CN107907395A - 早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法 - Google Patents
早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107907395A CN107907395A CN201711153843.5A CN201711153843A CN107907395A CN 107907395 A CN107907395 A CN 107907395A CN 201711153843 A CN201711153843 A CN 201711153843A CN 107907395 A CN107907395 A CN 107907395A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- stomach
- cancer
- imaging
- early carcinoma
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 128
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 128
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 128
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 64
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 62
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 62
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 56
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims abstract description 112
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims abstract description 9
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 15
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 14
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 12
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 9
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 8
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 8
- 101100008047 Caenorhabditis elegans cut-3 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 7
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims description 7
- 230000008676 import Effects 0.000 claims description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims 1
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 6
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 6
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000012277 endoscopic treatment Methods 0.000 description 1
- CXISHPLSAAGNQA-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CCOC(C)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O CXISHPLSAAGNQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
本发明提供了一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,涉及病理鉴别技术领域。本发明提供的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法通过染色切片结合多光子成像分析技术对早期胃癌癌旁胶原的多光子成像的形态学特征和纹理特征进行分析评价,及时发现早期胃癌肿瘤旁胶原变化情况,有助于临床工作者了解患者是否存在淋巴结转移的风险,从而为临床医生在术式选择及后续诊疗中提供参考,为患者提供更具个性化治疗方案,最终达到提高患者的生活质量,降低肿瘤复发的概率的目的。本发明设计合理,技术成熟,简便易行,具有广阔的临床应用前景和良好的科研推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及病理鉴别技术领域,尤其是涉及一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法。
背景技术
根据胃癌分类标准的定义,早期胃癌是指肿瘤细胞的侵犯局限在胃粘膜层或者粘膜下层,不论是否存在淋巴结转移。近年来,虽然在全世界范围内胃癌的整体发病率有所下降,但是早期胃癌的发病率却逐年升高。目前早期胃癌的治疗方式主要包括外科手术,即全胃或远端胃切除+淋巴结清扫,和内镜粘膜下切除术(ESD)。随着内镜技术的广泛应用,ESD已经逐渐替代外科手术,成为治疗早期胃癌的主流方式。
但是,目前早期胃癌患者中仍有约15%的病人存在淋巴结转移,肿瘤细胞淋巴结转移是早期胃癌患者行ESD的主要禁忌症,使得临床医生在做临床决策时更倾向于让早期胃癌患者接受外科手术,这一方面使无淋巴结转移的早期胃癌患者面临更大的手术风险,另一方面也降低了患者的生活质量。
研究显示,癌旁胶原的变化与胃癌淋巴结转移息息相关,及时发现癌旁胶原变化能对临床诊疗提供帮助,使存在淋巴结转移患者能接受手术治疗,降低后期复发风险,同时也使不存在淋巴结转移的病人通过内镜下治疗从而避免外科手术带来的风险,提高生活质量。
因此,研究开发出一种可以对早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织的微观结构进行观察评价的方法,进而能够快速、高效地反应癌旁胶原的变化情况,对临床医生判断患者是否存在淋巴结转移的评估提供参考,从而更好地选择治疗手段,在指导个性化诊疗方面具有重要意义。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,上述方法通过染色切片结合多光子成像分析技术对早期胃癌切除标本的癌旁胶原进行组织评价,能够快速、高效地反应癌旁胶原的变化情况,有助于临床工作者了解患者是否存在淋巴结转移的风险。
本发明提供的一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,所述方法包括以下步骤:
(a)样本准备:在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张组织切片进行常规蜡块制备,取1张进行苏木精-伊红染色,另1张进行病理学Masson染色,剩余1张进行冷藏保存,作为待测多光子成像切片;
(b)标注成像区域:在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察,并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比,在待测多光子成像切片上标注对应区域,得到标注成像区域;
(c)多光子胶原成像:对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像,得到多光子胶原成像图。
进一步的,所述方法还任选的包括步骤(d)成像分析:将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统,提取图像的形态学特征与纹理特征,进行胶原层面分析。
进一步的,所述步骤(a)中组织切片的厚度为3~8μm。
进一步的,所述步骤(a)中冷藏保存为-86℃冰箱保存。
进一步的,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像为利用双通道探测器进行成像。
更进一步的,所述步骤(c)双通道探测器的输出功率为2.0W~2.5W。
更进一步的,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像的成像激发波长为800~820nm,自体荧光信号通道的接收波长为430~708nm,二次谐波信号通道的接收波长为387nm~409nm。
进一步的,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像的成像倍数为20倍,成像面积为400μm×400μm。
进一步的,所述步骤(d)多光子成像图像的形态学特征包括:平均胶原纤维数量、胶原纤维数量标准差、平均胶原纤维交联指数、胶原纤维交联指数标准差、平均胶原纤维长度、胶原纤维长度标准差、平均胶原纤维宽度、胶原纤维宽度标准差、平均胶原垂直度、胶原垂直度标准差、平均胶原交联密度、胶原交联密度标准差、平均胶原弯曲度以及胶原弯曲度标准差。
进一步的,所述步骤(d)多光子成像图像的纹理特征包括:由图像生成的灰度共生矩阵元素值的平方和、灰度共生矩阵在空间的相似程度、图像纹理的非均匀程度或复杂程度以及纹理的粗细。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明提供一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,上述方法通过染色切片结合多光子成像分析技术对早期胃癌癌旁胶原的多光子成像进行包括形态学特征和纹理特征进行分析评价,及时发现早期胃癌肿瘤旁胶原变化情况,有助于临床工作者了解患者是否存在淋巴结转移的风险,从而为临床医生在术式选择及后续诊疗中提供参考,为患者提供更具个性化治疗方案,最终达到提高患者的生活质量,降低肿瘤复发的概率的目的。本发明设计合理,技术成熟,简便易行,具有广阔的临床应用前景和良好的科研推广价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1提供的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法流程图;
图2为本发明效果例1提供的传统方法测得的胶原含量较多的癌旁胶原标本的多光子胶原成像图;
图3为本发明效果例1提供的传统方法测得的胶原含量较少的癌旁胶原标本的多光子胶原成像图。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面,一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,所述方法包括以下步骤:
(a)样本准备:在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张组织切片进行常规蜡块制备,取1张进行苏木精-伊红染色,另1张进行病理学Masson染色,剩余1张进行冷藏保存,作为待测多光子成像切片;
(b)标注成像区域:在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察,并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比,在待测多光子成像切片上标注对应区域,得到标注成像区域;
(c)多光子胶原成像:对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像,得到多光子胶原成像图,随后进行直观成像分析。
本发明中,早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,通过染色切片结合多光子成像分析技术对早期胃癌癌旁胶原的多光子成像进行包括形态学特征和纹理特征进行分析评价。上述多光子成像是一种基于非线性光学和飞秒激光镭射之上的多光子显微成像技术,通过利用活体组织中细胞自身产生的自体荧光及非中心对称组织(如胶原)产生的二次谐波进行成像,该方法无需传统病理活检的组织切取、固定、包埋、切片、染色等步骤,便可实时快速地观察到标本的组织结构和细胞形态的目的,其具有穿透力强、光损伤小、分辨率高等优点能对石蜡切片、新鲜离体组织以及活体组织都可以清晰成像。因此,本发明将多光子成像技术应用于早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价具有广阔的应用前景和科研推广价值。
本发明早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,有助于临床工作者及时发现早期胃癌肿瘤旁胶原变化情况,了解患者是否存在淋巴结转移的风险,从而为临床医生在术式选择及后续诊疗中提供参考,为患者提供更具个性化治疗方案,最终达到提高患者的生活质量,降低肿瘤复发的概率的目的。
在本发明的一种优选实施方式中,所述方法还任选的包括步骤(d)成像分析:将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统,提取图像的形态学特征与纹理特征,进行胶原层面分析。
在本发明的一种优选实施方式中,所述步骤(a)中组织切片的厚度为3~8μm。
作为一种优选的实施方式,上述步骤(a)中组织切片的厚度为3~8μm更利于光学电镜以及多光子成像的观察。
在本发明的一种优选实施方式中,所述步骤(a)中冷藏保存为-86℃冰箱保存。
作为一种优选的实施方式,上述步骤(a)中冷藏保存为在-86℃冰箱中保存,可以使组织切片保持更好的安全性、均匀性和稳定性,进而使多光子成像达到更好的技术效果。
在本发明的一种优选实施方式中,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像为利用双通道探测器进行成像。
在上述优选实施方式中,所述步骤(c)双通道探测器的输出功率为2.0W~2.5W,成像激发波长为800~820nm,自体荧光信号通道的接收波长为430~708nm,二次谐波信号通道的接收波长为387nm~409nm。
作为一种优选的实施方式,本发明根据早期胃癌切除标本的癌旁胶原制得的待测切片的特点,采用特定激发波长和接受波长对多光子成像切片进行成像,可以得到更为清晰准确的二次谐波图像。
在本发明的一种优选实施方式中,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像的成像倍数为20倍,成像面积为400μm×400μm。
优选的,本发明早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,所述方法包括以下步骤:
(a)样本准备:在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张厚度为3~8μm组织切片进行常规蜡块制备,取1张进行苏木精-伊红染色,另1张进行病理学Masson染色,剩余1张放置于-86℃冰箱进行冷藏保存,作为待测多光子成像切片;
(b)标注成像区域:在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察,并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比,在待测多光子成像切片上标注对应区域,得到标注成像区域;
(c)多光子胶原成像:对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像,得到多光子胶原成像图,所述双通道探测器的输出功率为2.0W~2.5W,成像激发波长为800~820nm,自体荧光信号通道的接收波长为430~708nm,二次谐波信号通道的接收波长为387nm~409nm,所述成像倍数为20倍,成像面积为400μm×400μm;
任选的(d)成像分析:将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统,提取图像的形态学特征与纹理特征,进行胶原层面分析。
在本发明的一种优选实施方式中,所述步骤(d)多光子成像图像的形态学特征包括:平均胶原纤维数量、胶原纤维数量标准差、平均胶原纤维交联指数、胶原纤维交联指数标准差、平均胶原纤维长度、胶原纤维长度标准差、平均胶原纤维宽度、胶原纤维宽度标准差、平均胶原垂直度、胶原垂直度标准差、平均胶原交联密度、胶原交联密度标准差、平均胶原弯曲度以及胶原弯曲度标准差。
在本发明的一种优选实施方式中,所述步骤(d)多光子成像图像的纹理特征包括:由图像生成的灰度共生矩阵元素值的平方和、灰度共生矩阵在空间的相似程度、图像纹理的非均匀程度或复杂程度以及纹理的粗细。
实施例1
如图1所示,一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,所述方法包括以下步骤:
(a)样本准备:在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张厚度为3μm组织切片进行常规蜡块制备,取1张进行苏木精-伊红染色,另1张进行病理学Masson染色,剩余1张放置于-86℃冰箱进行冷藏保存,作为待测多光子成像切片;
(b)标注成像区域:在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察,并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比,在待测多光子成像切片上标注对应区域,得到标注成像区域;
(c)多光子胶原成像:对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像,得到多光子胶原成像图,所述双通道探测器的输出功率为2.0W,成像激发波长为800nm,自体荧光信号通道的接收波长为430nm,二次谐波信号通道的接收波长为387nm,所述成像倍数为20倍,成像面积为400μm×400μm;
(d)成像分析:将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统,提取图像的形态学特征与纹理特征,进行胶原层面分析。
实施例2
一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,所述方法包括以下步骤:
(a)样本准备:在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张厚度为8μm组织切片进行常规蜡块制备,取1张进行苏木精-伊红染色,另1张进行病理学Masson染色,剩余1张放置于-86℃冰箱进行冷藏保存,作为待测多光子成像切片;
(b)标注成像区域:在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察,并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比,在待测多光子成像切片上标注对应区域,得到标注成像区域;
(c)多光子胶原成像:对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像,得到多光子胶原成像图,所述双通道探测器的输出功率为2.5W,成像激发波长为820nm,自体荧光信号通道的接收波长为708nm,二次谐波信号通道的接收波长为409nm,所述成像倍数为20倍,成像面积为400μm×400μm;
(d)成像分析:将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统,提取图像的形态学特征与纹理特征,进行胶原层面分析。
实施例3
一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,所述方法包括以下步骤:
(a)样本准备:在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张厚度为5μm组织切片进行常规蜡块制备,取1张进行苏木精-伊红染色,另1张进行病理学Masson染色,剩余1张放置于-86℃冰箱进行冷藏保存,作为待测多光子成像切片;
(b)标注成像区域:在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察,并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比,在待测多光子成像切片上标注对应区域,得到标注成像区域;
(c)多光子胶原成像:对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像,得到多光子胶原成像图,所述双通道探测器的输出功率为2.0W,成像激发波长为820nm,自体荧光信号通道的接收波长为708nm,二次谐波信号通道的接收波长为387nm,所述成像倍数为20倍,成像面积为400μm×400μm;
(d)成像分析:将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统,提取图像的形态学特征与纹理特征,进行胶原层面分析。
效果例1
为表明本发明早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,可以直观准确的对早期胃癌切除标本的癌旁胶原进行组织评价,同时具有简便易行的特点。现特别使用现有的胶原蛋白(羟脯氨酸)含量分析法对早期胃癌标本的病变癌旁处标本的胶原含量进行测定,其中:标本1为测得胶原含量较多的标本,标本2为测得胶原含量较少的标本。
现有的胶原蛋白(羟脯氨酸)含量分析法,主要操作过程为:组织切片在100℃环境下干燥至恒重后在110℃6mol/L的HCl溶液中水解18小时;酸解液蒸发完毕后残渣用无离子水洗涤三次,每次洗涤步骤之间需完全蒸发,以除去残酸;样品经乙酸乙酯枸橼酸盐缓冲液(pH 6)溶解和处理后,通过比色分析羟脯氨酸值,分析结果乘固定系数7.46即为胶原含量,单位为ug/mg。该方法操作流程较为繁琐且耗时,也无法对胶原微观结构进行分析。
将上述标本1和标本2分别使用本发明实施例3提供的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法进行评价,其中:
如图2所示,标本1的多光子胶原成像图可见胶原结构致密、排列规整,提示患者出现淋巴结转移可能性小,建议在内镜下行ESD治疗,避免外科手术带来的风险,提高术后生活质量。
如图3所示,标本2的多光子胶原成像图可见胶原破坏增多、排列构象紊乱,评估患者出现淋巴结转移可能性大,建议行外科手术治疗,降低远期复发风险。
由此可知,本发明早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法与现有的胶原蛋白(羟脯氨酸)含量分析法得到的结果相同,且相较于现有的胶原蛋白(羟脯氨酸)含量分析法不但更为直观准确、简便易行,并且还可以对胶原微观结构进行分析,同时,也避免了现有胶原蛋白(羟脯氨酸)含量分析法的复杂实验操作流程对实验结果的影响。
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(a)样本准备:在早期胃癌标本的病变癌旁处连续切取3张组织切片进行常规蜡块制备,取1张进行苏木精-伊红染色,另1张进行病理学Masson染色,剩余1张进行冷藏保存,作为待测多光子成像切片;
(b)标注成像区域:在普通光学显微镜下对苏木精-伊红染色切片和Masson染色切片中符合早期胃癌癌旁胶原的区域进行观察,并与步骤(a)待测多光子成像切片进行对比,在待测多光子成像切片上标注对应区域,得到标注成像区域;
(c)多光子胶原成像:对步骤(b)待测多光子成像切片的标注成像区域的胶原信号进行自体荧光和二次谐波成像,得到多光子胶原成像图,随后进行直观成像分析。
2.根据权利要求1所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述方法还任选的包括步骤(d)成像分析:将步骤(c)得到的多光子成像图片导入图像分析系统,提取图像的形态学特征与纹理特征,进行胶原层面分析。
3.根据权利要求1所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(a)中组织切片的厚度为3~8μm。
4.根据权利要求1所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(a)中冷藏保存为-86℃冰箱保存。
5.根据权利要求1所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像为利用双通道探测器进行成像。
6.根据权利要求5所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(c)双通道探测器的输出功率为2.0W~2.5W。
7.根据权利要求5所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像的成像激发波长为800~820nm,自体荧光信号通道的接收波长为430~708nm,二次谐波信号通道的接收波长为387nm~409nm。
8.根据权利要求1所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(c)自体荧光和二次谐波成像的成像倍数为20倍,成像面积为400μm×400μm。
9.根据权利要求2所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(d)多光子成像图像的形态学特征包括:平均胶原纤维数量、胶原纤维数量标准差、平均胶原纤维交联指数、胶原纤维交联指数标准差、平均胶原纤维长度、胶原纤维长度标准差、平均胶原纤维宽度、胶原纤维宽度标准差、平均胶原垂直度、胶原垂直度标准差、平均胶原交联密度、胶原交联密度标准差、平均胶原弯曲度以及胶原弯曲度标准差。
10.根据权利要求2所述的早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法,其特征在于,所述步骤(d)多光子成像图像的纹理特征包括:由图像生成的灰度共生矩阵元素值的平方和、灰度共生矩阵在空间的相似程度、图像纹理的非均匀程度或复杂程度以及纹理的粗细。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711153843.5A CN107907395B (zh) | 2017-11-16 | 2017-11-16 | 早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711153843.5A CN107907395B (zh) | 2017-11-16 | 2017-11-16 | 早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107907395A true CN107907395A (zh) | 2018-04-13 |
CN107907395B CN107907395B (zh) | 2020-10-20 |
Family
ID=61846519
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711153843.5A Active CN107907395B (zh) | 2017-11-16 | 2017-11-16 | 早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107907395B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109259780A (zh) * | 2018-07-24 | 2019-01-25 | 南方医科大学南方医院 | 基于增强ct影像组学的胃癌预后和化疗获益的辅助评估系统与方法 |
CN117530659A (zh) * | 2023-11-06 | 2024-02-09 | 浙江大学 | 基于光学相干层析成像技术的早期宫颈癌变辅助诊断工具 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1310596A (zh) * | 1998-06-12 | 2001-08-29 | 福托金公司 | 治疗剂的多光子光激活用的改进方法和装置 |
US20050259256A1 (en) * | 2002-07-31 | 2005-11-24 | Dario Anselmetti | Device and method for measurement |
US20130182253A1 (en) * | 2011-01-19 | 2013-07-18 | Howard Hughes Medical Institute | Wavefront compensation for deep tissue optical microscopy |
CN105588943A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-05-18 | 山东省肿瘤防治研究院 | 一种胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法 |
-
2017
- 2017-11-16 CN CN201711153843.5A patent/CN107907395B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1310596A (zh) * | 1998-06-12 | 2001-08-29 | 福托金公司 | 治疗剂的多光子光激活用的改进方法和装置 |
US20050259256A1 (en) * | 2002-07-31 | 2005-11-24 | Dario Anselmetti | Device and method for measurement |
US20130182253A1 (en) * | 2011-01-19 | 2013-07-18 | Howard Hughes Medical Institute | Wavefront compensation for deep tissue optical microscopy |
CN105588943A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-05-18 | 山东省肿瘤防治研究院 | 一种胃癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JUN YAN 等: "Real-time optical diagnosis of gastric cancer with serosal invasion using multiphoton imagin", 《SCIENTIFIC REPORTS》 * |
刘庆仪 等: "人胃癌淋巴管的密度和面积及其与淋巴结转移的关系", 《解剖学报》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109259780A (zh) * | 2018-07-24 | 2019-01-25 | 南方医科大学南方医院 | 基于增强ct影像组学的胃癌预后和化疗获益的辅助评估系统与方法 |
CN117530659A (zh) * | 2023-11-06 | 2024-02-09 | 浙江大学 | 基于光学相干层析成像技术的早期宫颈癌变辅助诊断工具 |
CN117530659B (zh) * | 2023-11-06 | 2024-04-09 | 浙江大学 | 基于光学相干层析成像技术的早期宫颈癌变辅助诊断工具 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107907395B (zh) | 2020-10-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Zhang et al. | Rapid histology of laryngeal squamous cell carcinoma with deep-learning based stimulated Raman scattering microscopy | |
Li et al. | Margin analysis in head and neck cancer: state of the art and future directions | |
Kakkad et al. | Collagen I fiber density increases in lymph node positive breast cancers: pilot study | |
Yan et al. | Real-time optical diagnosis for surgical margin in low rectal cancer using multiphoton microscopy | |
Namikawa et al. | Limitation of indocyanine green fluorescence in identifying sentinel lymph node prior to skin incision in cutaneous melanoma | |
Lauwerends et al. | Current intraoperative imaging techniques to improve surgical resection of laryngeal cancer: a systematic review | |
Pouli et al. | Label-free, high-resolution optical metabolic imaging of human cervical precancers reveals potential for intraepithelial neoplasia diagnosis | |
CN107907395A (zh) | 早期胃癌切除标本的癌旁胶原组织评价方法 | |
US20130066199A1 (en) | Tumor margin detection method based on nuclear morphometry and tissue topology | |
Ziebart et al. | Deep neural network for differentiation of brain tumor tissue displayed by confocal laser endomicroscopy | |
Zhang et al. | A novel cell morphology analyzer application in head and neck cancer | |
Malachowski et al. | Mapping cutaneous T-cell lymphoma in the state of Florida: A retrospective exploratory spatial analysis of incidence patterns | |
Gao et al. | Comprehensive surface histology of fresh resection margins with rapid Open-Top Light-Sheet (OTLS) microscopy | |
Fang et al. | Prediction of the consistency of pituitary adenomas based on multiphoton microscopy | |
Giovannacci et al. | Correlation between autofluorescence intensity and histopathological features in non-melanoma skin cancer: An ex vivo study | |
Hellebust et al. | Vital-dye-enhanced multimodal imaging of neoplastic progression in a mouse model of oral carcinogenesis | |
Aref et al. | Emerging technology for intraoperative margin assessment and post-operative tissue diagnosis for breast-conserving surgery | |
CN1804593A (zh) | 单细胞拉曼光谱判别上皮细胞癌症性质的方法 | |
Farah et al. | Minimum intervention dentistry in oral medicine | |
Liu et al. | Quantitative analysis of collagen morphology in breast cancer from millimeter scale using multiphoton microscopy | |
CN107941760A (zh) | 直肠癌切除标本的切缘处胶原组织评价方法 | |
Meng et al. | Mapping variation of extracellular matrix in human keloid scar by label-free multiphoton imaging and machine learning | |
Wu et al. | Identifying three different architectural subtypes of mammary ductal carcinoma in situ using multiphoton microscopy | |
Bi et al. | The hypothesis of internal mammary lymph node drainage chain in breast cancer | |
Li et al. | Label-free identification of early gastrointestinal neuroendocrine tumors via biomedical multiphoton microscopy and automatic image analysis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |