CN105585639A - 一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用 - Google Patents
一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种蛹虫草子实体杂聚多糖的制备方法及其应用。本发明涉及的制备方法主要包括以下步骤：蛹虫草子实体烘干、粉碎、乙醇脱脂、热水超声提取、提取液经浓缩、醇沉、脱蛋白、柱层析、透析、冷冻干燥得蛹虫草子实体杂聚糖TY258。本发明蛹虫草多糖具有降脂和抗动脉粥样硬化功效，在25mg/kg即可显著降低高脂诱导的动脉粥样硬化模型小鼠（载脂蛋白E敲除和低密度脂蛋白受体敲除小鼠）胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平、以及肝脏和主动脉弓的脂质蓄积，提升小鼠高密度脂蛋白胆固醇水平、超氧化物歧化酶和脂蛋白酯解酶的活性。该蛹虫草子实体多糖亦可显著降低高脂诱导的豚鼠和大鼠血浆甘油三酯、胆固醇、丙二醛和氧化低密度脂蛋白的含量。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物活性物质及其制备方法和用途，具体是一种蛹虫草子实体中杂聚多糖及其制备方法和降脂的应用。
背景技术
心脑血管疾病是一种高发病率、高致残率、高病死率的疾病，其主要病理过程是在血管壁病变的基础上，血液成分和（或）血流动力学改变，造成缺血性或出血性疾病。其病因较多，其中一个重要的病因是动脉粥样硬化。
高血脂是诱发动脉粥样硬化的主要因素之一。当体内胆固醇过高，特别是低密度脂蛋白水平（LDL-C）以及甘油三酯增高时，氧化的LDL则可被巨噬细胞吞噬，进而沉积在动脉内皮下，引起内皮下变性，进而导致血小板在动脉内壁聚集，若同时伴有动脉壁损伤或胆固醇转运障碍，则易在动脉内膜形成脂斑，最后，血管壁隆起、向官腔内突起形成粥样斑块。
脂蛋白脂酶（LPL）是脂质代谢的关键酶，其由肝外实质细胞合成分泌入血，水解乳糜微粒（chylomicron,CM）以及VLDL上的甘油三酯（Triglyceride,TG）；LPL缺乏会引起CM和VLDL水平增高。
蛹虫草（CordycepsmilitarisL.Link）又名北虫草、北冬虫夏草，其与冬虫夏草属于同属真菌，不仅具有与冬虫夏草相近的生物活性，且易于人工培养，成为冬虫夏草极具潜力的替代品。蛹虫草多糖是蛹虫草含量较高的生物活性物质之一，且具有类似于冬虫夏草的生物学活性，例如：增强免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、降血糖等多种功能。从蛹虫草中制备多糖，并确定其生物学活性，可以促进蛹虫草的临床转化应用和经济价值，对蛹虫草的综合利用具有重要意义。
蛹虫草多糖的单糖组成、相对分子质量、糖苷键连接方式可对其生物活性产生重要影响。水提醇沉法获得多糖的方法虽然工艺流程简单，但获得的多糖相对分子质量范围广，组成成分复杂，既不利于多糖构-效关系的阐述，也不利于产品质量控制和后续临床转化应用。
近年来，先后有国内外研究者报道了蛹虫草提取液单独或联合用药的降脂和抗动脉粥样硬化效果，但蛹虫草子实体多糖中具有抗动脉粥样硬化和降脂功能的多糖活性成分及其结构和制备方法未见报道。
发明内容
本发明针对以上不足之处，提供了一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用，此杂聚多糖可用于制备药物用于降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升超氧化物歧化酶和脂蛋白酯解酶活性、提升血浆高密度脂蛋白水平。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种蛹虫草子实体杂聚多糖的提取方法，包括以下步骤：
1）制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干并粉碎，过筛；向粉碎的蛹虫草子实体中加水，经冻融后超声处理，过滤得破壁蛹虫草子实体；破壁后的蛹虫草子实体加入95%的乙醇回流浸提脱脂，过滤得固形物；向固形物中再加入蒸馏水，加热超声浸提，抽滤除去残渣得上清液；上清液减压浓缩后加入95%的乙醇，置于0～4℃过夜，离心，收集沉淀；收集的沉淀经真空冷冻干燥，即得蛹虫草子实体粗多糖；
2)蛹虫草子实体多糖的纯化：蛹虫草子实体粗多糖经阴离子交换柱采用去离子水洗脱和凝胶渗透色谱柱分离纯化，即可分离得到纯的蛹虫草子实体杂聚多糖，命名为TY258。
获得的TY258，采用凝胶色谱法测定其分子量，其特征为该多糖分子量为625.8kDa；TY258由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和6-氧甲基甘露糖组成；各糖苷键的构成比例由甲基化分析结果和核磁共振波谱（NMR）数据确定。NMR如附图1-5所示，数据归属如表格1所示。
所得的蛹虫草子实体杂多糖TY258的核磁共振波谱（NMR）数据（见表1）：
TY258的模拟结构式如下：
其中：Glcp为吡喃型葡萄糖、Manp为吡喃型氧甲基甘露糖、Galp为吡喃型半乳糖；其中B≈2，C≈3，A≈322；该多糖简称TY258。
蛹虫草子实体杂聚糖在制备降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升超氧化物歧化酶和脂蛋白酯解酶活性的药物中的应用。
蛹虫草子实体杂聚糖在制备降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升血浆高密度脂蛋白水平的药物中的应用。
本发明首次公开一种结构新颖的蛹虫草子实体杂聚多糖的制备方面以及其在降脂和抗动脉粥样硬化方面的应用，为蛹虫草多糖的构效关系研究提供了详实的实施案例。在本发明的实施例中，蛹虫草子实体杂聚多糖TY258可显著下调apoE(-/-)小鼠、LDLR(-/-)小鼠、豚鼠和Wistar大鼠血浆TC、TG、LDL-C、MDA和OX-LDL水平，并上调HDL-C、LPL活性和SOD活性；TY258亦可显著降低动脉粥样硬化模型apoE(-/-)小鼠和LDLR(-/-)小鼠肝脏和主动脉弓内皮下脂质蓄积，起到抗动脉粥样硬化效果。此外，在制备方面，本发明的实施方法中均采用了工业化生产中常用的离子交换和分子排阻色谱法，为该发明的转化奠定了基础。
附图说明
图1所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的1H(A)和DEPT(B)核磁共振图谱；
图2所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的1H-1HCOSY图谱；
图3所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的HSQC核磁共振图谱；
图4所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的HMBC核磁共振图谱；
图5所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的NEOSY核磁共振图谱；
图6所示为蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对肝脏脂质蓄积的影响，
与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01；
图7蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对主动脉弓脂质蓄积的影响，与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述：
实施例1：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的制备及抗动脉粥样硬化的应用
提取制备本发明的蛹虫草子实体杂聚多糖TY258并验证其在载脂蛋白E敲除小鼠模型上的降脂和抗动脉粥样硬化效果时，采取了下述各步骤：
1)制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干后用植物粉碎机粉碎，过100目筛。向粉碎的蛹虫草子实体中加入10倍量的水，搅拌均匀，置于超低温冰箱中-80℃冷冻12小时。迅速投入80℃水浴锅中解冻，水浴2小时。然后500W超声处理30分钟，过滤得固形物为破壁蛹虫草子实体。破壁后的蛹虫草子实体中加入95%乙醇回流2小时，料液比为1:5(W/V)，浸提脱脂及可溶性分子，过滤得固形物。向固形物中加入蒸馏水，料液比为1:10(W/V)，500W超声加热，温度控制在85℃，提取时间为3小时，抽滤除去残渣得上清液。重复提取1次。多次的上清液合并，减压浓缩得浓缩液。向浓缩液中加入4倍体积95%的乙醇，置于4℃过夜，3000×g，离心15分钟，收集沉淀。收集的沉淀经真空冷冻干燥即得蛹虫草子实体粗多糖。
2)蛹虫草子实体多糖的纯化：蛹虫草子实体多糖先经DEAE-52纤维素阴离子交换柱，采用去离子水洗脱，收集洗脱液，经浓缩、透析、冷冻干燥得蛹虫草子实体杂聚多糖半成品。上述蛹虫草子实体杂聚多糖半成品再经SephadexG-200葡聚糖凝胶柱层析，即可分离得到蛹虫草子实体杂聚多糖成品TY258。
3）蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的降脂和抗动脉粥样硬化应用：SPF级载脂蛋白E敲除（apoE-/-）小鼠，雄性，体重20±2g。在实验条件下给予普通饲料适应性喂养1周，将实验动物随机分为5组：空白组12只、模型组12只、TY258低剂量组12只、TY258中剂量组12只和TY258高剂量组12只。除空白组外，均给予高脂饲料（配方：胆固醇1.25%、胆汁盐0.5%、猪油10%、蛋黄粉10%、基础饲料78.25%）；空白组给予普通饲料。喂养1个月后，各组在饲料不变的情况下，按照0.2mL/kg灌胃给予相应药物，空白组和模型组给予同体积的生理盐水，每天1次，连续给药2个月。各组的受试药物及剂量如下：
空白组：0.2mL/kg生理盐水；
模型组：0.2mL/kg生理盐水；
低剂量组：12.5mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖TY258；
中剂量组：25mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖TY258；
高剂量组：50mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖TY258。
实验期间，各组均无动物死亡。于末次给药后禁食12h，采用肝素抗凝取血管眼眶静脉采血0.8-1.0mL，戊巴比妥钠麻醉处死，分离血浆，-80℃下保存备用；心脏注射冲洗残存血液后，迅速摘取心脏和肝脏，分离主动脉弓至髂总动脉分叉处的整条主动脉，去除血管外的脂肪和结缔组织，染色后进行镜检。所得血清样本检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白水平（LDL-C）、高密度脂蛋白水平（HDL-C）、超氧化物歧化酶（SOD）、氧化低密度脂蛋白水平（OX-LDL）、丙二醛（MDA）和脂蛋白酯解酶（LPL）活性。
实验结果见表2蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对apoE(-/-)小鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响，实验结果显示，模型组相对于空白对照组TC、TG和LDL-C显著上升，而HDL-C显著下降；给药组均可下调TC、TG和LDL-C，并上调HDL-C。TY258中、高剂量组效果明显，相对于模型组具有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01）。实验结果表明：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258在25mg/kg即可起到显著降低高脂诱导的apoE-/-小鼠血浆脂质的效果。
表2蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对apoE(-/-)小鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响
| 组别 | TC (mg/dl) | TG(mg/dl) | LDL-C (mg/dl) | HDL-C (mg/dl) |
| 空白组 | 457.88 ± 47.83 | 148.93 ± 38.35 | 119.44 ± 12.16 | 98.95 ±17.60 |
| 模型组 | 875.67 ± 79.03 ## | 198.63 ± 30.24 # | 272.17 ± 17.08 ## | 75.27 ± 8.22 # |
| 低剂量 | 779.67 ± 97.94* | 178.08 ± 23.90 | 229.33 ± 52.19 | 83.51 ± 20.17 |
| 中剂量 | 687.24 ± 83.30** | 157.25 ± 35.08* | 179.12 ± 41.97* | 91.35 ± 10.54* |
| 高剂量 | 600.72 ± 71.79 ** | 130.10 ± 42.48** | 160.91± 16.23** | 102.85 ± 10.23 ** |
与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
实验结果见表3蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对apoE(-/-)小鼠血浆LPL活性、MDA、OX-LDL和SOD的影响，实验结果显示，模型组相对于空白对照组MDA和OX-LDL水平显著上升，具有统计学意义（P＜0.01），而LPL活性和SOD活性显著下降（P＜0.01）。给药组，特别是中、高浓度组可显著降低MDA和OX-LDL水平（P＜0.01），同时升高LPL活性和SOD活性（P＜0.01）。
表3蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对血浆LPL活性、MDA、OX-LDL和SOD的影响
| 组别 | LPL 活性 (ng/ml) | MDA(nmol/ml) | OX-LDL (μg/dl) | SOD (U/ml) |
| 空白组 | 15.60 ± 1.74 | 4.14 ± 0.56 | 2.61 ± 0.35 | 71.69 ±2.27 |
| 模型组 | 10.00 ± 1.07## | 10.86 ± 1.54 ## | 5.40 ± 0.89 ## | 37.64 ± 6.35 ## |
| 低剂量组 | 11.90 ± 0.82 | 6.75 ± 1.01* | 4.54 ± 0.51 | 43.42 ± 2.534 --> |
| 中剂量组 | 14.19 ± 0.73 ** | 4.96 ± 0.91** | 3.46 ± 0.15** | 51.58 ± 4. 96** |
| 高剂量组 | 16.08 ± 0.49 ** | 4.07 ± 0.87** | 3.01 ± 0.46** | 68.63 ± 9.22 ** |
与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
如附图6所示，蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对动脉粥样硬化模型小鼠肝脏脂质蓄积的影响，实验结果显示，模型组相对于空白组脂质在肝脏大量蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。给药组，特别是中、高剂量组则可显著降低肝脏脂质蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。
如附图7所示，蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对动脉粥样硬化模型小鼠主动脉弓脂质蓄积的影响，实验结果显示，模型组相对于空白组脂质在主动脉弓内皮下大量蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。给药组，特别是中、高剂量组则可显著降低主动脉弓内皮下脂质蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。
实施例2：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的制备及其抗动脉粥样硬化应用
提取制备本发明的蛹虫草子实体杂聚多糖TY258并验证其降脂和在低密度脂蛋白受体敲除小鼠模型上的抗动脉粥样硬化活性时，采取了下述各步骤：
1)制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干后用植物粉碎机粉碎，过80目筛。向粉碎的蛹虫草子实体中加入8倍量的水，搅拌均匀，置于超低温冰箱中-80℃冷冻12小时。迅速投入85℃水浴锅中解冻，水浴3小时。然后450W超声处理50分钟，过滤得固形物为破壁蛹虫草子实体。破壁后的蛹虫草子实体中加入95%乙醇回流2.5小时，料液比为1:4(W/V)，浸提脱脂及可溶性分子，过滤得固形物。向固形物中加入蒸馏水，料液比为1:12(W/V)，400W超声加热，温度控制在90℃，提取时间为2.5小时，抽滤除去残渣得上清液。重复提取1次。多次的上清液合并，减压浓缩得浓缩液。向浓缩液中加入5倍体积95%的乙醇，置于4℃过夜，3500×g，离心20分钟，收集沉淀。收集的沉淀经真空冷冻干燥即得蛹虫草子实体粗多糖。
2)蛹虫草子实体多糖的纯化：蛹虫草子实体多糖先经HiscreenQFF离子交换柱，采用去离子水洗脱，收集洗脱液，经浓缩、透析、冷冻干燥得蛹虫草子实体杂聚多糖半成品。上述蛹虫草子实体杂聚多糖半成品再经Sepharose6B凝胶柱层析，即可分离得到蛹虫草子实体杂聚多糖成品TY258。
3）蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的降脂和抗动脉粥样硬化应用：SPF级载低密度脂蛋白受体敲除（LDLR-/-）小鼠，雄性，体重20±2g。在实验条件下给予普通饲料适应性喂养1周，将实验动物随机分为5组：空白组12只、模型组12只、TY258低剂量组12只、TY258中剂量组12只和TY258高剂量组12只。除空白组外，均给予高脂饲料（配方：胆固醇1.25%、胆汁盐0.5%、猪油10%、蛋黄粉10%、基础饲料78.25%）；空白组给予普通饲料。喂养1个月后，各组在饲料不变的情况下，按照0.2mL/kg灌胃给予相应药物，空白组和模型组给予同体积的生理盐水，每天1次，连续给药2个月。各组的受试药物及剂量如下：
空白组：0.2mL/kg生理盐水；
模型组：0.2mL/kg生理盐水；
TY258低剂量组：12.5mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖；
TY258中剂量组：25mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖；
TY258高剂量组：50mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖。
实验期间，各组均无动物死亡。于末次给药后禁食12h，采用肝素抗凝取血管眼眶静脉采血0.8-1.0mL，戊巴比妥钠麻醉处死，分离血浆，-80℃下保存备用；心脏注射冲洗残存血液后，迅速摘取心脏和肝脏，分离主动脉弓至髂总动脉分叉处的整条主动脉，去除血管外的脂肪和结缔组织，染色后进行镜检。所得血清样本检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白水平（LDL-C）、高密度脂蛋白水平（HDL-C）、超氧化物歧化酶（SOD）、氧化低密度脂蛋白水平（OX-LDL）、丙二醛（MDA）和脂蛋白酯解酶（LPL）活性。
实验结果见表4蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对LDLR(-/-)小鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响，实验结果显示，模型组相对于空白对照组TC、TG、LDL-C和HDL-C显著上升；给药组均可下调TC、TG、LDL-C和HDL-C。TY258中、高剂量组效果明显，相对于模型组具有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01）。实验结果表明：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258在25mg/kg即可起到显著降低高脂诱导的LDLR(-/-)小鼠血浆脂质的效果。
表4蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对LDLR(-/-)小鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响
| 组别 | TC (mg/dl) | TG(mg/dl) | LDL-C (mg/dl) | HDL-C (mg/dl) |
| 空白组 | 278.95 ± 32.42 | 88.23 ± 16.04 | 104.96 ±15.76 | 135.24 ± 20.07 |
| 模型组 | 786.15 ± 59.51 ## | 305.42 ± 22.35 ## | 422.05 ± 47.55 ## | 245.27 ± 35.12## |
| 低剂量 | 657.26 ± 47.49* | 268.08 ± 33.26 | 374.63 ± 37.32 | 205.73 ± 31.96 |
| 中剂量 | 617.35 ± 49.06** | 237.24 ± 45.61** | 297.76± 51.04** | 193.71 ± 21.45* |
| 高剂量 | 587.24 ± 61.18 ** | 184.03 ±31.94** | 217.84± 22.87** | 174.35 ± 28.90 ** |
与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
实验结果见表5蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对LDLR(-/-)小鼠血浆LPL活性、MDA、OX-LDL和SOD的影响，实验结果显示，模型组相对于空白对照组MDA和OX-LDL水平显著上升，具有统计学意义（P＜0.01），而LPL活性和SOD活性显著下降（P＜0.01）。给药组，特别是中、高浓度组可显著降低MDA和OX-LDL水平（P＜0.01），同时升高LPL活性和SOD活性（P＜0.01）。
表5蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对血浆LPL活性、MDA、OX-LDL和SOD的影响
| 组别 | LPL 活性 (ng/ml) | MDA(nmol/ml) | OX-LDL (μg/dl) | SOD (U/ml) |
| 空白组 | 17.34 ± 0.90 | 5.01 ± 0.85 | 3.08 ± 0.72 | 86.05 ±6.41 |
| 模型组 | 11.13 ± 1.28## | 11.07 ± 1.90 ## | 6.25 ± 0.84 ## | 48.37 ± 4.28 ## |
| 低剂量组 | 12.97 ± 1.06 | 8.95 ± 1.41* | 5.83 ± 0.66 | 56.20 ± 3.13 |
| 中剂量组 | 14.70 ± 1.25 ** | 5.77 ± 1.80** | 4.62 ± 0.35** | 62.44 ± 5. 02** |
| 高剂量组 | 15.88 ± 1.61 ** | 4.63 ± 1.56** | 3.94± 1.17** | 70.25 ± 7.30 ** |
与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
如附图6所示，蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对动脉粥样硬化模型小鼠肝脏脂质蓄积的影响，实验结果显示，模型组相对于空白组脂质在肝脏大量蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。给药组，特别是中、高剂量组则可显著降低肝脏脂质蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。
如附图7所示，蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对动脉粥样硬化模型小鼠主动脉弓脂质蓄积的影响，实验结果显示，模型组相对于空白组脂质在主动脉弓内皮下大量蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。给药组，特别是中、高剂量组则可显著降低主动脉弓内皮下脂质蓄积，具有统计学意义（P＜0.01）。
实施例3：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的制备及其降脂应用（一）
提取制备本发明的蛹虫草子实体杂聚多糖TY258并验证其在高脂诱导的豚鼠模型上的降脂活性时，采取了下述各步骤：
1)制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干后用植物粉碎机粉碎，过120目筛。向粉碎的蛹虫草子实体中加入9倍量的水，搅拌均匀，置于超低温冰箱中-40℃冷冻24小时。迅速投入90℃水浴锅中解冻，水浴1小时。然后200W超声处理3小时，过滤得固形物为破壁蛹虫草子实体。破壁后的蛹虫草子实体中加入95%乙醇回流3小时，料液比为1:6(W/V)，浸提脱脂及可溶性分子，过滤得固形物。向固形物中加入蒸馏水，料液比为1:15(W/V)，300W超声加热，温度控制在90℃，提取时间为2小时，抽滤除去残渣得上清液。重复提取2次。多次的上清液合并，减压浓缩得浓缩液。向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，置于4℃过夜，4000×g，离心10分钟，收集沉淀。收集的沉淀经真空冷冻干燥即得蛹虫草子实体粗多糖。
2)蛹虫草子实体多糖的纯化：蛹虫草子实体多糖经Q-SepharoseFastFlow阴离子交换柱，采用去离子水洗脱，收集洗脱液，经浓缩、透析、冷冻干燥得蛹虫草子实体杂聚多糖半成品。上述蛹虫草子实体杂聚多糖半成品再经Sephacryl-S200HR凝胶柱层析，即可分离得到蛹虫草子实体杂聚多糖成品TY258。
3）蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的降脂应用：SPF级豚鼠，雄性，体重350±15g。在实验条件下给予普通饲料适应性喂养1周，将实验动物随机分为5组：空白组8只、模型组8只、TY258低剂量组8只、TY258中剂量组8只和TY258高剂量组8只。除空白组外，均给予高脂饲料（配方：胆固醇1.25%、胆汁盐0.5%、猪油10%、蛋黄粉10%、基础饲料78.25%）；空白组给予普通饲料。喂养1个月后，各组在饲料不变的情况下，按照0.2mL/kg灌胃给予相应药物，空白组和模型组给予同体积的生理盐水，每天1次，连续给药2个月。各组的受试药物及剂量如下：
空白组：0.2mL/kg生理盐水；
模型组：0.2mL/kg生理盐水；
TY258低剂量组：12.5mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖；
TY258中剂量组：25mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖；
TY258高剂量组：50mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖。
实验期间，各组均无动物死亡。于末次给药后禁食12h，采用肝素抗凝取血管眼眶静脉采血1.2-2.0mL，戊巴比妥钠麻醉处死，分离血浆，-80℃下保存备用。所得血清样本检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白水平（LDL-C）和高密度脂蛋白水平（HDL-C）。
如表6蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对豚鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响所示，实验结果显示，模型组相对于空白对照组TC、TG和LDL-C显著上升，而HDL-C显著下降；给药组均可下调TC、TG和LDL-C，并上调HDL-C。TY258中、高剂量组效果明显，相对于模型组具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。实验结果表明：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258在25mg/kg即可起到显著降低高脂诱导的豚鼠血浆脂质的效果。
表6蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对豚鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响
| 组别 | TC (mg/dl) | TG (mg/dl) | LDL-C (mg/dl) | HDL-C (mg/dl)7 --> |
| 空白组 | 115.34 ± 35.46 | 98.17 ± 25.18 | 79.25 ± 20.94 | 28.54 ±17.85 |
| 模型组 | 457.60 ± 69.27 ## | 358.64 ± 71.84 # | 170.33 ± 65.38 ## | 66.37 ± 10.34 # |
| 低剂量 | 390.23 ± 68.42 | 304.38 ± 65.15 | 142.87 ± 42.35 | 68.39 ± 16.47 |
| 中剂量 | 328.47 ± 79.01** | 250.11 ± 45.28** | 121.34 ± 41.29* | 72.25 ± 26.01 |
| 高剂量 | 253.89 ± 60.54** | 202.35 ± 34.96** | 98.56 ± 29.84** | 74.59 ± 16.18* |
与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
实施例4：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的制备及其降脂应用（二）
提取制备本发明的蛹虫草子实体杂聚多糖TY258并验证其在高脂诱导的Wistar大鼠模型上的降脂活性时，采取了下述各步骤：
1)制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干后用植物粉碎机粉碎，过50目筛。向粉碎的蛹虫草子实体中加入7倍量的水，搅拌均匀，置于超低温冰箱中-70℃冷冻36小时。迅速投入95℃水浴锅中解冻，水浴1.5小时。然后350W超声处理1.5小时，过滤得固形物为破壁蛹虫草子实体。破壁后的蛹虫草子实体中加入95%乙醇回流2.5小时，料液比为1:5(W/V)，浸提脱脂及可溶性分子，过滤得固形物。向固形物中加入蒸馏水，料液比为1:12(W/V)，350W超声加热，温度控制在95℃，提取时间为1.5小时，抽滤除去残渣得上清液。重复提取3次。多次的上清液合并，减压浓缩得浓缩液。向浓缩液中加入4倍体积的95%乙醇，置于3℃过夜，3500×g，离心25分钟，收集沉淀。收集的沉淀经真空冷冻干燥即得蛹虫草子实体粗多糖。
2)蛹虫草子实体多糖的纯化：蛹虫草子实体多糖经Sepharose6FF阴离子交换柱，采用去离子水洗脱，收集洗脱液，经浓缩、透析、冷冻干燥得蛹虫草子实体杂聚多糖半成品。上述蛹虫草子实体杂聚多糖半成品再经QAESephadexA-50凝胶柱层析，即可分离得到蛹虫草子实体杂聚多糖成品TY258。
3）蛹虫草子实体杂聚多糖TY258的降脂应用：SPF级Wistar大鼠，雄性，体重80±5g。在实验条件下给予普通饲料适应性喂养1周，将实验动物随机分为5组：空白组8只、模型组8只、TY258低剂量组8只、TY258中剂量组8只和TY258高剂量组8只。除空白组外，均给予高脂饲料（配方：胆固醇1.25%、胆汁盐0.5%、猪油10%、蛋黄粉10%、基础饲料78.25%）；空白组给予普通饲料。喂养1个月后，各组在饲料不变的情况下，按照0.2mL/kg灌胃给予相应药物，空白组和模型组给予同体积的生理盐水，每天1次，连续给药2个月。各组的受试药物及剂量如下：
空白组：0.2mL/kg生理盐水；
模型组：0.2mL/kg生理盐水；
TY258低剂量组：12.5mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖；
TY258中剂量组：25mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖；
TY258高剂量组：50mg/kg蛹虫草子实体杂聚多糖。
实验期间，各组均无动物死亡。于末次给药后禁食12h，采用肝素抗凝取血管眼眶静脉采血1.2-2.0mL，戊巴比妥钠麻醉处死，分离血浆，-80℃下保存备用。所得血清样本检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白水平（LDL-C）和高密度脂蛋白水平（HDL-C）。
如表7蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对Wistar大鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响所示，实验结果显示，模型组相对于空白对照组TC、TG和LDL-C显著上升，而HDL-C显著下降；给药组均可下调TC、TG和LDL-C，并上调HDL-C。TY258中、高剂量组效果明显，相对于模型组具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。实验结果表明：蛹虫草子实体杂聚多糖TY258在25mg/kg即可起到显著降低高脂诱导的Wistar大鼠血浆脂质的效果。
表7蛹虫草子实体杂聚多糖TY258对Wistar大鼠血浆TC、TG、LDL-C和HDL-C的影响
| 组别 | TC (mg/dl) | TG(mg/dl) | LDL-C (mg/dl) | HDL-C (mg/dl) |
| 空白组 | 162.12± 25.27 | 71.45 ± 9.14 | 57.90 ± 11.32 | 114.20 ±12..58 |
| 模型组 | 274.16 ± 40.52 ## | 99.16 ±12.37 ## | 154.40 ± 21.15 ## | 78.59 ± 8.83 # |
| 低剂量 | 239.20 ± 18.13 | 88.80 ±7.46 | 120.12 ± 13.23 | 86.94 ± 6.77 |
| 中剂量 | 214.27 ± 16.22** | 79.43 ±4.81** | 101.36 ± 21.40* | 92.56 ± 20.16 |
| 高剂量 | 195.05 ± 14.29** | 74.35 ± 29.74** | 89.38± 17.23** | 98.59 ± 17.63* |
与空白组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种蛹虫草子实体杂聚多糖，其特征在于，其结构式如下：
其中：Glcp为吡喃型葡萄糖、Manp为吡喃型氧甲基甘露糖、Galp为吡喃型半乳糖；其中B≈2，C≈3，A≈322；该多糖简称TY258。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草子实体杂聚多糖，其特征在于，所述多糖的分子量为625.8kDa。
3.如权利要1所述的蛹虫草子实体杂聚多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）制备蛹虫草子实体粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干并粉碎，过筛；向粉碎的蛹虫草子实体中加水，经冻融后超声处理，过滤得破壁蛹虫草子实体；破壁后的蛹虫草子实体加入95%的乙醇回流浸提脱脂，过滤得固形物；向固形物中再加入蒸馏水，加热超声浸提，抽滤除去残渣得上清液；上清液减压浓缩后加入95%的乙醇，置于0～4℃过夜，离心，收集沉淀；收集的沉淀经真空冷冻干燥，即得蛹虫草子实体粗多糖；
2)蛹虫草子实体多糖的纯化：蛹虫草子实体粗多糖经阴离子交换柱采用去离子水洗脱和凝胶渗透色谱柱分离纯化，即可分离得到纯的蛹虫草子实体杂聚多糖，命名为TY258。
4.如权利要求1所述的蛹虫草子实体杂聚糖在制备降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平的药物中的应用。
5.如权利要求1所述的蛹虫草子实体杂聚糖在制备提升超氧化物歧化酶和脂蛋白酯解酶活性、血浆高密度脂蛋白水平的药物中的应用。
6.如权利要求1所述的蛹虫草子实体杂聚糖在制备抗动脉粥样硬化的药物中的应用。
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Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105902442A (zh) * | 2016-06-01 | 2016-08-31 | 合肥丰瑞隆生物科技有限公司 | 蛹虫草粗多糖护肤品及其制备方法 |
| CN106176826A (zh) * | 2016-08-18 | 2016-12-07 | 湖州新驰医药科技有限公司 | 一种金蝉花多糖制剂及提取工艺 |
| CN107616500A (zh) * | 2017-10-27 | 2018-01-23 | 吉林农业大学 | 蛹虫草低聚果糖组合物及其制备方法和应用 |
| CN108503724A (zh) * | 2018-04-27 | 2018-09-07 | 华南师范大学 | 蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和应用 |
| CN112220805A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-01-15 | 吉林大学 | 一种具有降血脂功能的复方制剂及制备方法 |
| CN113150177A (zh) * | 2020-10-15 | 2021-07-23 | 潍坊医学院 | 一种蛹虫草子实体碱提杂聚多糖及其制备方法和应用 |
| WO2023036203A1 (zh) * | 2021-09-07 | 2023-03-16 | 江西济民可信集团有限公司 | Cs-4发酵菌丝体杂聚多糖及其制备方法与用途 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101124988A (zh) * | 2007-09-25 | 2008-02-20 | 江苏瑞迪生科技有限公司 | 从蛹虫草中提取精制虫草素和虫草多糖的方法 |
| CN101508715A (zh) * | 2009-04-01 | 2009-08-19 | 江苏省农业科学院 | 一种蛹虫草中虫草素提取纯化方法 |
| CN102731666A (zh) * | 2011-04-07 | 2012-10-17 | 大连工业大学 | 一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法 |
| CN104403012A (zh) * | 2014-11-10 | 2015-03-11 | 苏州蔻美新材料有限公司 | 蛹虫草多糖和多肽的提取工艺 |
-
2015
- 2015-12-08 CN CN201510892906.3A patent/CN105585639B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101124988A (zh) * | 2007-09-25 | 2008-02-20 | 江苏瑞迪生科技有限公司 | 从蛹虫草中提取精制虫草素和虫草多糖的方法 |
| CN101508715A (zh) * | 2009-04-01 | 2009-08-19 | 江苏省农业科学院 | 一种蛹虫草中虫草素提取纯化方法 |
| CN102731666A (zh) * | 2011-04-07 | 2012-10-17 | 大连工业大学 | 一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法 |
| CN104403012A (zh) * | 2014-11-10 | 2015-03-11 | 苏州蔻美新材料有限公司 | 蛹虫草多糖和多肽的提取工艺 |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105902442A (zh) * | 2016-06-01 | 2016-08-31 | 合肥丰瑞隆生物科技有限公司 | 蛹虫草粗多糖护肤品及其制备方法 |
| CN106176826A (zh) * | 2016-08-18 | 2016-12-07 | 湖州新驰医药科技有限公司 | 一种金蝉花多糖制剂及提取工艺 |
| CN107616500A (zh) * | 2017-10-27 | 2018-01-23 | 吉林农业大学 | 蛹虫草低聚果糖组合物及其制备方法和应用 |
| CN108503724A (zh) * | 2018-04-27 | 2018-09-07 | 华南师范大学 | 蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和应用 |
| CN108503724B (zh) * | 2018-04-27 | 2021-06-01 | 华南师范大学 | 蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和应用 |
| CN113150177A (zh) * | 2020-10-15 | 2021-07-23 | 潍坊医学院 | 一种蛹虫草子实体碱提杂聚多糖及其制备方法和应用 |
| CN113150177B (zh) * | 2020-10-15 | 2022-04-15 | 潍坊医学院 | 一种蛹虫草子实体碱提杂聚多糖及其制备方法和应用 |
| CN112220805A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-01-15 | 吉林大学 | 一种具有降血脂功能的复方制剂及制备方法 |
| WO2023036203A1 (zh) * | 2021-09-07 | 2023-03-16 | 江西济民可信集团有限公司 | Cs-4发酵菌丝体杂聚多糖及其制备方法与用途 |
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