CN105588943A - 一种胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法 - Google Patents

一种胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法：利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，运用细胞蜡块技术制作薄层切片，进而检测无法获取组织标本的晚期或复发胃癌外周血CTC的Her-2表达情况。通过该技术方法，不用胃癌组织即可检测到无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者Her-2表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测。

Description

一种胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法
技术领域
本发明涉及一种检测Her-2基因的新方法，尤其是通过外周血检测无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者Her-2基因的方法。
背景技术
酪氨酸激酶-人类表皮生长因子受体2(Her-2，又名Her2/neu、c-erbB-2)属于表皮生长因子受体家族，是细胞内酪氨酸激酶活化的跨膜蛋白。它不同于其他表皮生长因子受体HER-1、HER-3、HER-4，它的配基可连接于细胞内片段。它可以翻译其他家族成员因此获得转磷酸化作用并活化下游信号通路。大部分活化HER-2是通过基因扩增导致HER-2的过度表达，但基因突变也可以导致它的活化。下游由HER-2活化的信号通路主要有：Ras-Raf-MAPK、PI3K-AKT、和STAT通路，这些通路可抑制细胞的凋亡，促进细胞的增殖、转移、血管生生、侵袭和转移。研究表明，在早期及进展期胃癌及乳腺癌中过度表达的Her-2(ErbB2)受体已成为胃癌及乳腺癌治疗的一个新靶标，而Her-2在不同类型胃癌中的表达率可达60％，超表达的患者可达13％～30％，目前Her-2已成为胃癌治疗的必要基因。曲妥珠单抗(赫赛汀)是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，适用于Her-2过度表达的胃癌。由于只有Her-2过度表达和基因扩增的胃癌患者用曲妥珠单抗治疗才有效，因此正确检测和评定胃癌的Her-2表达状态至关重要。
目前通常使用的Her-2检测方法有两种。一种是免疫组织化学方法，通过检测胃癌组织标本中的Her-2蛋白表达情况判定Her-2状态。该方法被认为是Her-2检测的金标准，但有研究证实该方法无法区分Her-2蛋白为中度阳性的患者是否存在Her-2基因的扩增。另外一种方法是基于检测Her-2基因扩增水平的荧光原位杂交法(FISH)，特异性更高，目前临床应用亦越来越多。这两种检测方法均是以肿瘤组织为检测对象，而对于复发或转移无法获取组织标本的胃癌，Her-2状态评估变得困难。
发明内容
循环肿瘤细胞(Circulatingtumorcell，CTC)是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。
为了克服无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者无法检测Her-2表达，进而不能评估患者Her-2状态的不足，本发明提供了一种胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法：利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，运用细胞蜡块技术制作薄层切片，进而检测无法获取组织标本的晚期或复发胃癌外周血CTC的Her-2表达情况。
本发明采用的技术方案如下：
一、利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC：
1、采集无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血：自肘正中静脉采集空腹8-12小时的空腹血5ml；
2、外周血样预处理：将采集的外周血样10倍稀释，稀释液成分：1mmol/lEDTA+0.1％BSA,稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25％；
3、利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周血循环肿瘤细胞：将预处理的外周血样加入到膜过滤分离肿瘤细胞装置的血样容器中，使其依靠重力自然过滤；
4、过滤结束后，从膜过滤分离肿瘤细胞装置中取下滤器，将循环肿瘤细胞染色液A液0.5ml加入到滤器中，染色3min，PBS缓冲液冲洗干净；滤液过滤完全后加入B液，1ml，染色2min，纯水1ml,冲洗2次，取下滤膜，放置在载玻片上，干燥后在显微镜下观察，确定是否存在CTC。
二、运用细胞蜡块技术制作薄层切片：
1、脱色：将带有CTC的滤膜从载玻片上取下，置于脱色液中浸泡4-6小时，脱去CTC染色液，所述脱色液为：95％酒精与100％二甲苯按容积比1:1混匀。
2、包裹：浸泡结束后取出滤膜，用显微镜擦镜纸或滤纸包裹；
3、固定：将包裹物置于10％中性福尔马林中，固定4-6h；
4、浸蜡包埋：固定结束后取出包裹物，脱水后置于石蜡包埋盒中，浸蜡包埋制作细胞石蜡块；
5、薄层切片：用切片机将细胞石蜡块连续切片，制成厚度为4μm的薄层切片。
三、检测无法获取组织标本的晚期或复发胃癌外周血CTC的Her-2表达情况：
1、将CTC蜡块薄层切片在染色缸中按以下步骤进行脱蜡和水化：二甲苯溶液浸泡3次，每次10分钟；无水乙醇溶液浸泡3次，每次5分钟；95％乙醇溶液浸泡5分钟；85％乙醇溶液浸泡5分钟；75％乙醇溶液浸泡5分钟；蒸馏水浸泡2次，每次3分钟；PH＝7.4的PBS浸泡3次，每次3分钟。
2、采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法对组织抗原进行修复：取pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液800-1500ml于压力锅中，大火加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温不锈钢切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，锅盖继续加热至喷汽开始计时，喷汽1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pH＝7.2～7.4的PBS冲洗两次，每次3分钟；
3、3％H2O2去离子水孵育5分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗3次，每次2分钟；
4、滴加Her-2一抗，室温或37℃孵育1～2小时或4℃过夜，PBS冲洗3次，每次2分钟；
5、滴加通用型IgG抗体-HRP多聚体，室温或37℃孵育15分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；
6、应用DAB溶液显色：甩去PBS液，每张切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3-10分钟；
7、蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明封片：蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；苏木素复染1分钟；0.1％盐酸酒精分化；0.1％氨水溶液返蓝；50％、70％、85％、95％梯度无水乙醇脱水干燥；二甲苯透明，中性树脂胶封片；
8、细胞病理学专家阅片，根据细胞膜和细胞浆着色程度判定Her-2表达情况。
步骤中所述的膜过滤分离肿瘤细胞装置，包括滤器、血样容器、废液缸和铁架台，所述铁架台设有底座、立架和支架，所述血样容器通过支架设置于铁架台上部，血样容器的下方为滤器，滤器通过输液器联通至废液缸，废液缸设置于底座上。
所述滤器包括滤器上口、滤膜、载滤膜平台和滤器下口，滤膜置于载滤膜平台上；滤器上口接血样容器，滤器下口通过输液器接废液缸。
所述滤膜为疏水材料制成，其上均匀布满口径为10微米的滤孔。
本发明的有益效果是：通过该技术方法，不用胃癌组织即可检测到无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者Her-2表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测。
附图说明
图1为本发明的膜过滤装置结构示意图；
图2为本发明膜过滤装置的滤器的结构示意剖视图；
图3为本发明膜过滤装置的滤器滤膜的结构示意图；
图4为胃癌患者外周血分离获取的循环肿瘤细胞影像图；
图5为晚期胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2免疫组化染色图像。
图中：1铁架台、2血样容器、3滤器、4输液器、5废液缸、6滤器上口、7滤膜、8载滤膜平台、9滤器下口、10滤孔、11底座、12立架、13支架。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明阐述如下。
运用此技术方法分离获取并鉴定8例胃癌术后腹腔复发而无法获取病理活检的胃癌患者(同时检测8例正常人样本做阴性对照)外周血循环肿瘤细胞的实施例。
一、利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，确定CTC是否存在：
自肘正中静脉采集空腹8-12小时的空腹血5ml，用45ml稀释液(成分：1mmol/lEDTA+0.1％BSA)稀释外周血，然后加入3ml的4％多聚甲醛固定稀释后的血样10分钟；
在固定的间期，组装膜过滤装置：如附图1、图2、图3所示，该过滤装置由滤器3、滤膜7、血样容器2、废液缸5、铁架台1构成；
用10mlPBS润湿滤器3，然后将固定好的外周血样加入到膜过滤装置的血样容器2中，使其依靠重力自然过滤，CTC被截留在滤膜7上；
肿瘤细胞直径一般大于15微米，而血细胞(包括红细胞、白细胞)直径一般小于10微米，因此当含有CTC的外周血经过滤后，血细胞因直径小于滤孔10能够被滤过，而CTC因直径大于滤孔10被截留在滤膜7上。
过滤结束后，从过滤装置中取下滤器3，打开并移走滤器上口6，将将循环肿瘤细胞染色液A液0.5ml加入到滤器中，染色3min，PBS缓冲液冲洗干净；滤液过滤完全后加入B液，1ml，染色2min，纯水1ml,
PBS缓冲液将滤器3冲洗干净，用眼科镊子取下滤膜7，细胞面朝上，放置在载玻片上；
将滤膜干燥后在显微镜下观察,确定是否存在CTC。
通过观察，8例健康志愿者均未查到循环肿瘤细胞；2例复发胃癌患者未检测到循环肿瘤细胞，1例晚期胃癌患者未检测到循环肿瘤细胞(表1)，本次检测阳性率为62.5％。
表1实施例CTC检测结果
二、运用细胞蜡块技术制作薄层切片：
将载玻片上载有CTC的滤膜7从载玻片上取下，置于95％酒精与100％二甲苯按容积比1:1混匀的脱色液中浸泡4-6小时，脱去CTC染色液；把滤膜浸泡脱色后应用擦镜纸包裹；将包裹物置于10％中性福尔马林中，固定4-6h；固定结束后取出包裹物，脱水后置于石蜡包埋盒中，浸蜡包埋制作细胞石蜡包块，用切片机将细胞石蜡块连续切片，制成厚度为4μm薄层切片。
三、检测无法获取组织标本的晚期或复发胃癌外周血CTC的Her-2表达情况：
将CTC蜡块薄层切片在染色缸中按以下步骤进行脱蜡和水化：二甲苯溶液浸泡3次，每次10分钟；无水乙醇溶液浸泡3次，每次5分钟；95％乙醇溶液浸泡5分钟；85％乙醇溶液浸泡5分钟；75％乙醇溶液浸泡5分钟；蒸馏水浸泡2次，每次3分钟；PH＝7.4的PBS浸泡3次，每次3分钟。
采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法对组织抗原进行修复：取pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液800-1500ml于压力锅中，大火加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温不锈钢切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，锅盖继续加热至喷汽开始计时，喷汽1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pH＝7.2～7.4的PBS冲洗两次，每次3分钟；
3％H2O2去离子水孵育5分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗3次，每次2分钟；
滴加Her-2一抗，室温或37℃孵育1～2小时或4℃过夜，PBS冲洗3次，每次2分钟；滴加通用型IgG抗体-HRP多聚体，室温或37℃孵育15分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；
应用DAB溶液显色：甩去PBS液，每张切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3-10分钟；
蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明封片：蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；苏木素复染1分钟；0.1％盐酸酒精分化；0.1％氨水溶液返蓝；50％、70％、85％、95％梯度无水乙醇脱水干燥；二甲苯透明，中性树脂胶封片；
细胞病理学专家阅片，根据细胞膜和细胞浆着色程度判定Her-2表达情况。
图4所示为胃癌患者外周血分离获取的循环肿瘤细胞影像图，其细胞核较大，细胞核形状不规则；高核质比。
图5所示为晚期胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2免疫组化染色图像，细胞膜和细胞浆黄染。根据其染色分布和强度判定阳性程度，细胞着色占细胞小于10％为(-)，着色10％-25％为(+)，着色25％-50％为(++)，着色大于50％为(+++)，见表1。
所检测的循环肿瘤细胞应用免疫组化证实Her-2的表达并与胃癌大体标本Her-2结果对比，观察其差异，主要针对大体标本Her-2表达阴性而循环肿瘤细胞表达阳性的患者，指导胃癌的靶向治疗，为胃癌靶向治疗提供新的思路。

Claims (7)

1.一种胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法，其特征在于，所述方法为：利用膜过滤装置分离获取晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，运用细胞蜡块技术制作薄层切片，检测晚期或复发胃癌外周血CTC的Her-2表达情况。
2.根据权利要求1所述的胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法，其特征在于，所述的膜过滤装置包括滤器(3)、血样容器(2)、废液缸(5)和铁架台(1)，所述铁架台(1)设有底座(11)、立架(12)和支架(13)，所述血样容器(2)通过支架(13)设置于铁架台(1)上部，血样容器(2)的下方为滤器(3)，滤器(3)通过输液器(4)联通至废液缸(5)，废液缸(5)设置于底座(11)上。
3.根据权利要求2所述的胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法，其特征在于：所述滤器(3)包括滤器上口(6)、滤膜(7)、载滤膜平台(8)和滤器下口(9)，滤膜(7)置于载滤膜平台8上；滤器上口(6)接血样容器(2)，滤器下口(9)通过输液器(4)接废液缸(5)。
4.根据权利要求3所述的胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法，其特征在于：所述滤膜(7)为疏水材料制成，其上均匀布满口径为10微米的滤孔(10)。
5.根据权利要求1所述的胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法，其特征在于，所述的利用膜过滤装置分离获取晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，其方法步骤如下：
1)采集无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血：自肘正中静脉采集空腹8-12小时的空腹血5ml；
2)外周血样预处理：将采集的外周血样按1：10浓度稀释，稀释液成分：1mmol/lEDTA+0.1％BSA,稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25％；
3)利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周血循环肿瘤细胞：将预处理的外周血样加入到膜过滤分离肿瘤细胞装置的血样容器(2)中，使其依靠重力自然过滤；
4)过滤结束后，从膜过滤分离肿瘤细胞装置中取下滤器(3)，将循环肿瘤细胞染色液A液0.5ml加入到滤器(3)中，染色3min，PBS缓冲液冲洗干净；滤液过滤完全后加入B液，1ml，染色2min，纯水1ml,冲洗2次，取下滤膜(7)，放置在载玻片上，室温放置，滤膜干燥后在显微镜下观察，确定是否存在CTC。
6.根据权利要求1所述的胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法，其特征在于，所述的运用细胞蜡块技术制作薄层切片，方法如下：
1)脱色：将带有CTC的滤膜(7)从载玻片上取下，置于脱色液中浸泡4-6小时，脱去CTC染色液，所述脱色液为：95％酒精与100％二甲苯按容积比1:1混匀；
2)包裹：浸泡结束后取出滤膜(7)，用显微镜擦镜纸或滤纸包裹；
3)固定：将包裹物置于10％中性福尔马林中，固定4-6h；
4)浸蜡包埋：固定结束后取出包裹物，脱水后置于石蜡包埋盒中，浸蜡包埋制作细胞石蜡块；
5)薄层切片：用切片机将细胞石蜡块连续切片，制成厚度为4μm的薄层切片。
7.根据权利要求1所述的胃癌患者外周血Her-2基因的检测方法，其特征在于，所述的检测晚期或复发胃癌外周血CTC的Her-2表达情况，其方法步骤如下：
1)CTC蜡块薄层切片在染色缸中按以下步骤进行脱蜡和水化：二甲苯溶液浸泡3次，每次10分钟；无水乙醇溶液浸泡3次，每次5分钟；95％乙醇溶液浸泡5分钟；85％乙醇溶液浸泡5分钟；75％乙醇溶液浸泡5分钟；蒸馏水浸泡2次，每次3分钟；PH＝7.4的PBS浸泡3次，每次3分钟；
2)采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法对组织抗原进行修复：取pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液800-1500ml于压力锅中，大火加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温不锈钢切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，锅盖继续加热至喷汽开始计时，喷汽1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pH＝7.2～7.4的PBS冲洗两次，每次3分钟；
3)3％H2O2去离子水孵育5分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗3次，每次2分钟；
4)滴加Her-2一抗，室温或37℃孵育1～2小时或4℃过夜，PBS冲洗3次，每次2分钟；
5)滴加通用型IgG抗体-HRP多聚体，室温或37℃孵育15分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；
6)应用DAB溶液显色：甩去PBS液，每张切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3-10分钟；
7)蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明封片：蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；苏木素复染1分钟；0.1％盐酸酒精分化；0.1％氨水溶液返蓝；50％、70％、85％、95％梯度无水乙醇脱水干燥；二甲苯透明，中性树脂胶封片；
8)细胞病理学专家阅片，根据细胞膜和细胞浆着色程度判定Her-2表达情况。
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Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107907395A (zh) * 2017-11-16 2018-04-13 南方医科大学南方医院 早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法
CN111562375A (zh) * 2020-04-20 2020-08-21 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
CN111610334A (zh) * 2020-05-18 2020-09-01 山东省肿瘤防治研究院（山东省肿瘤医院） 一种基于细胞大小过滤识别肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞的方法
WO2021213306A1 (zh) * 2020-04-21 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2021213290A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞ca199表达的试剂盒及检测方法
WO2021213299A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2021213315A1 (zh) * 2020-04-22 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 通过外周血循环肿瘤细胞检测结直肠癌患者braf基因v600e突变表达的试剂盒
WO2021213292A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
WO2021213311A1 (zh) * 2020-04-22 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 通过外周血循环肿瘤细胞检测结直肠癌患者pd-l1基因表达的免疫荧光试剂盒
WO2021213316A1 (zh) * 2020-04-21 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测肾癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2021213261A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2022001825A1 (zh) * 2020-07-01 2022-01-06 天津市肿瘤医院（天津医科大学肿瘤医院） 一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的试剂盒及检测方法
WO2022001824A1 (zh) * 2020-07-01 2022-01-06 山东第一医科大学第二附属医院 一种检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1737526A (zh) * 2005-07-20 2006-02-22 徐华 体液细胞块石蜡切片制作
CN102199659A (zh) * 2010-03-25 2011-09-28 中山大学达安基因股份有限公司 Her2基因扩增检测试剂盒
CN103597354A (zh) * 2011-04-04 2014-02-19 雀巢产品技术援助有限公司 用于预测和改善胃癌患者存活的方法
CN103820390A (zh) * 2014-03-04 2014-05-28 李胜 一种获取循环肿瘤微栓的方法及装置
CN103910800A (zh) * 2014-04-09 2014-07-09 杭州雅盛生物科技有限公司 抗her2的多克隆抗体及其制备和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1737526A (zh) * 2005-07-20 2006-02-22 徐华 体液细胞块石蜡切片制作
CN102199659A (zh) * 2010-03-25 2011-09-28 中山大学达安基因股份有限公司 Her2基因扩增检测试剂盒
CN103597354A (zh) * 2011-04-04 2014-02-19 雀巢产品技术援助有限公司 用于预测和改善胃癌患者存活的方法
CN103820390A (zh) * 2014-03-04 2014-05-28 李胜 一种获取循环肿瘤微栓的方法及装置
CN103910800A (zh) * 2014-04-09 2014-07-09 杭州雅盛生物科技有限公司 抗her2的多克隆抗体及其制备和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M IWATSUKI1 ET AL: "Frequency of HER2 expression of circulating tumour cells in patients with metastatic or recurrent gastrointestinal cancer", 《BRITISH JOURNAL OF CANCER》 *

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107907395A (zh) * 2017-11-16 2018-04-13 南方医科大学南方医院 早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法
CN111562375A (zh) * 2020-04-20 2020-08-21 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
CN111562375B (zh) * 2020-04-20 2022-05-06 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
WO2021213261A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2021213290A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞ca199表达的试剂盒及检测方法
WO2021213299A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2021213262A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
WO2021213292A1 (zh) * 2020-04-20 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
WO2021213316A1 (zh) * 2020-04-21 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测肾癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2021213306A1 (zh) * 2020-04-21 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
WO2021213311A1 (zh) * 2020-04-22 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 通过外周血循环肿瘤细胞检测结直肠癌患者pd-l1基因表达的免疫荧光试剂盒
WO2021213315A1 (zh) * 2020-04-22 2021-10-28 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 通过外周血循环肿瘤细胞检测结直肠癌患者braf基因v600e突变表达的试剂盒
CN111610334A (zh) * 2020-05-18 2020-09-01 山东省肿瘤防治研究院（山东省肿瘤医院） 一种基于细胞大小过滤识别肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞的方法
WO2022001825A1 (zh) * 2020-07-01 2022-01-06 天津市肿瘤医院（天津医科大学肿瘤医院） 一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的试剂盒及检测方法
WO2022001824A1 (zh) * 2020-07-01 2022-01-06 山东第一医科大学第二附属医院 一种检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法

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