CN104403012A

CN104403012A - 蛹虫草多糖和多肽的提取工艺

Info

Publication number: CN104403012A
Application number: CN201410623832.9A
Authority: CN
Inventors: 金仲恩; 全春兰; 张帆
Original assignee: Suzhou Cosmetic New Materials Co Ltd
Current assignee: Suzhou Cosmetic New Materials Co Ltd
Priority date: 2014-11-10
Filing date: 2014-11-10
Publication date: 2015-03-11

Abstract

本发明公开了一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，将蛹虫草干燥，粉碎至80~120目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理1~3min；然后加热至60~90℃，搅拌反应20~60min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖；滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至8~10，加入碱性蛋白酶水解8~12h，煮沸1~5min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽。本发明提供的提取工艺，可同时提取出蛹虫草多糖和多肽，实现蛹虫草资源的充分利用，并且提取条件温和，提取出产品的生物活性高，提取方法简单易操作。

Description

蛹虫草多糖和多肽的提取工艺

技术领域

本发明属于生物医药材料技术领域，具体涉及一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺。

背景技术

现代社会生活节奏较快，多数人身体处于亚健康状态，炎症、癌症、肿瘤等疾病时有发生。蛹虫草作为一种食、药兼用真菌，其有效成分例如虫草多肽、虫草多糖等在医疗、保健、食疗等各方面都具有显著功效，因此蛹虫草系列产品的开发研究应该受到重视。

有关研究表明，蛹虫草富含蛋白质、脂质、糖三大类营养物质，以及多种维生素和微量元素，含有丰富的虫草酸（甘露醇）、虫草素（3’-脱氧腺苷）、虫草多糖和超氧化物歧化酶（SOD）等生物活性物质。蛹虫草子座含蛋白质 25.73%、糖 27.75%、脂肪 2.93%，其中氨基酸总含量为 11.45 mg/g，微量元素 Se、Zn、Cu 的含量比冬虫夏草高出三倍以上，还测定到蛹虫草子座包含多种 B 族维生素和 VC、VE，以及虫草酸、SOD 和虫草素等特殊化学成分，其中 SOD 的含量为 584 u/mg。姜泓等（2000）、吕子明等（2008）使用大孔吸附树脂和硅胶色谱柱等分离纯化技术，从蛹虫草中首次分离纯化出 4 种新型化合物，即虫草环肽 A、N6-[β-(乙酰胺甲酰)氧乙基]腺苷、二十四烷酸单甘油酯、N-(2-羟乙基)腺苷。此外，王刚等利用浸提、浓缩、色谱分离等常规提取分离方法，从蛹虫草子座中分离出一种脑苷脂类化合物—脑苷脂 B，此物质被证明在动植物细胞识别中起重要作用。Byung 等从蛹虫草子座中分离得到分子量为12kDa 的小分子蛋白肽，经检测其对尖孢镰刀菌有显著抗菌活性，并能对人乳腺癌和膀胱癌细胞有抑制作用；Ng 等从蛹虫草中提取到天然活性肽 Cordymin，测定到此多肽分子量为10.90kDa，其对玉米小班病菌、球腔菌、丝核菌、加拿大白色念珠菌都有显著抑制作用；宗静采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶酶解蛹虫草子座制备的蛹虫草多肽具有一定的还原能力。在虫草素、虫草多糖等活性成分提取过程中，子座剩余物多被以残渣形式废弃，造成资源浪费及环境污染，且在热水浸提虫草素所得蛹虫草剩余物中，会有一些虫草素、虫草多糖的残留，具有抗氧化、抑菌、提高机体免疫力等功能。因此利用热水浸提虫草素所得蛹虫草剩余物制备具有特定生物学功能的蛹虫草多肽，不仅有利于蛹虫草资源的综合利用，更能进一步挖掘开发蛹虫草的潜在价值。SDS-PAGE 和葡聚糖凝胶层析技术作为现阶段在蛋白多肽物质测定分离中应用最广的方法之一，可分离鉴定分子量在15-200kDa 范围内的大分子蛋白及肽类物质，对多肽组分的带电性质、形状等也可作出初步鉴定。另外，蛹虫草 HWM 剩余物经酶解后所得的酶解液呈现棕色且颜色较深，影响了后续蛹虫草多肽的分离纯化。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，可同时提取出蛹虫草多糖和多肽，实现蛹虫草资源的充分利用，并且提取条件温和，提取出产品的生物活性高，提取方法简单易操作。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至80~120目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理1~3min；

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至60~90℃，搅拌反应20~60min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至8~10，加入碱性蛋白酶水解8~12h，煮沸 1~5min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽。

步骤1）中蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:10~20，单位为g/mL。

步骤1）超声处理的超声频率为1000~1800W。

步骤2）中加热至80℃，搅拌反应40min。

步骤3）中碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入4000~6000U。

步骤3）中碱性蛋白酶水解10h，煮沸 2min。

有益效果：本发明提供的一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，可同时提取出蛹虫草多糖和多肽，实现蛹虫草资源的充分利用，并且提取条件温和，提取出产品的生物活性高，提取方法简单易操作。

具体实施方式

实施例1

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至100目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理1min；蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:18，单位为g/mL。

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至90℃，搅拌反应20min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖，提取率 65%；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至8，加入碱性蛋白酶水解8h，碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入4000U，煮沸 3min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽，提取率 78%。

实施例2

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至80目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理1~3min；蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:10，单位为g/mL。

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至70℃，搅拌反应30min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖，提取率 63%；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至10，加入碱性蛋白酶水解8h，碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入5000U，煮沸 3min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽，提取率 71%。

实施例3

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至80目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理2min；蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:18，单位为g/mL。

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至80℃，搅拌反应30min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖，提取率 66%；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至9，加入碱性蛋白酶水解10h，碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入5000U，煮沸 2min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽，提取率 75%。

实施例4

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至80目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理3min；蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:15，单位为g/mL。

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至90℃，搅拌反应20min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖，提取率 69%；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至8，加入碱性蛋白酶水解12h，碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入6000U，煮沸5min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽，提取率 76%。

实施例5

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至120目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理2min；蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:16，单位为g/mL。

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至60℃，搅拌反应20~60min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖，提取率 68%；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至9，加入碱性蛋白酶水解8h，碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入6000U，煮沸 1min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽，提取率 72%。

实施例6

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至100目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理2min；蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:14，单位为g/mL。

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至90℃，搅拌反应20min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖，提取率 70%；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至8，加入碱性蛋白酶水解10h，碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入4000U，煮沸 2min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽，提取率 79%。

实施例7

一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，包括如下步骤：

1）将蛹虫草干燥，粉碎至120目，加入蒸馏水，搅拌均匀，然后超声处理1min；蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:12，单位为g/mL。

2）将步骤1）超声处理后的蛹虫草水溶液加热至70℃，搅拌反应35min，然后过滤收集滤饼和滤液，滤液加入乙醇，静置，析出蛹虫草多糖，提取率 74%；

3）将步骤2）收集的滤饼加入蒸馏水中，搅拌，以氢氧化钠调节溶液pH至8.5，加入碱性蛋白酶水解10h，碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入5000U，煮沸 2min，终止酶解反应，过滤，取滤液HPLC纯化得蛹虫草多肽，提取率 84%。

Claims

1.一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，其特征在于包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，其特征在于：步骤1）中蛹虫草与蒸馏水的质量体积比为1:10~20，单位为g/mL。

3.根据权利要求1所述一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，其特征在于：步骤1）超声处理的超声频率为1000~1800W。

4.根据权利要求1所述一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，其特征在于：步骤2）中加热至80℃，搅拌反应40min。

5.根据权利要求1所述一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，其特征在于：步骤3）中碱性蛋白酶加入量为每克滤饼加入4000~6000U。

6.根据权利要求1所述一种蛹虫草多糖和多肽的提取工艺，其特征在于：步骤3）中碱性蛋白酶水解10h，煮沸 2min。