CN105453918A - 一种利用魔芋复合寡糖诱导制备大豆抗毒素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用魔芋复合寡糖诱导制备大豆抗毒素的方法，属于抗毒素制备领域。该方法以预处理后的魔芋为原材料，用复合酶进行酶解，酶解物经高速离心后收集上清液浓缩得复合寡糖，并以寡糖作诱导剂，制备得到大豆抗毒素，本发明提供的制备方法，反应条件温和，大豆抗毒素产率高，诱导时间短，有效避免了大豆腐烂问题，降低生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用魔芋复合寡糖诱导制备大豆抗毒素的方法，属于抗毒素制备领域。
背景技术
寡糖，或称低聚糖，是由2~10个相同或不同的单糖单位，通过糖苷键连接形成的直链或支链低度聚合糖。它的相对分子质量为200~2000Da，可以分为功能性寡糖和普通寡糖两大类。比如蔗糖、乳糖、麦芽糖等属于普通寡糖，它们可被机体消化吸收；而果寡糖、木寡糖、甘露寡糖等则属于功能性寡糖。人体胃肠道内没有水解这些寡糖的酶系统，它们不被消化吸收而直接进入大肠内优先为双歧杆菌所利用，是双歧杆菌的增殖因子。因此，功能性寡糖是指具有特殊的生理学功能，特别是不被人和动物肠道吸收并能促进双歧杆菌的增殖、有益于肠道健康的一类寡糖。
近年来，寡糖由于其功能的多样性和独特性，越来越引起人们重视并得到迅速发展，在食品、饲料、医药、农业等领域具有广阔的应用前景。复合寡糖是指两种或者多种不同的寡糖组合而成的寡糖。目前，常见的复合寡糖大多是由几种寡糖复配而成，未见同时生产复合寡糖方面的公开报道。
大豆抗毒素是Keen等人在给大豆下胚轴接种大豆疫霉菌时发现并确认的具有抗菌活性的物质。大豆抗毒素是大豆中主要的植物抗毒素，当大豆在受到外源压力刺激时会大量积累。大豆抗毒素是能够与雌激素受体相结合的抗雌激素物质，进而抑制雌激素诱导的肿瘤进程。大豆抗毒素在治疗妇女乳腺癌和子宫癌方面具有很好的疗效。大豆抗毒素在调节血糖和血脂新陈代谢方面有显著功效。
发明内容
本发明主要解决的技术问题：针对目前制备大豆抗毒素多是以硝酸银作为诱导剂进行诱导制备，但其诱导过程中诱导温度、湿度等条件比较苛刻，且大豆抗毒素的诱导产率低，诱导时间长导致大豆腐烂的问题，提供了一种利用魔芋复合寡糖作诱导剂，制备大豆抗毒素的方法，该方法以预处理后的魔芋为原材料，用复合酶进行酶解，酶解物经高速离心后收集上清液浓缩得复合寡糖，并以寡糖作诱导剂，制备得到大豆抗毒素，本发明提供的制备方法，反应条件温和，大豆抗毒素产率高，诱导时间短，有效避免了大豆腐烂问题，降低生产成本。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）取1～2kg新鲜魔芋洗净，去皮，用刀切成1×1×1cm的小块，放入气流粉碎机进行粉碎，按固液比为1:1000将魔芋碎片和蒸馏水进行混合，放入高剪切混合乳化机中，以7000～8000r/min的转速剪切乳化3～5次，每次剪切5～15min；
（2）再将剪切后的魔芋放入超高压均质机，先在150～200MPa下均质5～10min，再于450～550MPa下均质处理2～3次，每次均质10～20min，用纱布过滤得到滤渣，放入恒温干燥器中以60～80℃的温度干燥1～2h，得魔芋粗粉；
（3）称取50～100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷发酵罐中，加入700～800mL蒸馏水，用质量浓度为9%的盐酸溶液调节pH至3～4，加入5～8g复合酶，用玻璃棒搅拌均匀后，用保鲜膜密封罐口，放置在恒温箱中，在40～50℃下酶解反应6～8h；
（4）将酶解产物移入沸水浴中，在95～100℃下灭活5～15min，再放入卧式离心机，以3000～5000r/min的转速离心30～50min，分离得到上清液，将其放入浓缩罐，减压至1200～1400Pa浓缩处理10～20min，得到的浓缩液即复合寡糖溶液；
（5）称取50～60g大豆，浸入200～300mL质量浓度为80%的乙醇溶液中灭菌5～7min，将灭菌后大豆放入1L烧杯中，加入500～600mL无菌水浸泡大豆4～6h，使大豆充分溶胀，将溶胀后的大豆分成两片子叶，向每片子叶上滴加0.5～0.6mL上述制得的复合寡糖溶液，放入恒温培养箱中，在25～35℃下诱导培养5～7天；
（6）将诱导培养后的大豆倒入研钵研磨后，按固液比为1:3将其和质量浓度为80%的乙醇溶液混合均匀，放置在超声振荡仪中，升温至50～60℃，超声提取1～2h后，移入高速离心机，以11000～13000r/min的转速离心10～20min，分离得到上清液经浓缩后即为大豆抗毒素浓缩液。
所述的复合酶为β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中两者质量比为3:2。
本发明的具体实施步骤：将大豆消毒后倒入无菌水浸泡直至大豆溶胀，将其分开成两片子叶，之后在每片子叶上滴加适量复合寡糖，恒温诱导后超声振荡醇提，浓缩制得大豆抗毒素，本发明的制备方法，诱导时间短比硝酸银诱导时间缩短20～30%，大豆抗毒素的产率提升15～25%，有效避免了因诱导时间长引起的大豆腐烂问题。
本发明的有益效果：本发明制备大豆抗毒素的方法，诱导时间短，诱导产率高，反应条件温和，提高了生产效率。
具体实施方式
取1～2kg新鲜魔芋洗净，去皮，用刀切成1×1×1cm的小块，放入气流粉碎机进行粉碎，按固液比为1:1000将魔芋碎片和蒸馏水进行混合，放入高剪切混合乳化机中，以7000～8000r/min的转速剪切乳化3～5次，每次剪切5～15min；再将剪切后的魔芋放入超高压均质机，先在150～200MPa下均质5～10min，再于450～550MPa下均质处理2～3次，每次均质10～20min，用纱布过滤得到滤渣，放入恒温干燥器中以60～80℃的温度干燥1～2h，得魔芋粗粉；称取50～100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷发酵罐中，加入700～800mL蒸馏水，用质量浓度为9%的盐酸溶液调节pH至3～4，加入5～8g复合酶，用玻璃棒搅拌均匀后，用保鲜膜密封罐口，放置在恒温箱中，在40～50℃下酶解反应6～8h；将酶解产物移入沸水浴中，在95～100℃下灭活5～15min，再放入卧式离心机，以3000～5000r/min的转速离心30～50min，分离得到上清液，将其放入浓缩罐，减压至1200～1400Pa浓缩处理10～20min，得到的浓缩液即复合寡糖溶液；称取50～60g大豆，浸入200～300mL质量浓度为80%的乙醇溶液中灭菌5～7min，将灭菌后大豆放入1L烧杯中，加入500～600mL无菌水浸泡大豆4～6h，使大豆充分溶胀，将溶胀后的大豆分成两片子叶，向每片子叶上滴加0.5～0.6mL上述制得的复合寡糖溶液，放入恒温培养箱中，在25～35℃下诱导培养5～7天；将诱导培养后的大豆倒入研钵研磨后，按固液比为1:3将其和质量浓度为80%的乙醇溶液混合均匀，放置在超声振荡仪中，升温至50～60℃，超声提取1～2h后，移入高速离心机，以11000～13000r/min的转速离心10～20min，分离得到上清液经浓缩后即为大豆抗毒素浓缩液。
所述的复合酶为β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中两者质量比为3:2。
实例1
取1kg新鲜魔芋洗净，去皮，用刀切成1×1×1cm的小块，放入气流粉碎机进行粉碎，按固液比为1:1000将魔芋碎片和蒸馏水进行混合，放入高剪切混合乳化机中，以7000r/min的转速剪切乳化3次，每次剪切5min；再将剪切后的魔芋放入超高压均质机，先在150MPa下均质5min，再于450MPa下均质处理2次，每次均质10min，用纱布过滤得到滤渣，放入恒温干燥器中以60℃的温度干燥1h，得魔芋粗粉；称取50g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷发酵罐中，加入700mL蒸馏水，用质量浓度为9%的盐酸溶液调节pH至3，加入5g复合酶，用玻璃棒搅拌均匀后，用保鲜膜密封罐口，放置在恒温箱中，在40℃下酶解反应6h；将酶解产物移入沸水浴中，在95℃下灭活5min，再放入卧式离心机，以3000r/min的转速离心30min，分离得到上清液，将其放入浓缩罐，减压至1200Pa浓缩处理10min，得到的浓缩液即复合寡糖溶液；称取50g大豆，浸入200mL质量浓度为80%的乙醇溶液中灭菌5min，将灭菌后大豆放入1L烧杯中，加入500mL无菌水浸泡大豆4h，使大豆充分溶胀，将溶胀后的大豆分成两片子叶，向每片子叶上滴加0.5mL上述制得的复合寡糖溶液，放入恒温培养箱中，在25℃下诱导培养5天；将诱导培养后的大豆倒入研钵研磨后，按固液比为1:3将其和质量浓度为80%的乙醇溶液混合均匀，放置在超声振荡仪中，升温至50℃，超声提取1h后，移入高速离心机，以11000r/min的转速离心10min，分离得到上清液经浓缩后即为大豆抗毒素浓缩液。
所述的复合酶为β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中两者质量比为3:2。
本发明的具体实施步骤：将大豆消毒后倒入无菌水浸泡直至大豆溶胀，将其分开成两片子叶，之后在每片子叶上滴加适量复合寡糖，恒温诱导后超声振荡醇提，浓缩制得大豆抗毒素，本发明的制备方法，诱导时间短比硝酸银诱导时间缩短20%，大豆抗毒素的产率提升15%，有效避免了因诱导时间长引起的大豆腐烂问题。
实例2
取1kg新鲜魔芋洗净，去皮，用刀切成1×1×1cm的小块，放入气流粉碎机进行粉碎，按固液比为1:1000将魔芋碎片和蒸馏水进行混合，放入高剪切混合乳化机中，以7500r/min的转速剪切乳化4次，每次剪切10min；再将剪切后的魔芋放入超高压均质机，先在180MPa下均质8min，再于500MPa下均质处理2次，每次均质15min，用纱布过滤得到滤渣，放入恒温干燥器中以70℃的温度干燥1h，得魔芋粗粉；称取80g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷发酵罐中，加入750mL蒸馏水，用质量浓度为9%的盐酸溶液调节pH至3，加入7g复合酶，用玻璃棒搅拌均匀后，用保鲜膜密封罐口，放置在恒温箱中，在45℃下酶解反应7h；将酶解产物移入沸水浴中，在98℃下灭活10min，再放入卧式离心机，以4000r/min的转速离心40min，分离得到上清液，将其放入浓缩罐，减压至1300Pa浓缩处理15min，得到的浓缩液即复合寡糖溶液；称取55g大豆，浸入250mL质量浓度为80%的乙醇溶液中灭菌6min，将灭菌后大豆放入1L烧杯中，加入550mL无菌水浸泡大豆5h，使大豆充分溶胀，将溶胀后的大豆分成两片子叶，向每片子叶上滴加0.5mL上述制得的复合寡糖溶液，放入恒温培养箱中，在30℃下诱导培养6天；将诱导培养后的大豆倒入研钵研磨后，按固液比为1:3将其和质量浓度为80%的乙醇溶液混合均匀，放置在超声振荡仪中，升温至55℃，超声提取1h后，移入高速离心机，以12000r/min的转速离心15min，分离得到上清液经浓缩后即为大豆抗毒素浓缩液。
所述的复合酶为β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中两者质量比为3:2。
本发明的具体实施步骤：将大豆消毒后倒入无菌水浸泡直至大豆溶胀，将其分开成两片子叶，之后在每片子叶上滴加适量复合寡糖，恒温诱导后超声振荡醇提，浓缩制得大豆抗毒素，本发明的制备方法，诱导时间短比硝酸银诱导时间缩短25%，大豆抗毒素的产率提升20%，有效避免了因诱导时间长引起的大豆腐烂问题。
实例3
取2kg新鲜魔芋洗净，去皮，用刀切成1×1×1cm的小块，放入气流粉碎机进行粉碎，按固液比为1:1000将魔芋碎片和蒸馏水进行混合，放入高剪切混合乳化机中，以8000r/min的转速剪切乳化5次，每次剪切15min；再将剪切后的魔芋放入超高压均质机，先在200MPa下均质10min，再于550MPa下均质处理3次，每次均质20min，用纱布过滤得到滤渣，放入恒温干燥器中以80℃的温度干燥2h，得魔芋粗粉；称取100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷发酵罐中，加入800mL蒸馏水，用质量浓度为9%的盐酸溶液调节pH至4，加入8g复合酶，用玻璃棒搅拌均匀后，用保鲜膜密封罐口，放置在恒温箱中，在50℃下酶解反应8h；将酶解产物移入沸水浴中，在100℃下灭活15min，再放入卧式离心机，以5000r/min的转速离心50min，分离得到上清液，将其放入浓缩罐，减压至1400Pa浓缩处理20min，得到的浓缩液即复合寡糖溶液；称取60g大豆，浸入300mL质量浓度为80%的乙醇溶液中灭菌7min，将灭菌后大豆放入1L烧杯中，加入600mL无菌水浸泡大豆6h，使大豆充分溶胀，将溶胀后的大豆分成两片子叶，向每片子叶上滴加0.6mL上述制得的复合寡糖溶液，放入恒温培养箱中，在35℃下诱导培养7天；将诱导培养后的大豆倒入研钵研磨后，按固液比为1:3将其和质量浓度为80%的乙醇溶液混合均匀，放置在超声振荡仪中，升温至60℃，超声提取2h后，移入高速离心机，以13000r/min的转速离心20min，分离得到上清液经浓缩后即为大豆抗毒素浓缩液。
所述的复合酶为β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中两者质量比为3:2。
本发明的具体实施步骤：将大豆消毒后倒入无菌水浸泡直至大豆溶胀，将其分开成两片子叶，之后在每片子叶上滴加适量复合寡糖，恒温诱导后超声振荡醇提，浓缩制得大豆抗毒素，本发明的制备方法，诱导时间短比硝酸银诱导时间缩短30%，大豆抗毒素的产率提升25%，有效避免了因诱导时间长引起的大豆腐烂问题。
Claims (2)
1.一种利用魔芋复合寡糖诱导制备大豆抗毒素的方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）取1～2kg新鲜魔芋洗净，去皮，用刀切成1×1×1cm的小块，放入气流粉碎机进行粉碎，按固液比为1:1000将魔芋碎片和蒸馏水进行混合，放入高剪切混合乳化机中，以7000～8000r/min的转速剪切乳化3～5次，每次剪切5～15min；
（2）再将剪切后的魔芋放入超高压均质机，先在150～200MPa下均质5～10min，再于450～550MPa下均质处理2～3次，每次均质10～20min，用纱布过滤得到滤渣，放入恒温干燥器中以60～80℃的温度干燥1～2h，得魔芋粗粉；
（3）称取50～100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷发酵罐中，加入700～800mL蒸馏水，用质量浓度为9%的盐酸溶液调节pH至3～4，加入5～8g复合酶，用玻璃棒搅拌均匀后，用保鲜膜密封罐口，放置在恒温箱中，在40～50℃下酶解反应6～8h；
（4）将酶解产物移入沸水浴中，在95～100℃下灭活5～15min，再放入卧式离心机，以3000～5000r/min的转速离心30～50min，分离得到上清液，将其放入浓缩罐，减压至1200～1400Pa浓缩处理10～20min，得到的浓缩液即复合寡糖溶液；
（5）称取50～60g大豆，浸入200～300mL质量浓度为80%的乙醇溶液中灭菌5～7min，将灭菌后大豆放入1L烧杯中，加入500～600mL无菌水浸泡大豆4～6h，使大豆充分溶胀，将溶胀后的大豆分成两片子叶，向每片子叶上滴加0.5～0.6mL上述制得的复合寡糖溶液，放入恒温培养箱中，在25～35℃下诱导培养5～7天；
（6）将诱导培养后的大豆倒入研钵研磨后，按固液比为1:3将其和质量浓度为80%的乙醇溶液混合均匀，放置在超声振荡仪中，升温至50～60℃，超声提取1～2h后，移入高速离心机，以11000～13000r/min的转速离心10～20min，分离得到上清液经浓缩后即为大豆抗毒素浓缩液。
2.根据权利要求1所述的一种利用魔芋复合寡糖诱导制备大豆抗毒素的方法，其特征在于：所述的复合酶为β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中两者质量比为3:2。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 213164 Changzhou Province, north of the New District, Jiangsu Biguiyuan, unit B, room 1601, room 32 Applicant after: Ding Yuqin Address before: 213164 Changzhou Province, north of the new North Industrial Park Road, one hundred environmental protection (Fan Qun drying equipment Co., Ltd.) Applicant before: Ding Yuqin |
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| COR | Change of bibliographic data | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160406 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |