KR102526210B1 - 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 일 양상에 따른 화장료 조성물은 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함함으로써, 우수한 피부 장벽 강화, 상처 개선 및 치유 및 피부 재생 효과를 나타낼 수 있다.
Description
매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
매스틱검(Mastic gum)은 그리스 키오스 섬에서 자라는 옻나무과 작물인 매스틱 나무(Pistacia lentiscus)의 가지나 줄기에서 얻어지는 수지를 말한다.
매스틱검은 고대 그리스부터 소화계통의 질병을 치료하는 목적으로 사용되어 왔으며, 현대사회에서는 주로 위 건강을 위한 건강기능식품으로 각광받고 있는 식물 유래 원료이다.
그 외에도 항균, 항암 등 매스틱검의 다양한 효과에 대해 이미 논문을 통해 이미 여러 차례 보고된 바가 있으며, 특히 이를 통한 장 내 염증 치료, 피부염 예방 등이 알려져 있다.
최근 들어, 미세 먼지와 코로나 19에 의한 마스크 착용 등에 의해 발생하는 피부 자극에 대해 진정하고자 하는 소비자의 선호도가 높아지고 있다. 이에 병풀, 어성초 등 피부 진정을 소구하는 제품들의 출시와 인기도가 높아지고 있다.
따라서, 매스틱검과 미생물을 활용하여 피부 장벽 개선 및 피부 재생과 피부 상처 개선에 효능을 나타낼 수 있는 화장품 원료의 개발, 발효법 및 추출법의 개발이 필요하다.
일 양상은 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물을 제조방법을 제공하는 것이다.
일 양상은 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
용어 '매스틱검 (Mastic Gum)'은 매스틱 나무 (Pistacia lentiscus)에서 얻은 수지를 의미할 수 있다.
상기 매스틱검 추출 발효물은 미생물에 의해서 발효된 것일 수 있다. 상기 매스틱 검 추출 발효물을 제조하기 위하여 사용될 수 있는 미생물은 예를 들면 흑효모(Aureobasidium Pullulans)일 수 있다.
용어 '추출물'은 추출 방법, 추출 용매, 추출 조건, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 추출함으로써 얻어진 물질을 모두 포함할 수 있으며, 천연물의 성분을 추출한 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질도 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 가공 또는 처리는 희석, 농축, 건조, 정제, 분획, 여과, 발효, 효소 처리 등을 포함할 수 있다. 따라서, 본 명세서 내에서 추출물은 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물 및 이를 1차 및/또는 2차 여과하여 얻은 여과물을 포함할 수 있다.
상기 추출 방법은 예를 들면 물 추출, 열수 추출, 에탄올 추출, 가열 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 아임계 추출 등 공지된 천연물 추출 방법을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
일 양상의 상기 매스틱검 추출 발효물의 추출 용매는 예를 들면 물, C1 내지 C4의 알코올, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 본 명세서 내 구체예로서 상기 매스틱검 추출물의 추출 용매는 물일 수 있다.
상기 추출 조건은 추출 시간, 추출 온도 등 천연물의 성분을 추출하기 위한 조건을 의미한다. 상기 추출 시간은 예를 들면, 12 시간 내지 56시간, 18시간 내지 48시간, 20 시간 내지 30시간, 22 시간 내지 25시간, 또는 24시간 일 수 있다. 또한 상기 추출물의 추출온도는 예를 들면 30℃내지 90℃, 40℃ 내지 80℃, 50℃ 내지 70℃ 또는 60℃일 수 있다.
상기 화장료 조성물에서 유효성분으로 포함된 매스틱검 추출 발효물의 농도는 예를 들면 0.1 mg/mL 내지 5 mg/mL, 0.3 mg/mL 내지 3 mg/mL, 0.5 mg/mL 내지 2 mg/mL, 0.5 mg/mL 내지 1.5 mg/mL, 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL, 또는 0.5 mg/mL 내지 1 mg/mL일 수 있다.
상기 매스틱검 추출 발효물은 미생물을 이용하여 발효시킬 수 있으며, 이 경우 발효시간은 예를 들면, 24 시간 내지 96시간, 30시간 내지 80시간, 36시간 내지 75시간, 또는 48시간 내지 74시간일 수 있다. 또한 발효 시 온도는 예를 들면 20℃내지 30℃, 22℃ 내지 26℃ 또는 25℃일 수 있다.
이때, 발효 온도 및 시간이 상기 범위 미만인 경우, 매스틱검의 충분한 발효가 일어나지 못할 가능성이 높아 매스틱검의 성분을 고농도로 함유할 수 없으므로 피부 피부재생 또는 피부 상처 개선 효과가 충분히 발휘되지 못하는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우, 과발효가 일어나 포함된 성분이 파괴되는 문제점이 있을 수 있다.
아울러 상기 매스틱검 추출 발효물은 발효 이후 여과과정을 추가적으로 거칠 수 있으며, 상기 여과 과정은 1차 또는 2차 여과과정을 거칠 수 있다. 상기 여과 과정에서 부틸렌글라이콜 (Butylene glycol), 글리세린(glycerin), 1,2-헥산디올(1,2-Hexanediol), 프로판다이올(Propanediol), 에칠헥산디올(Ethyl hexanediol), 폴리에틸렌글리콜(Polyethylene glycol), 폴리프로필렌글리콜(Polypropylene glycol), 디프로필렌글리콜(Dipropylene glycol), 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 피이지/피피지/폴리부틸렌글리콜-8/5/3글리세린(PEG/PPG/Polybutylene glycol-8/5/3 glycerin) 및 펜틸렌글리콜(Pentylene glycol)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 다가 알코올을 용매로 하여 여과한 것일 수 있다.
본 명세서에 있어서, "여과"란 액체와 고체가 혼합된 물질을 입자의 크기 차이를 이용하여 분리하는 방법을 의미하며, 예를 들어 공지된 방법으로서 물리적인 세공 또는 간극을 갖는 필터에 의해 여과가 행해질 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 여과는 여과매체 (filtering medium)를 사용하여 진행될 수 있으며, 이때 여과매체로는 글래스 필터 (glass filter) 등이 사용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 매스틱검 추출물을 발효하여 제조한 발효물을 포함하는 조성물은 피부 장벽 강화, 상처 개선 및 치유 또는 피부 재생 일 수 있다.
상기 매스틱검 추출 발효물은 미생물을 이용하여 발효시킬 수 있으며, 이 경우 발효시간은 예를 들면, 24 시간 내지 96시간, 30시간 내지 80시간, 36시간 내지 75시간, 48시간 내지 74시간일 수 있다.
용어 '피부 장벽 강화'는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다. 구체적으로 일 양상의 매스틱검 추출 발효물은 피부 장벽 개선 용도로 활용될 수 있다.
용어 '상처'는 '창상'이라고도 하며, 생체의 손상을 의미하며, 본 명세서 내에서는 피부의 손상을 의미할 수 있다. 상기 손상은 물리적 손상, 방사선, 화학물질에 의한 자극, 미생물의 증식 등 외부 요인, 스트레스 등의 내부 요인에 의한 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 상처는 절창, 자창, 할창, 좌창, 열창, 사창, 교창 등 모든 종류의 상처를 포함할 수 있다. 따라서, 상기 '피부 상처'는 물리적 손상, 방사선, 화학물질에 의한 자극, 미생물의 증식 등 외부 요인, 스트레스에 의한 상처, 창상, 절창, 자창, 할창, 좌창, 열창, 사창 및 교창으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종일 수 있다.
용어 '피부 재생'은 피부의 일부분이 소실되었거나 손상되었을 경우 그 부분을 보충하거나 피부 세포의 증식 및 이동을 증진시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.
용어 '상처 개선'은 얼굴이나 신체의 상처를 옅어지게 하거나 정도를 감소시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.
용어 '상처 치유'는 상처를 회복하는 일련의 생체반응을 의미할 수 있다. 상기 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 필라그린과 Caspase 14의 발현을 증가시켜 피부 장벽 강화 효과를 나타낼 수 있다.
상기 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 섬유아세포 이동을 촉진시켜 피부재생 또는 피부 상처 개선용 및 피부 장벽 강화용으로 활용될 수 있다.
상기 매스틱검을 이용한 발효물의 함량은 조성물의 용도, 목적하는 효과 등을 종합적으로 고려하여 통상적인 범위 내에서 적절히 선택할 수 있으나, 화장료 조성물에 있어서 상기 매스틱검 추출 발효물을 조성물 총 중량을 기준으로 예를 들면 0.2 중량%이상, 0.2중량% 내지 80중량%, 0.2중량% 내지 60중량%, 0.2중량% 내지 50중량%, 0.2중량% 내지 40중량%, 0.2중량% 내지 30중량%, 0.2중량% 내지 20중량%, 또는 0.2중량% 내지 10중량%으로 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물은 본 명세서에 개시된 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 기능성 첨가물 등을 추가로 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 분산제, 점증제, 방부제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제, 그리고 화장품학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들면, 상기 화장료 조성물은 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 앰플, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 파운데이션, 립스틱, 마스카라, 또는 메이크업 베이스일 수 있다.
일 양상에 있어서 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
상기 피부 외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
또한, 다른 양상은 유효한 양의 상기 매스틱검 추출 발효물을 포함하는 조성물을 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부재생 또는 피부 상처 개선, 완화, 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 매스틱검 추출 발효물 및 피부재생 또는 피부 상처 개선에 대한 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부재생 또는 피부 상처 개선 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
다른 양상은 매스틱검을 추출하는 단계; 매스틱검 추출물에 흑효모(Aureobasidium Pullulans)를 접종하고 발효시키는 단계; 및 멸균 및 여과하는 단계를 포함하는 매스틱검 추출 발효물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 매스틱검을 추출하는 단계에서 추출 용매는 예를 들면 물, C1 내지 C4의 알코올, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 본 명세서 내 구체예로서 상기 매스틱검 추출물의 추출 용매는 물일 수 있다.
상기 추출 조건은 추출 시간, 추출 온도 등 천연물의 성분을 추출하기 위한 조건을 의미한다. 상기 추출 시간은 예를 들면, 12 시간 내지 56시간, 18시간 내지 48시간, 20 시간 내지 30시간, 22 시간 내지 25시간, 또는 24시간 일 수 있다. 또한 상기 추출물의 추출온도는 예를 들면 30℃내지 90℃, 40℃ 내지 80℃, 50℃ 내지 70℃ 또는 60℃일 수 있다.
상기 흑효모를 접종하고 발효시키는 단계에서, 상기 발효는 예를 들면 20℃ 내지 30℃, 22℃ 내지 26℃ 또는 25℃에서 수행될 수 있다. 발효 온도가 20℃미만인 경우 충분한 발효가 일어나지 못할 가능성이 높고, 30℃를 초과한 높은 온도에서는 과발효가 될 수 있어 발효가 적절히 수행되지 않을 수 있다.
상기 흑효모를 접종하고 발효시키는 단계에서, 상기 발효 시간은 발효 온도, 교반 횟수 등 다른 조건에 따라 적절히 선택할 수 있으나, 예를 들면, 24 시간 내지 96시간, 30시간 내지 80시간, 36시간 내지 75시간, 48시간 내지 74시간일 수 있다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
일 양상에 따른 화장료 조성물은 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함함으로써, 우수한 피부 장벽 강화, 상처 개선 및 치유 및 피부 재생 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 매스틱검 추출 발효물인 실시예 1 조성물의 농도 별 필라그린(Filaggrin)의 발현에 미치는 영향을 확인한 도이다.
도 2는 매스틱검 추출물, 실시예 1 및 비교예 1 조성물의 농도 별 필라그린(Filaggrin)의 발현에 미치는 영향을 비교하여 분석한 도이다.
도 3은 매스틱검 추출 발효물인 실시예 1 조성물의 농도별 Caspase-14의 발현에 미치는 영향을 나타낸 확인한 도이다.
도 4는 매스틱검 추출 발효물인 실시예 1 조성물의 섬유아세포의 증식 및 이동을 촉진하여 상처 치유 또는 피부 재생에 미치는 영향을 현미경을 통해 관찰한 결과(도 4A) 및 인간 진피섬유아세포에 인위적으로 공백을 시간대별로 채워지는 공백의 면적을 분석하여 정량적으로 나타낸 결과(도 4B)를 나타낸 도이다(Negative control: 무혈청 배지(Serum free media)를 사용한 음성대조군; Positive control: FBS (Fetal Bovine Serum)을 사용한 양성 대조군; 용매 대조군(Solvent Control): 매스틱검 추출에 사용한 용매인 물 처리군; 매스틱검추출발효물 (흑효모) : 실시예 1 조성물의 0.1mg/mL, 1mg/mL 처리군).
도 2는 매스틱검 추출물, 실시예 1 및 비교예 1 조성물의 농도 별 필라그린(Filaggrin)의 발현에 미치는 영향을 비교하여 분석한 도이다.
도 3은 매스틱검 추출 발효물인 실시예 1 조성물의 농도별 Caspase-14의 발현에 미치는 영향을 나타낸 확인한 도이다.
도 4는 매스틱검 추출 발효물인 실시예 1 조성물의 섬유아세포의 증식 및 이동을 촉진하여 상처 치유 또는 피부 재생에 미치는 영향을 현미경을 통해 관찰한 결과(도 4A) 및 인간 진피섬유아세포에 인위적으로 공백을 시간대별로 채워지는 공백의 면적을 분석하여 정량적으로 나타낸 결과(도 4B)를 나타낸 도이다(Negative control: 무혈청 배지(Serum free media)를 사용한 음성대조군; Positive control: FBS (Fetal Bovine Serum)을 사용한 양성 대조군; 용매 대조군(Solvent Control): 매스틱검 추출에 사용한 용매인 물 처리군; 매스틱검추출발효물 (흑효모) : 실시예 1 조성물의 0.1mg/mL, 1mg/mL 처리군).
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예 및 실험예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예 및 실험예는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예 및 실험예에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예 및 실험예는 당 업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다.
실시예 1. 매스틱검 추출물 및 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물의 제조
매스틱검을 2 g 측량하여 물 1 kg을 첨가한 뒤 충분히 교반하였다. 교반 후 60℃에서 24시간 동안 물로 추출하였다. 추출 후 4℃에서 24시간 동안 저온 침지 시킨 뒤 여과하여 매스틱검 추출물을 제조하였다. 제조한 매스틱검 추출물을 120℃에서 30분간 멸균하였다. 멸균한 매스틱검 추출물에 흑효모(Aureobasidium Pullulans) 를 접종하여 25℃에서 120rpm으로 72시간 동안 발효하였다. 발효 종료 후 120℃에서 30분간 멸균하고 1차 여과하였다. 여과 후 부틸렌글라이콜, 글리세린, 1,2-헥산디올을 첨가하고 2차여과하여 매스틱검을 이용한 발효물을 제조하였다.
비교예 1. 효모를 이용한 매스틱검 발효물의 제조
상기 실시예 1의 실시예 제조 방법에서 흑효모가 아닌 효모(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하여 발효하였으며, 접종한 균주 외의 모든 실험 조건은 일 실시예와 동일하게 진행하였다.
실험예 1. 흑효모를 이용한 매스틱검 추출 발효물의 피부 장벽 및 피부 재생 효과 확인
실시예 1의 매스틱검을 이용한 추출물 및 발효물이 피부 장벽과 관련된 인자에 미치는 영향을 분석하였다.
구체적으로 인간 표피세포 (HaCaT)를 10% 우태아혈청(FBS)과 1% 페니실린을 포함하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지와 37 ℃, 5% CO2 배양기를 사용하여 배양하였다. 96 well plate에 3.0 x 104 개의 세포를 분주한 뒤 24시간 동안 배양기에서 배양하였다. 24시간 뒤 새로운 배지로 교체하고 시료를 원하는 농도로 처리하여 배양하였다. 24시간 배양 후 식염수로 충분히 세척하여 cDNA를 합성하고 100 ng/mL씩 정량한 다음 Quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR)을 진행하였다. Filaggrin (FLG) 및 Caspase-14 (CASP-14)의 상대적인 발현율은 Housekeeping gene (β-actin)으로 Normalization하였다. 매스틱검 추출물은 실시예 1에서 흑효모 등으로 발효과정을 거치지 않은 단순 추출물을 사용하였다. 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물인 실시예 1 조성물의 농도 별 필라그린(filaggrin: FLG)발현에 미치는 영향을 확인한 결과를 도 1에 나타내었다. 실시예 및 비교예를 활용하여 각각 흑효모 또는 효모를 이용한 FLG 발현에 미치는지 여부를 확인한 결과를 도 2에 나타내었다. 또한 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물인 실시예 1 조성물이 천연 보습인자 형성에 관여하는 CAS-14(caspase 14)의 발현에 미치는 영향을 확인하고 이를 도 3에 나타내었다.
| 유전자 | 프라이머 방향 | 서열 | 서열번호 |
| FLG | 정방향 | 5'-TCCCCTACGCTTTCTTGTCCT-3' | 1 |
| 역방향 | 5'-TGCTTGAGCCAACTTGAATACC-3' | 2 | |
| CASP-14 | 정방향 | 5'-GCTGGCGACAATGGAGTCAA-3' | 3 |
| 역방향 | 5'-TGGATCTTGTCAGCCCAACC-3' | 4 | |
| β-actin | 정방향 | 5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3' | 5 |
| 역방향 | 5'-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3' | 6 |
도 1에서 확인한 바와 같이, 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물인 실시예는 그 농도가 0.05 mg/mL에서는 오히려 그 발현이 감소하였으나, 0.1mg/mL이상에서는 발현이 증가가 되는 것을 확인하였다. 필라그린의 mRNA 농도가 가장 높아지는 농도는 0.1 mg/mL 내지 5 mg/mL 인 것을 확인하였다.
도 2에서 나타난 바와 같이, 매스틱검 추출물과 비교예 1에 따른 효모를 이용한 매스틱검 발효물은 0.1 mg/mL 에서 대조군보다도 필라그린의 발현이 줄어든 것을 확인하였으나, 동일한 농도에서 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물인 실시예 1 조성물은 필라그린의 발현이 증가한 것을 확인하였다. 또한 동일한 1 mg/mL 농도에서 역시 매스틱검 추출물 및 비교예 1 조성물 대비 실시예 1 조성물은 현저히 필라그린의 발현이 증가한 것을 확인하여 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물은 FLG 발현 증가에 효과적인 것을 확인할 수 있었다.
도 3에서 확인한 바와 같이, 실시예 1의 조성물은 0.1 mg/mL이상에서 CASP-14의 발현을 대조군 대비 증가시키는 것을 확인하였다. 따라서, 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물은 CASP-14의 발현을 촉진하는 것을 확인할 수 있었다.
종합적으로, 실시예 1의 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물은 피부 장벽의 주요 인자인 FLG와 CASP-14의 발현을 증가시킴으로써 다양한 외부 요인에 의한 피부 장벽의 손상 복구에 탁월한 효과가 있음을 확인하였다. 특히, 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물은 매스틱검 추출물, 효모를 이용한 매스틱검 발효물과 대비한 경우에도 FLG 발현 촉진 효과가 뛰어난 것을 확인할 수 있었다.
실험예 2. 흑효모를 이용한 매스틱검 추출 발효물의 상처 치유 효과
실시예 1의 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물의 상처 치유 효과를 확인하기 위해 Wound healing assay를 진행하였다.
구체적으로 상처에 의해 나타나는 조직의 손상과 이로 인한 조직 공백의 회복을 확인하기 위해 인간 진피섬유아세포 (Human Dermal Fibroblast, HDF) 세포에 인위적으로 공백을 만든 다음, 시료를 처리하여 상처 치유 효능을 확인하였다.
HDF를 10% 우태아혈청(FBS)과 1% 페니실린을 포함하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지와 37 ℃, 5% CO2 배양기를 사용하여 배양하였다. 24-wel plate에 well 당 1.0 Х 105 cell이 되도록 분주한 다음 24시간 동안 37℃ 5% CO2 incubator에서 배양하였다. 24시간 후 새로운 배지로 교체해주고 Yellow tip을 이용하여 세포가 배양된 well에 인위적으로 공백을 만들고 시료를 투여한 다음 시료 처리 직후 (0시간)를 포함하여 6시간, 24시간까지 공백으로의 세포 이동 능력을 현미경을 통해 관찰하고 촬영하였다. 촬영된 이미지를 Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA, ver.1.53e)를 이용하여 시간대별로 채워지는 공백의 면적을 비교 분석하였고, 촬영한 이미지를 도 4A에 시간대별로 채워지는 공백의 면적을 분석한 결과는 도 4B에 나타내었다.
도 4A 및 도 4B에서 확인한 바와 같이, 실시예 1의 조성물은 0.5mg/mL 에서는 대조군 대비 상처 치유 효과가 6.8% 상승하였으나, 1mg/mL에서는 28.7%로 치유효과가 현저히 상승하는 것을 확인하였다. 따라서, 실시예 1의 흑효모를 이용한 매스틱검 발효물은 인간 진피섬유아세포의 세포 증식 및 이동을 촉진하여 상처에 의해 나타나는 조직의 손상 및 공백 회복을 촉진하는 효과가 나타나는 것임을 확인하였다.
Claims (10)
- 흑효모(Aureobasidium Pullulans) 에 의해 발효된 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물로서,
상기 상처는 물리적 손상, 방사선, 화학물질에 의한 자극, 미생물의 증식, 스트레스에 의한 상처, 창상, 절창, 자창, 할창, 좌창, 열창, 사창 및 교창으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인 것인 화장료 조성물. - 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 매스틱검 추출 발효물은 물, C1 내지 C4의 알코올, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 추출용매로 추출된 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 매스틱검 추출 발효물의 농도는 상기 화장료 조성물 전체에 대해 0.1 mg/mL 내지 5 mg/mL 인 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 매스틱검 추출 발효물은 24시간 내지 96시간 및 20℃ 내지 30℃의 조건으로 발효된 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 매스틱검 추출 발효물은 부틸렌글라이콜 (Butylene glycol), 글리세린(glycerin), 1,2-헥산디올(1,2-Hexanediol), 프로판다이올(Propanediol), 에칠헥산디올(Ethyl hexanediol), 폴리에틸렌글리콜(Polyethylene glycol), 폴리프로필렌글리콜(Polypropylene glycol), 디프로필렌글리콜(Dipropylene glycol), 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 피이지/피피지/폴리부틸렌글리콜-8/5/3글리세린(PEG/PPG/Polybutylene glycol-8/5/3 glycerin) 및 펜틸렌글리콜(Pentylene glycol)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 다가 알코올을 포함한 용매로 여과한 것인 화장료 조성물.
- 삭제
- 흑효모(Aureobasidium Pullulans) 에 의해 발효된 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 피부 외용제 조성물로서,
상기 상처는 물리적 손상, 방사선, 화학물질에 의한 자극, 미생물의 증식, 스트레스에 의한 상처, 창상, 절창, 자창, 할창, 좌창, 열창, 사창 및 교창으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인 것인 피부 외용제 조성물. - 매스틱검을 추출하는 단계;
매스틱검 추출물에 흑효모(Aureobasidium Pullulans)를 접종하고 발효시키는 단계; 및
멸균 및 여과하는 단계를 포함하는 매스틱검 추출 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 피부 상처 개선용 화장료 조성물을 제조하는 방법으로서,
상기 상처는 물리적 손상, 방사선, 화학물질에 의한 자극, 미생물의 증식, 스트레스에 의한 상처, 창상, 절창, 자창, 할창, 좌창, 열창, 사창 및 교창으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인 것인 방법. - 청구항 9에 있어서, 상기 발효는 24시간 내지 96시간 및 20℃ 내지 30℃의 조건으로 수행되는 것인 방법.
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