CN105483287A - 一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与其他株的HRM检测方法及引物 - Google Patents

一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与其他株的HRM检测方法及引物 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与其他株的HRM检测方法及引物。其操作简单：只需PCR反应之前加荧光饱和染料即可；检测速度快且高通量：全部操作过程只需3小时，不需要病毒的细胞培养，极大缩短了分型所需时间；费用低，不需要特异性探针，荧光饱和染料廉价易得；准确性高、特异性好，重复性好，可以准确、快速、高通量地进行分析，有利于在临床实践中推广应用。

Description

一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与其他株的HRM检测方法及引物
技术领域
本发明涉及病毒疫苗株与其他疫苗株或野毒株的鉴别方法，具体涉及一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与其他疫苗株或野毒株的HRM检测方法及引物。
背景技术
伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus,PR）引起的多种家畜（猪、牛、羊等）和野生动物以发热、奇痒（猪除外）及神经系统症状和脑脊髓炎为主要特征的一种重要传染病。猪是该病毒重要的贮存宿主和传染源。伪狂犬病在1813年最早发现于美国的牛群中，1902年匈牙利学者Aujeszky证明该病由病毒引起，故也有Aujeszkydisease之称。1934年Sabin和Wright证明了本病的病原为疱疹病毒。在我国，1948年刘永纯等人首次报道了猫的伪狂犬病，到目前为止，国内已有20多个省市先后报道了本病的发生，且猪的感染率和发病率近些年呈现出扩大和蔓延的趋势，已经严重危害了养猪业的健康发展，对养殖者造成巨大经济损失。
疫苗免疫接种是防控伪狂犬病的根本措施，已研制出的PRV疫苗有灭活苗，弱毒疫苗，基因缺失疫苗等。灭活苗安全性好，但免疫力一般不佳，不如弱毒苗；弱毒苗具有较好免疫原性，对伪狂犬病的预防起着一定的效果，目前使用较多的典型弱毒疫苗株是Bartha-K61株；基因工程缺失疫苗是现代疫苗研究的活跃领域之一，在预防控制方面起重要作用，利用这类疫苗免疫并结合相关的检测方法，可以区分接种疫苗阳性猪和野毒感染阳性猪。
随着国内外许多学者对猪伪狂犬病病毒和新型疫苗的不断研究，对于猪伪狂犬病感染的诊断，目前拥有很多方法。血清学诊断方法包括血清中和试验、酶联免疫吸附试验等，分子生物学诊断包括核酸探针方法、基因芯片、PCR等方法，比如血清中和试验操作比较繁琐，工作量相对较大；酶联免疫吸附试验虽然特异性强、灵敏度高，但费用高、耗时长；核酸探针方法、基因芯片费用高，而PCR技术具有特异性强、敏感度高的优点，但结果判定需要电泳，费时费力，且反应产物容易产生污染而导致假阳性。以上检测方法只能区别其他株（包括Bartha-K61以外其它的疫苗株和/或野毒株）和缺失疫苗株，但伪狂犬病常规弱毒疫苗接种后不能区分开接种猪和感染猪，而Bartha-K61株是目前国内使用较多的弱毒疫苗株，因此，目前急需一种操作相对简易、检测结果可靠且检测成本低廉的区分Bartha-K61株疫苗株与其他株的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的HRM检测方法及引物。
本发明所采取的技术方案是：
一种快速用于区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的HRM检测方法的引物，其核苷酸序列如下所示：
P1:TACACCGAGTCGTGGCAGCT（SEQIDNO:1）；
P2:TCGATAAAGTACAGCAGGT（SEQIDNO:2）；
P3:TGGAGGACCCGTGCG（SEQIDNO:3）；
P4:CGCTCAGCAGCCGGT（SEQIDNO:4）。
优选的，其核苷酸序列如下所示：
P3:TGGAGGACCCGTGCG（SEQIDNO:3）；
P4:CGCTCAGCAGCCGGT（SEQIDNO:4）。
一种快速用于区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的HRM检测试剂盒，该试剂盒含有上述引物。
一种快速用于区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的HRM检测方法，包括下列步骤：
1)从样品中提取病毒核酸；
2)以核酸为模板，用上述引物对P1和P2进行预扩增反应获得预扩增产物；
3)以预扩增产物作为模板，用上述引物对P3、P4及荧光饱和染料进行PCR-HRM扩增反应获得扩增产物；
4)对扩增产物进行HRM分析，确定病毒类型。
优选的，步骤2）中PCR预扩增反应体系为：
模板2μL
PremixEx-Taq10μL
引物P11μL
引物P21μL
ddH2O6μL
总体积20μL。
优选的，步骤2）中的PCR预扩增的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s；循环35次；72℃终延伸10min。
优选的，步骤3）中的PCR-HRM扩增反应体系为：
模板2μL
PremixEx-Taq10μL
引物P31μL
引物P41μL
LCGreen染料1ul
ddH2O5μL
总体积20μL。
优选的，步骤3）中的PCR-HRM扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火25s，72℃延伸20s；循环35次；80℃到94℃以0.3℃/步的速率进行熔解曲线分析。
优选的，步骤4）中所述HRM分析的具体分析过程为：
以猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61标准样品为对照时，若其基因分型置信值GCP大于或等于95%则判定为疫苗株Bartha-K61。
优选的，步骤4）中所述HRM分析的具体分析过程为：
以猪伪狂犬病病毒其他任一疫苗株或野毒株的标准样品为对照时，若其基因分型置信值GCP大于或等于95%则判定为此疫苗株或野毒株。
本发明的有益效果是：
1）本发明首次建立了一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的PCR-HRM检测方法及引物，操作简单：只需PCR反应之前加荧光饱和染料即可；检测速度快且高通量：全部操作过程只需3小时，不需要病毒的细胞培养，极大缩短了分型所需时间；费用低，不需要特异性探针，荧光饱和染料廉价易得；准确性高、特异性好，重复性好，可以准确、快速、高通量地进行分析，有利于在临床实践中推广应用。
2）本发明的PCR-HRM引物，对猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与其他疫苗株或野毒株均有很好地的扩增性，有助于提高PCR的效率，减少病毒鉴别分型的时间。
3）本发明的PCR-HRM引物特异性好，能特异性扩增猪伪狂犬病病毒DNA，其他猪类病毒不能扩增，有利于提高本发明对基因型分析的正确性。
附图说明
图1为猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株标准样品HRM标准化熔解曲线；
图2为猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株标准样品HRM峰型化熔解曲线；
图3为猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株临床样品HRM标准化熔解曲线；
图4为猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株临床样品HRM峰型化熔解曲线；
图5为猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株PCR-HRM引物特异性凝胶电泳图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1PCR引物设计
1）PCR预扩增引物
根据猪伪狂犬病病毒基因序列设计出扩增猪伪狂犬病病毒部分基因序列的引物对P1和P2，其碱基序列如下所示：
P1:TACACCGAGTCGTGGCAGCT（SEQIDNO:1）；
P2:TCGATAAAGTACAGCAGGT（SEQIDNO:2）。
2）PCR-HRM引物：
经过对所设计的大量引物进行筛选后，发现引物对P3、P4和引物对P1、P2的联合使用对PCR-HRM方法区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株的效果最好，引物对P3、P4的碱基序列如下所示：
P3:TGGAGGACCCGTGCG（SEQIDNO:3）；
P4:CGCTCAGCAGCCGGT（SEQIDNO:4）。
实施例2标准样品的制备及其PCR-HRM分析
1）猪伪狂犬病病毒DNA的提取：
用试剂盒MiniBESTViralRNA/DNAExtractionKitVer.4.0提取病料样品中的猪伪狂犬病病毒DNA。病料样品可以是全血、乳液等易于获得且对动物体无严重伤害的样品；也可以是脑脊髓液、肾、肝、脾等组织样品。
2）标准样品的制备及其PCR-HRM分析
分别取经过测序确定为猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61和野毒株的DNA作为模板，分别以P1和P2为引物进行PCR预扩增，其预扩增反应体系为：
预扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s循环35次；72℃终延伸10min。
通过上述方法，分别获得猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61和野毒株的PCR预扩增产物，分别将PCR预扩增产物稀释100倍，即可分别获得疫苗株Bartha-K61和野毒株的标准样品，作为后续研究的阳性对照样品。
3）阳性标准样品的PCR-HRM操作步骤
分别以上述获得的两种阳性标准样品为DNA模板，分别进行PCR-HRM扩增反应和分析；PCR-HRM反应体系为：
PCR-HRM扩增反应程序：
95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火25s，72℃延伸20s；循环35次；72℃终延伸10min；80℃到94℃以0.3℃/s的熔解速率进行熔解曲线分析。
4）阳性标准样品PCR-HRM结果分析
PCR扩增产物用Rotor-GeneQ分析仪进行分析。猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株标准样品HRM（高分辨率熔解曲线，HighResolutionMeltingcurve）结果如图1、图2所示。
从图1所示的标准化熔解曲线图上可看出，疫苗株Bartha-K61和野毒株两种标准样品熔解曲线相互分开，表明所设计引物适合用于HRM分析。为了消除人为主观因素对判定结果的影响，利用Rotor-GeneTMQsoftwareversion2.0.2.软件中基因分型置信参数（GCP）对其结果进行分析，GCP值大于或等于95%时判定为相同基因型。基因分型结果表明，疫苗株Bartha-K61和野毒株标准样品（每个标准样品为3个重复）基因分型置信值（GCP）分别为100±0%和99.99±0.01%。
从图2所示的峰型化熔解曲线图上可看出，两种标准样品熔解曲线形状相似，均有1个熔解峰，表明引起GCP差值的主要原因为两种标准样品熔解温度（Tm）的不同。其中，疫苗株Bartha-K61熔解温度为89.25±0℃，野毒株熔解温度为88.35±0.02℃。
实施例3临床样品PCR-HRM分析
1）从临床样本中提取病毒DNA：方法同上述实施例2中DNA提取方法；
2）以提取的病毒DNA为模板，进行PCR预扩增，预扩增反应体系为：
3）预扩增PCR产物稀释100倍后作为DNA模板，进行PCR-HRM扩增反应：扩增反应体系为：
PCR-HRM扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，58℃退火25s，72℃延伸20s；循环35次；72℃终延伸10min；80℃到94℃以0.3℃/步的速率进行熔解曲线分析。
4）对扩增产物进行HRM分析，确定病毒的基因型。
本发明检测了30份临床样品，PCR-HRM的结果如图3、图4所示。
从图3所示的30份临床样品标准化熔解曲线图上可看出，当分别以疫苗株Bartha-K61和野毒株标准样品作为对照（每个标准样品为3个重复），GCP值大于或等于95%时判定为相同基因型。通过分析得知：30份临床样品中30份样品分型为野毒株，其GCP值为97.44±1.32%；30份临床样品中没有疫苗株Bartha-K61。
从图4所示的30份临床样品峰型化熔解曲线图上可看出，PRV疫苗株Bartha-K61（由于没有检测到Bartha-K61疫苗株的临床样本，只有其标准样品的三个重复）和野毒株Tm值分别为89.29±0.03℃和88.34±0.07℃。
实施例4特异性实验
分别提取其他常见猪病毒DNA，如提取猪细小病毒（PorcineParvovirus,PPV）和猪圆环病毒（Porcinecirco-virus,PCV）的DNA分别作为PCR模板，以上述实施例3中的PCR方法分别进行PCR反应，将PCR产物进行凝胶电泳分析，并与疫苗株Bartha-K61和野毒株阳性样品PCR产物进行对比分析，电泳结果如图5所示。图5中的M为Marker（DL1000DNAmarker），泳道1-5分别为1：PRV疫苗株Bartha-K61，2：PRV野毒株，3：PPV，4：PCV，5：阴性对照，凝胶电泳结果显示，猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与野毒株阳性样品在63bp左右有目的条带，而其它样品均未出现电泳条带，表明所设计的引物特异性高适合用于HRM分析。
除了野毒株，本发明方法还可以检测Bartha-K61以外的疫苗株，只要以需要检测的任一疫苗株的标准样品为对照时，若其基因分型置信值GCP大于或等于95%则判定为此疫苗株。因为目前猪场使用的伪狂犬疫苗基本都是Bartha-K61，所以可以根据猪场的背景来选择需要检测的标准样品即可。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
<110>广东省实验动物监测所
<120>一种快速区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61与其他株的HRM检测方法及
引物
<130>
<160>4
<170>PatentInversion3.5
<210>1
<211>20
<212>DNA
<213>人工引物
<400>1
tacaccgagtcgtggcagct20
<210>2
<211>19
<212>DNA
<213>人工引物
<400>2
tcgataaagtacagcaggt19
<210>3
<211>15
<212>DNA
<213>人工引物
<400>3
tggaggacccgtgcg15
<210>4
<211>15
<212>DNA
<213>人工引物
<400>4
cgctcagcagccggt15

Claims (9)

1.一种快速用于区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的HRM检测方法的引物，其核苷酸序列如下所示：
P1:TACACCGAGTCGTGGCAGCT（SEQIDNO:1）；
P2:TCGATAAAGTACAGCAGGT（SEQIDNO:2）；
P3:TGGAGGACCCGTGCG（SEQIDNO:3）；
P4:CGCTCAGCAGCCGGT（SEQIDNO:4）。
2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：其核苷酸序列如下所示：
P3:TGGAGGACCCGTGCG（SEQIDNO:3）；
P4:CGCTCAGCAGCCGGT（SEQIDNO:4）。
3.一种快速用于区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的HRM检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1所述的引物。
4.一种快速用于区分猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61的HRM检测方法，其特征在于，包括下列步骤：
1）从样品中提取病毒核酸；
2）以核酸为模板，用权利要求1所述的引物对P1和P2进行预扩增反应获得预扩增产物；
3）以预扩增产物作为模板，用权利要求1所述的引物对P3、P4及荧光饱和染料进行PCR-HRM扩增反应获得扩增产物；
4）对扩增产物进行HRM分析，确定病毒类型。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2）中PCR预扩增反应体系为：
模板2μL
PremixEx-Taq10μL
引物P11μL
引物P21μL
ddH2O6μL
总体积20μL。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤2）中的PCR预扩增的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s；循环35次；72℃终延伸10min。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤3）中的PCR-HRM扩增反应体系为：
模板2μL
PremixEx-Taq10μL
引物P31μL
引物P41μL
LCGreen染料1ul
ddH2O5μL
总体积20μL。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤3）中的PCR-HRM扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火25s，72℃延伸20s；循环35次；80℃到94℃以0.3℃/步的速率进行熔解曲线分析。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤4）中所述HRM分析的具体分析过程为：以猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61标准样品为对照时，若其基因分型置信值GCP大于或等于95%则判定为疫苗株Bartha-K61。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106048079A (zh) * 2016-05-05 2016-10-26 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种快速区分prv中国型、欧美型及疫苗株的双色荧光检测方法、引物及探针

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561374A (zh) * 2014-12-18 2015-04-29 河南省动物疫病预防控制中心 鉴别猪伪狂犬病病毒疫苗株和野毒株的检测试剂与方法
CN105018645A (zh) * 2015-07-29 2015-11-04 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 用于检测经典型和变异型猪伪狂犬病毒的实时荧光pcr-hrm引物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561374A (zh) * 2014-12-18 2015-04-29 河南省动物疫病预防控制中心 鉴别猪伪狂犬病病毒疫苗株和野毒株的检测试剂与方法
CN105018645A (zh) * 2015-07-29 2015-11-04 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 用于检测经典型和变异型猪伪狂犬病毒的实时荧光pcr-hrm引物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
彭金美等: "伪狂犬病病毒Bartha K61株Us区缺失片段的鉴定", 《中国兽医科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106048079A (zh) * 2016-05-05 2016-10-26 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种快速区分prv中国型、欧美型及疫苗株的双色荧光检测方法、引物及探针
CN106048079B (zh) * 2016-05-05 2020-03-31 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种快速区分prv中国型、欧美型及疫苗株的双色荧光检测方法、引物及探针

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