KR20170040659A - 고염 미생물의 발효 추출물을 포함하는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 고염 미생물의 발효 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명의 고염 미생물를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 조성물은 우수한 피부 개선, 항염, 자외선 차단 및 항산화 효과가 있으므로, 화장료 조성물로 사용될 수 있다.

Description

고염 미생물의 발효 추출물을 포함하는 조성물{Composition comprising fermented extract of Halophilic microorganism}
본 발명은 고염 미생물의 발효 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
미생물은 지구상 생체 중량의 약 60%를 차지할 뿐만 아니라 산소 생산량의 절반 이상을 책임지는 등의 기능적 다양성을 통해서 지구 생태의 핵심적인 위치를 차지하고 있을 뿐만 아니라 각종 생물 소재의 제공과 생태계 유지와 관련하여 인류에게는 없어서는 안 될 엄청난 경제적 가치를 제공하고 있다. 1992년 리우데자네이루에서 개최된 유엔 환경개발회의에서 "생물다양성 협약"의 체결로 전 세계적으로 생물 자원의 중요성 인식이 확산됨에 따라 다양한 생물 자원을 확보하고 고부가 가치의 생물 자원을 개발하기 위한 신종 미생물 탐색 노력이 한층 심화되고 있다[Omura, The search for bioactive compounds from microorganism, Springer-Verlag, Tokyo, 1992].
한편, 고염 미생물(호염성 미생물, halophile, halophilic microorganism)이란 생장하는데 염분을 필요로 하는 미생물로 고염분의 환경에서 존재하는 극한성 미생물이다.
고염 미생물은 6가지 유형의 로돕신 단백질(rhodopsin protein)을 가지고 있으며, 그 중 2가지 유형에 대한 매카니즘이 밝혀졌다. 밝혀진 첫 번째 유형의 로돕신 단백질은 세포막에 존재하며 이온농도를 맞추기 위해서 안으로 들어오는 염화이온(Cl-)을 밖으로 내보내주는 펌프 역할을 한다. 따라서 고염 미생물은 고염 환경에서 생존할 수 있다. 또한, 밝혀진 두 번째 유형의 로돕신 단백질은 빛 조사 시, 수소이온을 발생시켜 세포막 밖으로 수소이온을 보내는 동시에 ATP을 합성한다. 따라서 고염 미생물은 UV 조사 시 더 잘 자라는 것으로 보인다.
한편, 강한 UV를 조사할 경우 일반 미생물의 경우 DNA 손상이 있으나, 호염 미생물의 경우에는 DNA 회복 시스템이 발달되어 UV에 의한 DNA 손상이 일반 미생물에 비해 적은 것으로 보인다. 구체적으로, 자외선(UV)조사 후, DNA 회복 시스템이 활성화되고, 포토리아제(Photolyase) 효소에 의해 RNA 손상이 복구된다(S. Leuko et al., Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology 102 (2011) 140-145).
이러한 고염 미생물은 효소나 체외 형성 다당류의 생산, 제약 업계에 있어서 새로운 생리 활성 물질의 개발, 그리고 미생물에 의한 3차적 원유의 획득 과정 등의 측면에서 산업적인 가치를 가진다.
이와 같이, 고염 미생물은 다양한 분야에 응용 가능성이 있음에도 불구하고 충분한 연구가 진행되지 못하고 있다. 특히, 화장품 분야에서의 이용은 전무한 실정이다. 종래 바실러스(Bacillus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속 등 보편적으로 발효 화장료 조성물에 사용하는 미생물을 균주로 사용하여 약재를 발효하면, 자외선 보호 및 항염 효과까지 기대할 수 없다.
대한민국 공개특허 제10-2015-0077593호
따라서, 본 발명이 이루고자 하는 목적은 고염 미생물, 특히 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 미생물 및 이의 발효 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
따라서, 본 발명은 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시켜 약재의 피부 개선 또는 항산화 효과를 향상시키는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 피부 외용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주를 제공한다.
본 발명자들은 피부 개선 효과를 가지는 신규 공급원을 찾던 중, 높은 농도의 염분 환경에서도 서식할 수 있는 극한 미생물인 고염 미생물에 관심을 갖고 탐색한 결과, 피부 개선 효과를 갖는 균주를 발견하여 16S rRNA 핵산 서열을 분석하였다(서열번호 1).
그 결과, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주와 99.84%의 상동성을 갖는 신규한 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주임을 확인하여, 이를 할로아르쿨라 발리스모르티스 LG halophilic microorganism(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism) 균주로 명명하고 한국 미생물자원센터(KCTC)에 2015년 6월 3일자로 기탁하여 수탁번호 KCTC12830BP를 부여받았다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 고염(high-salt) 미생물의 일종으로, 상기 고염 미생물은 호염, 호염성(halophilic), 고염성 미생물 등 다양하게 호칭될 수 있는 고농도의 염분이 포함된 환경에서 생존할 수 있는 극한 미생물이다.
본 발명의 명세서에 있어서, 용어 "균주"는 미생물을 배양하여 얻어지는 균주, 균체, 균체 파쇄액, 포자, 이의 배양액, 배양 상등액, 이의 배양물의 건조물, 이의 배양물의 추출물 또는 이의 혼합물을 모두 포함한다.
본 발명의 명세서에 있어서, 용어 "균체"는 균주의 파쇄된 세포벽 분획, 사균, 또는 건조균을 모두 포함하는 의미이다. 배양액 중의 배양 배지를 제거하고 농축된 균체만을 회수하기 위해 원심분리 또는 여과과정을 거칠 수 있으며 이러한 단계는 통상의 기술자의 필요에 따라 수행할 수 있다. 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 냉동하거나 냉동 건조하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다.
본 발명의 명세서에 있어서, 용어 "배양물의 추출물"은 배양물을 다양한 용매를 이용해 다양한 생리활성물질이 포함되도록 추출한 것을 의미하며, 이에 한정되는 것은 아니지만, 물, 탄소수 1 내지 6의 다가알코올, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에틸아세테이트, 글리세린 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추출 용매를 이용하여 추출을 수행할 수 있다.
본 발명에서 상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis), 할로아르쿨라 마리스모르투이(Haloarcula marismortui), 할로아르쿨라 히스패니카(Haloarcula hispanica), 할로아르쿨라 자포니카(Haloarcula japonica), 할로아르쿨라 아르젠티넨시스(Haloarcula argentinensis), 할로아르쿨라 무코하타에이(Haloarcula mukohataei) 및 할로아르쿨라 쿼드라타(Haloarcula quadrata)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있고, 더욱 바람직하게는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있다.
본 발명에서 상기 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주는 고농도의 염분(염화나트륨)이 포함된 배지에서 배양될 수 있다. 상기 고농도의 염분은 100 내지 300 g/l의 염화나트륨일 수 있고, 더욱 바람직하게는 150 내지 250 g/l의 염화나트륨일 수 있다.
본 발명의 구체적 일 실시예에 따르면 상기 배지는, 예를 들어, Halophilic archaeal medium 일 수 있고, 액체 배지의 조성은 1L를 기준으로 이스트 추출물(yeast extract) 5g, 카사미노산(casamino acids) 5g, Na-glutamate 1g, KCl 2g, Na3-citrate 3g, MgSO4·7H2O 20g, NaCl 200g, FeCl2·4H2O 36mg, MnCl2·4H2O 0.36mg 을 포함할 수 있다.
본 발명자들은 종래 주로 이용되는 균주를 포함하는 조성물과 비교하여, 피부 개선 효과뿐만 아니라, 종래 균주를 포함하여 기대할 수 없었던 자외선 차단 효과, 항산화 및/또는 항염 효과까지 나타낸다는 놀라운 사실을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 명세서에 있어서, 용어 "약재"는 여러 가지 식물 중에서도 한약 또는 양약을 짓는 재료로 사용되는 식물을 의미한다. 따라서, 당업계에서 통상적으로 약재라고 알려진 식물을 포함하는 용어로서, 당업계에서는 약재인 식물과 약재가 아닌 식물을 구분하는 것은 용이하다.
본 발명에서 바람직하게 상기 약재는 감초(Glycyrrhiza glabra), 계피(Cinnamomum cassia), 고삼(Sophora angustifolia), 구기자(Lycium chinese), 동충하초(Cordyceps sinensis), 매실(Prunus mume), 목단피(Paeonia suffruticosa), 목향(Inula Helenium), 반하(Pinellia ternate), 방풍(Poria cocos), 백복령(Paria cocos Wolf), 복분자(Rubus chingii), 약쑥(Artemisia vularis), 우슬(Achyranthes bidentata), 울금(Curcuma longa), 인삼(Panax gienseng), 하수오(Polygonum multiflorum) 및 지황(Rehmanniae radix)으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명에서 상기 약재는 약재 전체, 지상부, 열매, 잎, 뿌리, 줄기, 나무껍질, 자실체, 뿌리껍질, 괴경, 균액, 괴근, 뿌리줄기 등에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 약재마다 상이한 부위를 사용할 수 있으며 이는 하기 각각의 약재들의 설명에 기재되어 있다.
상기 약재들을 간단히 설명한다.
상기 감초(Glycyrrhiza glabra)는 콩과의 다년생 초본으로 예로부터 감초를 백약의 독을 푸는 약재로 모든 처방에 거의 감초로 사용하였다. 감초는 약의 독을 푸는 만큼 처방약을 온화하게 하고 그만큼 약을 무디게 만드는 작용도 한다(본초강목). 감초의 리쿠라시드의 진경작용, 항염 작용, 항궤양 작용은 위십이지장 궤양 등을 치료할 수 있다. 본 발명에서는 바람직하게는 감초의 뿌리를 사용할 수 있다.
상기 계피(Cinnamomum cassia)는 녹나무과의 사철푸른 교목이며 그 껍질을 말려서 사용한다. 예로부터 땀내기약, 열내림약, 진통약, 허한을 따뜻하게 보하는 약으로 사용해왔다. 계피는 오히려 땀을 멎게 한다고 하며, 열을 내리고 몸살 등의 통증을 풀어주는 효과가 있다고 한다. 방향성건위약으로 쓰며, 계피유 제조 원료로 쓰이며, 식료품의 향료로도 쓰인다. 본 발명에서는 바람직하게는 나무껍질을 사용할 수 있다.
상기 고삼(Sophora angustifolia)은 콩과의 높이 약 1m 에 이르는 다년생 초본이다. 잎 모양이 회화나무(괴화)와 비슷하여 지괴, 수괴, 야괴라는 별명이 있다. 가을에 뿌리를 캐어 씻어 말린다. 맛이 쓰지만 인삼과 같은 효과가 있다하여 고삼이라 한다. 한의에서 뿌리를 건위약, 이뇨약, 해열약, 진통약, 살충약으로 황달, 배뇨곤란, 옴, 습진, 마른버짐 등에 사용한다. 오래 복용하면 좋은 강장약이 된다고 한다. 여성의 성기능을 높이는 효과도 있다고 한다. 완화약, 가래약으로 기관지염, 폐결핵에 쓰고, 호흡흥분약으로 쓰는데 씨티진이 주요인으로 보인다. 악성종양을 치료할 때는 달여서 사용한다. 황달과 열성질병, 선병에도 쓰며, 두통, 류마티스, 축농증에도 사용한다. 뿌리로 만든 고약은 트리코모나스질염, 습진, 신경성피부염에 사용한다. 민간에서는 뿌리와 줄기, 잎을 가루내거나 달여서 피부살충약 또는 농작물의 살충약으로 사용한다. 본 발명에서는 바람직하게는 고삼의 뿌리를 사용할 수 있다.
상기 구기자(Lycium chinese)는 가지과의 길이 4 m 에 이르는 덩굴성 관목이다. 이 식물의 열매는 구기자이고, 그 뿌리는 지골피라고 한다. 줄기껍질을 구가라한다. 간기능 개선 및 동맥경화 예방약으로 쓸 수 있다. 눈이 좋아진다는 것은 간기능이 좋아지므로 눈이 밝아진다는 것이다. 오래 먹으면 뼈를 튼튼하게 하고 몸을 가볍게 하며 흰머리를 검게하고 눈을 밝게 하며 추위와 더위도 타지 않고 오래산다는 말이 있다. 구기자와 산수유를 적량 섞어서 쓰면 양사를 일으키는 작용이 매우 강하므로 젊은 총각이 먹으면 곤란할 수 있다고 한다. 지골피는 강장제로 쓰이며, 지골피 술을 담그기도 한다. 잎과 가지치기를 할 때 나오는 잎가지를 모아 디오스게닌을 추출하면 부채마로 만든 동맥경화증 치료제보다 더 뚜렷한 효과가 있다. 본 발명에서는 바람직하게는 구기자의 열매를 사용할 수 있다.
상기 동충하초(Cordyceps sinensis)는 육좌균과의 식물로 겨울철에 곤충(린시목에 속하는 Hepialus armoricanus Oberthur)의 유충 또는 누에에 침입하여 그 속에서 자라 균핵이 생기고, 여름철에 머리부분에서 곤봉보양의 자실체(길이 3∼4 ㎝)가 돋는다. 겨울에는 벌레만 보이지만 여름에는 풀모양의 자실체가 생기기 때문에 동충하초라고 한다. 죽은 유충과 거기에 붙은 자실체를 함께 말려 약으로 사용한다. 물추출물은 모르모트의 떼낸 기관지를 뚜렷이 확장하며, 아드레날린의 작용을 세게 한다. 투끼의 떼낸 심장, 자궁활평근을 억제한다. 마취한 개에게 정맥주사하면 혈압을 뚜렷히 낮추지만 근육과 배안에 주사하면 뚜렷하지 않다. 동의에서는 폐와 신을 돕고 피를 멈추며 가래를 삭힌다고 하여 강장, 진정, 진해약으로 사용한다. 병으로 몸이 약해진 때, 기침, 각혈, 폐결핵, 다한, 빈혈, 양위, 유정, 허리아픔 등에 사용한다. 본 발명에서는 바람직하게는 동충하초의 자실체를 사용할 수 있다.
상기 매실(Prunus mume)은 선열매를 따서 연기를 쏘여 검게 해 말린 것을 오매라 한다. 열매살에는 레몬산, 사과산, 포도주산, 호박산, 시토스테롤, 올레아놀산, 세틸알콜, 씨에는 아미그달린이 있다. 열매는 레몬산의 원료로 쓴다. 오매는 설사멎이, 열내림약, 기침약, 가래약, 배아픔, 구토, 설사 등에 쓴다. 본 발명에서는 바람직하게는 매실의 열매를 사용할 수 있다.
상기 목단피(Paeonia suffruticosa)는 모란과의 관목으로 각지에서 꽃보기나 약초로 심는다. 진정 진경약으로 자율신경부조에 쓰이며, 해열, 진통, 항염제로 쓰이며, 월경불순, 허리아픔, 관절통 등에 사용한다. 목단피와 복숭아씨(도인)를 함께 쓰면 항염작용과 혈액순화개선 효과가 높아진다. 본 발명에서는 바람직하게는 뿌리껍질을 사용할 수 있다.
상기 목향(Inula Helenium)은 녹이 50∼150 ㎝ 에 이르는 국화과의 다년생 초본이다. 가래약, 건위약, 이뇨약, 발한약으로 기관지염, 폐결핵 등 여러 가지 호흡기 질병에 사용한다. 또한, 구토, 설사, 복통, 위카타르, 위산부족과 감기에도 사용한다. 본 발명에서는 바람직하게는 목향 전체를 사용할 수 있다.
상기 반하(Pinellia ternate)는 천남성과의 15∼30 ㎝되는 다년생 초본의 구근이다. 반하는 초여름에 그 잎이 지기 때문에 반하라 한다. 예로부터 한의에서는 구토를 멈추는 약으로 사용하였다. 구토약, 진경약, 가래삭힘약으로써 위하수, 임신구토, 구토, 기침, 어지러움증, 두통, 급성위염, 인후통 등에 사용한다. 위산과다를 억제하기 위하여 반하와 진피를 함께 사용한다. 본 발명에서는 바람직하게는 반하의 괴경을 사용할 수 있다.
상기 방풍(Poria cocos)은 벌목한지 3∼4 년 지난 소나무 뿌리에 기생하여 혹처럼 자란 균핵이다. 흔히 땅속 25∼50㎝ 에 있다. 직경 약 30∼50㎝ 의 덩어리이고 속이 흰 것을 백복령, 속이 분홍빛을 띠는 것을 적복령이라 한다. 이뇨작용을 통한 부기를 제거하고, 피로를 회복하며, 위 등 체내에 물이 고인 것을 제거하는데 사용해왔다. 위하수에 효과가 있으며 입맛을 좋게 한다. 근육경련과 어지럼증에도 효과가 있다고 한다. 본 발명에서는 바람직하게는 방풍의 뿌리를 사용할 수 있다.
상기 복분자(Rubus chingii)는 나무딸기로 미감하다. 신정을 보호하며 여자의 잉태를 돕고 모발을 검게 하며 눈을 밝게도 한다. 주증해서 사용하며, 봉류(멍석딸기)도 효력이 있다(본초강목). 본 발명에서는 바람직하게는 복분자의 열매를 사용할 수 있다.
상기 약쑥(Artemisia vularis)은 높이 0.8 ∼ 1 m 되는 국화과의 다년생 초본이다. 한의에서 수렴성 지혈약, 진통약으로 자궁출혈, 복통, 혈변이 있을 때 쓰며, 강장보혈약으로도 사용한다. 마른잎을 비벼서 겉면의 털을 모아 뜸뜨는데 사용한다. 뜸쑥은 6 월 초순에 채취한 것이 좋다. 약쑥은 월경이 고르지 못할 때, 유산시킬 때, 임신 중독 때, 자궁섬유종에 사용한다. 신선한 잎은 벌레나 뱀에 물린데 짓찧어 붙이기도 한다. 본 발명에서는 바람직하게는 약쑥의 뿌리를 사용할 수 있다.
상기 우슬(Achyranthes bidentata)은 줄기마다 소의 무릎 같다 해서 쇠부릎이라 한다. 근경을 캐어서 말린 것을 우슬이라 하고, 신경통이나 보약, 부인병에 쓴다. 본 발명에서는 바람직하게는 우슬의 뿌리를 사용할 수 있다.
상기 울금(Curcuma longa)은 열대지방에서 자라는 다년생 초본으로 뿌리줄기는 고깔 모양이거나 가지친 둥근 기둥 모양이고, 꺽은 면은 감색이다. 한의에선 방향성 건위약이나 통경약으로 쓰며, 코피, 토혈, 혈뇨 등에 사용한다. 쿠르쿠민과 정유를 분리하여 방향성 건위약, 이뇨약, 해열약, 소화제, 급만성 담낭염 치료약, 담도염약, 카타르성황달약, 담석증, 급성간염약에 사용한다. 본 발명에서는 바람직하게는 울금의 괴근을 사용할 수 있다.
상기 인삼(Panax gienseng)은 오갈피나무과의 다년생 초본이다. 인삼은 예로부터 보약으로 사용되어 왔다. 특히, 인삼과 부자를 잘 배합하여 허탈에 구급약으로 사용한다. 인삼을 심장 혈관계 질환에 사용하여 저혈압 또는 고혈압을 고치고, 심장영양장애, 심장동맥경화, 협심증에도 사용한다. 적은량은 혈압을 높이고 많은양은 혈압을 낮춘다. 인삼은 당뇨병에도 상당한 효과가 있다. 또 신경쇠약, 정신병 등에도 효과가 있다. 무기력증이나 위, 소화기 계통의 무력증에 효과가 있으며, 음위증 등 기력이 약해진 증세에 효과가 있다. 본 발명에서는 바람직하게는 인삼의 뿌리를 사용할 수 있다.
상기 하수오(Polygonum multiflorum)는 넝쿨 뻗는 박주가리과의 다년생 초본이다. 한의에서는 오래전부터 보약으로써 병후쇠약, 신경쇠약, 학질 등에 사용했다. 특히, 남성의 성기능을 높이는데 효과가 있다고 한다. 본 발명에서는 바람직하게는 하수오의 뿌리를 사용할 수 있다.
상기 지황(Rehmanniae radix)은 한약에서 보약으로 널리 알려져 있으며, 현삼과에 속하는 다년생초로서 뿌리를 약용으로 사용한다. 본 발명에서는 바람직하게는 지황의 뿌리줄기를 사용할 수 있다.
본 발명에서 상기 약재 추출물은 상기 약재를 추출 용매를 이용하여 추출한 것을 의미하며, 상기 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 6의 다가알코올, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에틸아세테이트, 글리세린 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 추출 용매 중에서 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올을 첨가하여 추출할 수 있다.
상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 10 내지 90%(v/v) 알코올일 수 있으며, 바람직하게는 30 내지 80 %(v/v) 알코올일 수 있고, 더욱 바람직하게는 50 내지 70%(v/v) 알코올일 수 있다.
이하 상기 "발효 추출물"을 자세하게 설명한다.
상기 발효 추출물은 고염 미생물, 특히 상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 상기 본 발명에 따른 약재 추출물이 포함된 배지에 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 배지는 고염 미생물이 생존할 수 있는 고농도의 염분이 포함된 배지일 수 있으며, 바람직하게는 상기 배지 내에 100 내지 300 g/l의 염화나트륨이 포함될 수 있고, 더욱 바람직하게는 150 내지 250 g/l의 염화나트륨이 포함될 수 있다.
본 발명의 구체적 일 실시예에 따르면 상기 배지는, 예를 들어, Halophilic archaeal medium 일 수 있고, 액체 배지의 조성은 1L를 기준으로 이스트 추출물(yeast extract) 5g, 카사미노산(casamino acids) 5g, Na-glutamate 1g, KCl 2g, Na3-citrate 3g, MgSO4·7H2O 20g, NaCl 200g, FeCl2·4H2O 36mg, MnCl2·4H2O 0.36mg 을 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 약재 추출물은 상기 배지에 총 중량 대비 0.001 내지 20 중량% 첨가할 수 있고, 바람직하게는 0.1 내지 10 중량% 첨가할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1 내지 8 중량% 첨가할 수 있다. 0.001 중량% 미만 첨가하는 경우 발효가 원활하게 일어나지 않아 피부 개선 효과가 미미할 수 있으며, 20 중량% 초과하여 첨가하는 경우 일정 수준 이상의 상승적 효과를 기대하기 어려울 수 있다.
본 발명에 따른 발효 추출물을 제조하기 위하여 상기 약재 추출물이 첨가된 배지에 고염 미생물, 특히 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주로서, 바람직하게는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis), 더욱 바람직하게는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주를 접종할 수 있다.
상기 접종은 103 내지 109 세포수/ml의 농도로 접종할 수 있고, 바람직하게는 104-108 세포수/ml의 농도로 접종할 수 있다.
균주를 접종한 후, 발효 단계를 거칠 수 있으며, 상기 발효 환경은 pH 4 내지 8에서 0 내지 50℃로 1 내지 20일간 실시하여 이루어질 수 있고, 바람직하게는 pH 6.5 내지 7.5에서 30 내지 45℃로 5 내지 10일간 실시하여 이루어질 수 있으며, 더욱 바람직하게는 pH 6.8 내지 7.3에서 32 내지 43℃로 6 내지 8일간 실시하여 이루어질 수 있다.
이후, 염분을 제거하는 과정 및 초음파 처리를 통해 균체를 사멸시키는 과정을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 발효 추출물을 조성물 총 중량 대비 0.0001 내지 10 중량% 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.001 내지 10 중량% 포함할 수 있고, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 7 중량% 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 자외선 차단 또는 항염용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 명세서에서, 용어 "자외선 차단"은 이에 한정되는 것은 아니지만, 지구에 도달하는 자외선 중에서 UV-A 또는 UV-B에 대한 피부에서의 흡수 억제 또는 반사를 의미한다. 본 발명의 조성물의 자외선 차단 효과를 통해 자외선으로 인해 생기는 기미, 주름, 피부 트러블 등의 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 명세서에서, 용어 "항염"은 염증 즉, 이에 한정되는 것은 아니지만 외부의 물리, 화학적 자극, 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 생체의 방어 반응을 예방 또는 억제를 의미한다. 염증 반응은 다양한 생화학적 현상이 관여할 수 있으며, 특히 생성된 NO(산화질소)는 이에 한정되는 것은 아니지만 관절염, 패혈증, 조직이식거부반응, 자가면역질환, 신경세포의 사멸 등 다양한 염증성 질환에 관여하게 된다. 본 발명에 따른 조성물은 우수한 NO 생성 저해 효과를 나타내어 우수한 항염 효과를 확인하였다.
보다 상세하게는, 본 발명에서 상기 "염증성 질환"은 이에 한정되는 것은 아니지만 외부의 물리, 화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 어떠한 상태일 수 있다. 이러한 반응은 각종 염증 매개 인자와 면역 세포와 관련된 효소 활성화(예를 들어, iNOS, COX-2 등), 염증 매개 물질의 분비(예를 들어, NO, TNF-α, IL-6, IL-1β, PGE2의 분비 등), 체액, 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반할 수 있으며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타날 수 있다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알레르기성 또는 괴사성을 띨 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알레르기성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다. 구체적으로는 상기 염증성 질환에는 천식, 알레르기성 또는 비-알레르기성 비염, 만성 또는 급성 비염, 만성 또는 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 또는 만성 신장염, 급성 또는 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두통, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 간염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, PGE(프로스타글란딘 E) 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염, 아토피성 피부염, 습진, 다발성 경화증 등이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 항산화 또는 피부 개선용 화장료 조성물일 수 있다. 본 발명에서 상기 피부 개선은 피부 미백, 피부 보습 또는 피부 주름 개선일 수 있다.
본 발명의 명세서에서 용어, "항산화"란, 이에 한정되는 것은 아니지만 체내에서 일어나는 여러 산화 작용을 방지하는 것을 의미할 수 있으며, 생체막이나 지단백질로서 존재하는 지질은 체내에서 발생하는 자유 라디칼(free radical)의 공격을 받아 여러 종류의 과산화물을 형성할 수 있는데, 과산화물과 분해산물 등은 반응성이 높아 주변의 생체 분자들의 구조와 기능을 변화시켜 노화 현상 또는 여러 가지 만성 질환을 초래할 수 잇다.
본 발명의 명세서에서 용어, "피부 미백"이란, 이에 한정되는 것은 아니지만 외부 자극에 의해 피부에서 멜라닌의 생성이 과하게 일어나 피부 밖으로 배출되지 못하고 피부 속에 남아 색소 침착이 일어난 피부색의 변화를 정돈하여 주는 개념일 수 있다. 따라서, 멜라닌의 총량의 변화를 통해 멜라닌 저해 활성이 우수한 경우 피부 미백 효과가 우수하다고 할 수 있다.
본 발명의 명세서에서 용어, "피부 주름"이란, 이에 한정되는 것은 아니지만, 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미하며, "피부 주름 개선"이란, 이에 한정되는 것은 아니지만, 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 의미한다.
본 발명의 명세서에서 용어, "피부 보습"이란, 이에 한정되는 것은 아니지만, 적정한 정도의 피부 수분 함량을 유지할 수 있는 것을 의미할 수 있다.
본 발명의 명세서에서 용어, "당화(glycation)"란 신체 내부의 화학반응으로, 단백질이 가지는 프리 아미노기(free amino group)와 글루코즈(glucose)와 같은 당과의 결합이 가져오는 비효소적 반응으로, 피부 주름, 미백 또는 보습과 관련이 있다.
본 발명자들은 본 발명에 따른 화장료 조성물을 이용하는 경우 고염 미생물의 발효 추출물을 이용하지 않은 화장료 조성물과 비교하여 현저한 피부 개선, 항염, 자외선 차단 및 항산화 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였으며, 이는 하기 실험예에서 확인할 수 있다. 특히 종래, 미생물을 이용한 화장료 조성물에 있어서, 자외선 차단 및 항염 효과를 향상시키는 효과를 확인하지 못하였지만 본 발명에서는 피부 개선 효과 뿐만 아니라 자외선 차단 및 항염 효과 향상까지 확인하여 고염 미생물, 예를 들어 할로아르쿨라(Haloarcula) 속을 활용한 화장료 조성물의 우수함을 확인하였다는데 기술적 특징이 있다.
본 발명의 상기 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더로 제형화될 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용가능한 담체는 제형에 따라 다양하다. 본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시켜 약재의 피부 개선 또는 항산화 효과를 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명에서 상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 바람직하게는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있다.
본 발명에서 본 발명에서 바람직하게 상기 약재는 감초(Glycyrrhiza glabra), 계피(Cinnamomum cassia), 고삼(Sophora angustifolia), 구기자(Lycium chinese), 동충하초(Cordyceps sinensis), 매실(Prunus mume), 목단피(Paeonia suffruticosa), 목향(Inula Helenium), 반하(Pinellia ternate), 방풍(Poria cocos), 백복령(Paria cocos Wolf), 복분자(Rubus chingii), 약쑥(Artemisia vularis), 우슬(Achyranthes bidentata), 울금(Curcuma longa), 인삼(Panax gienseng), 하수오(Polygonum multiflorum) 및 지황(Rehmanniae radix)으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 약학 조성물을 제공하며, 바람직하게는 피부 개선용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 자외선 차단, 항염, 항산화, 피부 미백, 피부 보습, 피부 주름 개선용일 수 있다.
상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis), 할로아르쿨라 마리스모르투이(Haloarcula marismortui), 할로아르쿨라 히스패니카(Haloarcula hispanica), 할로아르쿨라 자포니카(Haloarcula japonica), 할로아르쿨라 아르젠티넨시스(Haloarcula argentinensis), 할로아르쿨라 무코하타에이(Haloarcula mukohataei) 및 할로아르쿨라 쿼드라타(Haloarcula quadrata)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있고, 더욱 바람직하게는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 약학 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 예컨대, 공지의 피부 재생, 주름 개선, 항산화, 자외선 차단, 항염증 및 피부 미백 성분을 포함할 수 있다. 추가적인 피부 재생, 주름 개선, 항산화, 자외선 차단, 항염증 및 피부 미백 성분을 포함하게 되면 본 발명의 피부 재생, 주름 개선, 항산화, 자외선 차단, 항염증 및 피부 미백 효과는 더욱 증진될 수 있다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안정성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물에서, 상기 조성물은 당업계에 공지된 피부 재생 성분으로서, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물, 당업계에 공지된 항산화 성분으로서, 토코페롤, 셀레늄, 비타민 C 및 페놀성 화합물, 당업계에 공지된 자외선 차단 효과를 갖는 성분, 당업계에 공지된 미백 성분으로서, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소 활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민-C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물로 구성되는 1종 또는 2종 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가의 성분은 전체 조성물 중량 대비 0.0001 내지 10 중량% 포함될 수 있으며, 상기 범위는 피부 안정성, 제형화 시의 용이성 등의 요건에 따라 조절될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 통상적인 약학적 담체 및 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 이러한 약학 조성물은 통상적인 약학 조성물 제조방법에 따라 제조하여 이용할 수 있다.
상기 약학적 담체는 예를 들어, 완충액, 주사용 멸균수, 일반 식염수 또는 인산염 완충 식염수, 수크로스(sucrose), 히스티딘, 폴리솔베이트 등과 같은 성분일 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 일반 의약품 제제의 형태, 예를 들어, 임상 투여 시 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들어, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다.
단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 등과 같은 윤활제도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 일반적으로 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들어, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol), 올리브 오일(olive oil)과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 피부 외용제를 제공한다.
본 발명에 따른 피부 외용제는 자외선 차단, 항염, 항산화, 피부 미백, 피부 보습, 피부 주름 개선용일 수 있다.
상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis), 할로아르쿨라 마리스모르투이(Haloarcula marismortui), 할로아르쿨라 히스패니카(Haloarcula hispanica), 할로아르쿨라 자포니카(Haloarcula japonica), 할로아르쿨라 아르젠티넨시스(Haloarcula argentinensis), 할로아르쿨라 무코하타에이(Haloarcula mukohataei) 및 할로아르쿨라 쿼드라타(Haloarcula quadrata)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있고, 더욱 바람직하게는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있다.
본 발명에 따른 피부 외용제는 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부 외용제에 통상적으로 사용될 수 있는 임의의 다른 성분과 같은 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 피부 외용제는 이에 한정되는 것은 아니지만, 연고, 패치(patch), 겔, 크림 또는 분무제와 같은 제형을 가질 수 있다.
또한, 본 발명은 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 식품 조성물을 제공하며, 바람직하게는 피부 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis), 할로아르쿨라 마리스모르투이(Haloarcula marismortui), 할로아르쿨라 히스패니카(Haloarcula hispanica), 할로아르쿨라 자포니카(Haloarcula japonica), 할로아르쿨라 아르젠티넨시스(Haloarcula argentinensis), 할로아르쿨라 무코하타에이(Haloarcula mukohataei) 및 할로아르쿨라 쿼드라타(Haloarcula quadrata)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있고, 더욱 바람직하게는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주일 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 식품 조성물은 업계에서 일반적으로 실시하는 방법을 통하여 제조될 수 있다.
본 발명의 고염 미생물를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 조성물은 우수한 피부 개선, 항염, 자외선 차단 및 항산화 효과가 있으므로, 피부 개선용 화장료 조성물로 사용될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
1. 재료 준비
1-1. 약재 추출물의 제조
본 발명자들은 감초(뿌리), 계피(나무껍질), 고삼(뿌리), 구기자(열매), 동충하초(자실체), 매실(열매), 목단피(뿌리껍질), 목향(전체), 반하(괴경), 방풍(뿌리), 백복령(균액), 복분자(열매), 약쑥(잎), 우슬(뿌리), 울금(괴근), 인삼(뿌리), 하수오(뿌리) 및 지황(뿌리줄기)을 농업회사법인 (주)휴먼허브(대한민국) 에서 구입하여 분쇄한 각각의 분쇄물 100g을 정제수 또는 60%(v/v) 에탄올 3L에 각각 넣고, 냉각 콘덴서가 달린 환류 추출기에서 3시간 동안 끓여 추출하였다. 그 다음, 100 메쉬(mesh) 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출물을 합하여 상온에서 와트만(Whatman) 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치에서 60℃로 감압농축한 후 동결건조하여 하기 표 1에 나타낸 것과 같은 약재 각각의 건조 중량을 얻었다. 하기 표 1은 추출 용매에 따른 약재 100g 당 추출물의 건조 중량을 나타낸 것이다.
약재 60%(v/v) 에탄올 (g) 정제수 (g)
감초 8.3 7.9
계피 7.9 7.6
고삼 8.5 8.2
구기자 9.7 9.1
동충하초 6.6 6.1
매실 6.5 6.0
목단피 9.1 8.5
목향 9.5 9.2
반하 11.2 9.8
방풍 7.4 6.7
백복령 8.5 7.8
복분자 10.7 10.1
약쑥 8.1 7.5
우슬 6.2 5.5
울금 9.1 8.2
인삼 6.4 6.0
하수오 8.6 8.1
지황 7.2 6.8
1-2. 신규 균주의 분리 동정
본 발명자들은 신안 염전에서 고농축 염전물을 채취하고, 고염 미생물을 찾기 위하여 특수 배지(Halophilic archaeal medium(Difco, USA) : 1L를 기준으로 이스트 추출물(yeast extract) 5g, 카사미노산(casamino acids) 5g, Na-glutamate 1g, KCl 2g, Na3-citrate 3g, MgSO4·7H2O 20g, NaCl 200g, FeCl2·4H2O 36mg, MnCl2·4H2O 0.36mg, 아가(agar) 20 g)를 사용하였다.
각각 도말하여 35 - 40℃에서 5일간 배양하였다. 본 연구에 사용된 미생물 배양에 이용된 배지들은 모두 Difco(USA)에서 구입하였다. 배양 후 형성된 집락(colony)은 크기, 모양 및 색 등의 형태학적 특성에 따라 분류하여, 무작위로 다수의 집락을 선택하였으며, 3 회의 계대 배양을 통해 미생물을 순수 분리하였다.
이후 16S rRNA 유전자 서열을 분석하기 위하여, 배양된 미생물을 분리하여 genomic DNA를 추출 정제한 후, 27F(5'-GAG TTT GAT CCT GGC TCA G-3', 서열번호 2) 프라이머 및 1492R(5'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3', 서열번호 3) 프라이머를 이용하여 유전자를 증폭시킨 다음, 서열 분석을 실시하였다.
16S rRNA 염기 서열을 분석한 결과(서열번호 1), 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) CGMCC1.2048/rrnBT(=ATCC 29715 = JCM 8877)와 99.84%의 상동성을 나타내는 것을 확인하여, 이를 할로아르쿨라 발리스모르티스 LG halophilic microorganism(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism) 균주로 명명하고 한국 미생물자원센터(KCTC)에 2015년 6월 3일자로 기탁하여 수탁번호 KCTC12830BP를 부여받았다.
1-3. 미생물 배지 조성
본 발명에서 사용된 배지는 Halophilic archaeal medium(Difco, USA) 으로서, 액체 배지의 조성은 1L를 기준으로 이스트 추출물(yeast extract) 5g, 카사미노산(casamino acids) 5g, Na-glutamate 1g, KCl 2g, Na3-citrate 3g, MgSO4·7H2O 20g, NaCl 200g, FeCl2·4H2O 36mg, MnCl2·4H2O 0.36mg, 아가(agar) 20 g이다.
1-4. 약재 발효 추출물의 제조
상기 1-1 에서 수득한 60%(v/v) 에탄올을 이용하여 얻어진 각각의 약재 추출물을 고염 미생물인 할로아르쿨라 발리스모르티스 LG halophilic microorganism(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism) 배지에 대해 5 중량%로 첨가하여 발효시켰다.
구체적으로, 할로아르쿨라 발리스모르티스 LG halophilic microorganism(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)를 약 105 내지 107 세포수/ml의 농도로 5 중량%의 각각의 약재 추출물이 함유된 고염 미생물 배지에 접종한 후, pH 7.0~7.2, 온도 35~40℃, 통기량 0.05~0.5 VVM의 조건을 유지하면서 7일 동안 배양하였다. 그 후, 각각의 발효액 100g을 10,000M.W(분자량) 필름으로 투석하여 염분을 제거하고, 내용물을 초음파 처리하여 균체를 사멸하였다. 그 후, 원심분리하여 고분자 침전물과 균체를 제거하고 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치에서 60℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 약재 효모 발효 건조물을 수득하였다. 약재 발효 건조물의 건조 중량은 하기 표 2에 나타내었다.
약재 발효 추출물 건조중량 (g)
감초 5.23
계피 5.92
고삼 5.72
구기자 5.87
동충하초 5.83
매실 5.93
목단피 5.74
목향 5.96
반하 5.83
방풍 5.42
백복령 5.91
복분자 5.74
약쑥 5.72
우슬 5.67
울금 5.41
인삼 5.92
하수오 5.84
지황 6.12
2. 제형에서의 in vitro SPF 차단 효과
본 발명자들은 약재 발효 추출물의 자외선 차단 효과를 확인하기 위하여 하기 표 3에 나타낸 바와 같은 조성으로 SPF 50, PA +++ 인 제형에 상기 1-4 에서 제조한 발효 건조물을 5 중량% 첨가하였다.
VitroskinTM을 이용하여 in vitro SPF를 측정하였으며, 방법은 다음과 같다. 1) 바르는 면적이 35 cm2이 되게 자른 Vitroskin을 hydration chamber(15% 글리세린 용액으로 hydration 시킨 desiccator)에 18시간 이상 hydration 시켰다, 2) 샘플 중 70mg(2mg/cm2)을 취하여 Vitroskin 위에 최대한 고르게 도포한 뒤 상온에 10 분 방치하였다. 도포는 검지 손가락에 일회용 고무 골무를 낀 상태로 실시하였다. (모든 샘플을 일정한 방법으로 도포할 수 있도록 주의하였다. Vitroskin을 desiccator에서 꺼낸 순간부터 마르기 시작하므로 너무 과하게, 오랫동안 문지르지 않도록 하였다), 3) 아무것도 바르지 않은 Vitroskin을 이용하여 reference를 측정하였다, 4) 샘플의 SPF를 측정하였다(SPF-290S 기기 이용), 이는 자외선 파장의 빛의 투과 정도로 SPF, PA를 측정하였다.
원료 대조군 실험군
정제수 54.65 51.65
Tris Ultra Amino PC 1.6 1.6
PARSOL HS 2.75 2.75
글리세린 10 10
PARSOL MC80 6 6
SILICONE D5 9 9
ICEH 5 5
UV M 170 9 9
KF-6017 2 2
발효 건조물 - 5
그 결과, 하기 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 약재 발효 추출물은 SPF 차단 효과가 있는 제형에 무첨가한 대조군과 비교하였을 때 SPF 차단 효과가 높아지는 우수한 활성을 나타내어, 자외선으로 인해 생기는 기미, 주름, 피부 트러블 등을 예방해 주는 보조적인 역할을 할 수 있다는 것을 확인하였다. 이는 종래에 미생물 발효 추출물에서는 확인할 수 없었던 자외선 차단 효과를 본 발명자들은 본 발명의 고염 미생물을 이용하여 확인하였다.
Substrate type Vitroskin
UV type SPF PA
대조군(무첨가) 57.94±3.02 16.75±2.50
배지 58.23±2.18 15.98±1.89
감초 약재 자체 57.37±2.58 16.25±3.10
발효 추출물 67.66±7.23 21.25±5.27
계피 약재 자체 56.72±7.26 16.24±3.27
발효 추출물 65.23±5.48 20.15±7.24
고삼 약재 자체 59.27±7.24 15.37±4.26
발효 추출물 68.91±9.63 22.14±3.85
구기자 약재 자체 53.17±3.41 17.62±2.84
발효 추출물 68.51±8.62 20.14±4.81
동충하초 약재 자체 56.24±5.43 15.48±3.28
발효 추출물 67.21±11.62 21.62±2.81
매실 약재 자체 57.30±4.62 18.20±5.92
발효 추출물 69.20±2.80 22.60±3.82
목단피 약재 자체 59.20±1.82 15.26±2.91
발효 추출물 68.30±9.26 22.64±2.51
목향 약재 자체 59.32±1.82 14.80±7.26
발효 추출물 68.60±4.82 26.10±2.91
반하 약재 자체 55.92±3.56 15.17±3.58
발효 추출물 64.81±8.90 19.80±2.70
방풍 약재 자체 59.40±3.80 16.10±8.61
발효 추출물 67.61±7.61 21.20±4.50
백복령 약재 자체 52.41±2.81 18.20±3.40
발효 추출물 67.60±5.40 22.60±5.67
복분자 약재 자체 55.23±9.51 15.14±4.78
발효 추출물 68.30±12.39 23.50±5.26
약쑥 약재 자체 56.14±4.26 17.10±7.13
발효 추출물 71.24±9.16 23.60±7.61
우슬 약재 자체 55.34±2.82 16.17±3.94
발효 추출물 67.60±4.54 23.71±5.48
울금 약재 자체 58.46±2.46 15.17±6.72
발효 추출물 67.16±3.18 28.90±7.54
인삼 약재 자체 54.18±4.16 19.54±3.58
발효 추출물 65.49±5.47 18.47±6.18
하수오 약재 자체 54.72±7.08 13.80±5.17
발효 추출물 67.81±6.17 25.84±7.71
지황 약재 자체 57.91±3.55 14.17±4.58
발효 추출물 65.81±4.81 23.80±2.51
3. 항염증 효과 확인 - NO 생성 저해 효과
본 발명자들은 본 발명에 따른 발효 추출물의 항염증 효과 및 피부 트러블 완화 효과를 확인하기 위하여, RAW264.7 세포주(ATCC number: CRL-2278)를 이용한 GRIESS 법으로 Nitric oxide(NO) 형성억제력 실험을 실시하였다.
구체적으로, 생쥐의 대식세포인 RAW264.7 세포를 수차례 계대배양하고, 웰 하나에 3×105개씩 들어가도록 24-웰 플레이트에 넣은 후, 24시간 동안 배양시켰다. 이어서, 최종농도 1, 10, 100ppm의 농도로 시료를 희석한 세포 배지로 교체하였다. 이때, NO-생성 억제물질인 L-NMMA(L-NG-Monomethylarginine)를 양성 대조군으로 함께 처리하여 30분 동안 배양하였고, 자극원으로 LPS(Lipopolysaccharide)를 1 μg씩 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 상층액을 100 μl씩 취해 96-웰 프레이트에 옮기고, GRIESS 용액을 100 μl씩 가해 상온에서 10분간 반응시키고, 540nm에서의 흡광도를 측정함으로써 시료의 NO 억제 효과를 판단하고, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
시료 NO 생성 억제율(%)
L-NMMA (양성 대조군, 10 ppm) 32.74
배지 3.42
감초 약재 자체(10 ppm) 2.77
약재 자체(100 ppm) 2.27
약재 자체(1000 ppm) 4.71
발효 추출물 (10 ppm) 11.24
발효 추출물 (100 ppm) 16.75
발효 추출물 (1000 ppm) 42.94
계피 약재 자체(10 ppm) 9.89
약재 자체(100 ppm) 18.21
약재 자체(1000 ppm) 51.29
발효 추출물 (10 ppm) 12.47
발효 추출물 (100 ppm) 26.47
발효 추출물 (1000 ppm) 62.34
고삼 약재 자체(10 ppm) 2.17
약재 자체(100 ppm) 3.43
약재 자체(1000 ppm) 7.71
발효 추출물 (10 ppm) 14.72
발효 추출물 (100 ppm) 18.71
발효 추출물 (1000 ppm) 43.84
구기자 약재 자체(10 ppm) 4.37
약재 자체(100 ppm) 7.23
약재 자체(1000 ppm) 12.7
발효 추출물 (10 ppm) 13.14
발효 추출물 (100 ppm) 18.75
발효 추출물 (1000 ppm) 46.93
동충하초 약재 자체(10 ppm) 9.89
약재 자체(100 ppm) 31.27
약재 자체(1000 ppm) 51.19
발효 추출물 (10 ppm) 12.32
발효 추출물 (100 ppm) 53.28
발효 추출물 (1000 ppm) 62.34
매실 약재 자체(10 ppm) 7.19
약재 자체(100 ppm) 22.82
약재 자체(1000 ppm) 37.74
발효 추출물 (10 ppm) 16.32
발효 추출물 (100 ppm) 38.72
발효 추출물 (1000 ppm) 58.62
목단피 약재 자체(10 ppm) 11.23
약재 자체(100 ppm) 23.47
약재 자체(1000 ppm) 37.72
발효 추출물 (10 ppm) 14.36
발효 추출물 (100 ppm) 29.25
발효 추출물 (1000 ppm) 42.64
목향 약재 자체(10 ppm) 3.27
약재 자체(100 ppm) 5.17
약재 자체(1000 ppm) 11.21
발효 추출물 (10 ppm) 9.14
발효 추출물 (100 ppm) 17.36
발효 추출물 (1000 ppm) 43.95
반하 약재 자체(10 ppm) 7.37
약재 자체(100 ppm) 21.89
약재 자체(1000 ppm) 32.28
발효 추출물 (10 ppm) 15.22
발효 추출물 (100 ppm) 37.74
발효 추출물 (1000 ppm) 53.43
방풍 약재 자체(10 ppm) 9.23
약재 자체(100 ppm) 24.36
약재 자체(1000 ppm) 37.25
발효 추출물 (10 ppm) 17.32
발효 추출물 (100 ppm) 39.27
발효 추출물 (1000 ppm) 57.23
백복령 약재 자체(10 ppm) 2.12
약재 자체(100 ppm) 3.45
약재 자체(1000 ppm) 4.23
발효 추출물 (10 ppm) 7.26
발효 추출물 (100 ppm) 13.28
발효 추출물 (1000 ppm) 37.26
복분자 약재 자체(10 ppm) 9.23
약재 자체(100 ppm) 14.36
약재 자체(1000 ppm) 34.26
발효 추출물 (10 ppm) 12.69
발효 추출물 (100 ppm) 17.36
발효 추출물 (1000 ppm) 48.96
약쑥 약재 자체(10 ppm) 11.36
약재 자체(100 ppm) 23.21
약재 자체(1000 ppm) 51.26
발효 추출물 (10 ppm) 11.47
발효 추출물 (100 ppm) 26.28
발효 추출물 (1000 ppm) 52.44
우슬 약재 자체(10 ppm) 7.17
약재 자체(100 ppm) 12.42
약재 자체(1000 ppm) 23.78
발효 추출물 (10 ppm) 8.74
발효 추출물 (100 ppm) 16.23
발효 추출물 (1000 ppm) 39.27
울금 약재 자체(10 ppm) 9.78
약재 자체(100 ppm) 18.26
약재 자체(1000 ppm) 32.47
발효 추출물 (10 ppm) 11.36
발효 추출물 (100 ppm) 39.24
발효 추출물 (1000 ppm) 49.25
인삼 약재 자체(10 ppm) 17.23
약재 자체(100 ppm) 36.78
약재 자체(1000 ppm) 57.28
발효 추출물 (10 ppm) 19.27
발효 추출물 (100 ppm) 47.29
발효 추출물 (1000 ppm) 62.78
하수오 약재 자체(10 ppm) 9.82
약재 자체(100 ppm) 23.47
약재 자체(1000 ppm) 48.29
발효 추출물 (10 ppm) 13.27
발효 추출물 (100 ppm) 28.43
발효 추출물 (1000 ppm) 57.89
지황 약재 자체(10 ppm) 3.75
약재 자체(100 ppm) 14.28
약재 자체(1000 ppm) 31.89
발효 추출물 (10 ppm) 2.78
발효 추출물 (100 ppm) 21.79
발효 추출물 (1000 ppm) 43.75
상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 약재 발효 추출물은 대표적인 항염 의약 물질인 L-NMMA와 비교하였을 때, 우수한 활성을 나타내어, 미백, 주름 개선, 또는 피부 트러블 개선에 있어, 항염 효과가 보조적인 역할로 작용하여 상승 효과를 기대할 수 있음을 확인하였다.
4. 미백 효과 확인 - 멜라닌 총량 감소 효과
본 발명자들은 본 발명에 따른 발효 추출물의 미백 효과를 확인하기 위하여, 시료의 화합물을 쥐의 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)의 배양액에 첨가하여 세포 수준에서의 멜라닌 총량을 측정함으로써 미백 효과를 확인하였다(Lotan R., Lotan D. Cancer Res. 40:3345-3350, 1980). 실험 전 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 독성을 평가하여 독성이 없는 농도를 선정하여 미백평가를 수행하였다.
시료를 배양액에 최종 농도가 1ppm, 10ppm이 되도록 하였으며, 대조군인 selina는 20ppm이 되도록 배지에 첨가하여 각각 B-16 멜라노마 세포에 처리하여 3일간 배양하였다. 이후, 세포들을 트립신(trypsin) 처리하여 배양용기로부터 떼어내 원심분리한 후, 멜라닌을 추출하였다. 떼어낸 세포는 수산화나트륨 용액(1N 농도) 1ml를 가하여 10분간 끓여 멜라닌을 녹이고 분광 광도계를 이용하여, 400nm에서 흡광도를 측정하여 생성된 멜라닌의 양을 측정하였다. 상기 멜라닌의 양은 단위 세포수당(1×106 cell)의 흡광도로 나타내는 방법으로 측정하였으며, 대조군에 대한 상대적인 멜라닌 총량을 저해율(%)로 계산하고 결과를 하기 표 6에 정리하였다.
시료
(최종농도는 모두 10ppm, 단 대조군은 20ppm)		 멜라닌생성량
(abs)		 멜라닌 함량
(% of control)
대조군(무첨가) 0.14 100
양성대조군(selina) 0.077 55.00
배지 0.137 97.86
감초 약재 자체 0.099 70.71
발효 추출물 0.096 68.42
계피 약재 자체 0.125 89.29
발효 추출물 0.116 82.74
고삼 약재 자체 0.134 95.72
발효 추출물 0.116 83.18
동충하초 약재 자체 0.095 67.94
발효 추출물 0.088 62.88
매실 약재 자체 0.124 88.72
발효 추출물 0.115 81.94
목단피 약재 자체 0.110 78.57
발효 추출물 0.102 72.86
목향 약재 자체 0.119 85.00
발효 추출물 0.108 77.14
반하 약재 자체 0.095 67.86
발효 추출물 0.088 62.86
방풍 약재 자체 0.126 90.00
발효 추출물 0.113 80.71
백복령 약재 자체 0.098 70.00
발효 추출물 0.085 60.71
복분자 약재 자체 0.129 92.14
발효 추출물 0.121 86.43
약쑥 약재 자체 0.123 87.86
발효 추출물 0.117 83.57
우슬 약재 자체 0.129 92.14
발효 추출물 0.115 82.14
울금 약재 자체 0.131 93.57
발효 추출물 0.122 87.14
인삼 약재 자체 0.135 96.43
발효 추출물 0.125 89.29
하수오 약재 자체 0.129 92.14
발효 추출물 0.117 83.57
지황 약재 자체 0.137 97.86
발효 추출물 0.112 80.00
상기 표 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 약재 발효 추출물은 우수한 멜라닌 저해 활성을 나타내어, 미백 효과에 있어 상승적인 효과를 나타냄을 확인하였다.
5. 보습 효과 확인 - 당화 저해 효과(anti- glycation )
본 발명자들은 본 발명에 따른 발효 추출물의 피부 미백, 주름 개선, 보습 효과를 확인하기 위하여, L-arginine과 포도당을 이용하여 당화 저해 활성을 측정하였다.
먼저, 1M 인산 완충용액(pH 7.4)을 이용하여 1M L-아르기닌(arginine), 1M 포도당을 녹여 준비하고 1M 인산 완충용액을 이용하여 시료를 50, 100ppm이 되도록 희석해서 준비하였다. 1M L-아르기닌과 1M 인산 완충용액을 1 : 4의 비율로 섞은 다음 96-웰플레이트에 80 μl씩 분주하였다. 여기에 각각 50, 100ppm으로 희석한 시료와 양성 대조군으로 사용될 0.01M 아미노구아니딘(aminoguanidin)을 100 μl씩 첨가하였다. 이 시료들을 잘 섞어준 다음, 마지막으로 포도당의 최종 농도가 0.1M이 되도록 1M 인산 완충용액으로 희석한 포도당을 넣었다. 이후, 70℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 96-웰플레이트를 분광 광도계를 이용하여 420 nm에서 흡광도를 측정하여 당화 정도를 측정한 후 하기 표 7에 나타내었다.
하기 수학식 1의 Glycation 실험군은 1M L-아르기닌과 1M 포도당을 넣어 당화를 유발시킨 실험군이며, 시료 자체의 흡광도를 측정하기 위해서 포도당을 넣지 않고 1M L-아르기닌과 시료만을 넣어 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 당화 저해 활성은 다음과 같은 수학식 1로 부터 구할 수 있다.
[수학식 1]
Figure pat00001
시료 (최종농도는 모두 1%) 양성대조군 대비 당화억제효과(%)
양성대조군(1mM Aminoguanidin) 100
배지 98.23
감초 약재 자체 61.27
발효 추출물 45.47
계피 약재 자체 78.61
발효 추출물 51.48
고삼 약재 자체 84.49
발효 추출물 58.46
구기자 약재 자체 74.15
발효 추출물 49.42
동충하초 약재 자체 87.46
발효 추출물 57.18
매실 약재 자체 76.14
발효 추출물 52.42
목단피 약재 자체 94.16
발효 추출물 61.48
목향 약재 자체 95.61
발효 추출물 57.87
반하 약재 자체 89.99
발효 추출물 58.49
방풍 약재 자체 95.17
발효 추출물 55.78
백복령 약재 자체 94.81
발효 추출물 59.17
복분자 약재 자체 84.91
발효 추출물 54.18
약쑥 약재 자체 86.94
발효 추출물 52.74
우슬 약재 자체 89.46
발효 추출물 53.48
울금 약재 자체 97.16
발효 추출물 56.18
인삼 약재 자체 62.17
발효 추출물 48.16
하수오 약재 자체 85.74
발효 추출물 52.81
지황 약재 자체 89.26
발효 추출물 52.48
그 결과, 항당화 물질로 알려진 아미노구아니딘과 비교할 때, 발효 추출물이 기존 약재에 비해서 항당화 효과가 다소 높다는 것을 알 수 있다. 즉, 우수한 항당화 효과를 나타내어 피부 미백, 주름 개선, 보습 효과에 있어, 항당화 효과가 보조적인 역할로 작용하여 상승효과를 기대할 수 있다는 것을 확인하였다.
6. 항산화 효과 확인 - 자유라디칼 소거율 측정
본 발명자들은 본 발명에 따른 발효 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위하여, 하기와 같은 자유라디칼 소거율 측정 실험을 진행하였다.
시료는 각각의 약재 자체와 본 발명에 따른 상기 약재 발효 추출물을 사용하였으며, 자유라디칼 소거활성은 DPPH를 이용하여 측정하였다. DPPH는 시그마사(Sigma Co., Ltd, 미국)에서 구입하여 사용하였다. 먼저, 400μm 농도의 표준 DPPH 용액을 만들었다. 그리고 각각의 약재 자체, 약재 발효추출물 및 기준물질로 항산화제인 아스코르빈산에 각각 에탄올을 가하여 200㎍/㎖의 농도로 시료를 만들었다.
그 다음, 상기 시료와 표준 DPPH 용액을 같은 비율로 첨가하여 잘 교반한 후, 37℃에서 30분간 반응시키고 520㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 상기 실시예 대신 약재 발효 추출물을 대신하여 에탄올을 첨가한 것을 대조군으로 하였다. 하기 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거율(%)을 구하고, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
[수학식 2]
Figure pat00002
시료 (최종농도는 모두 0.005%, 단 대조군은 제외) 자유라디칼 소거율(%)
대조군(무첨가) 0
배지 11.3
아스코르빈산 43.9
감초 약재 자체 30.2
발효 추출물 59.2
계피 약재 자체 33.7
발효 추출물 59.4
고삼 약재 자체 32.7
발효 추출물 52.9
구기자 약재 자체 39.5
발효 추출물 43.5
동충하초 약재 자체 32.9
발효 추출물 61.8
매실 약재 자체 34.2
발효 추출물 56.1
목단피 약재 자체 31.8
발효 추출물 46.2
목향 약재 자체 32.5
발효 추출물 49.2
반하 약재 자체 30.8
발효 추출물 52.4
방풍 약재 자체 36.2
발효 추출물 55.7
백복령 약재 자체 31.2
발효 추출물 49.3
복분자 약재 자체 36.4
발효 추출물 62.3
약쑥 약재 자체 38.2
발효 추출물 55.1
우슬 약재 자체 32.5
발효 추출물 42.6
울금 약재 자체 36.2
발효 추출물 50.3
인삼 약재 자체 38.6
발효 추출물 68.3
하수오 약재 자체 32.1
발효 추출물 52.9
지황 약재 자체 35.1
발효 추출물 48.3
그 결과, 항산화 물질로 알려진 아스코르빈산과 비교할 때, 발효 추출물이 기존 약재 및 아스코르빈산에 비해서 항산화 효과가 다소 높다는 것을 알 수 있다. 즉, 우수한 항산화 효과를 나타내어 피부 개선에 상승효과를 기대할 수 있다는 것을 확인하였다.
한국 미생물자원센터 KCTC12830BP 20150603
<110> LG HOUSEHOLD & HEALTH CARE LTD. <120> Composition comprising fermented extract of Halophilic microorganism <130> LH15-124 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1279 <212> DNA <213> Haloarcula vallismortis <400> 1 catatagctc agtaacacgt ggccaaacta ccctacagac cgcgataacc tcgggaaact 60 gaggccaata gcggatatca ctctcaggct ggagtgccga gagtgagaaa cgttccggcg 120 ctgtaggatg tggctgcggc cgattaggta gatggtgggg taatggccca ccatgccgat 180 aatcggtaca ggttgtgaga gcaagagcct ggagacggta tctgagacaa gataccgggc 240 cctacggggc gcagcaggcg cgaaaccttt acactgcacg acagtgcgat agggggactc 300 cgagtgcgag ggcatatagc cctcgctttt ctgaaccgta aggtggttca ggaacaagga 360 ctgggcaaga ccggtgccag ccgccgcggt aataccggca gtccgagtga tggccgatat 420 tattgggcct aaagcgtccg tagcttgctg tgtaagtcca ttgggaaatc gaccagctca 480 actggtcggc gtccggtgga aactrcmcag cttggggccg aragactcra cgggtacgtc 540 cggggtagga gtgaaatcct gtaatcctgg acggaccacc aatggggaaa ccacgttgag 600 agaccggacc cgacagtgag ggacgaaagc cagggtctcg aaccggatta gatacccggg 660 tagtcctggc tgtaaacaat gctcgctagg tatgtcacrc gccatgagca ygtgatgtgc 720 cgtagtgaag acgataagcg agccgcctgg gaagtacgtc cgcaaggatg aaacttaaag 780 gaattggcgg gggagcacca caaccggagg agcctgcggt ttaattggac tcaacgccgg 840 acatctcacc ggtcccgaca gtagtaatga cagtcaggtt gacgacttta ctcgacgcta 900 ctgagaggag gtgcatggcc gccgtcagct cgtaccgtga ggcgtcctgt taagtcaggc 960 aacgagcgag acccacactt ctagttgcca gcaacacccc tgcggtggtt gggtacacta 1020 ggaggactgc cattgctaaa atggaggaag gaatgggcaa cggtaggtca gtatgccccg 1080 aatggaccgg gcaacacgcg ggctacaatg gctctgacag tgggatgcaa cgccgagagg 1140 cggagctaat ctccaaacgg agtcgtagtt cggattgcgg gctgaaaccc gcccgcatga 1200 agctggattc ggtagtaatc gcgtgtcaga agcgcgcggt gaatacgtcc ctgctccttg 1260 cacacaccgc ccgtcaaag 1279 <210> 2 <211> 18 <212> DNA <213> primer <400> 2 gagtttgatc ctggctca 18 <210> 3 <211> 18 <212> DNA <213> primer <400> 3 ggttaccttg ttacgact 18

Claims (18)

  1. 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된, 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주는 염화나트륨이 포함된 배지에서 배양되는 것을 특징으로 하는 균주.
  3. 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 약재는 감초, 계피, 고삼, 구기자, 동충하초, 매실, 목단피, 목향, 반하, 방풍, 백복령, 복분자, 약쑥, 우슬, 울금, 인삼, 하수오 및 지황으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제3항에 있어서,
    상기 약재 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 다가알코올, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에틸아세테이트, 글리세린 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추출 용매를 이용하여 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제3항에 있어서,
    상기 발효는 pH 4 내지 8에서 0 내지 50℃로 1 내지 20일간 실시하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  8. 제3항에 있어서,
    상기 발효 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.0001 내지 10 중량% 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  9. 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화장료 조성물은,
    자외선 차단 또는 항염용 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  10. 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화장료 조성물은,
    항산화 또는 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 피부 개선은 피부 미백, 피부 보습 또는 피부 주름 개선인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  12. 제3항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 제형인 화장료 조성물.
  13. 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시켜 약재의 피부 개선 또는 항산화 효과를 향상시키는 방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주인 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 약학 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  17. 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주를 첨가하여 약재 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 피부 외용제.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 할로아르쿨라(Haloarcula) 속 균주는 기탁번호 KCTC12830BP(Haloarcula vallismortis LG halophilic microorganism)로 기탁된 할로아르쿨라 발리스모르티스(Haloarcula vallismortis) 균주인 것을 특징으로 하는 피부 외용제.
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