CN105388228A - 一种鉴别不同产地麦冬的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种麦冬产地的鉴别方法，将麦冬药材进行提取浓缩制成待测样品，通过高效液相色谱法，对麦冬药材中的特征性药效成分——麦冬龙脑次苷进行含量测定，发现不同产地的麦冬药材中龙脑次苷含量存在明显差异。该方法不仅提供了一种全新的检测麦冬中的微量成分——龙脑次苷的方法，同时也是一种全新的麦冬产地鉴别方法。

Description

一种鉴别不同产地麦冬的方法

技术领域

本发明涉及一种麦冬产地的鉴别方法，包括利用特征性成分鉴别两种不同产地麦冬的方法和该特征性成分的含量测定方法，具体地说是利用龙脑次苷鉴别麦冬产地的方法和龙脑次苷的含量测定方法。

技术背景

麦冬又称麦门冬，为百合科植物麦冬Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.的干燥块根。具有养阴生津、润肺清心之功效。用于肺燥干咳，阴虚痨嗽，喉痹咽痛，津伤口渴，内热消渴，心烦失眠，肠燥便秘。为常用大宗中药材之一。麦门冬始载于《神农本草经》，列为上品，此后历代本草均有记载。根据历代本草记载和现代麦冬的产销情况，麦冬形成两大道地药材，即浙麦冬(又称杭麦冬)和川麦冬，且历代本草均认为浙麦冬质量最佳，川麦冬次之。

浙麦冬主产于浙江省的杭州附近和慈溪，以杭州笕桥所产为最佳。浙麦冬的采收年限一般为三年。川麦冬主产区四川绵阳地区的三台县，采收年限为一年，且产量高于三年生的浙麦冬。根据《中国药典》和现代植物分类学文献，浙麦冬和川麦冬为同一种植物，但根据两个产地的植物形态观察和化学成分分析，二个产地的麦冬不管是植物形态特征、生长状况还是从化学成分，均存在着明显的差别。目前已上市的参麦注射液所选取的麦冬药材产地不同，却没有标明其所用的麦冬其产地为何。

文献显示，麦冬中含有多种有效成分，主要为皂苷类和黄酮类(长春中医学院学报，麦冬化学成分及药理作用的研究现状)，然而发明人发现上述两类成分均难以被鉴别或不具有特征性。目前已有文献报道，使用龙脑苷鉴别参麦注射液中的麦冬成分(CN200910155685.6)，但是对于两个不同产地的麦冬到目前为止没有行之有效的鉴别方法。

龙脑次苷首次发现是浙麦冬中，在1983年，金田宣等(金田宣等.StudiesontheComponentsofOphiopogonRoots(China).I[J].Yakugakuzasshi.1983,103(11):1133-1139.)从20kg的浙麦冬(OphiopogonjaponicusKer-Gawler)中分得龙脑次苷300mg，得率为300mg/20kg。常规条件下根本无法检测到其存在，但是龙脑次苷又是麦冬的重要活性成分，有保护心肌细胞凋亡、促进心肌内皮细胞NO释放和抗低密度脂蛋白酶氧化等作用，故目前急需一种快速，简便的龙脑次苷检测方法用于鉴别麦冬产地。

发明内容

本发明提供一种麦冬产地的鉴别方法，包括通过检测龙脑次苷鉴别麦冬产地的方法和麦冬药材中龙脑次苷的含量测定方法。

本发明针对目前龙脑次苷含量测定方法的缺失，提供了一种行之有效的测定方法，可用于鉴别不同产地的麦冬药材。

本发明对麦冬原药材进行不同条件的提取浓缩后，采用高效液相色谱法检测龙脑次苷的含量，并且根据龙脑次苷的含量鉴别麦冬药材的产地。

具体方法如下：

(1)制备待测样品：将浙麦冬药材粉碎后过10目筛，精密称定150g，加溶剂500mL，提取0.2～3小时，滤过，减压浓缩至近干，残渣加甲醇溶液20mL，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

(2)制备对照品：精密称取龙脑次苷对照品(纯度：98.08％)35.38mg,，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

(3)含量测定：将待测样品注入高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：色谱柱为C18柱(250×4.6mm,5μm)，蒸发光散射检测器；流动相为乙腈-水(28:72)混匀；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测条件：漂移管温度40℃；氮气压力3.5L/min。

进一步，所述步骤(1)中，所述溶剂优选甲醇，乙醇，乙酸乙酯，水，氯仿，和正丁醇。

所述步骤(1)中，所述提取方法优选超声处理0.2～3小时或者加热回流0.2～3时。

进一步，所述步骤(1)中，所述提取方法优选加热回流0.5-2小时。

本发明方法中，提取浓缩后产生大量糖浆状混悬物，无法完全干燥，加入甲醇后无法得到浓度均匀的供试品溶剂，且含量极低，为提高龙脑次苷的含量，优选步骤(1)溶剂为甲醇：氯仿＝1～9:1。

进一步，所述步骤(1)中，所述溶剂优选甲醇：氯仿＝1～3:1。

使用上述方法，发明人通过不同渠道，收集了大量不同种植基地、不同采收时间的两种产地的麦冬，对多批次的浙麦冬与川麦冬进行分别测定，发现龙脑次苷只有在浙麦冬存在，川麦冬中检测不到龙脑次苷的存在，使用龙脑次苷作为麦冬药材中的指标性成分进行鉴别是行之有效的方法。

与现有技术相比，本发明的优势体现在：目前常规检测龙脑苷的方法是无法准确检测到龙脑次苷的含量，本发明不仅能做到快速检测，同时优选了提取方法与最佳溶剂，通过改变提取方法，使用较短的提取时间充分提取了药材中的微量成分，同时发明人筛选了不同溶剂以排除药材中大量糖类物质的干扰，最终能够准确检测其在药材中的含量，弥补了现有技术的空白。同时能够准确鉴别不同产地的麦冬药材，能够有效提高参麦注射液的质量。

附图说明

图1为实施例1中龙脑次苷标准曲线图。

图2为实施例1中龙脑次苷标准品溶液的色谱图。

图3为实施例1中供试品溶液的色谱图。

图4为实施例2中提取1h后供试品溶液的色谱图。

图5为实施例4中溶剂为甲醇-氯仿(2:1)的供试品色谱图。

图6为实施例6中浙麦冬20150621的色谱图。

图7为实施例6中川麦冬20150621的色谱图。

图8为实施例6中川麦冬20150801的色谱图。

具体实施例

发明的具体实施方案是为了更清楚地说明本发明，不是对本发明技术特征的限制。

实施例1：采用高效液相色谱法测定浙麦冬(浙麦冬20150801)中龙脑次苷的含量。

(1)高效液相色谱条件

仪器名称：Agilent1100高效液相色谱仪；

色谱条件：色谱柱为AlltimaC18柱(250×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈-水(28:72)混匀；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测条件：漂移管温度40℃；氮气压力3.5L/min；

检测器：SEDEX75蒸发激光散射检测器。

(2)标准品溶液制备

精密称取龙脑次苷对照品(纯度：98.08％)35.38mg,，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

(3)供试品溶液的制备

将麦冬药材粉碎后过10目筛，精密称定150g，加甲醇500mL，超声1小时，滤过，减压浓缩至近干，残渣加甲醇溶液20mL，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

(4)线性范围考察

精密称取龙脑次苷对照品35.38mg，至100mL量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度，摇匀，即得，按照拟定的色谱条件，分别进样1,2,5,10,15和20μL，以峰面积的对数值与进样量的对数值进行回归，求得回归方程：Y＝1.5891X-0.3422，r＝0.9993，结果见附图1，表明龙脑次苷在0.3470-6.940μg范围内线性良好。

(4)待测样品含量测定

精密吸取供试品溶液，每次进样量20μL，计算龙脑次苷含量为3.764μg/g。

实施例2：将实施例1中步骤(3)中的超声提取法更换为80℃加热回流提取，反应时间见表1，其他操作同实施例1，测定结果见表1。

表1不同提取时间对含量的影响

实施例3：将实施例2中的提取溶剂更换为表2所示，其他操作同实施例2，结果见表2所示。

表2不同提取溶剂对含量的影响

实施例4：将实施例3中的提取溶剂更换为表3所示，其他操作同实施例2，对待测样品进行检测，结果见表3所示。

选择更换溶剂的原因是在尝试大量不同溶剂提取浓缩后发现，待测样品变成浓稠糖浆状混悬物，无法彻底旋干，考虑是药材中糖类物质过多造成，使龙脑次苷包覆于混悬物中无法检测，致使其含量偏低，检测困难。通过在溶剂的摸索过程中，发现氯仿能有效抑制糖类物质的渗出，故考察不同比例溶剂对含量测定的影响。

表3不同比例溶剂对含量的影响

实施例5实施例4中的甲醇-氯仿(2:1)作为提取溶剂，其他操作不变，进行方法学验证。精密吸取同一样品溶液(浙麦冬2015621)，重复进样6次，每次进样量20μL，计算含量(μg/g)，测试结果见表4，5，RSD(n＝6)为均在3％以内。结果表明该方法精密度良好。

表4精密度测试含量(μg/g)结果

表3重复性测试含量(μg/g)结果

本方法的方法学验证中12小时稳定性考察符合要求，结果见表4.

表5稳定性实验数据列表

平均值：35.643μg/g；RSD＝1.63％

精密量取已测含量(以其重复性试验的平均值计，5335.01μg)的浙麦冬药材6份(浙麦冬20150621)，每份75g，每份精密加入对照品溶液7.40mL(精密称定龙脑次苷对照品35.38mg,，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得)，按照相同方法，制备成加样回收率供试液，分别精密吸取20μL以上供试品溶液，依法测定，测试结果见表6，加样回收率(n＝6)为92.15％，RSD为3.98，说明该方法具有一定准确度。

表6加样回收率实验数据列表

实施例6实施例4中的甲醇-氯仿(2:1)作为提取溶剂取,其他条件不变，检测不同批次的浙麦冬和川麦冬中龙脑次苷的含量。

表7麦冬药材中龙脑次苷的含量

Claims (6)

1.一种检测麦冬中龙脑次苷含量的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)制备待测样品：将麦冬药材加溶剂提取0.2～3小时，滤过，浓缩。

(2)含量测定：高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为C18柱，流动相为乙腈-水(28:72)，蒸发光散射检测器。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，提取溶剂为甲醇，乙醇，乙酸乙酯，水，氯仿，正丁醇及他们的混合溶剂。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，提取溶剂为甲醇-氯仿＝1～9:1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，提取方法为超声0.2～3小时、加热回流0.2～3小时。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，提取方法为加热回流0.5～2小时。

6.如权利要求权利1，步骤(2)，C18为AlltimaC18柱所述的方法在鉴别麦冬产地的用途。