煮20min得到第二培养液；将第二培养液搅拌均匀后分装到摇瓶，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；待第二培养液冷却至22℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为350，在22℃下摇动培养5天后得到第一液体菌种。
实施例2
本实施例提供了一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将50g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入1000mL水中煮30min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将20g葡萄糖、1g硫酸镁、100g土和20g琼脂加入第一混合水中并煮20min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固4天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在20℃条件下放置4天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在18℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将200g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入1000mL水中煮30min后取出并得到麦麸水，然后将土豆水和麦麸混合后得到第二混合水；
再将20g葡萄糖、1g硫酸镁和1片维生素B1加入第二混合水中并煮20min得到第二培养液；将第二培养液搅拌均匀后分装到摇瓶，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；待第二培养液冷却至22℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为350，在22℃下摇动培养5天后得到第一液体菌种。
(3)扩大培养步骤为：将容量为400L的发酵罐洗净并消毒(具体清洗消毒的过程为，在发酵罐清洗干净后，对每个开关阀进行检查无误后，对发酵罐进行空消，在发酵罐外层加水，然后加温，当内层压力达到0.1Pa时，设定温度，时间设定35分钟，同时打开外层连向内层的三个开关，用水蒸气对内层及管道消毒35分钟)；然后将200g麦麸用1000mL水煮30min后过滤得到麦麸水，将麦麸水、6kg糊状淀粉、4kg硫酸镁、0.8kg磷酸二氢钾、2kg葡萄糖、2kg白糖、1.2kg蛋白胨和0.08kg食用油加入发酵罐，再向发酵罐内加入无菌水至发酵罐的最大容量刻度处，搅拌均匀后得到400L第三培养液；对第三培养液进行加热灭菌，待第三培养液冷却至22℃后，将第一液体菌种在无菌环境下接入发酵罐，向发酵罐内通入无菌空气并对第三培养液进行吹气搅拌，培养4天后得到第二液体菌种。
实施例3
本实施例提供了一种羊肚菌的工厂化栽培方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将50g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入1000mL水中煮30min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水水混合后得到第一混合水。
然后将20g葡萄糖、1g硫酸镁、100g土和20g琼脂加入第一混合水中并煮20min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固4天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在20℃条件下放置4天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在18℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将200g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入1000mL水中煮30min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和麦麸水混合后得到第二混合水；
再将20g葡萄糖、1g硫酸镁和1片维生素B1加入第二混合水中并煮20min得到第二培养液；将第二培养液搅拌均匀后分装到摇瓶，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；待第二培养液冷却至22℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为350，在22℃下摇动培养5天后得到第一液体菌种。
(3)菌包制作步骤：将小麦、木屑、土、麦麸、石灰、石膏、糖、硫酸镁和谷壳混合得到混合物；混合物中，各个组分的重量百分数分别为：小麦38％，木屑35％，土10％，麦麸10％，石灰2％，石膏1％，糖1％，硫酸镁1％，谷壳2％；然后将混合物装袋，再在温度120度、压力0.15Pa条件下灭菌5h；用接种枪将第一液体菌种在无菌环境下接种到混合物，然后在18℃、湿度65％条件下培养18天得到菌包；
(4)脱袋栽培步骤：先在栽培区挖掘出土坑，土坑的深度为15cm的，然后将菌包脱袋后摆放在土坑内，相邻的菌包之间间隔4cm，再向土坑内填土并且覆盖菌包，菌包的顶部的土层厚度为4cm，然后向栽培区浇水至栽培区的土壤的湿度为60-70％。
大棚呈拱形，大棚的最高点距离地面2.2m，大棚覆盖了隔热保温膜，大棚覆盖了透光率为30％的遮阳网或者遮阳布。大棚内的温度为10-20℃，大棚内的空气湿度为75-90％。大棚内设置有5层层架，每层层架的宽度为1.2m，长度为5m，层架的底部设置有网板，网板的顶面铺设有遮阳网，在遮阳网的顶面铺设泥土作为栽培区。
实施例4
本实施例提供了一种羊肚菌的工厂化栽培方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将50g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入1000mL水中煮30min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将20g葡萄糖、1g硫酸镁、100g土和20g琼脂加入第一混合水中并煮20min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固4天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在20℃条件下放置4天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在18℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将200g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的将把放入1000mL水中煮30min后取出并得到将把水，然后将土豆水、和麦麸水混合后得到第二混合水；
再将20g葡萄糖、1g硫酸镁和1片维生素B1加入第二混合水中并煮20min得到第二培养液；将第二培养液搅拌均匀后分装到摇瓶，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；待第二培养液冷却至22℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为350，在22℃下摇动培养5天后得到第一液体菌种。
(3)扩大培养步骤为：将容量为400L的发酵罐洗净并消毒(具体清洗消毒的过程为，在发酵罐清洗干净后，对每个开关阀进行检查无误后，对发酵罐进行空消，在发酵罐外层加水，然后加温，当内层压力达到0.1Pa时，设定温度，时间设定35分钟，同时打开外层连向内层的三个开关，用水蒸气对内层及管道消毒35分钟)；然后将200g麦麸用1000mL水煮30min后过滤得到麦麸水，将麦麸水、6kg糊状淀粉、4kg硫酸镁、0.8kg磷酸二氢钾、2kg葡萄糖、2kg白糖、1.2kg蛋白胨和0.08kg食用油加入发酵罐，再向发酵罐内加入无菌水至发酵罐的最大容量刻度处，搅拌均匀后得到400L第三培养液；对第三培养液进行加热灭菌，待第三培养液冷却至22℃后，将第一液体菌种在无菌环境下接入发酵罐，向发酵罐内通入无菌空气并对第三培养液进行吹气搅拌，培养4天后得到第二液体菌种。
(4)菌包制作步骤：将小麦、木屑、土、麦麸、石灰、石膏、糖、硫酸镁和谷壳混合得到混合物；混合物中，各个组分的重量百分数分别为：小麦38％，木屑35％，土10％，麦麸10％，石灰2％，石膏1％，糖1％，硫酸镁1％，谷壳然后将混合物装袋，再在温度120度、压力0.15Pa条件下灭菌5h；用接种枪将第二液体菌种在无菌环境下接种到混合物，然后在18℃、湿度65％条件下培养18天得到菌包；
(5)脱袋栽培步骤：先在栽培区挖掘出土坑，土坑的深度为15cm的，然后将菌包脱袋后摆放在土坑内，相邻的菌包之间间隔4cm，再向土坑内填土并且覆盖菌包，菌包的顶部的土层厚度为4cm，然后向栽培区浇水至栽培区的土壤的湿度为60-70％。
大棚呈拱形，大棚的最高点距离地面2.2m，大棚覆盖了隔热保温膜，大棚覆盖了透光率为30％的遮阳网或者遮阳布。大棚内的温度为10-20℃，大棚内的空气湿度为75-90％。大棚内设置有6层层架，每层层架的宽度为1m，长度为4m，层架的底部设置有网板，网板的顶面铺设有遮阳网，在遮阳网的顶面铺设泥土作为栽培区。
实施例5
本实施例提供了一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将180g土豆用800mL水煮20min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将45g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入800水中煮20-40min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将18g葡萄糖、0.8g硫酸镁、90g土和18g琼脂加入第一混合水中并煮15min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.1Pa且温度为100℃的条件下灭菌50min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固3天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在18℃条件下放置5天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在15℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将180g土豆用800mL水煮20-40min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将180g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入800mL水中煮20min后取出并得到麦麸水，然后将土豆水和麦麸水混合后得到第二混合水；
再将18g葡萄糖、0.8g硫酸镁和0.5片维生素B1加入第二混合水中并煮15min得到第二培养液；将第二培养液分装到摇瓶，在压力为0.1Pa且温度为100℃的条件下灭菌50min；待第二培养液冷却至20℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为400rpm，在20℃下摇动培养6天后得到第一液体菌种。
实施例6
本实施例提供了一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将220g土豆用1200mL水煮40min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将55g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入1200mL水中煮40min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将22g葡萄糖、1.2g硫酸镁、110g土和22g琼脂加入第一混合水中并煮25min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.2Pa且温度为130℃的条件下灭菌40min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固5天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在22℃条件下放置3天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在20℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将220g土豆用1200mL水煮40min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将220g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入1200mL水中煮40min后取出并得到麦麸水，然后将土豆水、和麦麸水混合后得到第二混合水；
再将22g葡萄糖、1.2g硫酸镁和1.5片维生素B1加入第二混合水中并煮25min得到第二培养液；将第二培养液分装到摇瓶，在压力为0.2Pa且温度为130℃的条件下灭菌40min；待第二培养液冷却至23℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为450rpm，在23℃下摇动培养3天后得到第一液体菌种。
实施例7
本实施例提供了一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将50g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入1000mL水中煮30min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将20g葡萄糖、1g硫酸镁、100g土和20g琼脂加入第一混合水中并煮20min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固4天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在20℃条件下放置4天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在18℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将200g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入1000mL水中煮30min后取出并得到麦麸水，然后将土豆水和麦麸水混合后得到第二混合水；
再将20g葡萄糖、1g硫酸镁和1片维生素B1加入第二混合水中并煮20min得到第二培养液；将第二培养液搅拌均匀后分装到摇瓶，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；待第二培养液冷却至22℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为500rpm，在22℃下摇动培养5天后得到第一液体菌种。
(3)扩大培养步骤为：将容量为400L的发酵罐洗净并消毒(具体清洗消毒的过程为，在发酵罐清洗干净后，对每个开关阀进行检查无误后，对发酵罐进行空消，在发酵罐外层加水，然后加温，当内层压力达到0.1Pa时，设定温度，时间设定35分钟，同时打开外层连向内层的三个开关，用水蒸气对内层及管道消毒35分钟)；将220g麦麸用1200mL水煮32min后过滤得到麦麸水，将麦麸水、7.2kg糊状淀粉、4.8kg硫酸镁、1.2kg磷酸二氢钾、2.4kg葡萄糖、2.4kg白糖、1.6kg蛋白胨和0.12kg食用油加入发酵罐，再向发酵罐内加入无菌水至发酵罐的最大容量刻度处，搅拌均匀后得到400L第三培养液；对第三培养液进行加热灭菌，待第三培养液冷却至24℃后，将第一液体菌种在无菌环境下接入发酵罐，向发酵罐内通入无菌空气并对第三培养液进行吹气搅拌，培养4天后得到第二液体菌种。
实施例8
本实施例提供了一种羊肚菌的工厂化栽培方法，包括以下步骤：
(1)母种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将50g木屑用布袋装好，再将用布袋装好的木屑放入1000mL水中煮30min后取出并得到木屑水，然后将土豆水和木屑水混合后得到第一混合水。
然后将20g葡萄糖、1g硫酸镁、100g土和20g琼脂加入第一混合水中并煮20min得到第一培养液，将第一培养液搅拌均匀后备用。其中每片维生素B1的重量为0.5g，每片酵母片的重量为0.3g。
再将第一培养液分装在试管内，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；然后将试管试倾斜放置并与水平面保持15°的夹角在阴凉的环境下进行冷却；第一培养液冷却凝固4天后得到第一培养基；采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌用胶布包裹后在20℃条件下放置4天；在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在18℃的环境下培养并得到母种。
(2)液体菌种制作步骤：先将200g土豆用1000mL水煮30min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将200g麦麸用布袋装好，再将用布袋装好的麦麸放入1000mL水中煮30min后取出并得到麦麸水，然后将土豆水和麦麸水混合后得到第二混合水；
再将20g葡萄糖、1g硫酸镁和1片维生素B1加入第二混合水中并煮20min得到第二培养液；将第二培养液搅拌均匀后分装到摇瓶，在压力为0.15Pa且温度为120℃的条件下灭菌45min；待第二培养液冷却至22℃，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，摇床的旋转频率为500rpm，在22℃下摇动培养5天后得到第一液体菌种。
(3)扩大培养步骤为：将容量为400L的发酵罐洗净并消毒(具体清洗消毒的过程为，在发酵罐清洗干净后，对每个开关阀进行检查无误后，对发酵罐进行空消，在发酵罐外层加水，然后加温，当内层压力达到0.1Pa时，设定温度，时间设定35分钟，同时打开外层连向内层的三个开关，用水蒸气对内层及管道消毒35分钟)后加入无菌水，将220g麦麸用1200mL水煮32min后过滤得到麦麸水，将麦麸水、7.2kg糊状淀粉、4.8kg硫酸镁、1.2kg磷酸二氢钾、2.4kg葡萄糖、2.4kg白糖、1.6kg蛋白胨和0.12kg食用油加入发酵罐，再向发酵罐内加入无菌水至发酵罐的最大容量刻度处，搅拌均匀后得到400L第三培养液；对第三培养液进行加热灭菌，待第三培养液冷却至24℃后，将第一液体菌种在无菌环境下接入发酵罐，向发酵罐内通入无菌空气并对第三培养液进行吹气搅拌，培养4天后得到第二液体菌种。
(4)菌包制作步骤：将小麦、木屑、土、麦麸、石灰、石膏、糖、硫酸镁和谷壳混合得到混合物；混合物中，各个组分的重量百分数分别为：小麦36％，木屑32％，土8％，麦麸8％，石灰1％，石膏0.8％，糖0.8％，硫酸镁0.8％，谷壳1％；然后将混合物装袋，再在温度为120℃、压力0.15Pa条件下灭菌5h；用接种枪将第二液体菌种在无菌环境下接种到混合物，然后在18℃、湿度65％条件下培养18天得到菌包；
(5)脱袋栽培步骤：先在栽培区挖掘出土坑，土坑的深度为18cm的，然后将菌包脱袋后摆放在土坑内，相邻的菌包之间间隔5cm，再向土坑内填土并且覆盖菌包，菌包的顶部的土层厚度为5cm，然后向栽培区浇水至栽培区的土壤的湿度为60-70％。
大棚呈拱形，大棚的最高点距离地面2.4m，大棚覆盖了隔热保温膜，大棚覆盖了透光率为25％的遮阳网或者遮阳布。大棚内的温度为10-20℃，大棚内的空气湿度为75-90％。大棚内设置有2层层架，每层层架的宽度为1.5m，长度为6m，层架的底部设置有网板，网板的顶面铺设有遮阳网，在遮阳网的顶面铺设泥土作为栽培区。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (9)
1.一种羊肚菌的液体菌种繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
母种制作步骤：在无菌的环境下，取羊肚菌的菌柄和菌帽的衔接处的组织放入第一培养基中培养，在15-20℃的环境下培养并得到母种；
其中，按重量份计，所述第一培养基由以下组分制成：180-220份土豆、45-55份木屑、1600-2400份水、18-22份葡萄糖、0.8-1.2份硫酸镁、90-110份土和18-22份琼脂；
液体菌种制作步骤：无菌环境下在第二培养基中接入所述母种，进行摇床培养，摇床培养的温度为20-23℃，摇床培养3-6天后得到第一液体菌种；
其中，按重量份计，所述第二培养基由以下组分制成：180-220份土豆、180-220份麦麸、1600-2400份水、18-22份葡萄糖、0.8-1.2份硫酸镁和0.25-1份维生素B1。
2.根据权利要求1所述的羊肚菌的液体菌种繁育方法，其特征在于，羊肚菌的液体菌种繁育方法还包括扩大培养步骤；
所述扩大培养步骤为：将所述第一液体菌种在无菌环境下接入发酵罐，向所述发酵罐内通入无菌空气并对所述发酵罐内的第三培养基进行吹气搅拌，培养3-6天后得到第二液体菌种；
按照与发酵罐的容积的比例，所述第三培养基由以下组分制成：麦麸40-60kg/100L、淀粉1.2-1.8kg/100L、硫酸镁0.8-1.2kg/100L、磷酸二氢钾0.1-0.3kg/100L、葡萄糖0.4-0.6kg/100L、白糖0.4-0.6kg/100L、蛋白胨0.2-0.4kg/100L和食用油0.01-0.03kg/100L，余量为水。
3.根据权利要求1所述的羊肚菌的液体菌种繁育方法，其特征在于，所述母种制作步骤中，所述羊肚菌由新鲜羊肚菌处理后得到，处理过程为：采摘生长完好、强壮的新鲜羊肚菌，然后将新鲜羊肚菌放入密闭容器内或者用胶布包裹后在18-22℃条件下放置3-5天。
4.根据权利要求1所述的羊肚菌的液体菌种繁育方法，其特征在于，所述第一培养基为斜面培养基。
5.一种羊肚菌的工厂化栽培方法，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述的步骤以及以下步骤：
菌包制作步骤：将小麦、木屑、土、麦麸、石灰、石膏、糖、硫酸镁和谷壳混合得到混合物；所述混合物中，各个组分的重量百分数分别为：所述小麦36-40％，所述木屑32-38％，所述土8-12％，所述麦麸8-12％，所述石灰1-3％，所述石膏0.8-1.2％，所述糖0.8-1.2％，所述硫酸镁0.8-1.2％，所述谷壳1-3％；然后将所述混合物装袋并进行加热灭菌处理，再将如权利要求1中 所述的第一液体菌种或者如权利要求2中 所述的第二液体菌种在无菌环境下接种到所述混合物，然后在15-22℃条件下培养15-20天得到菌包；
脱袋栽培步骤：先在栽培区挖掘出土坑，然后将所述菌包脱袋后摆放在土坑内，再向土坑内填土并且覆盖所述菌包，然后向栽培区浇水。
6.根据权利要求5所述的羊肚菌的工厂化栽培方法，其特征在于，所述土坑的深度为12-18cm，向所述栽培区浇水后的栽培区的土壤的湿度为60-70％，相邻的菌包之间间隔3-5cm，所述菌包的顶部的土层厚度为3-5cm。
7.根据权利要求5所述的羊肚菌的工厂化栽培方法，其特征在于，所述栽培区为多个并分布在大棚内，大棚内的温度为10-20℃，大棚内的空气湿度为75-90％。
8.根据权利要求7所述的羊肚菌的工厂化栽培方法，其特征在于，所述大棚内设置有2-6层层架，每层层架的宽度为1-1.5m，长度为4-6m，所述层架的底部设置有漏水孔。
9.根据权利要求8所述的羊肚菌的工厂化栽培方法，其特征在于，所述大棚呈拱形，所述大棚的最高点距离地面2-2.4m，所述大棚覆盖了隔热保温膜，所述大棚覆盖了透光率为25％-35％的遮阳网或者遮阳布。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 羊肚菌菌丝生物学特性研究;张松等;《食用菌学报》;20021231;第9卷(第1期);18-21 * |
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| CN105613042A (zh) | 2016-06-01 |
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