CN1737526A - 体液细胞块石蜡切片制作 - Google Patents
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Abstract
一种体液细胞块石蜡切片制作，是通过前处理、离心沉定、固定、脱水透明浸蜡、包埋、切片、HE染色，封片等工序而完成；本发明方法简单，操作步骤少，不易出差错，结果稳定，不需要特殊的材料和设备，可与平常的日常工作一起进行，HE和免疫组织化染色背景清晰，效果满意，没有琼脂包埋的那种模糊背景、对进行分子病理方面的工作，提高了体液细胞学病理诊断的准确率。
Description
技术领域
本发明是临床医学检测肿瘤细胞及细胞分子标记检测方法之一。
背景技术
人体的细胞在致癌因素的作用下，细胞的性质会逐渐发生质的改变而成为癌细胞，其细胞在长期致癌因素的影响下，细胞所形成的肿瘤细胞增加到一定数量时就发展成恶性肿瘤，为了确诊病情，以便对症下药，争取最佳的治疗，时间和效果，目前医疗部门对患者采用的方法之一，是体液内查找癌细胞，一般使用离心机制作离心沉定涂片，或使用琼脂包埋细胞块石蜡切片，使用涂片离心机简单快捷，但设备较贵，不能用于免疫组织化学染色检查、不能进行细胞分子标记物检测、不能对肿瘤病人进行更加准确的检测，有时遇到疑难涂片，很难对肿瘤类型进行分类，有时难以区分是退变的肿瘤细胞还是增生退变的间皮细胞，使用琼脂细胞块石蜡包埋切片程序较多，又需要事先制作琼脂较为麻烦，故需改进。
发明内容
本发明的目的是提供一种方法简单，不易出差错，结果稳定的体液细胞块石蜡切片制作。
本发明的制作步骤如下：
1)离心沉淀前处理：将体液加入40％的甲醛其比例为体液：40％的甲醛等于9∶1，静止5分钟至5小时后，加入NaCl使体液内NaCl浓度达到0.9％，沉淀30分钟至72小时；
2)离心沉淀：将上述沉淀物摇匀后注入到5ml-20ml离心管进行离心处理，离心机转速为3000-5000转/分，每次时间为5-15分钟，每次离心处理后弃去上部清液，再注入沉淀物，反复进行2-8次，直到获得较多的细胞数量；
3)固定：将上述离心沉淀的产物弃去上部清液注入10％中性福尔马林，固定2小时。使组织细胞的结构保持，保持细胞块中细胞与生活时的形态相似，防止细胞自溶；
4)脱水、透明、浸蜡：将上述固定处理后的沉淀物用双层纱布包裹，在生物组织自动脱水进行脱水，或采用人工脱水，脱水时酒精温度为摄氏45度，75％酒精脱水60min，85％酒精脱水120min，95％酒精脱水120min，无水乙醇I脱水90min，无水乙醇II脱水90min，无水乙醇III脱水90min，采用有亲水性又有亲脂性的二甲苯或TO透明试剂进行透明、浸蜡，达到石蜡浸入细胞的目的；
5)包埋：将浸蜡后的细胞块冷却、粉碎，粉碎后混匀、放入石蜡包埋框底部，聚合在一起，缓缓沿着包埋框边缘加入溶化石蜡这样使细胞成份在细胞块内部更均匀，容易包埋好；
6)切片脱蜡：切片厚度为3-5微米。进行脱蜡具体步骤如下：①切片在恒温干燥箱内脱蜡50min，温度为摄氏60度；②二甲苯I脱蜡10min；③二甲苯II脱蜡5min；④无水乙醇洗去二甲苯1min×2；⑤95％酒精1min⑥90％酒精1min⑦85％酒精1min；
7)HE染色：先将脱蜡切片里流水或静水中冲洗1-3分钟，按常规进行染色，对部分细胞块切片可根据需要进行免疫组织的化学染色，其方法与普通免疫组织化学染色相同，才可以进行细胞分子标记物检测；
最后将采用中性树脂胶封片完成制作过程。
本发明与其他制作切片相比较，方法简单，操作步骤少、不易出差错，结果稳定，不需要特殊的材料和设备，可与平常的日常工作一起进行，切片背景清晰，显色良好，效果满意，没有琼脂包埋的那种模糊背景，可以进行分子病理方面的工作，进行细胞分子标记物检测，提高了体液细胞学病理诊断的准确率，提高了应用范围，特别是对耐药基因表达物的检测，对临床病人的治疗效果提供更加准确的治疗指导性意见。
实施例
本发明对50例胸腹水检测与普通离心涂片结果相比，查见癌细胞5例，在肿瘤细胞检出方面没有显著差异，但本发明获得的肿瘤细胞更多，可以进行免疫组织化学染色，免疫组织化学染色的背景清晰，显色良好，特别是可以进行耐药基因表达产物的检测，对肿瘤化疗具有重要的帮助，并可以通过免疫组织化学染色进行肿瘤细胞分类提高诊断质量，进行细胞标记物检测，对于退变的间皮细胞和退变的肿瘤细胞有时难以区分别，使用免疫组织化学染色标记细胞的类型，可以提高诊断的准确性，可以进行肿瘤分类及提供更加准确的治疗指导性意见。
Claims (1)
1.一种体液细胞块石蜡切片制作其步骤如下：
1)离心沉淀前处理：将体液加入40％的甲醛静止5分钟至5小时后，加入NaCl使体液内NaCl浓度达到0.9％，沉淀30分钟至72小时；
2)离心沉淀：将上述沉淀物摇匀后注入到5ml-20ml离心管进行离心处理，离心机转速为3000-5000转/分，每次时间为5-15分钟，每次离心处理后弃去上清液，再注入沉淀物，反复进行2-8次，直到获得较多的细胞数量；
3)固定：将上述离心沉淀的产物弃去上部清液注入10％中性福尔马林，固定2小时；
4)脱水、透明、浸蜡：将上述固定处理后的沉淀物用双层纱布包裹，在生物组织自动脱水进行脱水，或采用人工脱水，采用有亲水性又有亲脂性的二甲苯或TO透明试剂进行透明、浸蜡；
5)包埋：将浸蜡后的细胞块冷却、粉碎，粉碎后混匀、放入石蜡包埋框底部，聚合在一起，缓缓沿着包埋框边缘加入溶化石蜡均匀的包埋好；
6)切片脱蜡：切片厚度为3-5微米，切片置流水或静水冲洗1～3分钟，主要是将甲醛和氯化钠去除；
7)HE染色：按常规进行染色部分细胞块可根据需要进行免疫组织的化学染色；
最后将采用中性树胶封片，完成制片过程。
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