KR101722615B1 - 산뽕나무, 한련초, 지구자 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

산뽕나무, 한련초, 지구자 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유함으로써 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase2, HAS2)의 유전자 발현을 증가시켜 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키고, 버시칸의 합성을 촉진하며, 버시칸 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제함으로써 세포외 기질의 구조를 견고히 하여 피부 탄력 증가 및 피부 보습 효과가 우수한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

산뽕나무, 한련초, 지구자 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물{Skin external composition containing Morus Bombycis Extract, Eclipta Prostrata Extract or Hovenia Dulcis Fruit Extract}
본 발명은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유함으로써 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase2, HAS2)의 유전자 발현을 증가시켜 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키고, 버시칸의 합성을 촉진하며, 버시칸 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제함으로써 세포외 기질의 구조를 견고히 하여 피부 탄력 증가 및 피부 보습 효과가 우수한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
인체에서의 히알루론산의 기능과 히알루론산 합성효소의 유전자 발현 조절에 관하여 설명하고자 한다. 히알루론산은 황산기가 부착되지 않은 글루코스아미노글리칸 (nonsulfated glycosaminoglycan)의 일종으로, 글루쿠로닉산과 N-아세틸글루코사민 잔기가 반복적으로 연결되어 있는 선형의 고분자물질이다. 세포외기질의 주 구성성분으로서 수분 보유, 세포간 간격 유지, 세포성장인자 및 영양성분의 저장 및 확산에 관여할 뿐만 아니라, 세포의 분열과 분화, 이동 등에 관여하는 것으로 보고되었다.
포유류의 신체에 존재하는 히알루론산의 50 % 이상이 피부에 존재하는데, 주로 각질형성세포와 섬유아세포에 의해 합성되며, 표피의 세포간간격과 진피의 결체 조직에 분포한다고 보고되었다. 인간의 피부에서의 히알루론산의 양은 노화와 함께 감소되는 것으로 보고되었는데, 이것이 노화에 따른 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나라고 여겨진다.
피부 세포 배양 상태에서의 히알루론산의 합성은 여러 가지 성장인자와 트랜스레티노인산, N-메틸세린 등에 의해 증가된다는 보고와, 피부에 도포된 여성호르몬(estradiol) 및 그 유사물질이 히알루론산의 합성을 증가시킨다는 보고가 있으나, 히알루론산 대사에 대한 자세한 기작은 아직 밝혀지지 않았다. 단지, 히알루론산의 합성은 세포막의 안쪽 표면에서 히알루론산합성효소에 의해 진행되며, 합성되는 동안 세포막을 뚫고 나와 세포외기질로 축적된다고 알려졌다. 포유동물에서 히알루론산 합성 효소의 유전자는 서열상의 유사성이 높은 HAS1, HAS2, HAS3, 이 세가지 형태가 보고되었으나, 세포와 조직에서의 분포와 효소 활성을 조절하는 인자에 대한 연구는 많이 진행되지 않았다. 표피성장인자(Epidermal growth factor, EGF)가 표피 세포 배양액 속에 첨가되었을 때 HAS2의 유전자 발현이 증가한다는 사실이 보고되었다.
이에, 본 발명자들은 세포 배양 상태에서의 실시간 DNA 연쇄 중합 반응 어세이, ELISA를 수행하여 산뽕나무, 한련초, 지구자 복합 추출물이 히알루론산 합성 효소 2 (HAS2) 유전자의 발현을 증가시키고 히알루론산의 합성을 증가시키고, 또한 히알루론산, 콜라젠 다발과 결합하여 세포외기질 구조를 강화하는 버시칸 유전자의 발현을 증가시키며, 버시칸의 분해를 야기하는 MMP-12 유전자의 감소를 유도하는 효과를 발견하고, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 히아룰론산 생성을 촉진하고 세포외기질 성분의 구조를 견고히 하여 노화로 인한 피부 탄력 저하를 억제하는 히알루론산 생성촉진용 외용제 또는 피부 보습 증진 및 노화 방지용 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 발명의 피부 외용제 조성물은 단일 성분이 아닌 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 한약재 복합 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 함유하여 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소의 유전자 발현을 현저히 증가시킴으로써 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키는 히알루론산 생성촉진제로서의 효과를 가지고 동시에 세포외기질 구조를 견고히 하는 버시칸의 생성을 촉진하며, 버시칸의 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제하는 효과를 가지므로 피부 건조증 및 피부 노화 방지를 위해 이용될 수 있다.
도 1은 산뽕나무, 한련초 및 지구자 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 히알루론산 합성효소의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 2는 산뽕나무, 한련초 및 지구자 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 버시칸 유전자의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 3은 산뽕나무, 한련초 및 지구자 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 UV에 의한 MMP-12 유전자의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 4는 산뽕나무, 한련초 및 지구자 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 히알루론산의 양을 ELISA 방법으로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
본 발명은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 유효성분으로 사용되는 산뽕나무(Morus Bombycis)는 산기슭의 양지에서 자라는 낙엽활엽소교목이다. 원산지는 한국으로 국외로는 중국, 일본, 대만, 히말라야 등지에 분포한다. 뽕나무와 구분할 수 없을 만큼 비슷한데, 산뽕나무의 잎은 끝이 꼬리처럼 길고, 뽕나무의 잎은 끝이 점점 뾰족해진다. 6월에 노란 빛이 도는 녹색의 꽃이 핀다.
본 발명은 산뽕나무의 뿌리를 추출한 추출액을 이용할 수 있다. 뽕나무의 뿌리껍질을 채취하여 겉껍질을 벗기고 흰 속살(대체로 담황색 혹은 황갈색)만을 약으로 쓰는데 이것을 ‘상근백피’ 또는 ‘상백피’라 한다. 상백피는 동의보감에 ‘아무 때나 채취하는데, 땅 위에 드러나 있는 것은 사람을 상하게 한다. 처음 캐서 칼로 겉껍질을 긁어 버리고 속에 있는 흰 껍질을 벗겨서 햇볕에 말려 쓴다.’고 했다. 질이 단단하고, 맛은 달며 성질이 차고 독이 없다. 동의보감에 따르면 산뽕나무뿌리 추출물은 갈증을 없애주고, 수기를 소통시켜 부스럼이나 종창을 삭여주는 효능이 있다. 또한, 얼굴 피부에 부종이 있는 증상을 완화시켜준다고 한다. 혈압낮춤작용, 가래삭임작용, 이뇨작용, 억균작용, 피부가려움증, 폐열로 기침이 나고 숨이 찬 데, 피가래, 붓는 데, 고혈압, 기관지 천식, 기관지염에도 효과가 있다고 한다.
본 발명의 유효성분인 한련초(Eclipta Prostrata)는 논둑이나 습지에서 자란다. 줄기 높이는 10~60센티미터에 이른다. 몸 전체에 조금 거센 느낌의 털이 난다. 잎은 마주 나고 바소꼴이며, 잎자루는 거의 없다. 길이 3~10센티미터, 폭 5~25밀리미터쯤 되며, 가장자리에 잔 톱니가 있다. 양면에 털이 있어 껄끄럽다. 꽃은 두화로 8~9월에 잎겨드랑이에서 나온 긴 꽃자루 끝에 1개씩 달리며, 설상화는 흰색이고 가운데 대롱꽃은 노란색이다. 열매는 수과로, 3~5개 모서리가 지고, 까맣게 익으며 갓털이 없다. 줄기를 자르면 검은 즙액이 나오며 잘라진 부분도 금세 까매진다. 한련초는 신(腎)을 보하고, 음(陰)을 더해주는 기능이 있다. 이는 노화로 인해 부족해진 (火) 진액을 보충해주는 것과 같다. 구체적으로는 지혈, 항균 작용, 피부가 갈라지는 피부염(갖가지 피부병)에 효과, 모발 성장 촉진, 모발을 검게 해 주고, 관상 동맥의 혈류량 촉진 작용과 진정, 진통 작용, 항암작용 (자궁암, 식도암, 피부암 등)이 있다고 알려져 있다.
본 발명의 유효성분인 지구자(Hovenia Dulcis Fruit)는 한약재의 명칭으로 갈매나무과의 헛개나무(Hovenia dulcis Thunb.)의 과병을 가진 열매 또는 씨를 말한다. 맛이 달다고 해서 나무에서 나는 꿀이라는 뜻으로 목밀(木蜜)이라고도 한다. 중국에서는 신선의 정원에서 나는 배나무라는 뜻으로 현포리(玄葡梨)라고 했으며 돌과 같이 희고 단단하다 하여 백석목(白石木)이라고 부르기도 한다. 생김새는 납작한 원형으로 등쪽은 조금 볼록하고 배쪽은 비교적 납작하며 바깥 면은 홍갈색으로 광택이 있다. 기부에는 타원형의 점 모양의 씨앗배꼽이 있고 끝에는 약간 볼록한 모듬점이 있으며 배쪽에는 한 개의 볼록한 씨앗등마루가 세로로 있다. 지구자는 열병으로 인한 번열, 구갈, 딸꾹질, 구토 등에 쓰며 이뇨를 돕고, 알코올중독으로 상한 간장을 치료한다고 알려져 있다.
본 발명에 사용되는 산뽕나무, 한련초, 지구자는 상업적으로 구입하거나 통상 사용되는 제조 방법에 의해서 제조될 수 있으며, 그 제조방법이 특별히 한정되지는 않지만, 바람직하게는 하기와 같은 방법으로 제조될 수 있다.
본 발명에서 사용하는 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 또는 지구자 추출물은 각 한약재를 물 또는 유기용매로 추출물을 수득할 수 있다. 본 발명에서 사용하는 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으며, 또는 이들 유기용매와 물과의 혼합용매를 사용할 수도 있다. 바람직하게는 80% 에탄올을 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 산뽕나무, 한련초 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~14중량%의 양으로 함유한다. 상기 복합 처방 추출물의 함량이 0.0001중량% 미만이면 상기 추출물에 의한 히알루론산 생성 증가, 버시칸 생성 촉진, MMP-12 생성 억제 효과 등을 얻을 수 없고, 14중량%를 초과하면 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문에 비효율적이다.
본 발명에 의한 조성물은 상기 추출물을 단독으로 사용할 때보다 2종 이상을 혼합하여 사용할 때 그 효과가 더 우수하다. 바람직하게는 산뽕나무 추출물과 한련초 추출물을 1:1의 중량비로 혼합한 산뽕나무 추출물과 한련초 복합 처방 추출물을 0.0001중량%로 사용할 수 있지만, 특별하게 한정하지 않고 제형 내에서 적절한 비율로 혼합하여 사용할 수 있다. 또한, 산뽕나무 추출물과 한련초 추출물의 혼합 처방 추출물에 지구자 추출물을 혼합하여 사용할 때 그 효과가 더 우수하며, 바람직하게는 산뽕나무 추출물과 한련초의 혼합 추출물, 지구자 추출물 및 추출물을 1:1:1의 중량비로 혼합하여 사용하지만, 특별하게 한정하지 않고 제형 내에서 적절한 비율로 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 HAS2 유전자의 발현을 증가시켜 히알루론산의 합성을 증가시킨다. 또한, 버시칸 유전자의 발현을 증가시켜 버시칸의 합성을 촉진시킬 뿐만 아니라 MMP-12 유전자의 발현을 감소시켜 버시칸의 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제한다. 따라서, 본 발명은 히알루론산의 생성을 촉진하고 세포외기질 성분의 구조를 견고히 하여 노화로 인한 피부 탄력 저하를 억제시키고 피부 보습을 증진시키는 효과를 가진다.
본 발명의 피부 외용제 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 경우는 없는데, 예를 들어 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입의 화장료 제형을 가질 수 있으며, 또한 로션, 연고, 젤, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피투여형의 제형일 수 있다.
이하 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 좀 더 상세히 설명하고자 하며, 본 발명의 권리 범위는 이들 예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
[제조예 1] 산뽕나무 뿌리 추출물의 제조
산뽕나무뿌리를 용매인 정제수를 이용하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 및 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 산뽕나무 뿌리 추출물을 제조하였다.
[제조예 2] 한련초 추출물의 제조
한련초를 용매인 정제수를 이용하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 및 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 한련초 추출물을 제조하였다.
[제조예 3] 지구자 추출물의 제조
지구자를 용매인 정제수를 이용하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 및 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 지구자 추출물을 제조하였다.
[시험예 1] 산뽕나무뿌리, 한련초, 지구자 한약재 복합추출물 처리에 의한 HaCaT 세포에서의 HAS2, 버시칸, MMP-12 발현 증가
[1 단계] 세포주와 세포 배양
인체 각질형성 세포주 (human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청 (fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지 (Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다.
[2 단계] 정량적인 역전사 PCR 을 통한 HAS2 , 버시칸 , MMP -12 유전자의 mRNA 합성 증가 확인
상기 1 단계에서 배양된 세포주를 트립신으로 처리하여 단일세포 현탁액을 만들고 T75 플라스크에 1 x 10 6개씩 분주하여, 24 시간 배양하였다. 그 후, 우혈청이 포함되지 않은 DMEM 배지를 처리하여 24 시간 동안 배양한 다음 역시 우혈청이 포함되지 않은 배지에 DMSO에 녹인 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물, 지구자 추출물(상기 제조예 1~3)을 10 ppm씩 처리하였다. 무처리 대조군으로는 비히클인 DMSO를 이용하였다.
그리고, MMP-12의 발현을 유도하기 위한 UV 처리는 다음과 같이 진행하였다. 인체 각질형성세포주인 HaCaT세포를 106개의 밀도로 100mm 세포 배양 접시에서 배양하였고, FS40 램프[웨스팅하우스, 피츠버그, 피에이., 미국(Westinghouse, Pittsburgh, PA, USA)]를 이용하여 자외선 B를 10mJ/cm2로 조사한 후, DMSO에 산뽕나무뿌리, 한련초, 지구자 추출물을 10ppm씩, 산뽕나무뿌리와 지구자 추출물의 복합처방의 총 양을 5ppm, 산뽕나무뿌리, 한련초 및 지구자 추출물의 복합처방의 총 양을 5ppm의 농도로 각각 녹여 처리한 배지로 교체하였다. 무처리 대조군으로는 비히클인 DMSO를 이용하였다.
24 시간 경과 시점에서 세포를 회수하여 냉각된 인산완충용약(PBS)로 세척하고 TRIzol™ 시약 (Life Technologies, Inc.) 1 ml을 첨가하여 총 RNA를 추출하여 정량적인 실시간 DNA 연쇄중합반응을 수행하였다. 실시간 DNA 연쇄중합반응 수행을 위한 HAS2, 버시칸, MMP-12의 프라이머 서열은 하기 표 1과 같다.
Figure 112010075122316-pat00001
총 RNA 1μg을 50mM 트리스-HCl(Tris-HCl, pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 0.1M DTT, 10mM dNTP 및 40 유닛/μl RNase 저해제가 함유된 역전사 반응 완충액 25μl에 넣고, 0.5μg/μl 올리고(dT)16의 프라이머와 200 유닛 수퍼스크립트 II[SuperScript II, 집코비알엘(GiboBRL)]의 역전사 중합효소를 첨가하여 42℃에서 1시간 반응시킨 다음 역전사 반응 용액 2.5μl를 엠플리택(AmpliTaq) DNA 중합효소[0.04U, 퍼킨 엘멀, 쉘튼, 씨티(Perkin Elmer, Shelton, CT)], 50mM 트리스(pH 8.3), 0.25mg/ml 우혈청알부민, 3mM MgCl2, 0.25mM dNTPs, SYBR 그린 I의 1/50,000 희석액[몰레큘라 프로브, 유진, 오알(Molecular Probes, Eugene, OR)]이 함유된 PCR 반응 완충액 50리터에 섞고, 10μM의 프라이머를 첨가하여 94℃에서 30초간 변성, 53℃에서 30초간 어닐링 및 72℃에서 1분간 확장하는 사이클을 30회 수행하였다. 상대적인 mRNA 레벨은 아이사이클러(ICycler) 소프트웨어를 이용하여 SYBR 그린 I 형광 변화를 측정함으로써 분석하였다. 각각의 프라이머는 SCI급 논문들을 토대로 제작하였다. 내부 표준물질로 GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)를 사용하여 유전자의 정량적 발현 수준을 보정하였다. HAS2, 버시칸 및 MMP-12 유전자의 발현 정도는 각각 도 1~3에 나타내었다.
도 1 및 도 2에서 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 또는 지구자 추출물의 단독 처리군은 10ppm 농도로 처리한 군이고, 산뽕나무뿌리 추출물 및 한련초 추출물, 산뽕나무뿌리 추출물 및 지구자 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물의 2종 복합 처방군은 각각의 2종 혼합물의 총 양을 5ppm 농도로 처리한 군이고, 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 및 지구자의 3종 복합 처방군은 3종의 혼합물의 총 양을 5ppm 농도로 처리한 군이다.
도 1 및 도 2를 보면, 산뽕나무뿌리, 한련초 또는 지구자 추출물을 단독 처리한 경우, 상기 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 어느 정도 증가하였으나, 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물 중에 2가지 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 유의하게 증가함을 알 수 있었다. 특히, 산뽕나무뿌리, 한련초 및 지구자 추출물의 세가지 복합처방을 사용할 경우에는 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 단독 처리군이나 2종 복합 처리군보다 현격히 증가함을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따라 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 사용하면 히알루론산의 합성을 효과적으로 증가시킬 수 있으며, 이로써 세포외기질 구조를 강화시킬 수 있음을 알 수 있다.
또한, 도 3에서 UV군은 UV를 조사한 뒤 DMSO로 처리한 군이고, UV + 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 또는 지구자 추출물의 단독 처리군은 UV를 조사한 뒤 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 또는 지구자 추출물을 10ppm 농도로 처리한 군이고, UV + 산뽕나무뿌리 추출물 및 한련초 추출물, 산뽕나무뿌리 추출물 및 지구자 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물의 2종 복합 처방군은 UV를 조사한 뒤 각각의 2종 혼합물의 총 양을 5ppm 농도로 처리한 군이고, UV + 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 및 지구자의 3종 복합 처방군은 UV를 조사한 뒤 3종의 혼합물의 총 양을 5ppm 농도로 처리한 군이다.
도 3을 보면, 산뽕나무뿌리, 한련초 또는 지구자 추출물을 단독 처리한 경우, 상기 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 MMP-12 유전자의 발현량이 어느 정도 감소하였으나, 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물 중에 2가지 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 MMP-12 유전자의 발현량이 유의하게 감소함을 알 수 있었다. 특히, 산뽕나무뿌리, 한련초 및 지구자 추출물의 세가지 복합처방을 사용할 경우에는 단독 처리군이나 2종 복합 처리군보다 MMP-12 유전자의 발현량이 현격히 훨씬 더 감소함을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따라 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 사용하면 MMP-12 유전자의 발현량을 감소시킴으로써 세포외기질 구조를 강화하는 버시칸의 분해를 억제할 수 있음을 알 수 있다.
[시험예 2] 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물, 지구자 추출물에 의한 HaCaT 세포에서의 히알루론산 생성 증가
상기 시험예 1의 단계 1에서 배양된 세포주를 트립신 처리하여 단일세포 현탁액을 만들고 T75 플라스크에 1 x 10 6개씩 분주하여, 24 시간 배양하였다. 그 후, 우혈청이 포함되지 않은 DMEM 배지를 처리하여 24 시간 동안 배양한 다음 역시 우혈청이 포함되지 않은 배지에 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물, 지구자 추출물을 10 ppm씩, 산뽕나무뿌리 추출물과 지구자 혼합 추출물 10 ppm, 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물, 지구자 혼합 추출물 10 ppm을 녹여 처리하였다. 24 시간 경과 시점에서 세포 배양액을 회수하여 15,000g에서 5분간 원심분리하여 침강된 세포를 제거하고 상층액을 얻어 에첼론 생명과학 회사 (Echelon Bioscience, Salt Lake, UT)회사의 ELISA 키트를 이용하여 히알루론산 양을 측정하였다.
도 4에서 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 또는 지구자 추출물의 단독 처리군은 10ppm 농도로 처리한 군이고, 산뽕나무뿌리 추출물 및 한련초 추출물, 산뽕나무뿌리 추출물 및 지구자 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물의 2종 복합 처방군은 각각의 2종 혼합물의 총 양을 5ppm 농도로 처리한 군이고, 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 및 지구자의 3종 복합 처방군은 3종의 혼합물의 총 양을 5ppm 농도로 처리한 군이다.
도 4를 보면, 산뽕나무뿌리, 한련초 또는 지구자 추출물을 단독 처리한 경우, 상기 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 히알루론산의 양이 어느 정도 증가하였으나, 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물 중에 2가지 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 히알루론산의 양이 유의하게 증가함을 알 수 있었다. 특히, 산뽕나무뿌리, 한련초 및 지구자 추출물의 세가지 복합처방을 사용할 경우에는 히알루론산의 합성량이 단독 처리군이나 2종 복합 처리군보다 현격히 증가함을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따라 산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 사용하면 히알루론산의 합성량을 효과적으로 증가시킬 수 있고, 이로써 히알루론산 감소로 인한 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소를 예방할 수 있다.
[제형예 1] 영양화장수
하기 표 2에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물 2.0
스쿠알란 5.0
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 2] 영양크림
하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물 2.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
PEG60 경화피마자유 2.0
유동파라핀 10.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 3] 팩
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물 2.0
폴리비닐알콜 13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2
글리세린 5.0
알란토인 0.1
에탄올 6.0
PEG 12 노닐페닐에테르 0.3
폴리솔베이트 60 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 4] 연고
하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
산뽕나무뿌리 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물 2.0
정제수 잔량
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 15.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 1.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
솔비탄 스테아레이트 0.4
스테아릴 알코올 1.0
방부제 적량
향 적량
색소 작량
밀랍 4.1
합계 100

Claims (27)

  1. 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 2종 이상의 식물 추출물로 구성되는 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 산뽕나무 추출물은 산뽕나무 뿌리로부터 추출되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상이 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~14중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 히알루론산의 생성을 촉진시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 히알루론산 합성 효소 유전자의 발현을 증가시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 버시칸 유전자의 발현을 증가시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 MMP-12 유전자의 발현을 감소시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 식물 추출물은 물, 부틸렌글라이콜 또는 페녹시에탄올을 추출용매로 이용하여 추출한 것임을 특징으로 하는, 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 식물 추출물은 1500기압 및 30℃ 이하의 온도에서 3시간 동안 추출한 것임을 특징으로 하는, 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 피부 점착 타입, 로션, 연고, 패취 및 분무제로 구성되는 군에서 선택되는 어느 1종으로 제형화됨을 특징으로 하는, 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 혼합물은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 2종의 식물 추출물이 1~10:1~10의 중량비로 혼합되어 구성됨을 특징으로 하는, 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 상기 혼합물은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 3종의 식물 추출물이 1~10:1~10:1~10의 중량비로 혼합되어 구성됨을 특징으로 하는, 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 조성물로 제조되는 화장품.
  14. 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 2종 이상의 식물 추출물로 구성되는 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 산뽕나무 추출물은 산뽕나무 뿌리로부터 추출되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  16. 제14항에 있어서, 상기 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상이 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~14중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  17. 제14항에 있어서, 상기 조성물은 히알루론산의 생성을 촉진시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  18. 제14항에 있어서, 상기 조성물은 히알루론산 합성 효소 유전자의 발현을 증가시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  19. 제14항에 있어서, 상기 조성물은 버시칸 유전자의 발현을 증가시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  20. 제14항에 있어서, 상기 조성물은 MMP-12 유전자의 발현을 감소시킴을 특징으로 하는, 조성물.
  21. 제14항에 있어서, 상기 식물 추출물은 물, 부틸렌글라이콜 또는 페녹시에탄올을 추출용매로 이용하여 추출한 것임을 특징으로 하는, 조성물.
  22. 제14항에 있어서, 상기 식물 추출물은 1500기압 및 30℃ 이하의 온도에서 3시간 동안 추출한 것임을 특징으로 하는, 조성물.
  23. 제14항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 피부 점착 타입, 로션, 연고, 패취 및 분무제로 구성되는 군에서 선택되는 어느 1종으로 제형화됨을 특징으로 하는, 조성물.
  24. 제14항에 있어서, 상기 혼합물은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 2종의 식물 추출물이 1~10:1~10의 중량비로 혼합되어 구성됨을 특징으로 하는, 조성물.
  25. 제14항에 있어서, 상기 혼합물은 산뽕나무 추출물, 한련초 추출물 및 지구자 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 3종의 식물 추출물이 1~10:1~10:1~10의 중량비로 혼합되어 구성됨을 특징으로 하는, 조성물.
  26. 제14항에 있어서, 상기 피부 노화 방지는 피부의 탄력 저하를 억제시키고 피부의 보습력을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  27. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항의 조성물로 제조되는 화장품.
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