JP2009286746A - 冬虫夏草菌セミタケを含む外用剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】コルディセプス(Cordyceps)属に属する菌類を含む外用剤。コルディセプス属に属する菌類としては、冬虫夏草、サナギタケ、又はセミタケを用いることができる。セミタケは特に好適な例である。コルディセプス属に属する菌類は、子実体の熱水抽出物として用いることが特に好ましい。熱水抽出物は、外用剤に、10ppm〜1000ppm、好ましくは25ppm〜500ppm、より好ましくは50ppm〜250ppmで含有させるとよい。
【選択図】なし
Description
卯 暁嵐; 中国経済真菌; pp. 629, 科学技術出版社, 東京 (1998) 傅 嵐; 陳 作紅; 虫草属真菌化学成分及薬理作用研究進展; 生命科学研究, 8、1-7 (2004) 清水大典; 原色冬虫夏草図鑑; pp. 24, 誠文堂新光社, 東京 (1994) 楊 柏松、大賀祥治; セミタケの栽培特性; Food Function, 3, (2008)
1)コルディセプス(Cordyceps)属に属する菌類を含む、外用剤;
2)メラニン生成に関連した疾患若しくは状態、又は肌荒れを処置するための、1)に記載の外用剤+
3)コルディセプス属に属する菌類が、冬虫夏草(Cordyceps sinensis)、サナギタケ(Cordyceps militaris (Vuill.) Fr.)、又はセミタケ(Cordyceps sobolifera(Hill.) Berk. et Br.)である、1)又は2)に記載の外用剤;
4)コルディセプス属に属する菌類の子実体の抽出物を含む、1)〜3)のいずれか1に記載の外用剤;
5)コルディセプス属に属する菌類の子実体の熱水抽出物を、10ppm〜1000ppm(好ましくは25ppm〜500ppm、より好ましくは50ppm〜250ppm)で含む、4)に記載の外用剤;
6)コルディセプス属に属する菌類を含む、メラニン生成抑制剤;
7)コルディセプス属に属する菌類、及びコルディセプス属に属する菌類を外用剤として用いる指針を含む、製品;
8)コルディセプス属に属する菌類を投与することを含む、メラニン生成に関連した疾患若しくは状態、又は肌荒れの処置方法。
9)コルディセプス属に属する菌類が、セミタケ KS-80(受領番号 FERM APー21569)である、2)に記載の外用剤。
10)受領番号 FERM APー21569として寄託された、セミタケ。
本明細書で「コルディセプス属に属する菌類」というとき、又はその具体例に言及するときは、特別な場合を除き、加工の有無、程度を問わず、それを原料とした抽出物、抽出物残滓、分画物、単離物、濃縮物、加工物、乾燥物を含む。
子実体の乾燥物に相当する量は、当業者であれば、本明細書の実施例等を参考にして、抽出物、抽出物残滓、分画物、単離物、濃縮物若しくは加工物、又は子実体の一部(例えば、菌糸)、その乾燥物、抽出物、抽出物残滓、分画物、単離物、濃縮物若しくは加工物等について、それぞれ求めることができる。
1. 培地調製及び子実体形成
1.1. 供試菌
セミタケ(Cordyceps sobolifera (Hill.) Berk. et Br.)の菌株は、九州大学農学部宮崎演習林で採取された子実体から単離された(九州大学保有菌株 KS-80)(図1)。種菌調製として、菌糸がポテトデキストロース寒天(PDA)培地上で、25℃、暗黒下の条件で14日間平面培養された。
培養基質として、玄米40g、卵黄20g、ペプトン2gと栄養液70ml(コーンスティープリカー:CSL 0.2%、MgSO4、0.05%、KH2PO4 0.2%)を混合し、三角フラスコ(300ml)に充填した。シリコ栓を施し、玄米に栄養液を吸収させるため冷蔵庫(5℃)に一晩放置した後、120℃、1.2kg/cm2で30分間蒸気滅菌した。
放冷された培地に、あらかじめPDA培地で培養しておいた種菌を直径5mmのコルクボーラーでディスクを抜き取り、3個を培地表面の中央部に接種した(後掲の文献5〜8参照)。
菌床は25℃、暗黒下で菌糸蔓延を行い、完熟後に17℃で一週間低温処理した。続いて、20℃、RH 90%の発生室においで蛍光灯を照射し(8時間/日)、図1に示すような子実体を得た(文献9〜13参照)。
セミタケ子実体を凍結乾燥し、ワーリングブレンダーで粉砕後、16メッシュパスの粉末を調製した。そして、10倍量の熱水で抽出処理(80℃、1時間)を行った。また対照として、シイタケ子実体(Lentinula edodes (Berk.) Sing.)の熱水抽出物を取り上げた。
子実体粉末試料について、タンパク質、ビタミン類、糖類、無機成分、アミノ酸などを測定した。分析方法は、食品分析法(文献14)に準じ、表1に示す方法で行った。
4.1. 美白作用
4.1.1. メラニン生成抑制
B16メラノーマ細胞を1.0×105cells/mlに調節し、24wellプレートに1mlずつ播種した。細胞を播種し、24時間、CO2インキュベーターで放置後、990μlのEMEM培地で培地交換し、2μlの試料DMSO溶液(抽出液を2%ジメチルスルフォキシド(DMSO)溶液2μlに添加したもの)を添加した。48時間後、同様の培地交換を行った。さらに24時間後、培地を除去し、1NのNaOH溶液1mlを添加し、細胞を溶解した。可溶化したメラニンの405nmの吸光度をプレートリーダーで測定することにより、メラニン生成を評価した。ポジティブコントロールとして、市販の美白化粧品に配合されているアルブチン及びコウジ酸を用いた。
細胞を播種し、24時間、CO2インキュベーターで放置後、990μlのEMEM培地で培地交換し、10μlのコウジ酸DMSO溶液を添加した。[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide](MTT)溶液(酸性イソプロパノール)を各wellにつき、50μlずつ添加して、CO2インキュベーター内で4時間培養した。培地を除去し、MTT溶解液を1mlずつ加え、遮光し一晩放置した。ウルトラソニックで超音波処理し、生成物を完全に溶解後、マイクロプレートリーダーで630nmを対照波長とし、570nmの吸光度を測定して細胞数の指標とした。
女性健常人顔面の皮膚表面形態について、レプリカ法を用いて肌のレプリカを採り、光学顕微鏡(20倍)にて観察した。皮紋の状態及び角層の剥離状態から肌荒れの状態を評価し、皮溝、皮丘の消失、広範囲の角層のめくれが認められるもの(評点1)、及び、皮溝、皮丘が不鮮明(評点2)と判断されたパネル(肌荒れパネル)各10名を選抜した。
得られた成績は、平均値±標準偏差(mean±S.D.)で表示し、群間比較をWilcoxon U-testで解析して危険率5%以下を有意差ありと判定した(p<0.05)。
1. 含有成分
セミタケには、下表に示すとおり、タンパク質と無機物が豊富に含有されていることが明らかになった。
肌の日焼け、シミの原因となるメラニン色素沈着は、紫外線照射により肌の基底層に存在するメラノサイトからメラニン色素が放出され沈着することで生じる。100ppmでは、アルブチンやコウジ酸よりもメラニン抑制作用が高いことが分かった(図2)。
3. 肌荒れ改善
レプリカ法による実使用試験をおこなった。結果を図4に示すが、セミタケ子実体抽出物は改善率89%となり、対照のイオン交換水塗布及びシイタケ抽出物塗布に対して有意に高い改善率を示した.
肌荒れと診断され対照群としてイオン交換水のみを塗布されたパネル(Cont)は、39%の改善率であった。これは保湿にともなう自然治癒によるものと推察される。シイタケ子実体でも41%と対照よりやや改善率が高かった。
5) 楊 柏松、成 漢功、大賀祥治; ツクツクボウシタケの生態と栽培特性; 日本きのこ学会誌, 14, 191-196 (2006)
6) 苑 貴華、呉 国山, サナギタケ生物学特性初探: 食用菌, 10, 10-11(1988)
7) 松本 繁: セミタケ菌の培養: 新昆虫, 12, 19-21 (1959)
8) 原田幸夫、秋山直司、城田安幸、ヨトウガ蛹を用いたサナギタケ(Cordyceps militaris) 子実体の人工培養: 日菌報, 36, 67-72 (1995)
9) 矢萩信夫、矢萩禮美子、高野文英: サナギタケ(Cordyceps militaris (L.: Fr.))とマルミノアリタケ(Cordyceps formicarum Kobayasi)の寒天培養における子嚢殻性子座形成について: 日菌報, 45, 15-19 (2004)
10) 李 晃、虫草人工栽培技術: pp. 31-62, 金盾出版社, 北京 (2001)
11) 陳 順志、呉 佩傑、蛹草瓶栽技術紹介: 食用菌, 12, 31-32 (1990)
12)聞 有権、蛹草高産栽培技術要点: 食用菌: 25, 37-38 (2003)
13) 苑 貴華、呉 国山: 蛹虫草生物学特性初探: 食用菌, 10, 8-10 (1988)
14) 堤 忠一: 一般成分及び関連物質, 「新食品分析法」(日本食品工業学会編集委員会編): pp. 1-118, 光琳, 東京 (1997)
15) 張 顕科、劉 文霞: 蛹虫草化学成分測定. 菌物系統: 16, 78-80 (1997)
16) 肖 建輝、梁 宗埼、劉 愛英: 虫草無性型及其相関真菌多糖的研究開発現状: 薬学報、37, 589-592 (2002)
17) 車 振明: 虫草多糖生物活性研究進展及其応用前景: 食用菌、26, 3-5 (2004)
18) 羅 玉秀: 冬虫夏草薬理作用研究現状: 中国食用菌: 22, 39-42 (2003)
19) 原 彰、冬虫夏草を正しく学ぼう: pp. 120, 碧天舎, 東京 (2004)
Claims (10)
- コルディセプス(Cordyceps)属に属する菌類を含む、外用剤。
- メラニン生成に関連した疾患若しくは状態、又は肌荒れを処置するための、請求項1に記載の外用剤。
- コルディセプス属に属する菌類が、冬虫夏草(Cordyceps sinensis)、サナギタケ(Cordyceps militaris (Vuill.) Fr.)、又はセミタケ(Cordyceps sobolifera(Hill.) Berk. et Br.)である、請求項1又は2に記載の外用剤。
- コルディセプス属に属する菌類の子実体の抽出物を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の外用剤。
- コルディセプス属に属する菌類の子実体の熱水抽出物を、10ppm〜1000ppm(好ましくは25ppm〜500ppm、より好ましくは50ppm〜250ppm)で含む、請求項4に記載の外用剤。
- コルディセプス属に属する菌類を含む、メラニン生成抑制剤。
- コルディセプス属に属する菌類、及びコルディセプス属に属する菌類を外用剤として用いる指針を含む、製品。
- コルディセプス属に属する菌類を投与することを含む、メラニン生成に関連した疾患若しくは状態、又は肌荒れの処置方法。
- コルディセプス属に属する菌類が、セミタケ KS-80(受領番号 FERM APー21569)である、請求項2に記載の外用剤。
- 受領番号 FERM APー21569として寄託された、セミタケ。
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