CN105503898A

CN105503898A - 一种含氮杂环的青蒿素衍生物及其制备方法

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Publication number: CN105503898A
Application number: CN201510786573.6A
Authority: CN
Inventors: 周红; 宋羿; 覃容欣; 潘夕春; 郑江
Original assignee: Third Military Medical University TMMU
Current assignee: Third Military Medical University TMMU
Priority date: 2015-11-16
Filing date: 2015-11-16
Publication date: 2016-04-20
Anticipated expiration: 2035-11-16
Also published as: CN105503898B

Abstract

本发明公开了一种含氮杂环青蒿素衍生物及其制备方法，所述衍生物为式I所示的化合物，X为咪唑基、噻唑基、噁唑基或四氢噻唑基。以及所述衍生物在抗大肠埃希菌感染中的用途，特别是与青霉素类药物联用对大肠埃希菌表现出非常强的协同抗菌作用。

Description

一种含氮杂环的青蒿素衍生物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种含氮杂环青蒿素衍生物及其制备和应用，特别是治疗大肠埃希氏菌感染的用途。

背景技术

随着抗菌药物的广泛使用，细菌对药物的耐药性不断增加。而革兰阴性菌为临床最常见的病原菌，耐药性不断增加，其中，大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的检出率高达60％-81％。

目前，细菌的耐药机制主要有以下几种：(1)产生灭活酶；(2)抗菌药物作用靶位改变；(3)代谢途径改变；(4)药物积聚减少，包括主动外排机制(外排泵)增强和细菌外膜通透性降低两种情况。针对革兰阴性菌不同于革兰阳性菌的特殊细菌内膜和外膜结构，“药物积聚减少”被认为是革兰阴性菌多重耐药的主要机制，因此，针对主动外排机制中的外排泵进行外排泵抑制剂(effluxpumpinhibitors，EPIs)的研究是目前研究的热点、焦点与难点。

大肠埃希菌中最主要的外排泵是AcrAB-TolC系统，导致其对抗菌药物多重耐药，其中，AcrB是外排泵中首先与捕捉药物有关的蛋白质，因此AcrB结构与功能的研究最值得关注。AcrB由1049个氨基酸组成，分子量约为114kDa，在不同细菌的AcrAB-TolC中氨基酸序列的保守性很高，因此AcrAB-TolC的过量表达使大肠埃希菌表现出对不同化学结构的抗菌药物的多重耐药和交叉耐药。

青蒿琥酯(Artesunate，AS)，化学名为二氢青蒿素-1，2-α-琥珀酸单酯，是具有倍半萜结构的青蒿素衍生物之一，是一种速效、低毒的抗疟药物。文献证实青蒿琥酯除具有抗疟作用以外，还具有抗肿瘤、抗炎、抗组织纤维化和放射增敏等作用。同时，青蒿琥酯具有增加大肠埃希菌对庆大霉素等抗生素的敏感性，其作用靶点可能与外排泵蛋白AcrB有关，但青蒿琥酯抗菌活性，特别是抗大肠埃希菌的活性不强。本发明人在此基础上，利用计算机药物设计技术，将AcrB蛋白的三维结构与药物结合的部位进行计算机对接实验，确定可能的功能区位点，将青蒿琥酯经结构修饰的衍生物与靶蛋白的分子对接，筛选出体外药效学活性更好的青蒿素衍生物。

发明内容

本发明的目的提供了一种含氮杂环青蒿素衍生物，该青蒿素衍生物的体外活性均较青蒿琥酯有更好的活性，特别是可大大增强大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素敏感性的生物学活性。

为实现本发明的目的，提供如下实施方案。

在一实施方案中，本发明的一种含氮杂环青蒿素衍生物，为式1所示的化合物，及其光学活性体或药学上可接受的盐，

式I中X为含氮杂环的取代基，所述取代基为被取代的咪唑基(1)、噻唑基(2)、四氢噻唑基(3)或噁唑基(4)，*原子为取代基的X结合处，

其中，所述被取代的咪唑基(1)中的R1和R2各自独立地为乙基和甲基；

或R1和R2各自独立地为氢、乙基、氨基、硝基、苯基或哌啶基，其条件是R1和R2不能同时为氢。

在上述实施方案中，优选的，本发明的青蒿素衍生物，R1为乙基，R2为甲基。

在上述实施方案中，优选的，本发明的青蒿素衍生物，R1为氢，R2为氨基、硝基、苯基或哌啶基。

在上述实施方案中，本发明的青蒿素衍生物，所述药学上可接受的盐包括但不限于盐酸盐或枸橼酸盐。

在上述实施方案中，本发明的青蒿素衍生物，还包括式I所示化合物的任一光学异构体。

在一具体实施方案中，本发明的一种含氮杂环青蒿素衍生物，为式1所示的化合物，及其光学活性体或药学上可接受的盐，

其中，所述被取代的咪唑基(1)中的R1和R2分别乙基和甲基；或者R1为氢，则R2为氨基、硝基、苯基或哌啶基。

在另一实施方案中，本发明还提供一种制备含氮杂环青蒿素衍生物即式Ia所示化合物的方法，包括以下步骤：

1)将双氢青蒿素与2-溴乙醇反应生成式II所示的化合物；

2)将式II所示的化合物在非质子性溶剂中，在碱性催化剂存在下与咪唑(1)、噻唑(2)、四氢噻唑(3)或噁唑(4)反应，获得式Ia所示的化合物，

其中，式Ia中的X为咪唑基(1)、噻唑基(2)、四氢噻唑基(3)或噁唑基(4)，所述被取代的咪唑基(1)中的R1和R2分别乙基和甲基；或者R1为氢，则R2为氨基、硝基、苯基或哌啶基，咪唑(1)中的R1与R2的定义与式Ia中的咪唑基(1)的定义相同。

上述本发明的方法，所述催化剂选自氢化钠、三乙胺、碳酸钾、乙醇钠和叔丁醇钾，所述非质子性溶剂选自乙腈、四氢呋喃、乙醚和二甲基甲酰胺。

另一方面，本发明还提供一种制备含氮杂环青蒿素衍生物即式Ib所示化合物的方法，包括将双氢青蒿素与2-羟乙基-噻唑或2-羟乙基-噁唑反应生成式Ib所示化合物，

式Ib中的Y为噻唑(2)或噁唑(4)。

在又一实施方案中，提供一处药物组合物，包含式I所示化合物或其药学上可接受的盐和药用辅料。

药用辅料包括但不限于填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂等，如微晶纤维素、粘粉、乳糖、甘露醇、羧甲基纤维素钠、交链聚维酮、羟丙甲纤维素，低取代羟丙纤维，乙基纤维素、硬脂酸镁、滑石粉等。

本发明的氮杂环青蒿素衍生物即式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制造治疗大肠埃希氏菌感染药物中的应用。

上述本发明的应用，还包括将氮杂环青蒿素衍生物式I所示化合物与β内酰胺抗生素联用。所述β内酰胺抗生素包括但不限于青霉素、氨苄西林、阿莫西林、头孢类抗生素等。

本发明获得的化合物均具有比青蒿琥酯(AS)、12β-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)双氢青蒿素(IED)具有更好的增强大肠埃希菌对β-内酰胺类的敏感性的活性。也就是说本发明的氮杂环青蒿素衍生物即式I所示化合物与β-内酰胺类抗生素联用对大肠埃希菌表现出非常强的协同抗菌作用。

具体的，本发明的含杂氮青蒿素衍生物可以由以下合成路线实现。

合成路线一，通过双氢青蒿素为起始原料，制备目标化合物，其具体合成路线如下

其X为咪唑(1)或四氢噻唑(3)化合物

合成路线二，通过双氢青蒿素为起始原料，制备目标化合物，其具体合成路线如下：

Y为噻唑基(2)或恶唑基(4)化合物。

附图说明

图1为本发明的含杂氮环青霉素衍生物体外增强大肠埃希菌对β-内酰胺抗生素的敏感性的活性。

具体实施方式

以下实施例用于进一步说明和理解本发明的实质，但不以任何方式本发明的范围。

实施例112β-(2-溴乙氧基)二氢青蒿素(B)的合成

11.4g(40mmol)二氢青蒿素和2.9ml(40mmol)2-溴乙醇和250mlTHF中，加入到500ml的圆底烧瓶中，氩气保护下加入8mlBF3.Et2O，置于冰浴中搅拌反应6h。反应过程用TLC(EtOAc：PE＝1:4)监测。反应结束后，加入饱和NaHCO3溶液。分层后收集有机层，将水层用EtOAc(60ml×2)萃取分离，合并有机层。将有机层用50ml饱和盐水溶液洗涤，然后用无水MgSO4干燥，减压蒸馏除去溶剂得粗品。将粗产物用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂中，静置重结晶，过滤和真空干燥后，得到13.1g白色晶体,收率为83.7％。

MS(ESI，m/z):391.5；m.p.:162.0-162.8℃；(1.0mg/mL,CDCl₃).¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δppm:0.94(3H,d,J＝6.0Hz,H-13),0.96(3H,d,J＝4.8Hz,H-14),1.44(3H,s,H-15),1.19-2.07(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9andH-10),2.32-2.42(1H,m,H-1),2.61-2.71(1H,m,H-11),3.52(2H,t,J＝5.7Hz,H-17),3.76-3.83(1H,m,H-16),4.09-4.17(1H,m,H-16),4.85(1H,d,J＝3.6Hz,H-12),5.50(1H,s,H-5)。

实施例2DHA25的合成。12β-(2-(4-氨基-1H-咪唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA25)的合成路线如下：

1.17g(3mmol)中间体，0.41g(3mmol)K₂CO₃，0.049g(0.3mmol)KI和0.4g(4mmol)4-氨基-1H-咪唑分别加入到一个100mL的圆底烧瓶中。50mLCH₃CN溶解，该混合物在50℃反应36h；反应过程通过TLC(EtOAc：PE＝1:3)监测。反应结束后加入15mL二氯甲烷和20mL饱和NaCl溶液。分层后收集有机层，水层用二氯甲烷(10mL×2)萃取液分离后，然后将有机层合并。将有机层用20mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥；通过减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的淡黄色油状物。称量0.89g，产率76.2％。

Mp:178-180℃.1HNMR(600MHz,CDCl₃)δppm:0.85(3H,d,J＝7.2Hz,H-14),0.94(3H,d,J＝6.1Hz,H-13),1.44(3H,s,H-15),1.22-2.07(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9,andH-10),2.32-2.38(1H,m,H-1),2.61-2.63(1H,m,H-11),3.62-3.68(1H,m,H-16),4.15-4.21(4H,m,H-16andH-17),4.76(1H,s,H-12),5.11(1H,s,H-5),7.12(1H,s,H-18),7.62(1H,s,H-20)；.7.80(2H,s,H-19).

实施例3DHA26的合成。12β-(2-(4-硝基-1H-咪唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA26)的合成路线如下：

1.22g(3mmol)中间体，0.41g(3mmol)K₂CO₃，0.049g(0.3mmol)KI和0.45g(4mmol)4-硝基-1H-咪唑分别加入到一个100mL的圆底烧瓶中。50mLCH₃CN溶解，该混合物在50℃反应36h；反应过程通过TLC(EtOAc：PE＝1:3)监测。反应结束后加入15mL二氯甲烷和20mL饱和NaCl溶液。分层后收集有机层，水层用二氯甲烷(10mL×2)萃取液分离后，然后将有机层合并。将有机层用20mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥；通过减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的黄色油状物。称量0.68g，产率58.2％。

M.p.:114-115℃.1HNMR(600MHz,CDCl₃)δppm:0.75(3H,d,J＝7.2Hz,H-14),0.94(3H,d,J＝4.5Hz,H-13),1.42(3H,s,H-15),1.21-2.04(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9,andH-10),2.29-2.38(1H,m,H-1),2.58-2.61(H,m,H-11),3.80-3.87(1H,m,H-16),4.34-4.37(2H,m,H-16),4.46-4.48(2H,m,H-17),4.76(1H,s,H-12),5.11(1H,s,H-5)；7.17(1H,s,H-18),7.62(1H,s,H-19)。

实施例4DHA27的合成。12β-(2-(N-四氢噻唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA27)的合成路线如下：

1.58g(4mmol)中间体，0.54g(4mmol)K₂CO₃，0.066g(0.4mmol)KI和0.36g(4mmol)四氢噻唑分别加入到一个100mL的圆底烧瓶中。50mLCH₃CN溶解，该混合物在50℃反应36h；反应过程通过TLC(EtOAc：PE＝1:3)监测。反应结束后加入15mL二氯甲烷和20mL饱和NaCl溶液。分层后收集有机层，水层用二氯甲烷(10mL×2)萃取液分离后，然后将有机层合并。将有机层用20mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥；通过减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的深黄色油状物。称量0.65g，产率32.7％。

M.p.:128-130℃.1HNMR(300MHz,CDCl₃)δppm:0.88(3H,d,J＝7.2Hz,H-14),0.93(3H,d,J＝6.1Hz,H-13),1.41(3H,s,H-15),1.25-2.09(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9,andH-10),2.34-2.40(1H,m,H-1),2.61-2.63(1H,m,H-11),4.05-4.21(4H,m,H-16andH-17),4.69(1H,s,H-12),5.15(1H,s,H-5).6.93(2H,s,H-19),7.15(2H,s,H-18),7.51(2H,s,H-20)

实施例5：DHA28的合成。12β-(2-(4-苯基-1H-咪唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA28)的合成路线如下：

1.14g(3mmol)中间体，0.39g(3mmol)K₂CO₃，0.047g(0.3mmol)KI和0.56g(4mmol)4-苯基-1H-咪唑分别加入到一个100mL的圆底烧瓶中。50mLCH₃CN溶解，该混合物在50℃反应36h；反应过程通过TLC(EtOAc：PE＝1:3)监测。反应结束后加入15mL二氯甲烷和20mL饱和NaCl溶液。分层后收集有机层，水层用二氯甲烷(10mL×2)萃取液分离后，然后将有机层合并。将有机层用20mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥；通过减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的深黄色油状物。称量0.94g，产率62.6％。

M.p.:120-121℃；¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δppm:0.90(3H,d,J＝7.2Hz,H-13),0.95(3H,d,J＝6.0Hz,H-14),1.44(3H,s,H-15),1.23-2.06(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9,andH-10),2.32-2.42(1H,m,H-1),2.59-2.60(1H,m,H-11),4.38-4.45(2H,m,H-16),4.48-4.55(2H,m,H-17),4.83(1H,d,J＝2.7Hz,H-12),5.48(1H,s,H-5),6.89-7.13(5H,d,J＝7.8Hz,H-22，H-23，H-24，H-26，H-26)，7.17(1H,s,H-18)，7.21(1H,t,J＝7.5Hz,H-19)。

实施例6DHA29的合成。12β-(2-(4-哌啶基-1H-咪唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA29)的合成路线如下：

1.57g(4mmol)中间体，0.55g(4mmol)K₂CO₃，0.056g(0.4mmol)KI和0.62g(4mmol)4-哌啶基-1H-咪唑分别加入到一个100mL的圆底烧瓶中。50mLCH₃CN溶解，该混合物在50℃反应36h；反应过程通过TLC(EtOAc：PE＝1:3)监测。反应结束后加入15mL二氯甲烷和20mL饱和NaCl溶液。分层后收集有机层，水层用二氯甲烷(10mL×2)萃取液分离后，然后将有机层合并。将有机层用20mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥；通过减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的深棕色油状物。称量1.58g，产率71.7％。

M.p.:100-102℃，¹HNMR(600MHz,CDCl3)δppm:0.91(3H,d,J＝7.5Hz,H-13),0.95(3H,d,J＝6.3Hz,H-14),1.44(3H,s,H-15),1.22-2.06(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9,H-10),2.32-2.42(1H,m,H-1),2.59-2.80(11H,m,H-11,H-21，H-22，H-23，H-24，H-25),4.14-4.21(2H,m,H-16),4.35-4.42(2H,m,H-17),4.81(1H,s,H-12),5.44(1H,s,H-5)；7.02(1H,s,H-18)，7.14(1H,t,J＝7.5Hz,H-19)

实施例7DHA30的合成。12β-(2-(4-噻唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA30)的合成路线如下：

0.569(2mmol)二氢青蒿素和0.254g(2mmol)2-羟乙基-噻唑和20mLTHF中，加入到50mL的圆底烧瓶中，氩气保护下加入0.4mLBF3.Et2O，置于冰浴中搅拌反应6h。反应过程用TLC(EtOAc：PE＝1:4)监测。反应结束后，加入饱和NaHCO3溶液。分层后收集有机层，将水层用EtOAc(10mL×2)萃取分离，合并有机层。将有机层用10mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水MgSO4干燥，减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的棕色油状物。称量0.39g，产率68.8％。

M.p.:113-116℃.¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δppm:0.89(3H,d,J＝7.2Hz,H-14),0.95(3H,d,J＝6.1Hz,H-13),1.46(3H,s,H-15),1.21-2.09(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9,andH-10),2.32(1H,m,H-1),2.64(1H,m,H-11),4.15-4.31(4H,m,H-16andH-17),4.70(1H,s,H-12),5.16(1H,s,H-5).7.20(1H,s,H-19),7.46(1H,s,H-20)；

实施例8DHA31的合成。12β-(2-(4-噁唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA31)的合成路线如下：

0.574(2mmol)二氢青蒿素(s)和0.222g(2mmol)2-羟乙基-噁唑和20mLTHF中，加入到50mL的圆底烧瓶中，氩气保护下加入0.4mLBF3.Et2O，置于冰浴中搅拌反应6h。反应过程用TLC(EtOAc：PE＝1:4)监测。反应结束后，加入饱和NaHCO₃溶液。分层后收集有机层，将水层用EtOAc(10mL×2)萃取分离，合并有机层。将有机层用10mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水MgSO₄干燥，减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的棕色油状物。称量0.61g，产率71.4％。

M.p.:110-112℃.¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δppm:0.91(3H,d,J＝7.2Hz,H-14),0.96(3H,d,J＝6.1Hz,H-13),1.43(3H,s,H-15),1.23-2.11(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9,andH-10),2.35(1H,m,H-1),2.64-2.71(1H,m,H-11),4.17-4.33(4H,m,H-16andH-17),4.70(1H,s,H-12),5.16(1H,s,H-5).7.11(1H,s,H-19),7.28(1H,s,H-20)。

实施例9DHA32的合成。12β-(2-(2-乙基-4-甲基-1H-咪唑-1基)乙氧基)双氢青蒿素(命名为DHA32)的合成路线如下：

1.39g(3.5mmol)中间体，0.48g(3.5mmol)K2CO3，0.058g(0.35mmol)KI和0.45g(4mmol)2-乙基-4-甲基-1H-咪唑分别加入到一个100mL的圆底烧瓶中。50mLCH3CN溶解，该混合物在50℃反应36h；反应过程通过TLC(EtOAc：PE＝1:3)监测。反应结束后加入15mL二氯甲烷和20mL饱和NaCl溶液。分层后收集有机层，水层用二氯甲烷(10mL×2)萃取液分离后，然后将有机层合并。将有机层用20mL饱和盐水溶液洗涤，然后用无水Na2SO₄干燥；通过减压蒸馏除去溶剂得粗品。粗品过色谱柱后，获得纯的淡黄色油状物。称量1.34g，产率76.4％。

M.p.:132-135℃；¹HNMR(600MHz,CDCl3)δppm:0.91(3H,d,J＝6.9Hz,H-14),0.95(3H,d,J＝6.3Hz,H-13),1.45(3H,s,H-15),1.19-2.06(10H,m,H-2,H-3,H-7,H-8,H-9andH-10),2.12(2H,s,H-21),2.21(3H,s,H-22),2.32-2.43(1H,m,H-1),2.59-2.66(1H,m,H-11),4.40-4.52(4H,m,H-16andH-17),4.69(1H,d,J＝2.7Hz,H-12),5.39(1H,s,H-5)；7.04(1H,s,H-18)。

实施例10式I所示的化合物与盐酸、枸橼酸反应生成相应的盐。反应式如下：

其中，X为咪唑基(1)、噻唑基(2)、四氢噻唑基(3)或噁唑基(4)。

以DHA27的盐的制备为例说明成盐的方法，其它化合物DHA25～32的盐可采用相同的方法制得

DHA27盐酸盐的制备：

在密封条件下，将浓H₂SO₄缓慢滴入装有足量NaCl的圆底烧瓶中，产生气体用导管通入50mL溶解有0.504g(1.25mmol)DHA27的乙酸乙酯中，不断搅拌下，10分钟后有白色晶体析出。停止通气体，过滤，乙酸乙酯溶剂旋转蒸馏，收集合并固体。称量0.538g，产率98.6％。

DHA27枸橼酸盐的制备：

0.478g(1.2mmol)DHA27溶解于乙酸乙酯中，加热条件下加入0.27g(1.44mmol)，枸橼酸溶解完全后，室温静置过夜。过滤，收集固体称量0.514g，产率72.4％。活性测试

实施例11化合物DHA25～32与β-内酰胺类抗生素单独使用时，对大肠埃希菌的最低抑菌浓度(MIC)的影响

采用微孔二倍稀释法，调整细菌浓度为1×10⁵CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，DHA25～32和β-内酰胺类抗生素氨苄西林以生理盐水稀释。加入各种药物至含细菌培养孔内，依次倍比稀释，第1～10孔药物的最终浓度依次为2048、1024、512、256、128、64、32、16、8、μg/mL。置37℃培养箱孵育18～24h，读取阳性和阴性对照孔，阴性对照孔清亮，阳性对照孔混浊。药物对细菌的MIC为18～24h抑制细菌肉眼可见生长的最低药物浓度。此次实验结果表明DHA25～32单独使用不能完全抑制细菌生长，并观察了β-内酰胺类抗生素氨苄西林(AMP)对该大肠埃希菌的抑菌效力，结果示于表1。

表1β-内酰胺类抗生素和DHA25～32单独使用时对大肠埃希菌35218的MIC

实施例12AS、IED和DHA25～32与β-内酰胺类抗生素氨苄西林联合应用后对大肠埃希菌MIC的影响。

采用棋盘式微孔稀释法，调整细菌浓度为1×10⁵CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，将对β-内酰胺类抗生素氨苄西林与不同浓度DHA25～32分别配伍，观察配伍后的药物对大肠埃希菌35218MIC的影响，具有协同效应用联合抑菌指数说明。联合抑菌指数是指在2种或多种药物同时使用的情况下，各种药物的联合用药时的最低抑菌浓度(MIC)与单独用药时的MIC的比值之和(FIC)，是评价药物具有联合效应的金标准。一般情况下，FIC≤0.5为协同作用；0.5～4.0为无关作用；>4.0为拮抗作用。

FIC＝β-内酰胺类联用时的MIC/β-内酰胺类单用时的MIC+药物联合β-内酰胺类的浓度/药物单独的MIC

此次实验结果表明DHA25～32单独使用虽不能完全抑制细菌生长，但与β-内酰胺类抗生素联合应用后可明显降低β-内酰胺类抗生素的MIC，说明DHA25～32可以增加大肠埃希菌35218对β-内酰胺类抗生素氨苄西林的敏感性，结果见表2。

表2β-内酰胺类抗生素氨苄西林(AMP)与DHA25～32联合使用时对大肠埃希菌35218MIC的影响，(以FIC为评判标准)

实施例13DHA25～32与青蒿琥酯(AS)、12β-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)双氢青蒿素(IED)对β-内酰胺类抗生素氨苄西林联合应用后对大肠埃希菌MIC影响的比较。(棋盘式微孔稀释法和抑菌曲线法)

1、采用棋盘式微孔稀释法，调整细菌浓度为1×10⁵CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内，将对β-内酰胺类抗生素氨苄西林与不同浓度DHA25～32、AS和IED分别配伍，观察配伍后的各种药物对大肠埃希菌35218MIC的影响，具有协同效应用联合抑菌指数说明。比较DHA25～32与AS、IED的体外抗菌增敏活性。

此次实验结果表明DHA25～32与AMP联用均较AS和IED有明显好的体外抗菌增敏活性，结果见表3。

表3β-内酰胺类抗生素氨苄西林(AMP)与DHA25～32、青蒿琥酯联合使用时对大肠埃希菌35218MIC的影响(以FIC为评判标准)

2、采用抑菌曲线法，调整细菌浓度为1×10⁵CFU/mL。DHA25～32(64μg/mL)AS(64μg/mL)、IED(64μg/mL)和AMP(128μg/mL)的所示浓度加入到细菌悬浮液中。于加入药物后的2h、4h、6h、8h和24h测量OD值。

此次实验结果表明DHA25～32均较AS和IED明显增强了β-内酰胺类抗生素对大肠埃希菌的体外抗菌增敏活性，结果见图1和表3。

Claims

1.一种含氮杂环的青蒿素衍生物，为式I所示的化合物或药学上可接受的盐，

2.根据权利要求1所述的青蒿素衍生物，R1为乙基，R2为甲基。

3.根据权利要求1所述的青蒿素衍生物，R1为氢，R2为氨基、硝基、苯基或哌啶基。

4.根据权利要求1-3任一所述的青蒿素衍生物，所述药学上可接受的盐为盐酸盐或枸橼酸盐。

5.根据权利要求1-3任一所述的青蒿素衍生物，为式I所示化合物的任一光学异构体。

6.一种制备权利要求1-3的青蒿素衍生物的方法，包括以下步骤：

1)将双氢青蒿素与2-溴代乙醇反应生成式II所示的化合物；

2)将式II所示的化合物在非质子性溶剂中，在碱性催化剂存在下与咪唑(1)、噻唑(2)、四氢噻唑(3)或噁唑(4)反应，获得式Ia所示的化合物，其中，式Ia中的X为咪唑基(1)、噻唑基(2)、四氢噻唑基(3)或噁唑基(4)，咪唑(1)中的R1与R2的定义与权利要求1中的咪唑基(1)的定义相同，

7.根据权利要求6所述的方法，所述催化剂选自氢化钠、三乙胺、碳酸钾、乙醇钠和叔丁醇钾，所述非质子性溶剂选自乙腈、四氢呋喃、乙醚和二甲基甲酰胺。

8.一种药物组合物，包含权利要求1-3任一所述的式I所示的化合物或其药学上可接受的盐和药用辅料。

9.根据权利要求1-3任一所述的式I所示的化合物或其药学上可接受的盐在制造治疗大肠埃希氏菌感染药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，还包括与β-内酰胺类抗生素联用。