CN105439723A - 一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种应用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其制备方法与应用，制备该解淀粉芽孢杆菌药肥的原料为：解淀粉芽孢杆菌菌粉，硫酸粘杆菌素，纳他霉素，L-丙氨酸，天冬酰胺，酵母浸粉，蛋白胨，磷酸氢二钠，氯化钠，葡萄糖，果糖，红糖。利用药肥中的纳他霉素与硫酸粘杆菌素抑制发酵过程中的病原真菌，酵母菌等真菌，与大肠杆菌，沙门氏菌等革兰氏阴性菌的生长，利用丙氨酸，果糖，天冬酰胺等芽孢萌发剂快速促进解淀粉芽孢的萌发，提高芽孢萌发率；从而实现可以在简陋的农场现场进行发酵扩繁操作，设施需求简单，用菌量少，成本低，现场发酵的发酵液菌含量高，活性好，具有防病促生，增产提质的效果，可作为微生物农药使用，效果稳定。

Description

一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用

技术领域

本发明涉及微生物肥料与微生物农药领域，特别是涉及一种应用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用。

背景技术

随着现有农业政策的发展，农场规模化，大型化的趋势进一步加强，芽孢杆菌是目前生物农药，生物肥料中研究最多的一种微生物，它具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力，其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖，有效抑制病菌生长，因此，在控制病害发生、促进植株生长，提高作物产量等方面显示出了广阔的应用前景。

解淀粉芽孢杆菌的抑菌谱较广，代谢产物较丰富，能够产生多种抑菌物质。解淀粉芽孢杆菌具有抑制植物病害的能力，可制成生物制剂用于植物花部、叶、枝干、根部以及果蔬釆后病害防治上;使用解淀粉芽孢杆菌的发酵液，对农作物进行喷施、拌种、灌根等，对植物都产生促进生长的功效。

在生物防治领域，解淀粉芽孢杆菌应用很多。尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)引起的枯萎病可以被解淀粉芽孢杆菌Q12抑制（权春善等2006），菌株JK-JS3对松树线虫具有杀灭活性，其活性物质是一种非蛋白类气体（朱丽梅等2009）。解淀粉LP-5菌株可以显著抑制梨黑斑病菌（Alternariaalternata）的生长，活性物质是一种20.3kD的蛋白（张宝俊等2010）。早起喷施Ba33菌株可以有效抑制烟草发生花叶病（TMV），枯斑数量明显减少（申莉莉等2010）。在抑制真菌方面，解淀粉芽孢杆菌对大多数常见的真菌病害都有一定的抑制作用。如水稻恶苗病（田洁萍等2010）、葡萄白腐病和小麦根腐病菌（葛平华等2012）、香蕉枯萎病（卢娟等2013）等。此外，它还能抑制油菜核盘菌菌核的形成（陈士云等2005）。本发明人分离的解淀粉芽孢杆菌可以防治多种土传病害与叶部病害，能起来促生防病作用。

虽然以芽孢杆菌为主制备的微生物农药产品不少，但总体说来，还存在包括研究开发与生产脱节，制剂化困难，产品质量稳定性差、生产工艺落后，产品一致性不高，生产企业规模小，应用推广难度大的问题，除些之外，目前芽孢杆菌以可湿性粉剂为主，这种剂型虽然便于储存和运输，但在生产应用中存在很多制约因子。如施用的可湿性粉剂中大部份以芽孢作为衡量产品中有效成分的惟一标准，若芽孢不能及时萌发，施用效果则不佳，如王倩利用枯草芽孢杆菌TR21防治巴西蕉枯萎病时，前期试验利用TR21菌株NB发酵液灌根和叶腋接种都能有效防治枯萎病，但是利用芽孢制备可湿性粉剂的灌根与叶腋效果却不理想，显示了去掉发酵液后的纯芽孢可能因为萌发困难和缺少发酵液中有效成分而使防效下降。此外，在生产实践中，随着作物的生长，需要定期不断的补充生防菌才能获得较好的防效，但现有可湿性粉剂价格一般较高，而且可湿性粉剂的溶解需要使用大量的水，而随着植物病害的蔓延，洁净水源也成为制约生防制剂使用的因子，与化学药剂不同的是芽孢溶解到水中并不能直接杀死水中的病原菌，因而如果使用已被病原菌污染的水体施用生防菌，还会促进病害的蔓延。

为了能够利于生产，运输，我们生产产品中的芽孢菌主要是以孢子的状态存在，但其应用于作物，土壤，水体中，都需要的主要是营养态细胞，如在水产上使用芽孢杆菌制剂，在使用前会经过活化，即使芽孢状态的芽孢杆菌转化为营养态细胞，但传统上的活化主要是加入一些红糖，或葡萄糖，培养基之类的营养物质诱导其生长繁殖，如芽孢杆菌制剂：红糖：水以1：1：10的比例进行“活化”，但传统上的“活化”存在以下几个方面的问题：

一是高营养培养基加水后易使空气与水中的酵母菌，乳酸菌繁殖迅速，消耗培养基中营养，迅速降低培养液中PH，抑制芽孢的萌发与生长；

二是芽孢萌发前期需要时间长，一般需要4小时，芽孢才会开始萌发，而此时，由于“活化”液中酵母菌与乳酸菌的大量繁殖导致PH下降迅速，已经可以抑制芽孢的萌发与繁殖，从而大大影响芽孢萌发；

三是高营养培养基中也易感染大肠杆菌，原著的植物病害菌等有害杂菌，导致施用后效果差仍致有反作用；

四是芽孢菌用量大，效果不稳定。

然而到目前为止还没有公开过有关一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好控制杂菌与促进芽孢快速萌发的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用的相关技术。

发明内容

为了克服现有技术的缺点，本发明提供一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好控制杂菌与促进芽孢快速萌发的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用，具体说是提供一种可应用于农场现场发酵扩繁，利用纳他霉素与多粘菌素抑制病原真菌，酵母菌等真菌与大肠杆菌，沙门氏菌等革兰氏阴性菌的生长，利用丙氨酸，果糖，天冬酰胺等芽孢萌发剂，能快速促进芽孢的萌发，提高芽孢萌发效率，减少芽孢萌发时间，从而快速使解淀粉芽孢杆菌繁殖而占据优势菌种，而更好的抑制其他的杂菌与有害菌。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥，制备该解淀粉芽孢杆菌药肥的原料为：解淀粉芽孢杆菌菌粉50-200份，硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-2份，L-丙氨酸3-40份，天冬酰胺5-40份，酵母浸粉50-200份，蛋白胨50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯化钠1-10份，葡萄糖20-200份，果糖20-50份，红糖20-200份。

为了达到上述目的，用于农场现场发酵的解淀芽孢杆菌药肥的制备方法包含以下步骤：

先将硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-2份，L-丙氨酸3-40份，天冬酰胺5-40份，酵母浸粉50-200份，蛋白胨50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯化钠1-10份，葡萄糖20-200份，果糖20-50份，红糖20-200份，放置密封搅拌罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再将解淀粉芽孢杆菌菌粉50-200份加入搅拌罐中搅拌均匀后，分装，抽真空包装，即得到用于现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥。

其中，所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用，包括以下步骤：此解淀粉芽孢杆菌药肥在农场现场进行发酵的方法为：先将制备的解淀粉芽孢杆菌药肥加入其3-5倍重量的水润湿调匀，30分钟后再补足水，以达到解淀粉芽孢杆菌药肥与水的比例为1：10至1：30的比例，调PH至8-8.2后，开始培养，前12小时每分钟通气量液气比为1：0.6，12小时后通气量为1：1，培养温度为20-35℃，培养16-24小时后，即可得到现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液；

用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用是现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液在作物栽培中对土传病害，叶部病害的应用；

用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用是现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液在作物栽培中作为底肥、追肥和叶面肥以及穴施和拌种的应用；

其中，对于土传病害如烟草青枯病，黑胫病，西瓜枯萎病，黄瓜枯萎病等，将步骤制备的发酵液稀释500-800倍后采用灌根的方法进行防治，在移栽时和发病初期用药，每次用发酵液量为0.5-1公斤/亩；

其中，对于叶部病害如水稻稻瘟病，水稻纹枯病，草莓白粉病等，将步骤制备的发酵液稀释200-500倍采用喷雾的方法进行防治，在发病初期开始用药，每隔7天使用一次，共3-5次；

其中，作为底肥时，将步骤制备的发酵液与其他有机肥与化肥配合使用，每次用发酵液量为5-20公斤/亩；

其中，作为追肥时，将步骤制备的发酵液稀释500-1000倍灌根，每次用发酵液量为0.1-0.3公斤/亩；

其中，作为叶面肥，将步骤制备的发酵液稀释300-800倍叶面喷施，正反叶面全部喷湿为止，每次用发酵液量为0.3-0.8公斤/亩；

其中，用于拌种时，将步骤制备的发酵液稀释200-500倍，拌种2-10小时。

其中，所述的解淀粉芽孢杆菌菌粉的芽孢含量不低于100亿cfu/g。

其中，所述的一种用于农场现场发酵的芽孢药肥的各组份原料的水份含量低于5%。

其中，所述的解淀粉芽孢杆菌菌粉可采用现有技术，比如可湿性粉剂，普通菌粉，水分分散剂都可，本发明提供以下方法：

取出解淀粉芽孢杆菌菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至5L大三角瓶中，装液量为2L的LB培养基，37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过40亿/毫升，即可作为芽孢杆菌液体菌种接种至1000L发酵培养基，接种量为5%，开搅拌120r/min，每分钟通气量为液/气1：0.8，37℃培养16-24小时，待芽孢含量不低于80亿/毫升，即可结束发酵，加硅藻土喷雾干燥，水份含量低于5%，调节菌浓度为100亿/克，粉碎过100目即得到芽孢杆菌菌粉。其中所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；其中所述芽孢杆菌液体菌种培养基：玉米粉10g/L，可溶性淀粉20g/L，玉米浆粉10g/L，豆粕粉44g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，碳酸钙2.5g/L，pH7.2。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

该用于农场现场培养的解淀粉芽孢杆菌药肥中含有纳他霉素，纳他霉素是26种多烯大环内酯类抗真菌抗生素的一种，主要由3种链霉菌产生，分别是恰努加链霉菌(Streptomyceschattanovgensis)、纳塔尔链霉菌Streptomyxesnatalensis)和褐黄孢链霉菌(Streptomyxesgilvosporeus)，经发酵、提取、精制获得的具有广谱、双效的生物防腐剂。它既可以抑制各种霉菌、酵母的生长引起的食品腐败，又能抑制真菌毒素的产生，防止造成毒素型食物中毒。1996年，我国批准纳他霉素用于干酪、肉制品、月饼、糕点、果汁原浆以及易发霉的食品加工器皿的表面防腐。纳他霉素也被批准直接添加到发酵酒、酸奶和色拉酱中，限量为10mg/kg。纳他霉素对人体无毒，而且无致突变、致癌、致畸和致敏作用，并且很难被哺乳动物消化道吸收。给动物饲喂高剂量的纳他霉素，90%以上以原型及其分解产物随粪便排出。研究表明，自然条件下，微生物很难产生对纳他霉素的抗性。纳他霉素的临床医学应用范围也很广泛，可以用于抗皮肤、粘膜、阴道和肺部的真菌感染。纳他霉素是国际上唯一获得批准的抗真菌生物防腐剂，是一种高效、安全的新型生物防腐剂。纳他霉素是一种多烯烃大环内酯类抗真菌剂，多烯是一平面大环内酯环状结构，与细胞上甾醇化合物相互作用具有高度亲和性，由此引发细胞膜结构改变而破裂，导致细胞内容物的渗漏，使细胞死亡。但有些微生物如细菌的细胞壁及细胞质膜不存在这些甾醇化合物，所以纳他霉素对细菌没有作用。

本发明中用于农场现场培养的解淀粉芽孢杆菌药肥中含有粘杆菌素(Colistin)又名抗敌素、多粘菌素E。1950年，由日本小山康夫等从福岛县土壤中分离到一株多粘芽胞杆菌抗敌素变株(Bacilluspolymyxavarcolistin)培养液中产生的一种锁环状多肽抗生素。它与敏感菌胞浆膜中脂蛋白的游离磷酸盐相结合，使胞浆膜表面张力降低，通透性增加，导致胞浆膜失去屏障作用而使细胞内嘌岭、嘧啶、核苷酸等外漏而死亡，属杀菌类抗生素。粘杆菌素对大部分革兰氏阴性菌有较强的抗菌作用，如大肠杆菌、沙门氏菌、假单胞菌等，但对革兰氏阳性菌及真菌几乎无效。

本发明用于农场现场培养的解淀粉芽孢杆菌药肥中含有丙氨酸，天冬酰胺，果糖等芽孢萌发剂，自然界中芽孢萌发受外源营养物质的影响，这类营养物质被称之为“萌发剂”，通常情况下，芽孢和促进萌发的芽孢萌发剂混合后数秒钟之内，萌发剂快速跨过芽孢衣和皮层到达芽孢内膜的表面，与位于芽孢内膜上的受体蛋白相互作用，激发芽孢进入萌发状态，接着启动一连串萌发事件，之后的萌发过程不会因移走萌发剂而停止。

本发明中含有大量的酵母浸粉，蛋白胨，红糖，都是适合促进芽孢杆菌发酵繁殖的营养剂，一旦芽孢萌发则会快速促进芽孢杆菌的繁殖与倍增。

本发明中的解淀粉芽孢杆菌药肥中的解淀粉芽孢杆菌是从烤烟根际土壤中分离得到的具有效防治白粉病，烟草黑胫病，灰霉病，水稻稻瘟病，黄瓜枯萎病、番茄早疫病、甜椒炭疽病、西瓜菌核病、小麦赤霉病、西瓜枯萎病等防治多种病害的芽孢杆菌。

本发明采用上述方案的有益效果：解淀粉芽孢杆菌药肥与水先按1：3-1:5的比例进行润湿混合均匀，此时的芽孢萌发剂能充分与芽孢接触后，从而促使其快萌发，经过试验，30分钟后，芽孢萌发率已经达到75%以上，再补水至解淀粉芽孢杆菌菌肥与水先按1：10-1:30的比例，调节PH到8-8.2，通气开始培养，较高的PH下，在扩繁发酵前期能较好的抑制乳酸菌的生长，其中解淀粉芽孢杆菌药肥中含有的纳他霉素与多粘菌素能够较好的抑制水中与通入的空气中所含的酵母菌，病原真菌与大肠杆菌，沙门氏菌等有害菌的生长，而解淀粉芽孢杆菌药肥中的酵母粉，蛋白胨，红糖，都是适合促进芽孢杆菌发酵繁殖的营养剂，一旦芽孢萌发则会快速促进芽孢杆菌的繁殖与倍增。从而快速增加其芽孢杆菌的菌体含量，从而快速使芽孢杆菌繁殖而占据优势菌种，而更好的抑制其他的杂菌与有害菌。

因此，本解淀粉芽孢杆菌药肥在现场发酵所使用的水，空气，容器不需要进行消毒灭菌，能够在农场现场发酵培养过程中较好的抑制杂菌，达到现场培养较高浓度的解淀粉芽孢杆菌发酵液。本发明的用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥，生产工艺简单，现场发酵过程中可以在简陋的农场现场操作，设施需求简单，操作简单，易于实施，可批量生产和推广应用，用菌量少，成本低，现场发酵的发酵液菌含量高，活性高，具有防病促生，增产提质，可作为微生物农药与肥料使用，效果稳定。

具体实施方式

实施例1下面通过试验说明本发明现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥与传统的芽孢“活化”的优越性

试验组：硫酸粘杆菌素15份，纳他霉素1份，L-丙氨酸10份，天冬酰胺18份，酵母浸粉100份，蛋白胨100份，磷酸氢二钠2份，氯化钠2份，葡萄糖22份，果糖30份，红糖100份放置密封搅拌罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再将解淀粉芽孢杆菌菌粉100份加入搅拌罐中搅拌均匀后，取1kg做试验，先将解淀粉芽孢杆菌药肥加入4kg的水润湿调匀，30分钟后再补足水以达到解淀粉芽孢杆菌药肥与水的比例为1：20的比例(总共20kg的水)，调PH至8.2后，开始培养，前12小时每分钟通气量液气比为1：0.6，12小时后通气量为1：0.8，培养温度为20-35℃，培养24小时后即为现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液；

对照组：酵母浸粉100份，蛋白胨100份，磷酸氢二钠2份，氯化钠2份，葡萄糖22份，红糖100份，放置密封搅拌罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再将巨大芽孢杆菌菌粉100份加入搅拌罐中搅拌均匀后，取0.852kg做试验，先将对照组制备解淀粉芽孢杆菌药肥加入其4kg的水润湿调匀，30分钟后再补足水以达到解淀粉芽孢杆菌药肥与水的比例为1：20的比例（20kg的水），调PH至8.2后，开始培养，前12小时每分钟通气量液气比为1：0.6，12小时后通气量为1：0.8，培养温度为20-35℃，培养24小时后即为现场“活化”的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液；

在相同的培养条件下，检测其24小时培养过程中发酵液的pH，芽孢，活菌总数，杂菌数的变化情况如附图1，附图2，附图3所示。

从附图1中可以看出试验组的pH变化较慢，pH一直维持在7以上，而对照组的pH在8小时后就快速降低至5以下，到24小时后，pH降低至4以下，这时已经较适合酵母菌，乳酸菌的生长，较低的pH能抑制芽孢的萌发及生长。从附图2中可以明显看出，试验组的芽孢在4小时后，其芽孢萌发率已经达到了95%以上，而对照组的芽孢发酵24小时以后其芽孢萌发率才到50%左右；

从附图3中明显可以看到试验组的发酵24小时后，其总菌数约达到19亿CFU/ml，杂菌数检测后基本上低于0.1亿CFU/ml，而对照组的总菌含量约为12亿CFU/ml，但杂菌含量则达到了4.1亿CFU/ml。因此说明试验组加入防腐剂：硫酸粘杆菌素，纳他霉素，与芽孢萌发剂丙氨酸，天冬酰胺，果糖等就可以明显的抑制杂菌生长，促进行解淀粉芽孢杆菌的快速繁殖，其作用效果是非常显著的；

其中，附图1是试验组与对照现场扩培中pH的变化曲线；图1解淀粉芽孢杆菌药肥现场发酵的pH变化曲线；

其中，附图2是试验组与对照组残余芽孢的变化曲线；图2解淀粉芽孢杆菌药肥现场发酵残余芽孢变化曲线；

其中，附图3是试验组与对照组活菌总数与杂菌数的变化曲线；图3解淀粉芽孢杆菌药肥现场发酵总菌数与杂菌数的变化曲线。

实施例2

利用实施例1试验组生产的解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液在烤烟中作为药肥的效果

1．试验地点：湖南省隆回县滩头镇白居村某农户种植地

2．试验方法：烤烟品种：中烟99-10-1，共设2个处理，4次重复。试验面积16亩，外设保护行。试验组：芽孢杆菌药肥生产的发酵液+60%常规烤烟专用基肥(N-P2O5-K2O=10-10-25)即24公斤烤烟专用肥；解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液的亩用量为4公斤：烤烟移栽苗时，用解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液800倍液灌根与沾根各一次；缓苗后20天用解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液1000倍液灌第二次，然后连续每隔20天喷施第三次和第四次。CK(对照)：常规烤烟专用基肥，烤烟专用基肥的用量为40公斤/亩，施肥方法为底施，与试验组同时用清水灌根；

3．试验结果：

由于白居村的土地已经连续两年都种植烤烟，尽管每年也种一季晚稻，但其青枯病与黑胫病发病率较高且，试验组施用解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液后,株高、茎围、节距、有效叶数、最大叶面积均大于对照组，说明减少40%的复合肥的情况解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液可以有效改善烟株的农艺性状，促进烟株健壮生长。如表1所示施用的烟株青枯病与黑胫病发病率很低，且发病程度显著降低，而对照组则有明显的青枯病与黑胫病，使用链霉素与50%敌克松可湿性粉剂后也明显存在病害；

表1施用解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液对大田烟草对黑胫病与青枯病的防治效果

施用解淀粉芽孢杆菌药肥生产的发酵液后烟草提早成熟、提高品质，很大程度上提高烟叶的产量、均价、产值、上中等烟比例。从表2可以分析得出，试验示范区烟叶产量、产值、均价分别比对照区域高出60.4公斤/亩、1212.2元/亩、1.52元/公斤。减去增加的成本440元（其中人工360元），可净增772.2元/亩。

表2解淀粉芽孢杆菌药肥对烟草产量产值增收效果

处理	产量（公斤/亩）	产值（元/亩）	均价（元/公斤）
				对照区	196.4	2718.2	13.84
处理区	266.7	4043.2	15.16

实施例3

一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥，制备该解淀粉芽孢杆菌药肥的原料为：解淀粉芽孢杆菌菌粉100份，硫酸粘杆菌素12份，纳他霉素1份，L-丙氨酸20份，天冬酰胺15份，酵母浸粉100份，蛋白胨100份，磷酸氢二钠5份，氯化钠5份，葡萄糖50份，果糖40份，红糖60份；

其中，所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的制备方法为：先将硫酸粘杆菌素12份，纳他霉素1份，L-丙氨酸20份，天冬酰胺15份，酵母浸粉100份，蛋白胨100份，磷酸氢二钠5份，氯化钠5份，葡萄糖50份，果糖40份，红糖60份，放置密封搅拌罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再将解淀粉芽孢杆菌菌粉100份加入搅拌罐中搅拌均匀后，分装，抽真空包装，即得到用于现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥；

其中，所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用，包括以下步骤：此解淀粉芽孢杆菌药肥在农场现场进行发酵的方法为：先将权利要求2制备的解淀粉芽孢杆菌药肥加入其4倍重量的水润湿调匀，30分钟后再补足水，以达到解淀粉芽孢杆菌药肥与水的比例为1：20的比例，调PH至8.2后，开始培养，前12小时每分钟通气量液气比为1：0.6，12小时后通气量为1：1，培养温度为20-35℃，培养16-24小时后，即可得到现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液。

实施例4

利用农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥在田间对植物病害的防治作用

利用农场现场发酵好的解淀粉芽孢杆菌发酵液分别对西瓜枯萎病，水稻稻瘟病，草莓白粉病，黄瓜枯萎病等病害的作物，进行了初步的田间药效试验。对于根部病害（如烟草黑胫病，西瓜枯萎病，黄瓜枯萎病等），将菌剂稀释500-1000倍后采用灌根的方法进行防治（在移栽时和发病初期用药），总用农场现场发酵好的解淀粉芽孢杆菌发酵液为1公斤/亩。对于叶部病害（如水稻稻瘟病，草莓白粉病等），将菌剂稀释300-500倍采用喷雾的方法进行防治，在发病初期开始用药，每隔7天使用一次，共3-5次。观察并统计作物的发病率或病指。施用的效果见表3，其中空白是指作物不采取任何防治措施。从表3中可以看到，不管是根部病害还是叶部病害，现场发酵的菌液对各种病害的防治效果是很显著的。

表3农场现场发酵好的解淀粉芽孢杆菌发酵液在田间对植物病害的防治作用

Claims (5)

1.一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥，其特征在于，制备该解淀粉芽孢杆菌药肥的原料为：解淀粉芽孢杆菌菌粉50-200份，硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-2份，L-丙氨酸3-40份，天冬酰胺5-40份，酵母浸粉50-200份，蛋白胨50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯化钠1-10份，葡萄糖20-200份，果糖20-50份，红糖20-200份。

2.根据权利要求1所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥，其特征在于，其制备方法为：先将硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-2份，L-丙氨酸3-40份，天冬酰胺5-40份，酵母浸粉50-200份，蛋白胨50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯化钠1-10份，葡萄糖20-200份，果糖20-50份，红糖20-200份，放置密封搅拌罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再将解淀粉芽孢杆菌菌粉50-200份加入搅拌罐中搅拌均匀后，分装，抽真空包装，即得到用于现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥。

3.根据权利要求1所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用，其特征在于，包括以下步骤：此解淀粉芽孢杆菌药肥在农场现场进行发酵的方法为：先将权利要求2制备的解淀粉芽孢杆菌药肥加入其3-5倍重量的水润湿调匀，30分钟后再补足水，以达到解淀粉芽孢杆菌药肥与水的比例为1：10至1：30的比例，调PH至8-8.2后，开始培养，前12小时每分钟通气量液气比为1：0.6，12小时后通气量为1：1，培养温度为20-35℃，培养16-24小时后，即可得到现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液；

用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用是现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液在作物栽培中对土传病害，叶部病害的应用；

用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用是现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液在作物栽培中作为底肥、追肥和叶面肥以及穴施和拌种的应用；对土传病害，叶部病害的应用；

其中，对于土传病害如烟草青枯病，黑胫病，西瓜枯萎病，黄瓜枯萎病等，将步骤制备的发酵液稀释500-800倍后采用灌根的方法进行防治，在移栽时和发病初期用药，每次用发酵液量为0.5-1公斤/亩；

其中，对于叶部病害如水稻稻瘟病，水稻纹枯病，草莓白粉病等，将步骤制备的发酵液稀释200-500倍采用喷雾的方法进行防治，在发病初期开始用药，每隔7天使用一次，共3-5次；

其中，作为底肥时，将步骤制备的发酵液与其他有机肥与化肥配合使用，每次用发酵液量为5-20公斤/亩；

其中，作为追肥时，将步骤制备的发酵液稀释500-1000倍灌根，每次用发酵液量为0.1-0.3公斤/亩；

其中，作为叶面肥，将步骤制备的发酵液稀释300-800倍叶面喷施，正反叶面全部喷湿为止，每次用发酵液量为0.3-0.8公斤/亩；

其中，用于拌种时，将步骤制备的发酵液稀释200-500倍，拌种2-10小时。

4.根据权利要求1所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥，其特征在于，所述的解淀粉芽孢杆菌菌粉的芽孢含量不低于100亿cfu/g。

5.根据权利要求1所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥，其特征在于，所述的各组份原料的水份含量低于5%。