CN107602660A - 一种蛹虫草多肽制品及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种蛹虫草多肽制品及其制备方法与应用，属于蛋白质工作技术领域。本发明提供的一种蛹虫草多肽制品的制备方法，操作简单，步骤简约，通过温和的反应条件，就能大量制得天然的多肽类产品，具有较好的应用价值；采用上述方法制备的多肽制品，可以应用于较多的领域中，尤其是在制备保健食品或美容护肤品中应用，具有较高的经济价值和推广应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白质工程技术领域，具体而言，涉及一种蛹虫草多肽制品及其制备方法与应用。
背景技术
随着经济的不断向前发展，社会的不断进步，人们逐渐开始对生活品质的要求也越来越高；人们的收入也越来越高，人们对天然食品、保健品以及美容护肤品的要求也越来越高。
随着需求越来越大，而在生产上还没有跟上需求，所以需要大量大规模的生产制备天然的多肽产品。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种蛹虫草多肽制品的制备方法，该制备方法操作简单，步骤简约，通过温和的反应条件，就能大量制得天然的多肽类产品，具有较好的应用价值。
本发明的第二目的在于提供一种多肽制品。
本发明的第三目的在于提供述的多肽制品在制备保健食品或美容护肤品中应用。
为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：
一种蛹虫草多肽制品的制备方法，包括：
蛹虫草原料添加提取液并研磨得到匀浆液，离心匀浆液并提取上清液，得到上清提取液；
过滤上清提取液后并用酶制剂水解提取液得到多肽制品。
一种多肽制品，多肽制品采用如权上述的蛹虫草多肽制品的制备方法制得。
上述的多肽制品在制备保健食品或美容护肤品中应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供的一种蛹虫草多肽制品的制备方法，操作简单，步骤简约，通过温和的反应条件，就能大量制得天然的多肽类产品，具有较好的应用价值；采用上述方法制备的多肽制品，可以应用于较多的领域中，尤其是在制备保健食品或美容护肤品中应用，具有较高的经济价值和推广应用价值。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种蛹虫草多肽制品及其制备方法与应用进行具体说明。
蛹虫草为子囊菌门，肉座目，虫草菌科、虫草属的模式种；学名为Cordycepsmilitaris，又名北蛹虫草，有地区亦称为踊虫草，很多人都误以为北虫草也叫蛹虫草、蛹草，其实不然，两者有本质的区别，北虫草富含虫草素，是属于普通食品类别，蛹虫草则属于国家明定的新资源食品，两者是有本质的区别。蛹虫草由子座(即草部分，又称子实体)与菌核(即昆虫的尸体部分)两部分组成的复合体。多感染鳞翅目昆虫的蛹。中医认为，虫草酸(甘露醇)入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，痨咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。
蛹虫草形态特征为子座单生或数个一起从寄生蛹体的头部或节部长出，颜色为橘黄或橘红色，全长2—8厘米，蛹体颜色为紫色，长约1.5—2厘米。通过异宗配合进行有性生殖。其无性型为蛹草拟青霉。其子实体成熟后可形成子囊孢子(繁殖单位)，孢子散发后随风传播，孢子落在适宜的虫体上，便开始萌发形成菌丝体。菌丝体一面不断地发育，一面开始向虫体内蔓延，于是蛹虫就会被真菌感染，分解蛹体内的组织，以蛹体内的营养作为其生长发育的物质和能量来源，最后将蛹体内部完全分解。一般当蛹虫草的菌丝把蛹体内的各种组织和器官分解完毕后，菌丝体发育也进入了一个新的阶段。形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座(子实体)。
一种蛹虫草多肽制品的制备方法，包括：
蛹虫草原料添加提取液并研磨得到匀浆液，离心匀浆液并提取上清液，得到上清提取液；
过滤上清提取液后并用酶制剂水解上清提取液得到多肽制品。
进一步地，蛹虫草原料为蛹虫草的子实体。
蛹虫草的子实体的蛋白含量高，营养更为丰富。
进一步地，提取液包括终浓度为7-9mmol/L的Na2HPO4、130-140mmol/L的NaCl、1.5-2.5mmol/L的KH2PO4和2.5-2.9mmol/L的KCl。
配制上述的缓冲液，在生物化学研究中使用广泛，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；可以很好的维持溶液的离子平衡，形成一个稳定的溶液环境。
进一步地，离心的条件为8000-12000rpm，温度为0-4℃条件下，离心15-40min。
进一步地，酶制剂为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶和金属蛋白酶中的至少一种；以及金黄色葡萄球菌V8蛋白酶。
丝氨酸蛋白酶是一个蛋白酶家族，它们的作用是断裂大分子蛋白质中的肽键，使之成为小分子蛋白质或者多肽；其激活是通过活性中心一组氨基酸残基变化实现的，它们之中一定有一个是丝氨酸(其名字的由来)。丝氨酸蛋白酶通过邻近的氨基酸残基链，丝氨酸残基在活性中心被激活；被激活的羟基与肽键的碳原子发生亲核反应；肽键断裂后，酰基上的碳被酯化，肽键的氮端会被释放游离；水解反应，与酶相连的碳端产物被释放；反应完成。
在哺乳类动物里面，丝氨酸蛋白酶扮演着很重要的角色，特别是在消化，凝血和补体系统方面。
巯基蛋白酶是一类活性中心含有巯基(半胱氨酸)，并且依靠巯基催化水解肽键的蛋白水解酶。
金属蛋白酶是指活性中心中含有金属离子的蛋白酶。
金黄色葡萄球菌V8蛋白酶，来自金黄葡萄球菌V8株系，可切断天冬氨酸和谷氨酸羧基端肽键的酶。
进一步地，丝氨酸蛋白酶为胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和颌下腺蛋白酶中的至少一种，巯基蛋白酶包括菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶中的至少一种，金属蛋白酶包括嗜热菌蛋白酶。
胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)为蛋白酶的一种，EC 3.4.4.4，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后，作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。胰蛋白酶是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。胰蛋白酶是一种蛋白质水解酶，能选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，能消化溶解变性蛋白质，对未变性的蛋白质无作用，因此，能使脓、痰液、血凝块等分解、变稀，易于引流排除，加速创面净化，促进肉芽组织新生，此外还有抗炎症作用。
胰凝乳蛋白酶与胰蛋白酶大致相同；都属参与蛋白质氨基酸代谢酶，也是一种水解酶。
颌下腺蛋白酶也是一类丝氨酸蛋白酶，可以断裂精氨酸的碳端位点，降解蛋白质。
木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。
木瓜蛋白酶由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158。木瓜蛋白酶在医药、食品、饮料、化学试剂、饲料、纺织化妆品等方面都有广泛的应用，开发前景广阔。
菠萝蛋白酶属巯基蛋白酶，对酪蛋白、血红蛋白、BAEE的最适pH值是6～8，对明胶是pH值5.0。酶活性受重金属抑制。略溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿和乙醚。它优先水解碱性氨基酸(例如精氨酸)或芳香族氨基酸(例如苯丙氨酸、酪氨酸)的羧基侧上的肽链，选择性水解纤维蛋白，使多肽类水解为低分子量的肽类，还有水解酰胺基键和酯类的作用。
嗜热菌蛋白酶外文名是Thermolysin。特性是水解疏水性强的氨基酸时速度较快，活性中心含有Ca2+和Zn2+。
进一步地，按照酶活性单位计，按照每克提取液添加1.8-2.5U的酶制剂。
酶作为一种生物催化剂，可以在少量浓度的条件下发挥催化作用，加量过多造成浪费，加量过少反应速度降低，不利于实际的生产需要。
进一步地，酶制剂的工作pH值为3.5-8.1，工作温度35-55℃。
酶在反应的时候，有一个最佳的反应的pH值和反应温度，但是在非最佳条件也能发挥效用。
一种多肽制品，多肽制品采用上述的蛹虫草多肽制品的制备方法制得。
上述的多肽制品在制备保健食品或美容护肤品中应用。
将制备得到的多肽制品应用到制备保健食品中，可以提高保健食品的营养价值，提高人体的消化吸收效率。
将制备得到的多肽制品应用到制备美容护肤品中，可以起到一定的美容养颜的作用。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种蛹虫草多肽制品的制备方法，具体操作步骤如下：
1.1配制提取液，提取液中Na2HPO4终浓度为7mmol/L、NaCl终浓度为140mmol/L的、KH2PO4终浓度为2.5mmol/L、KCl终浓度为2.9mmol/L；
1.2称取1kg的蛹虫草的子实体，并加入到提取液中，并研磨得到匀浆液；且提取液与籽粒的重量比为2:1；
1.3在4℃条件下，12000rpm离心15min，取上清液，得到上清提取液；
1.4用0.22μm的滤膜过滤上清提取液，得到过滤液；
1.5向步骤1.4中得到的过滤液中按照1.8U/g提取液加入胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶以及金黄色葡萄球菌V8蛋白酶；调整混合溶液的pH值为3.5，温度控制在35℃；
1.6连续发酵酶解水解并高温灭活酶，制得多肽制品。
实施例2
本实施例提供一种蛹虫草多肽制品的制备方法，具体操作步骤如下：
1.1配制提取液，提取液中Na2HPO4终浓度为8mmol/L、NaCl终浓度为135mmol/L的、KH2PO4终浓度为2.0mmol/L、KCl终浓度为2.7mmol/L；
1.2称取1kg的蛹虫草的子实体，并加入到提取液中，并研磨得到匀浆液；且提取液与籽粒的重量比为2:1；
1.3在0℃条件下，11000rpm离心20min，取上清液，得到上清提取液；
1.4用0.22μm的滤膜过滤上清提取液，得到过滤液；
1.5向步骤1.4中得到的过滤液中按照每克提取液分别加入2.1U的胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶以及金黄色葡萄球菌V8蛋白酶；调整混合溶液的pH值为5.5，温度控制在42℃；
1.6连续发酵酶解水解并高温灭活酶，制得多肽制品。
实施例3
本实施例提供一种蛹虫草多肽制品的制备方法，具体操作步骤如下：
1.1配制提取液，提取液中Na2HPO4终浓度为9mmol/L、NaCl终浓度为130mmol/L的、KH2PO4终浓度为1.5mmol/L、KCl终浓度为2.5mmol/L；
1.2称取1kg的蛹虫草的子实体，并加入到提取液中，并研磨得到匀浆液；且提取液与籽粒的重量比为2:1；
1.3在3℃条件下，8000rpm离心40min，取上清液，得到上清提取液；
1.4用0.22μm的滤膜过滤上清提取液，得到过滤液；
1.5向步骤1.4中得到的过滤液中按照每克提取液分别加入2.5U的胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、颌下腺蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶以及金黄色葡萄球菌V8蛋白酶；调整混合溶液的pH值为8.1，温度控制在55℃；
1.6连续发酵酶解水解并高温灭活酶，制得多肽制品。
实施例4
本实施例提供一种多肽制品，本实施例提供的多肽制品采用实施例1提供的制备方法制得。
并将本实施例得到的多肽制品应用于制备保健食品或美容护肤品。
实验例1
本实验例对实施例1-3制备的多肽制品进行分析，具体方法如下：
分别取实施例1-3制备多肽制品测定蛋白含量，参照食品安全国家标准-食品中蛋白质的测定》GB5009.5-2016的凯氏定氮法，测定粗提样品和浓缩样品中多肽含量。检测结果如表1。
表1多肽含量检测结果
| 粗提样品多肽含量(wt％) | 浓缩样品多肽含量(wt％) | |
| 实施例1 | 52.6％ | 85.7％ |
| 实施例2 | 53.4％ | 87.8％ |
| 实施例3 | 55.9％ | 89.3％ |
从表1可以看出实施例1-3制备的多肽制品的粗提样品和浓缩样品多肽含量较高，具有富含多肽，营养丰富，可以在较多的领域中应用推广。
综上所述，本发明实施例提供的蛹虫草多肽制品的制备方法，能通过简单的制备步骤，温和的反应条件制备多肽制品，且制备的得到的多肽制品具有较高的使用价值，并且应用范围较广；具有较高的实用性和较高的推广应用价值。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，包括：
蛹虫草原料添加提取液并研磨得到匀浆液，离心所述匀浆液并提取上清液，得到上清提取液；
过滤所述上清提取液后并用酶制剂水解所述上清提取液得到多肽制品。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，所述蛹虫草原料为蛹虫草的子实体。
3.根据权利要求1所述的蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，所述提取液包括终浓度为7-9mmol/L的Na2HPO4、130-140mmol/L的NaCl、1.5-2.5mmol/L的KH2PO4和2.5-2.9mmol/L的KCl。
4.根据权利要求1所述的蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，所述离心的条件为8000-12000rpm，温度为0-4℃条件下，离心15-40min。
5.根据权利要求1所述的蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，所述酶制剂为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶和金属蛋白酶中的至少一种；以及金黄色葡萄球菌V8蛋白酶。
6.根据权利要求5所述的蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，所述丝氨酸蛋白酶为胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和颌下腺蛋白酶中的至少一种，所述巯基蛋白酶包括菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶中的至少一种，所述金属蛋白酶包括嗜热菌蛋白酶。
7.根据权利要求5所述的蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，按照酶活性单位计，按照每克所述提取液添加1.8-2.5U的所述酶制剂。
8.根据权利要求5所述的蛹虫草多肽制品的制备方法，其特征在于，所述酶制剂的工作pH值为3.5-8.1，工作温度35-42℃。
9.一种多肽制品，其特征在于，所述多肽制品采用如权利要求1-8所述的蛹虫草多肽制品的制备方法制得。
10.如权利要求9所述的多肽制品在制备保健食品或美容护肤品中应用。
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