CN105434326A - 一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用，所述精华素含有浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物，所述浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比为(3～9)g：(2～6)g：(1～5)g：(1～3)g：(1～3)g。本发明精华素及其化妆品全面作用于各种脂肪细胞，促进脂肪分解、防止脂肪的堆积，改善局部微循环障碍、消除水肿及缓解腿部疲劳和沉重感，从而达到显著的保湿、瘦身及局部瘦身的效果。

Description

一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，特别是涉及一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用。
背景技术
常言说:“万病肥是首，百病胖为先”。1997年WHO正式宣布:肥胖是一种疾病。因为，随着人的体重直线上升，高血压、糖尿病、冠心病、胆石症、脂肪肝和各种肿瘤会悄然造访。因此肥胖将是危害人们健康的大敌，研究肥胖的原因和科学的减肥方法已引起人们的高度重视。肥胖表现为脂肪细胞数量的增加或体积的增大，近年来的研究显示，脂肪细胞亦存在凋亡现象，故诱导脂肪细胞凋亡是控制机体脂肪组织堆积、预防肥胖及相关疾病的重要措施之一。
脂肪根据颜色的不同，可分为白色脂肪、棕色脂肪、米黄色脂肪，在体重正常的人类中，白色脂肪的含量可占到总体重的20％-25％。研究表明，天然存在的植物化学物可诱导前体和成熟脂肪细胞凋亡，且植物化学物诱导前体和成熟脂肪细胞凋亡作用大多与激活线粒体凋亡途径有关，而线粒体主要存在于棕色脂肪和米色脂肪中。现有技术中对该类植物化学物已有一些研究，例如申请号为CN200710007079.0的中国专利，公开了一种含有艾草叶、野菊花、灵芝、臧红花等中草药的瘦身膏用组合物，其通过燃烧分解脂肪从而达到瘦身目的。诸如此类的现有技术，其虽然具有一定的瘦身效果，但其主要作用于人体的棕色脂肪或米色脂肪，对占到总体重的20％-25％的白色脂肪并无作用，导致其瘦身效果并不明显或尽如人意。
发明内容
基于此，本发明为解决上述问题，提供一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用，得到的精华素对人体白色脂肪、棕色脂肪、米黄色脂肪能同时起到分解的作用。
解决上述技术问题的具体技术方案如下：
本发明提供一种含有浮游生物的精华素，所述精华素含有浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物，所述浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比为(3～9)g：(2～6)g：(1～5)g：(1～3)g：(1～3)g。
浮游生物提取物可通过促进解耦联蛋白的表达，刺激白色脂肪褐变，加速机体生热过程，促进脂肪分解；啤酒花提取物可以抑制脂肪细胞甘油三脂生成以及诱导3T3-L1成熟脂肪细胞凋亡；小米椒果提取物一方面通过降低能量摄取、降低脂肪组织含量及血中甘油酯水平，防止脂肪堆积，另一方面通过活化caspase(蛋白酶)途径，诱导3T3-L1前脂肪细胞凋亡，防止脂肪堆积，此外还可以促进局部血液循环；假叶树根提取物一方面可收缩毛细血管，使血液循环加速，改善局部微循环障碍，去除脂肪团和橘皮组织，另一方面使毛细血管中的α-肾上腺素分泌增多，发挥抗水肿和抗炎功效；毛果一枝黄花提取物可通过改善毛细血管韧性，降低血管渗透性，从而消除水肿及缓解腿部疲劳和沉重感；假叶树根提取物和毛果一枝黄花提取物对于身体局部尤其是腿部因微循环障碍或水肿引起的脂肪堆积有积极的改善作用的。
研究表明不同质量比的植物化学物质之间存在协同作用，本发明精华素经过发明人大量试验研究发现，精华素所含的活性成分：浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物以质量比为(3～9)g：(2～6)g：(1～5)g：(1～3)g：(1～3)g进行配比时，其对脂肪的分解作用显著。
进一步地，所述浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比为5g：4g：3g：2g：2g。
进一步地，所述浮游生物提取物提取自定鞭金藻，定鞭金藻又称为土栖藻或普林藻。
所述浮游生物可优先选自定鞭金藻目、等边金藻目、颗石藻目、棕囊藻目、巴夫藻目，如绿色巴夫藻、小定鞭金藻、三毛金藻、钙板金藻、叉鞭金藻、球形棕囊藻等，研究表明此类浮游生物均有相似药理作用。
本发明还提供该精华素在制备化妆品中的应用。
进一步地，所述精华素作为具有促进脂肪分解、消除水肿、缓解腿部疲劳作用的有效成分添加在瘦腿化妆品中。
本发明的另一目的在于提供一种化妆品，所述化妆品包括有1～11wt％的上述精华素，余量为化妆品中其他添加剂及其组合。
进一步地，上述化妆品为一种瘦腿霜，所述瘦腿霜包括下述重量百分比的组分：
本发明所述的精华素：1～11wt％，
甲基葡糖倍半硬脂酸酯：0.8～1.8wt％，
PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯：0.3～1.4wt％，
鲸蜡硬脂醇：1～3wt％，
小麦胚芽油：1～4wt％，
甜扁桃油：2～4wt％，
肉豆蔻酸异丙酯：2～4wt％，
环五聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷：2～4wt％，
生育酚(维生素E)：0.1～1wt％，
丙二醇：3～7wt％，
黄原胶：0.02～0.11wt％，
丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物：0.1～1.0wt％，
丙烯酸(酯)类/异癸酸乙烯酯交联聚合物：0.08～0.25wt％，
咖啡豆提取物:2～6wt％，
氢氧化钾：0.2～0.9wt％，
细小裸藻多糖、水解胶原：0.5～1.5wt％，
北美金缕梅提取物：2～7wt％，
香兰基丁基醚：0.05～0.2wt％，
苯氧乙醇：0.1～0.4wt％，
对羟基苯乙酮：0.1～0.5wt％，
1,2-己二醇：0.1～0.5wt％，
去离子水：余量。
进一步地，所述瘦腿霜包括下述重量百分比的组分：
本发明所述的精华素：8wt％，
甲基葡糖倍半硬脂酸酯：1.2wt％，
PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯：0.8wt％，
鲸蜡硬脂醇：2wt％，
小麦胚芽油：3wt％，
甜扁桃油：3wt％，
肉豆蔻酸异丙酯：3wt％，
环五聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷：3wt％，
生育酚(维生素E)：0.5wt％，
丙二醇：5wt％，
黄原胶：0.08wt％，
丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物：0.4wt％，
丙烯酸(酯)类/异癸酸乙烯酯交联聚合物：0.15wt％，
咖啡豆提取物:4wt％，
氢氧化钾：0.55wt％，
细小裸藻多糖、水解胶原：1wt％，
北美金缕梅提取物：5wt％，
香兰基丁基醚：:0.15wt％，
苯氧乙醇：0.3wt％，
对羟基苯乙酮：0.4wt％，
1,2-己二醇：0.4wt％，
去离子水：余量。
本发明精华素将浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物以特定的质量比合理配伍，综合运用各种诱导脂肪细胞凋亡的作用机制，全面作用于各种脂肪细胞，促进脂肪分解、防止脂肪的堆积，改善局部微循环障碍、消除水肿及缓解腿部疲劳和沉重感，从而达到显著的瘦身及局部瘦身的效果。本发明精华素即可以单独涂布在皮肤上使用或用带状包裹材料包裹于皮肤表面使用或先使瘦身部位温度升高，再在相应部位皮肤上涂布该精华素，然后用带状包裹材料包裹于皮肤表面使用等，也可以作为有效成分添加于瘦身化妆品中使用，或是作为具有促进脂肪分解、消除水肿、缓解腿部疲劳作用的有效成分添加在瘦腿化妆品中使用。
具体实施例
以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。
下述实施例中所述的“环五聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷”是指环五聚二甲基硅氧烷和环己硅氧烷的混合物，；所述的“细小裸藻多糖、水解胶原”是指细小裸藻多糖和水解胶原的混合物，。
实施例1
本实施例一种精华素a，其活性成分包括下述重量的原料：
浮游生物提取物3g、啤酒花提取物2g、小米椒果提取物2g、假叶树根提取物1g、毛果一枝黄花提取物1g,将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得，所述浮游生物提取物提取自等边金藻及叉鞭金藻。
实施例2
本实施例一种精华素b，其活性成分包括下述重量的原料：
浮游生物提取物5g、啤酒花提取物4g、小米椒果提取物3g、假叶树根提取物2g、毛果一枝黄花提取物2g，将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得，所述浮游生物提取物提取自定边金藻。
实施例3
本实施例一种精华素c，其活性成分包括下述重量的原料：
浮游生物提取物9g、啤酒花提取物6g、小米椒果提取物5g、假叶树根提取物3g、毛果一枝黄花提取物3g，将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得，所述浮游生物提取物提取自三毛金藻、钙板金藻及绿色巴夫藻。
对比例1
本对比例一种精华素d，其活性成分包括下述重量的原料：
浮游生物提取物5g、啤酒花提取物1g、小米椒果提取物6g、假叶树根提取物4g、毛果一枝黄花提取物0.5g，将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得，所述浮游生物提取物提取自定鞭金藻及等边金藻。
实施例4本发明精华素对前脂肪细胞凋亡作用评价
一、实验目的：测定实施例1～3及对比例1所得的精华素对前脂肪细胞凋亡作用。
二、实验材料
1、实验样品及试剂：实施例1～3及对比例1所得的精华素a、b、c、d；I型胶原酶、牛血清蛋白、MTT(四唑盐)、DMSO(二甲基亚砜)、DMEM/F12培养基等，均购于上海优思生物技术有限公司；本发明精华素溶液：将实施例1～3及对比例1所得的精华素分别取1g溶于四蒸水，定容至100mL，配成母液，过滤除菌分装于-20℃储存，临用时用10％血清DMEM/F12培养液稀释为所需浓度的实验处理培养液。将精华素b分别配置成10mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L四种不同浓度的实验处理培养液，精华素a、c、d分别配制成100mg/L浓度的实验处理培养液。
PBS溶液：8.00gNaCl，0.20gKCl，0.20gKH2PO4,3.96gNa2HPO4·12H2O，用四蒸水定容至1L；
无血清DMEM/F12培养液：10g/LDMEM/F12培养基，四蒸水，100u/mL青霉素，100u/mL链霉素，3.7g/LNaHCO3；
I型胶原酶消化液：无血清DMEM/F12培养液，20g/L牛血清蛋白，1g/LI型胶原酶；
10％血清DMEM/F12培养液：10g/LDMEM/F12培养基，四蒸水，100u/mL青霉素，100u/mL链霉素，3.7g/LNaHCO3；
红细胞裂解液：8.219g/LNH4Cl,1.0g/LKHCO3，0.0292g/LEDTA；
MTT溶液：250mgMTT溶于50mLPBS溶液，搅拌30min后用0.22um微孔滤器过滤除菌，分装于4℃保存，有效期为两周。
2、实验动物：1-7日龄仔猪，购自杨凌光明猪场。
三、实验步骤
(1)处死仔猪，1-5％(v/v)新洁尔灭浸泡消毒，无菌状态下取出颈部脂肪组织，用含高浓度双抗的PBS清洗3次，剪成1mm3大小的组织块；
(2)组织块移入青霉素小瓶，加入2倍体积的I型胶原酶消化液，恒温37℃消化60-90min，振荡频率为40r/min；
(3)加10％血清DMEM/F12培养液终止消化，然后依次过孔径70目和200目不锈钢细胞筛；
(4)滤液收集到10mL离心管，2000r/min离心10min，弃上清液；
(5)加5mL红细胞裂解液，用弯头吸管吹打均匀，室温静置10min，1000r/min离心5min，弃上清液；
(6)加5mL无血清DMEM/F12培养液，用弯头吸管吹打均匀，1000r/min离心5min，弃上清液。重复操作两次；
(7)加入适量10％血清DMEM/F12培养液，吹打均匀，制成细胞悬液，吸取少量细胞悬液滴片，在光学显微镜下计计数板四角大方格的细胞数，细胞密度以如下公式计算：细胞数/mL＝(4大格细胞数之和/4)×104；
(8)分别以6×104/cm2密度将细胞接种于96孔，各孔分别加200μL10％血清DMEM/F12培养液，置于37℃、5％CO2培养箱培养，96孔培养板接种1天后分别更换为不同的实验处理培养液，之后每2天换培养液。
(9)培养10天后，每孔加入10μLMTT，37℃条件下继续培养4小时，终止培养，小心弃去培养液，每孔加入150μLDMSO，恒温摇床上振荡10min，选择波长490，以经过相同处理的空白孔为调零值，使用酶联检测仪测定各孔吸光度A值。
四、实验结果
MTT比色是一种检测细胞生长的方法，已广泛应用于检测细胞增殖，吸光度与细胞增殖程度正相关。
表1MTT比色结果
结果分析：由以上表1可知，精华素a、b、c、d对前脂肪细胞增殖均有一定的抑制作用，但精华素a、b、c对前脂肪细胞增殖的抑制作用明显优于精华素d，且随着精华素各个活性成分质量比的增大其对前脂肪细胞增殖的抑制作用也增强，但当浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比高于5:4:3:2:2时，其对前脂肪细胞增殖的抑制作用差异不大，而同一精华素随着其添加量的增加，其对前脂肪细胞增殖的抑制作用也增强，但当其添加浓度从100mg/L增加至200mg/L时，其对前脂肪细胞增殖的抑制作用差异并不显著，由此可知，本发明精华素对前脂肪细胞增殖的抑制作用依赖各个活性成分的质量比和使用时所添加的浓度，但并不是意味着其含有的活性成分的质量比或其使用时所添加的浓度越高越好，达到本发明所规定的范围值时，可达到一个相对饱和值，而超过或不在本发明所规定的范围值时，其对前脂肪细胞增殖的抑制作用反而下降。
实施例5本发明精华素对脂肪细胞脂解作用评价
脂肪组织中的甘油三酯在一系列脂肪酶的作用下，分解生成甘油和脂肪酸，并释放入血供其他组织利用，本实验通过测定释放到培养液中甘油的量对本发明精华素对脂肪细胞脂解作用进行评价。
一、实验目的：测定实施例1～3及对比例1所得的精华素对脂肪细胞脂解作用。
二、实验材料
1、实验样品及试剂：
TRIzoI总RNA提取试剂盒(天为时代)，TG试剂盒(中生北控)，TaqDNA聚合酶(MBI)，反转录试剂盒(MBI)，DNAlandermarker(MBI)，DEPC(MBI)，胰蛋白酶(Gibco)，牛血清白蛋白，油红O工作液，TBE缓冲液，溴酚蓝溶液，EB溶液，琼脂糖等。
胰蛋白酶溶液:0.25g胰蛋白酶溶解于100ml灭菌PBS中，过滤除菌，4℃保存。
分化诱导培养液:100nmo1/L重组牛胰岛素、氢化可的松50ng/ml、转铁蛋白10ug/ml的无血清培养液。
油红O原液:0.5g油红O，溶于100ml异丙醇，60℃过夜，自然冷却，中性滤纸过滤，常温保存。
油红O工作液:临用时取6ml油红O原液4ml双蒸水，过滤后使用。
DEPC水:1m1DEPC溶于99m1四蒸水中，高压灭菌后使用。
溴化乙啶(EB)溶液:100mg溴化乙啶溶于100m1灭菌双蒸水中，4℃或室温保存。
10×TBE缓冲液储存液:Tris108.99g、硼酸55.62g,EDTA29.23g溶于1000m1双蒸水中，PH8.0-8.2，高压灭菌，4℃或室温保存。
1×TBE缓冲液应用液:取10×TBE加9倍体积的去离子水用于电泳缓冲液。
溴酚蓝溶液:0.25g溴酚蓝溶解于100m1灭菌双蒸水中，4℃或室温保存。
琼脂糖凝胶:0.24g琼脂糖于30m11×TBE中，微波炉中加热溶解，当溶液温度降至60℃加入溴化乙啶使其终浓度为0.5ug/ml。
紫外分光光度计、甘油检测试剂盒，其他试剂及样品同实施例4中所述；
2、实验动物
参见实施例4；
三、实验方法
1、脂肪细胞原代培养
猪前体脂肪细胞分离后同时接种于24孔培养板中，24孔培养板接种细胞24小时换为分化诱导培养液，培养7天后换为对应浓度的实验处理培养液，处理24小时后收集培养液储存于-70℃用于甘油释放量的测定，细胞提取总RNA，实验每组2个平行并重复三次。其他程序同实施例4。
2、培养液中甘油含量测定
甘油测定反应体系：
表2甘油测定体系
反应试剂及溶液 空白管(ml) 样品管(ml)
去离子水 2.1 1.1
待测样品溶液 - 1
溶液2(NADH/ATP/PEP/Tris/HCL) 0.2 0.2
溶液3(PK/L-LDH) 0.02 0.02
溶液4(GK) 0.02 0.02
反应总体积 2.34 2.34
反应步骤：灭菌试管中加入去离子水、待测样品溶液、溶液2和3→混合，室温反应至少6min→340nm测吸光度值，记录为A1→加入溶液4→混合，室温反应至少5min→测吸光度值，记录为A2→每隔2min读一次值，直至数值不再改变。
甘油浓度按以下公式计算:
C＝V×MW/ξ×d×ν×ΔAglycerol
其中:V＝最终体积(ml)，MW＝甘油摩尔质量(g/mol)，ξ＝NADH在340nm的消光系数＝6300(1×mol-1×cm-1)，d＝光程(cm)，ν＝样品体积(ml)。
3、脂肪细胞总RNA提取
使用TRIzoI(天为时代)试剂盒，按厂商提供的说明书提取细胞总RNA。
(1)吸出六孔培养板中的培养液，加入1mlTRIzoI，用取样器吹打几次；
(2)将匀浆样品在15-30℃放置15min，使核酸蛋白复合物完全分离；
(3)在高速冷冻离心机中4℃10,000×g离心10min，吸取上清液；
(4)加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min；
(5)4℃10,000×g离心15min。样品分为黄色有机相、中间层和无色水相三层，RNA主要在水相中，将水相转移到新管中；
(6)加入0.5ml异丙醇，混匀，室温放置10min；
(7)4℃10,000×g离心10min，弃上清液。离心后在管侧和管底可见RNA胶状沉淀；
(8)加1ml75％乙醇(用DEPC处理水配制)洗涤沉淀；
(9)4℃7500×g离心5min，弃上清液；
(10)室温放置晾干，按RNA提取量的多少，加25-200μl无RNAse的DEPC处理水，55-60℃溶解后，-70℃保存。
提取的RNA溶解在适量无RNAse的DEPC水中，在1％的含溴化乙啶的琼脂糖凝胶上电泳，紫外光下观察RNA完整性和有无降解及基因组DNA污染；以500倍DEPC水稀释，用紫外分光光度计测定波长260、280处的OD值，计算A260/A280值和RNA浓度，提取的无污染、无降解RNAA260/A280值为1.8-2.0。
4、cDNA第一链合成
从细胞提取的总RNA用RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(IBM)反转录得到cDNA。
反应体系如表3
表3反转录反应体系
反应步骤和条件：
在冰上依次加入反应物1、2、3共12ul→混合，在PTC-200热循环仪中70℃孵育5min，短暂离心收集液滴→置于冰上按顺序加入4、5、6反应液→混合，离心收集液滴，25℃孵育5min→置于冰上加入反转录酶，25℃孵育10min，42℃孵育60min→70℃加热10min终止反应，冰上冷却。合成的cDNA产物在-20℃保存。
5、PCR扩增
PCR反应体系：反应体积为25ul时的反应体系如表4。
表4PCR反应体系
反应试剂名称 体积(μl)
去离子水 14.37
引物(上游)(25μmol/L) 0.5
引物(下游)(25μmol/L) 0.5
MgCl2(10mmol/L) 5
cDNA产物 1.5
Taq酶(5u/μ1) 0.13
dNTPs(2mmol/L) 2.59 -->
10×(NH4)2S04 buffer 2.5
总体积 25
PCR引物参数见表5
表5PCR引物参数
注:S，上游引物；A，下游引物；
扩增条件为：95℃,8min→94℃,1min→53～55℃,1min→72℃,1min；30个循环→72℃,10min→4℃保存。
6、电泳及凝胶成像和定量分析
2.5μPCR扩增产物与微量溴酚蓝混合，在1％的含溴化乙啶的琼脂糖凝胶上电泳。同时加2000bp的DNA分子量ladderMarker，以确定扩增产物片段的大小。电泳分离的DNA片段在Wealtec凝胶成像系统拍照，并用Dophin-1D凝胶分析软件分析(WealtecCorp.)。结果用特异基因和β-actin电泳带吸光度的相对比值表示。
四、实验结果
1、实施例1～3及对比例1所得的精华素对脂肪细胞甘油释放量的影响见表6：
表6甘油释放量结果
2、实施例1～3及对比例1所得的精华素对HSL基因mRNA表达的影响见表7：
表7HSL基因mRNA表达结果
结果以平均值±SD表示，标有不同字母的平均值之间差异显著(P<0.05)。
结果分析：从表6和表7可以看出实施例1～3及对比例1所得的精华素可以使释放入培养液中的甘油三酯水解产物浓度升高以及使HSL的表达降低(这与脂肪细胞中水解甘油三醋的酶活性加强有关)，但实施例1～3所得精华素作用效果明显优于对比例1所得精华素的作用效果，且随着精华素各个活性成分质量比的增大其对脂肪细胞的脂解(加速脂肪的分解，抑制HSL基因的表达)作用也增强，而同一精华素随着其使用时添加量的增加，其对脂肪细胞的脂解的作用也增强。由此说明本发明精华素对脂肪有显著的分解作用。
实施例6含有本发明精华素化妆品的制备
将实施例1～3及对比例1所得的精华素a、b、c、d制备成化妆品,分别编号为A、B、B0、B1、B2、C、D，A组含有精华素a，B、B1、B2组含有精华素b，C组含有精华素c，D组含有精华素d，B0为空白对照组。
A、B、B0、B1、B2、C、D组化妆品的组分及其含量见表8、表9：
表8B、B0、B1、B2化妆品的组成及其重量百分比
表9A、B、C、D化妆品的组成及其重量百分比
实施例7临床功效性评价
一、实验目的
通过对比分析，评价实施例6所制得的化妆品保湿、促进脂肪分解、消除水肿、缓解腿部疲劳的功效。
二、实验方法
1、临床实验评价
征集BMI＝22-28肥胖的女性240人，随机分为8组，每组30人，平均年龄32.5岁，试验者身体健康，无遗传或过往病史、无不良生活习惯等。以实施例6所得化妆品为例进行疗效观察，观察试用者在测试前、测试后试验区域周径、体重、体内脂肪率的改善情况。
2、实验方法
在受试者大腿、手臂作为实验区域涂抹，涂抹量约为5g，适当力度按摩2-3min，早晚各一次，连续使用8周，受试者无需增加运动量和节食。同时还要注意观察化妆品的安全性，有无不良反应，如厌食、腹泻和乏力等。
3、评价方法
分别测量试用者在测试前和测试后试验区域周径、体重、体内脂肪率以作功效评价。大腿及手臂最大周径可用皮尺测量，以评价皮下脂肪的改善情况。另测试受试者的体重、体脂率的变化以作辅助评价。体重可用体重计直接测出。采用生物体电电阻法测定体脂率，对受试者必须始终使用同一台测量仪器。
周径变化率＝(测试后最大周径-测试前最大周径)/测试前最大周径*100％
体重变化率＝(测试后体重-测试前体重)/测试前体重*100％
体脂率变化率＝(测试后体脂率-测试前体脂率)/测试前体脂率*100％
4、实验结果
实验结果如下表：
表10脂肪分解效果值
表11受试部位干燥、水肿、腿部疲劳的改善程度
在试用者临床试验过程中均未见刺激性反应及其他不良反应。
结果分析：从表10和表11可以看出化妆品A、B、B1、B2、B0、C、D对受试者皮肤的保湿性、脂肪分解、水肿、腿部疲劳均有不同程度的改善作用，但A、B、B1、B2、C组化妆品的改善程度明显优于B0、D组(空白对照组、不在本发明精华素所含各组分的含量范围内的对照组)化妆品及某市售瘦身霜的效果。另外，从A、B、C组的结果数据可知，随着本发明精华素中所含浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比的增加，其对受试者皮肤的保湿性、脂肪分解、水肿、腿部疲劳改善效果加强，但并不是随着浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比的增大而无限增大，综合产品的作用效果及经济效益等考量因素，本发明精华素所含浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比在(3～9)：(2～6)：(1～5)：(1～3)：(1～3)范围内最佳；此外，从B、B1、B2、B0组结果数据可知，本发明精华素的保湿、促进脂肪分解、消除水肿、缓解腿部疲劳的功效是有浓度依赖性的，其功效和其在化妆品中的添加量在一定的范围内是呈正比的关系，但并不是随着其添加量增大而无限增大的，综合产品的作用效果及经济效益等考量因素，本发明精华素在化妆品中的添加量维持在1～11wt％较为合理。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种含有浮游生物的精华素，其特征在于，所述精华素含有浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物，所述浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比为(3～9)g：(2～6)g：(1～5)g：(1～3)g：(1～3)g。
2.根据权利要求1所述的精华素，其特征在于，所述浮游生物提取物、啤酒花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比为5g：4g：3g：2g：2g。
3.根据权利要求1或2所述的精华素，其特征在于，所述浮游生物提取物提取自定鞭金藻。
4.如权利要求1～3任一项所述的精华素在制备化妆品中的应用。
5.一种包含权利要求1或2所述精华素的化妆品，其特征在于，所述化妆品包括有1～11wt％的的精华素，余量为化妆品中其他添加剂及其组合。
6.一种包含权利要求1或2所述精华素的瘦腿霜，其特征在于，所述瘦腿霜包括下述重量百分比的组分：
精华素：1～11wt％，
甲基葡糖倍半硬脂酸酯：0.8～1.8wt％，
PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯：0.3～1.4wt％，
鲸蜡硬脂醇：1～3wt％，
小麦胚芽油：1～4wt％，
甜扁桃油：2～4wt％，
肉豆蔻酸异丙酯：2～4wt％，
环五聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷：2～4wt％，
生育酚(维生素E)：0.1～1wt％，
丙二醇：3～7wt％，
黄原胶：0.02～0.11wt％，
丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物：0.1～1.0wt％，
丙烯酸(酯)类/异癸酸乙烯酯交联聚合物：0.08～0.25wt％，
咖啡豆提取物:2～6wt％，
氢氧化钾：0.2～0.9wt％，
细小裸藻多糖、水解胶原：0.5～1.5wt％，
北美金缕梅提取物：2～7wt％，
香兰基丁基醚：0.05～0.2wt％，
苯氧乙醇：0.1～0.4wt％，
对羟基苯乙酮：0.1～0.5wt％，
1,2-己二醇：0.1～0.5wt％，
去离子水：余量。
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