CN105349700A - 一种快速鉴别小鼠细小病毒mvm株与mpv株的hrm检测方法及引物 - Google Patents

一种快速鉴别小鼠细小病毒mvm株与mpv株的hrm检测方法及引物 Download PDF

Info

Publication number
CN105349700A
CN105349700A CN201510852572.7A CN201510852572A CN105349700A CN 105349700 A CN105349700 A CN 105349700A CN 201510852572 A CN201510852572 A CN 201510852572A CN 105349700 A CN105349700 A CN 105349700A
Authority
CN
China
Prior art keywords
strain
mice
hrm
primer
mpv
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510852572.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105349700B (zh
Inventor
饶丹
郭鹏举
袁文
黄韧
张钰
陈梅丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute
Original Assignee
Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute filed Critical Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute
Priority to CN201510852572.7A priority Critical patent/CN105349700B/zh
Publication of CN105349700A publication Critical patent/CN105349700A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105349700B publication Critical patent/CN105349700B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物。其操作简单：只需PCR反应之前加荧光饱和染料即可；检测速度快且高通量：全部操作过程只需2小时，极大缩短了分型所需时间；费用低，不需要特异性荧光标记探针；准确性高、特异性好，重复性好，可以准确、快速、高通量地进行分析，有利于在临床实践中推广应用。

Description

一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物
技术领域
本发明属于病毒检测领域，具体涉及一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物。
背景技术
小鼠细小病毒属于细小病毒属的单股负链DNA病毒，在普通级小鼠中感染率较高。MVM株首次发现于1966年，在后续研究中发现该病毒株在生物体内有抑制肿瘤的作用；起初被认为是孤立的细小病毒株的MPV株最早是在1933年从L3杀伤性T淋巴细胞中分离出来的。MVM株和MPV株和其他的细小病毒一样具有强的物理稳定性，对酸碱、温度等有一定的耐受能力。在生物制品的生产中，许多生物制品所用的细胞系来源于鼠源细胞如中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、乳仓鼠肾细胞等，而这些细胞容易受细小毒株污染。自然感染细小病毒的鼠群通常是无症状的，但研究表明幼鼠及免疫不全的鼠感染MVM株出现矮小症，突发死亡及造血功能障碍等。相比MVM株感染，研究报道实验室和自然感染MPV株的小鼠均无病理状态。由于临床感染的症状弱或无症状以及细小病毒强的生存力，使其成为目前动物屏障设施中一种很难根除的病原。
体外检测小鼠细小病毒株的方法有多种，如ELISA、感染实验、血凝实验，免疫荧光法、PCR方法等。鉴于感染后一些未能发生血清转换的小鼠则无法通过血清抗体检测，因而快速、灵敏的PCR检测方法被常用于细小病毒的日常检测。细小病毒的组织嗜性广泛，在小鼠肝、肾、脾、盲肠内容物、粪便中等均能检测病毒。目前已有的PCR检测方法有单独检测MVM株或MPV株，检测两种毒株但不区分是哪种毒株，所以迫切需要一种既可检测两种小鼠细小毒株又能够鉴别是MVM株还是MPV株的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物。
本发明所采取的技术方案是：
一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法的引物，其核苷酸序列如下所示：
P1:GACCTYACWGCTTSCATGAT（SEQIDNO：1）；
P2:GTGWGGYTGACAAAATCCWACTT（SEQIDNO：2）。
一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测试剂盒，该试剂盒含有上述的引物。
一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的的HRM检测方法，包括以下步骤：
1)从样品中提取病毒核酸；
2)以核酸为模板，利用上述引物对P1和P2以及荧光饱和染料，进行扩增反应获得扩增产物；
3)对扩增产物进行HRM分析，确定病毒类型。
优选的，步骤2）中扩增反应体系如下：
PremixEx-Taq10μL
引物P10.5μL
引物P20.5μL
LCgreen染料1μL
模板1μL
ddH2O7μL
总体积20μL。
优选的，步骤2）中扩增反应程序如下：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸35s；循环35次；72℃终延伸5min。
优选的，步骤3）中HRM分析仪器熔解温度设定是以每步升温0.3℃的速率从80℃到90℃进行荧光信号的收集。
优选的，步骤3）中HRM分析的具体分析过程：在80-90℃熔解温度范围内，若待检测样品熔解曲线有两个熔解区间即峰型曲线有两个熔解峰时，判定该样品为小鼠细小病毒MVM株；只有一个熔解峰的判定为小鼠细小病毒MPV株。
优选的，步骤3）中HRM分析的具体分析过程：在99%的置信区间内，当检测样品含有2个熔解峰时，若2个熔解峰的Tm值分别为84.63±0.42℃、86.76±0.36℃，且二者差值的绝对值为2.13±0.08℃，则判定该样品为小鼠细小病毒MVM型毒株；当检测样品只有1个熔解峰，熔解Tm值为85.4±0.36℃时，则判定为小鼠细小病毒MPV型毒株。
本发明的有益效果是：
1）本发明首次建立了一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物，只需PCR体系中加入荧光饱和染料进行常规PCR反应；检测速度快，全部操作过程只需2小时；费用低，不需要特异性探针，荧光饱和染料用量少；可以简单、快速的实现高通量分析，适合于小鼠细小病毒筛查。
2）本发明的PCR-HRM引物，对小鼠细小病毒MVM株与MPV株均有很好的扩增性，PCR扩增效率高，检测灵敏度相当于荧光定量PCR。
3）本发明的PCR-HRM引物特异性好，能够特异性扩增小鼠细小病毒DNA而不扩增小鼠常见的其他病毒性和细菌病原，保证了本方法的可靠性。
附图说明
图1为小鼠细小病毒MVM株与MPV株标准样品HRM标准化熔解曲线；
图2为小鼠细小病毒MVM株与MPV株标准样品HRM峰型化熔解曲线；
图3为小鼠细小病毒MVM株与MPV株临床样品HRM标准化熔解曲线；
图4为小鼠细小病毒MVM株与MPV株临床样品HRM峰型化熔解曲线；
图5为特异性试验凝胶电泳图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但并不局限于此。
实施例1特异性引物的设计
本发明设计可以同时检测小鼠细小病毒MVM株与MPV株的引物；并对所设计的引物做大量的实验筛选，筛选出一对特异性强的引物，其核苷酸序列如下所示：
P1:GACCTYACWGCTTSCATGAT（SEQIDNO：1）；
P2:GTGWGGYTGACAAAATCCWACTT（SEQIDNO：2）；
引物所扩增片段长度均为516bp。
实施例2标准样品的制备及PCR-HRM分析
1）小鼠细小病毒DNA的提取：
采用天根DNA提取试剂盒提取样品中的小鼠细小病毒DNA，样品组织可以是组织脏器、粪便或细胞培养物。
2）阳性标准样品的制备：
为了验证本发明方法可行性与可靠性，同时构建标准阳性样品，为之后的临床样品检测提供HRM阳性对照，本发明需优先制备小鼠细小病毒MVM株与MPV株阳性标准样品。标准样品的制备步骤如下：分别取经过测序确定为MVM株和MPV株的质粒DNA作为模板（质粒浓度稀释至106copies/μL），以P1和P2为上下游引物在加有荧光饱和染料下的进行PCR扩增，其预扩增反应体系为：
PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸35s；循环35次；72℃终延伸5min；HRM分析仪器熔解温度设定是以每步升温0.3℃的速率从80℃到90℃进行荧光信号的收集。
3）阳性标准样品PCR-HRM结果分析
HRM分析过程在Rotor-GeneQ分析仪进行，该仪器可以完成PCR-HRM分析全过程，也可以在普通PCR仪上完成PCR扩增再将PCR产物直接转移至Rotor-GeneQ中完成熔解分析。由于无需开盖，从而保证了PCR产物不受污染。小鼠细小病毒MVM株与MPV株标准样品HRM结果如图1、图2所示。
图1为质粒标准品PCR扩增产物标准化熔解曲线图，MVM株与MPV株熔解曲线差异明显。图2为熔解曲线导数图即峰型熔解曲线，其中MVM株扩增的熔解曲线有两个峰，Tm1平均值为84.75℃、Tm2平均值为86.85℃、△Tm（Tm2-Tm1）平均值为2.10℃；MPV株熔解曲线为单峰型，平均Tm值为85.57℃。
实施例3临床样品的PCR-HRM检测
1）从样本中提取病毒DNA：方法同实施例2中DNA提取方法；
2）以提取的DNA为模板，进行PCR扩增，扩增反应体系为：
PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸35s；循环35次；72℃终延伸5min；HRM分析仪器熔解温度设定是以每步升温0.3℃的速率从80℃到90℃进行荧光信号的收集。
3）对扩增产物进行HRM分析，确定小鼠细小毒株类型
本发明对28份临床样本进行检测，检测结果如图3、4。
图3为PCR扩增产物标准化熔解曲线图，两种毒株PCR扩增产物熔解曲线差异明显。图4为峰型熔解曲线图。通过对图形的分析，发现其中有20份样本熔解曲线有两个熔解区间即峰型曲线有两个熔解峰的，判断为小鼠细小病毒MVM株；另外8份样本熔解曲线只有一个熔解区间即峰型曲线只有一个熔解峰的，判断为小鼠细小病毒MPV株。
进一步对熔解曲线进行分析：小鼠细小病毒MVM株阳性样品熔解曲线表现为双峰型，第一个熔解峰的Tm值（Tm1）统计为84.63±0.14℃，第二个熔解峰的Tm值（Tm2）统计为86.76±0.12℃，△Tm（Tm2-Tm1）值为2.13±0.027℃；MPV株阳性样品熔解曲线Tm值为85.4±0.12℃。由于实际检测中熔解曲线Tm受多方面因素的影响会有些变化，包括核酸片段本身、反应试剂盐离子浓度及饱和荧光染料浓度微弱变化，故介定一个宽的Tm范围。
以本发明引物和方法，在99%置信区间内，当检测样品含有2个熔解峰时，若Tm1范围为84.63±0.42℃、Tm2范围为86.76±0.36℃且△Tm（Tm2-Tm1）值为2.13±0.08℃则判定该样品含小鼠细小病毒MVM型毒株；当检测样品只有1个熔解峰，熔解Tm值在85.4±0.36℃时，判定为小鼠细小病毒MPV型毒株。
另外，对这28份样品用针对保守基因的引物进行扩增并测序，做进化分析，分析结果与本发明方法检测的结果完全一致，说明本发明方法的准确性高，可达100%。
实施例4特异性试验
选取小鼠易感的几种DNA病毒和细菌进行特异性检测，选取的病毒有大鼠细小病毒KRV株、鼠痘病毒（ECT）、小鼠腺病毒（MAV）、小鼠巨细胞病毒（MCMV）、多瘤病毒（Poly）、肝螺杆菌（H.hepaticus）和鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）。将非小鼠细小病毒样本与阳性标准品按照相同的加样体系和PCR反应条件进行反应，分析PCR产物熔解曲线结果。
特异性试验凝胶电泳图结果如图5所示。图5表明除了阳性标准品对照外，其他非小鼠细小病毒病原电泳图中未出现目的条带。非细小病毒病原的未能扩增的实验依据保证了本发明所涉及的引物的特异性，进一步也保证了本发明方法的可靠性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
<110>广东省实验动物监测所
<120>一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物
<130>
<160>2
<170>PatentInversion3.5
<210>1
<211>20
<212>DNA
<213>人工引物
<400>1
gacctyacwgcttscatgat20
<210>2
<211>23
<212>DNA
<213>人工引物
<400>2
gtgwggytgacaaaatccwactt23

Claims (8)

1.一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法的引物，其核苷酸序列如下所示：
P1:GACCTYACWGCTTSCATGAT（SEQIDNO：1）；
P2:GTGWGGYTGACAAAATCCWACTT（SEQIDNO：2）。
2.一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1所述的引物。
3.一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的的HRM检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)从样品中提取病毒核酸；
2)以核酸为模板，利用权利要求1所述的引物对P1和P2以及荧光饱和染料，进行扩增反应获得扩增产物；
3)对扩增产物进行HRM分析，确定病毒类型。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2）中扩增反应体系如下：
PremixEx-Taq10μL
引物P10.5μL
引物P20.5μL
LCgreen染料1μL
模板1μL
ddH2O7μL
总体积20μL。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤2）中扩增反应程序如下：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸35s；循环35次；72℃终延伸5min。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤3）中HRM分析仪器熔解温度设定是以每步升温0.3℃的速率从80℃到90℃进行荧光信号的收集。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤3）中HRM分析的具体分析过程：在80-90℃熔解温度范围内，若待检测样品熔解曲线有两个熔解区间即峰型曲线有两个熔解峰时，判定该样品为小鼠细小病毒MVM株；只有一个熔解峰的判定为小鼠细小病毒MPV株。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤3）中HRM分析的具体分析过程：在99%的置信区间内，当检测样品含有2个熔解峰时，若2个熔解峰的Tm值分别为84.63±0.42℃、86.76±0.36℃，且二者差值的绝对值为2.13±0.08℃，则判定该样品为小鼠细小病毒MVM型毒株；当检测样品只有1个熔解峰，熔解Tm值为85.4±0.36℃时，则判定为小鼠细小病毒MPV型毒株。
CN201510852572.7A 2015-11-27 2015-11-27 一种快速鉴别小鼠细小病毒mvm株与mpv株的hrm检测方法及引物 Active CN105349700B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510852572.7A CN105349700B (zh) 2015-11-27 2015-11-27 一种快速鉴别小鼠细小病毒mvm株与mpv株的hrm检测方法及引物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510852572.7A CN105349700B (zh) 2015-11-27 2015-11-27 一种快速鉴别小鼠细小病毒mvm株与mpv株的hrm检测方法及引物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105349700A true CN105349700A (zh) 2016-02-24
CN105349700B CN105349700B (zh) 2018-09-07

Family

ID=55325759

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510852572.7A Active CN105349700B (zh) 2015-11-27 2015-11-27 一种快速鉴别小鼠细小病毒mvm株与mpv株的hrm检测方法及引物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105349700B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106367530A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 广东省实验动物监测所 一种快速鉴别四种大鼠细小病毒株的引物组及检测方法
CN106893786A (zh) * 2017-03-22 2017-06-27 中国农业科学院上海兽医研究所 鉴别检测大鼠微小病毒和大鼠细小病毒的引物对、探针、试剂盒及方法
CN108384871A (zh) * 2017-12-17 2018-08-10 中国农业科学院兰州兽医研究所 羊梨形虫检测与鉴别的方法与试剂盒

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103866048A (zh) * 2014-02-27 2014-06-18 广东省农业科学院动物卫生研究所 番鸭细小病毒和鹅细小病毒的hrm鉴别方法、试剂盒和引物组
CN104004857A (zh) * 2014-05-27 2014-08-27 广州博至生物科技有限公司 一种快速区分不同基因型犬细小病毒的pcr-hrm引物和方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103866048A (zh) * 2014-02-27 2014-06-18 广东省农业科学院动物卫生研究所 番鸭细小病毒和鹅细小病毒的hrm鉴别方法、试剂盒和引物组
CN104004857A (zh) * 2014-05-27 2014-08-27 广州博至生物科技有限公司 一种快速区分不同基因型犬细小病毒的pcr-hrm引物和方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JOONGHO JOH ET AL: "Epidemiological and phylogenetic analysis of institutional mouse parvoviruses", 《EXPERIMENTAL AND MOLECULAR PATHOLOGY》 *
嘎利兵嘎: "高分辨率熔解曲线（HRM）技术在动物病毒基因分型中的研究及应用", 《中国博士学位论文全文数据库（电子期刊）》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106367530A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 广东省实验动物监测所 一种快速鉴别四种大鼠细小病毒株的引物组及检测方法
CN106893786A (zh) * 2017-03-22 2017-06-27 中国农业科学院上海兽医研究所 鉴别检测大鼠微小病毒和大鼠细小病毒的引物对、探针、试剂盒及方法
CN108384871A (zh) * 2017-12-17 2018-08-10 中国农业科学院兰州兽医研究所 羊梨形虫检测与鉴别的方法与试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN105349700B (zh) 2018-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106319092B (zh) 一种快速鉴别猪流行性腹泻病毒经典株与变异株的hrm检测引物、试剂盒及方法
CN104513865B (zh) 反转录pcr检测基孔肯雅病毒的试剂盒及其检测方法
CN112048570A (zh) 一种检测鸭腺病毒4型的pcr引物及其检测方法与应用
CN111500690A (zh) 一种检测car-t细胞基因组中病毒载体拷贝数的方法
CN104195268A (zh) 检测口蹄疫A型、O型和Asia 1型病毒的试剂盒及制备方法
CN107557494A (zh) 鉴别检测猪腹泻冠状病毒的引物及多重rt‑pcr方法
CN108866244A (zh) 检测对虾虹彩病毒的rpa引物和探针、试剂盒及其方法
CN103757139A (zh) 犬瘟热、犬细小病毒二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测试剂及其检测方法
CN103074447B (zh) 一种快速鉴别诊断不同血清型禽白血病病毒pcr-hrm分析方法的建立
CN112176108A (zh) 基于raa技术检测鸭腺病毒3型的引物探针组合、试剂盒及检测方法
CN105349700A (zh) 一种快速鉴别小鼠细小病毒mvm株与mpv株的hrm检测方法及引物
CN112877476A (zh) 非洲猪瘟病毒p72基因荧光探针pcr检测引物探针组、试剂盒及方法
CN114015815B (zh) 猪非典型瘟病毒的微滴数字pcr试剂盒及其检测方法
CN106191311A (zh) 一种快速检测豚鼠LCMV、SV、PVM、Reo‑3病毒的多重液相基因芯片方法及试剂
Gou et al. The colorimetric isothermal multiple-self-matching-initiated amplification using cresol red for rapid and sensitive detection of porcine circovirus 3
CN110747261A (zh) 一种四环素类抗生素抗性基因tetX的特异性引物、检测方法和应用
CN106191319A (zh) 一种快速区分6种禽呼吸道病原的多重荧光免疫分析方法
CN106011313A (zh) 一种快速区分iltv、ibv、mg和ms的多重荧光免疫分析方法及试剂
CN102154523B (zh) 检测人bk病毒核酸的引物与荧光探针及其应用
CN105861661B (zh) -α21.9缺失型α-地中海贫血基因检测试剂盒
CN106367530B (zh) 一种快速鉴别四种大鼠细小病毒株的引物组及检测方法
CN103602756A (zh) 一种新城疫病毒的检测方法
CN106435013A (zh) 犬圆环病毒的实时荧光pcr检测用引物及检测方法
CN106167836B (zh) 一种同时检测4株大鼠细小病毒的多重荧光分析方法及试剂盒
CN105331741A (zh) 一种快速鉴别小鼠脑脊髓炎病毒和大鼠泰勒病毒的hrm检测方法及引物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant