CN105338999A - 乙型流感病毒重配 - Google Patents

乙型流感病毒重配 Download PDF

Info

Publication number
CN105338999A
CN105338999A CN201480027225.4A CN201480027225A CN105338999A CN 105338999 A CN105338999 A CN 105338999A CN 201480027225 A CN201480027225 A CN 201480027225A CN 105338999 A CN105338999 A CN 105338999A
Authority
CN
China
Prior art keywords
section
seqidno
virus
influenza
vaccine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201480027225.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105338999B (zh
Inventor
P·道米策
P·梅森
P·苏帕菲帕特
R·戈米勒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Synthetic Genomics Vaccines Inc
Original Assignee
Novartis AG
Synthetic Genomics Vaccines Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis AG, Synthetic Genomics Vaccines Inc filed Critical Novartis AG
Priority to CN202010070674.4A priority Critical patent/CN111334530A/zh
Publication of CN105338999A publication Critical patent/CN105338999A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105338999B publication Critical patent/CN105338999B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16251—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16251—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2760/16252—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

提供了用于生产重配乙型流感病毒的新的流感供体毒株。

Description

乙型流感病毒重配
本申请部分是在生物医学高级研究和开发机构(BARDA)授予的基金号HHSO10020100061C的政府支持下完成。政府对本发明享有某些权利。
本申请要求2013年3月13日提交的美国临时申请61/779,888的优先权，其全部内容通过引用纳入本文。
技术领域
本发明属于乙型流感病毒重配领域。此外，其涉及生产用于保护抵御乙型流感病毒的疫苗。
背景技术
针对流感感染的最有效保护是抗流行株的疫苗接种，且尽快生成用于疫苗生产的流感病毒是重要的。
野生型流感病毒通常在鸡蛋和细胞培养物内生长达到低效价。为了获得生长更好的毒株用于疫苗生产，可以使用快速生长的高产供体毒株重配流行疫苗株。这可以通过以下方法完成：用流行流感毒株和高产供体毒株共同感染培养宿主，并选择含有来自疫苗毒株的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)区段和来自供体毒株的其它病毒区段(即，编码PB1、PB2、PA、NP、M1、M2、NS1和NS2的那些)的重配病毒。另一个方法是通过反向遗传重配流感病毒(参见，例如参考文献1和2)。
虽然常见做法是在疫苗生产中使用重配甲型流过毒株，但通常不使用重配乙型流感毒株，因为野生型乙型流感病毒通常就能在鸡蛋中提供合适的产率。此外，野生型乙型流感病毒已被报道具有优于重配乙型流感病毒的生长优势(参见，例如，参考文献3)。因此，仅生成高生长乙型流感重配株用于少量目前的乙型流感病毒。这些重配株通常含有来自B/Lee/40、B/Brisbane/60/08和B/Panama/45/90的主链基因区段的混合物(4，5)。
迄今为止，只有两种重配乙型流感病毒(BX-35和BX-39)被用于商业化疫苗制造。BX-35含有来自B/Brisbane/60/08毒株的HA、NA、PA、PB1和NS区段、来自B/Panama/45/90的PB2和M区段，以及来自B/Lee/40的NP区段。BX-39含有来自B/Hubei-Wujiagang/159/08毒株的HA、NA、PB1和M区段、来自B/Panama/45/90的PA和NS区段，以及来自B/Lee/40的PB2和NP区段(6，7)。
目前仅存在有限数目的用于疫苗制造的重配乙型流感病毒的供体毒株且已知的重配乙型流感病毒不总是比亲本毒株生长的更好。因此，本领域需要提供进一步和改善的供体毒株用于乙型流感病毒重配。
具体实施方式
本发明因此提供了与作为HA区段来源的相应野生型乙型流感病毒相比，在培养宿主中(特别是在细胞培养物中)生长速度相同或更快的重配乙型流感病毒。例如，发明人出乎意料地发现，该方法可用于生产包含来自第一乙型流感病毒的HA区段和来自第二乙型流感病毒的NP和/或PB2区段的重配乙型流感毒株，该第二乙型流感病毒是在细胞培养物和鸡蛋中生长特别好的B/Victoria/2/87样毒株。该B/Victoria/2/87样毒株可以是B/Brisbane/60/08。
发明人还提供了包含来自第一乙型流感病毒的HA区段和来自第二乙型流感病毒的NP区段的重配乙型流感病毒，该第二乙型流感病毒不是B/Lee/40或B/AnnArbor/1/66或B/Panama/45/90。例如，该重配乙型流感病毒可具有不具有SEQIDNO:33、38、39或43的序列的NP区段。该重配乙型流感病毒还可具有不编码SEQIDNO:19、23、44或45的蛋白的NP区段。发明人发现，包含来自除B/Lee/40或B/AnnArbor/1/66或B/Panama/45/90以外的乙型流感病毒的NP区段的重配乙型流感病毒可在培养宿主中生长得非常好。该重配乙型流感病毒可包含来自第二乙型流感病毒的NP和PB2区段。该第二乙型流感病毒优选是B/Victoria/2/87样毒株。该B/Victoria/2/87样毒株可以是B/Brisbane/60/08。
发明人还发现，包含来自B/Yamagata/16/88样毒株的HA区段和来自B/Victoria/2/87样毒株的至少一个主链区段的重配乙型流感病毒可以在培养宿主中良好生长。该重配乙型流感病毒可包含两个、三个、四个、五个或六个来自B/Victoria/2/87样毒株的主链区段。在优选的实施方式中，该重配乙型流感病毒包含所有来自B/Victoria/2/87样毒株的主链区段。该B/Victoria/2/87样毒株可以是B/Brisbane/60/08。
本发明还提供了一种包含来自B/Victoria/2/87样毒株和B/Yamagata/16/88样毒株的病毒区段的重配乙型流感病毒，其中来自B/Victoria/2/87样毒株和B/Yamagata/16/88样毒株的区段的比例是1:7、2:6、4:4、5:3、6:2或7:1。7:1、6:2、4:4、3:5或1:7的比例(特别是4:4的比例)是优选的，因为这类重配乙型流感病毒在培养宿主中生长得特别好。该B/Victoria/2/87样毒株可以是B/Brisbane/60/08。该B/Yamagata/16/88样毒株可以是B/Panama/45/90。在这些实施方式中，该重配乙型流感病毒通常不包含所有来自相同乙型流感供体毒株的主链区段。
还提供了包含以下区段的重配乙型流感病毒：
a)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:16的NS区段和SEQIDNO:15的M区段；或
b)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
c)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:32的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:16的NS区段和SEQIDNO:15的M区段；或
d)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:16的NS区段和SEQIDNO:15的M区段；或
e)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
f)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:33的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
g)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:32的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
h)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:33的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
i)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:32的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
j)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
k)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段。
在这些重配乙型流感病毒中，HA和NA区段可来自任何乙型流感毒株。
具有上文(a)至(k)段所述区段组合的重配乙型流感病毒是优选的，因为发明人已证明其在培养宿主中生长得特别好。(a)、(b)和(e)的重配乙型流感毒株在培养宿主中生长得特别好且因此是特别优选的。
本发明还提供了上文(a)至(k)段中鉴定的重配乙型流感病毒的变体，其包含与这些段中鉴定的病毒区段至少97％相同、至少98％相同或至少99％相同的病毒区段。这类变体可优选地在培养宿主中生长至病毒效价，其是相同时间内且相同生长条件下使用作为这些变体来源的重配乙型流感毒株所达到的病毒效价的3％内。
本发明提供了制备本发明的重配乙型流感病毒的方法。这些方法包括以下步骤：(i)将一种或多种表达构建体引入培养宿主，所述表达构建体编码产生本发明的重配乙型流感病毒所需的病毒区段；以及(ii)培养所述培养宿主以产生重配病毒；和可选地(iii)纯化步骤(ii)中获得的病毒。
这些方法还可包括以下步骤：(iv)用步骤(ii)或步骤(iii)中获得的病毒感染培养宿主；(v)培养来自步骤(iv)的培养宿主以生成其它病毒；和可选地(vi)纯化步骤(v)中获得的病毒。
还提供可用于本发明的方法的表达构建体。
例如，该表达构建体可编码的重配乙型流感病毒包含来自第一乙型流感病毒的HA区段和来自第二乙型流感病毒的NP和/或PB2区段，该第二乙型流感病毒是B/Victoria/2/87样毒株。NP和PB2区段都可来自B/Victoria/2/87样毒株。该B/Victoria/2/87样毒株优选是B/Brisbane/60/08。
该表达构建体可编码的重配乙型流感病毒还包含来自第一乙型流感病毒的HA区段和来自第二乙型流感病毒的NP区段，该第二乙型流感病毒不是B/Lee/40或B/AnnArbor/1/66或B/Panama/45/90。例如，该表达构建体不编码具有SEQIDNO:19、23、44或45的序列的NP区段。NP和PB2区段都可来自第二乙型流感病毒。该第二乙型流感病毒可以是B/Victoria/2/87样毒株且优选是B/Brisbane/60/08。
“第一流感病毒”和“第二流感病毒”彼此不同。
该表达构建体可编码的重配乙型流感病毒包含来自B/Victoria/2/87样毒株和B/Yamagata/16/88样毒株的病毒区段，其中来自B/Victoria/2/87样毒株和B/Yamagata/16/88样毒株的区段的比例是1:7、2:6、4:4、5:3、6:2或7:1。优选的比例是7:1、6:2、4:4、3:5或1:7，特别优选4:4。该B/Victoria/2/87样毒株可以是B/Brisbane/60/08。该B/Yamagata/16/88样毒株可以是B/Panama/45/90。
还提供了编码上文所述重配乙型流感病毒的表达构建体。
本发明提供了包含本发明的一种或多种表达构建体的表达系统。本发明还提供一种包含本发明的表达系统的宿主细胞。这些宿主细胞能由所述表达系统中的表达构建体表达乙型流感病毒。
本发明还提供一种用于产生流感病毒的方法，所述方法包括以下步骤：(a)用本发明的重配病毒感染培养宿主；(b)培养来自步骤(a)的宿主以产生所述病毒；和可选地(c)纯化步骤(b)中获得的病毒。
本发明还提供一种制备疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(a)通过上述实施方式中任何一种的方法制备病毒和(b)从所述病毒制备疫苗。
还提供了一种从本发明的重配乙型流感病毒制备疫苗的方法。
本发明还提供了可通过本发明的方法获得的疫苗。
重配病毒
本发明的重配乙型流感病毒含有来自疫苗毒株和一种或多种供体毒株的病毒区段。该疫苗毒株是提供重配流感毒株的HA区段的乙型流感毒株。该疫苗毒株可以是任何毒株并可随季节变化。
供体毒株是提供乙型流感毒株的一种或多种主链区段(即编码PB1、PB2、PA、NP、M1、M2、NS1和NS2的那些)的乙型流感毒株。NA区段还可由供体毒株提供或者其可由疫苗毒株提供。本发明的重配乙型流感病毒还可包含一种或多种(但不是全部)来自疫苗毒株的主链区段。由于重配乙型流感病毒含有总共八个区段，其因此含有x个(其中x为1-7)来自疫苗毒株的病毒区段和8-x个来自一种或多种供体毒株的病毒区段。
如上文所述，本发明的目的是提供以下重配乙型流感病毒，其一旦拯救即可在培养宿主中生长至较高或类似的病毒效价。因此，与野生型疫苗毒株相比，在相同的时间(例如12小时、24小时、48小时或72小时)内且在相同生长条件下，本发明的重配乙型流感病毒毒株可在细胞培养物和/或鸡蛋中生长至较高或类似的病毒效价。具体而言，与野生型疫苗毒株相比，在相同的时间内且在相同生长条件下，其可在MDCK细胞(如MDCK33016)中生长至较高或类似的病毒效价。可通过本领域技术人员已知的标准方法测定病毒效价。有用地，在相同时间框内且在相同条件下，本发明的重配乙型流感病毒能达到的病毒效价比野生型疫苗毒株的病毒效价高出至少5％、至少10％、至少20％、至少50％、至少100％、至少200％或至少500％。与野生型疫苗毒株相比，在相同的时间内且在相同生长条件下，该重配乙型流感病毒还可生长至类似病毒效价。此时类似效价指重配乙型流感病毒所生长至的效价是在相同时间内且在相同生长条件下野生型疫苗毒株所能达到的病毒效价的3％以内(即野生型效价±3％)。
乙型流感病毒目前不显示不同的HA亚型，但乙型流感病毒毒株属于两种不同的谱系。这些谱系出现于1980年代晚期，并且具有在抗原/遗传上可彼此区分的HA[8]。当前的乙型流感病毒毒株是B/Victoria/2/87样或B/Yamagata/16/88样。通常可从抗原性区分这些毒株，但氨基酸序列的差异也可以区分这两种谱系，例如B/Yamagata/16/88样毒株常常(但并非总是)具有氨基酸残基164缺失(相对'Lee40'HA序列进行编号)的HA蛋白[9]。在一些实施方式中，本发明的重配乙型流感病毒包含所有来自B/Victoria/2/87样毒株的病毒区段。它们可包含来自B/Yamagata/16/88样毒株的病毒区段。或者，它们可包含来自B/Victoria/2/87样毒株和B/Yamagata/16/88样毒株的病毒区段。
当该重配乙型流感病毒包含来自两种或多种乙型流感病毒毒株的病毒区段时，这些病毒区段可源自具有相关神经氨酸酶的乙型流感毒株。例如，提供病毒区段的乙型流感毒株可以都具有B/Victoria/2/87样神经氨酸酶[10]或可都具有B/Yamagata/16/88样神经氨酸酶。例如，两种B/Victoria/2/87样神经氨酸酶可都具有一种或多种以下序列特性：(1)在残基27处不是丝氨酸，但优选亮氨酸；(2)在残基44处不是谷氨酸，但优选赖氨酸；(3)在残基46处不是苏氨酸，但优选异亮氨酸；(4)在残基51处不是脯氨酸，但优选丝氨酸；(5)在残基65处不是精氨酸，但优选组氨酸；(6)在残基70处不是甘氨酸，但优选谷氨酸；(7)在残基73处不是亮氨酸，但优选苯丙氨酸；和/或(8)在残基88处不是脯氨酸，但优选谷氨酸。类似地，在一些实施方式中，神经氨酸酶可在残基43处有缺失，或可以是苏氨酸；在残基43处有缺失，由NA基因中的三核苷缺失引起，其已被报道为B/Victoria/2/87样毒株特征，但近来的毒株重新获得了Thr-43[10]。相反地，当然，两种B/Yamagata/16/88样神经氨酸酶也可具有相反性质，例如S27、E44、T46、P51、R65、G70、L73和/或P88。这些氨基酸相对于‘Lee40’神经氨酸酶序列进行编号[11]。该重配乙型流感病毒可包含具有上述特性的NA区段。或者，或此外，该重配乙型流感病毒可包含来自特定乙型流感毒株的病毒区段(不是NA)，该乙型流感毒株包含具有上述特性的NA区段。
是B/Victoria/2/87样毒株的乙型流感病毒的主链病毒区段与来自B/Victoria/2/87的相应病毒区段的相同性水平高于其与B/Yamagata/16/88的相应病毒区段的相同性水平，且反之亦然。例如，B/Panama/45/90(其是B/Yamagata/16/88样毒株)的NP区段与B/Yamagata/16/88的NP区段具有99％相同性而与B/Victoria/2/87的NP区段仅具有96％相同性。
当本发明的重配乙型流感病毒包含来自B/Victoria/2/87样毒株的主链病毒区段时，该病毒区段可编码具有以下序列的蛋白。PA蛋白可与SEQIDNO:1的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。PB1蛋白可与SEQIDNO:2的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。PB2蛋白可与SEQIDNO:3的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。NP蛋白可与SEQIDNO:4的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。M1蛋白可与SEQIDNO:5的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。M2蛋白可与SEQIDNO:6的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。NS1蛋白可与SEQIDNO:7的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。NS2蛋白可与SEQIDNO:8的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。在一些实施方式中，该重配乙型流感病毒还可包含所用这些主链区段。
当本发明的重配乙型流感病毒包含来自B/Yamagata/16/88样毒株的主链病毒区段时，该病毒区段可编码具有以下序列的蛋白。PA蛋白可与SEQIDNO:20的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。PB1蛋白可与SEQIDNO:21的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。PB2蛋白可与SEQIDNO:22的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。NP蛋白可与SEQIDNO:23的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。M1蛋白可与SEQIDNO:24的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。M2蛋白可与SEQIDNO:25的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。NS1蛋白可与SEQIDNO:26的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。NS2蛋白可与SEQIDNO:27的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。
本发明还可用与SEQIDNO11-16或30-35序列具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％或100％相同性的病毒区段的供体毒株实施。由于遗传密码的简并性，具有不同序列的若干核酸编码相同多肽是可能的。例如，SEQIDNO:40和41的核苷酸序列仅有73％相同性，但其编码相同的病毒蛋白。因此，本发明可用编码与序列SEQIDNO11-16或30-35相同的多肽的病毒区段实施。
通常，重配流感病毒会仅包含各主链区段之一。例如，当流感病毒包含来自B/Brisbane/60/08的NP区段时，其不会同时包含来自另一流感毒株的NP区段。
在一些实施方式中，本发明的重配乙型流感病毒可包含来自同一乙型流感供体毒株的所有主链区段。或者，其可包含来自超过一种流感供体毒株(例如两种、三种、四种或五种供体毒株)的主链区段。当该重配乙型流感病毒包含来自两种或三种供体毒株的主链区段时，各供体毒株可提供超过一种的重配乙型流感病毒主链区段，但该供体毒株中的一或两种也可仅提供单一的主链区段。优选地，至少一种主链区段是来自B/Yamagata/16/88样毒株，因为发明人发现这类重配流感病毒在细胞培养物中生长良好。在本发明的上下文中，优选的B/Yamagata/16/88样毒株是B/Panama/45/90。通常，重配乙型流感病毒不可包含超过六种主链区段。因此，例如，若这些供体毒株之一提供五种病毒区段，则该重配乙型流感病毒仅能包含来自总共两种不同流感毒株(例如两种供体毒株或者一种供体毒株和一种疫苗毒株)的主链区段。
当所述重配乙型流感病毒包含来自单一供体毒株的主链区段时，这些重配病毒包含的供体毒株与疫苗毒株的区段比通常是1:7、2:6、3:5、4:4、5:3、6:2或7:1。当该重配病毒包含来自两种供体毒株的主链区段时，该重配病毒包含的来自第一种供体毒株、来自第二种供体毒株和来自疫苗毒株的区段比通常是1:1:6、1:2:5、1:3:4、1:4:3、1:5:2、1:6:1、2:1:5、2:2:4、2:3:3、2:4:2、2:5:1、3:1:4、3:2:3、3:3:2、3:4:1、4:1:3、4:2:2、4:3:1、5:1:2、5:2:1或6:1:1。
这些重配乙型流感病毒含有来自疫苗毒株的HA区段，其编码流感病毒的主要疫苗抗原并因此来自于疫苗毒株。本发明的重配病毒还优选具有来自疫苗毒株的NA区段，但本发明还包括含有来自不同毒株的HA和NA区段的重配病毒。
可用作疫苗毒株的毒株包括对抗病毒治疗有抗性(例如对奥塞米韦[12]和/或扎那米韦有抗性)的毒株，包括抗性大流行毒株[13]。
包含不编码功能性NS蛋白的NS区段的重配病毒也在本发明的范围内。参考文献14描述了NS1敲除突变。这些NS1突变病毒株尤其适于制备活减毒流感疫苗。
病毒传代过程中能出现的自发性突变可产生DNA和氨基酸序列内的变异。这类变体流感毒株也可用于本发明。
反向遗传学
本发明特别适合于通过反向遗传学技术生产重配乙型流感病毒株。在这些技术中，使用一种或多种表达系统在培养宿主中生产病毒。该表达系统可编码生成本发明的重配乙型流感病毒所必需的所有区段。
流感病毒的反向遗传学可用表达起始复制与转录所需4种蛋白(PB1、PB2、PA和NP)的12种质粒以及所有八种病毒基因组区段来实施。然而为减少所需的构建体数量，多个RNA聚合酶I转录盒(用于合成病毒RNA)可包含在单一质粒(如编码1、2、3、4、5、6、7或所有8种流感vRNA片段的序列)上，并且将多个蛋白编码区与RNA聚合酶II启动子包含在另一个质粒(如编码1、2、3、4、5、6、7或8种流感mRNA转录物的序列)上[15]。也可将一种或多种流感vRNA区段纳入polI启动子的控制下并将一种或多种流感蛋白编码区纳入同一质粒的另一启动子控制下，特别是polII启动子。优选使用双向质粒实现这点。
参考文献15方法的优选方面涉及：(a)单一表达构建体上的PB1、PB2、NP和PAmRNA编码区域；和(b)单一表达构建体上的所有8种vRNA编码区段。特别优选在一种表达构建体上包括神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA)区段并在另一表达构建体上包括六种其他病毒区段，因为新出现的流感病毒株通常在所述NA和/或HA区段具有突变。因此，在独立的表达构建体上具有HA和/或NA区段的优势是仅需替换包含HA和NA序列的载体。因此，在本发明的一个方面中，所述疫苗毒株的NA和/或HA区段可包含在一个表达构建体上，而来自一种或多种本发明供体毒株的HA和/或NA区段以外的vRNA编码区段包含在不同的表达构建体上。因此，本发明提供包含编码本发明供体毒株中主链病毒区段的一种、两种、三种、四种、五种或六种vRNA的表达构建体。该表达构建体可包含生成功能性HA和/或NA蛋白的HA和/或NA病毒区段。
已知的反向遗传系统涉及用polI启动子、细菌RNA聚合酶启动子、噬菌体聚合酶启动子等表达编码所需病毒RNA(vRNA)分子的DNA分子。由于流感病毒需要病毒聚合酶存在以起始生命周期，系统还可提供这些蛋白，例如，所述系统还包括编码病毒聚合酶蛋白的DNA分子从而表达两种类型DNA引起完全感染性病毒的装配。还可以蛋白形式提供病毒聚合酶。
当反向遗传学用于流感vRNA表达时，本领域技术人员清楚序列元件彼此的精确间隔对于聚合酶启动复制是重要的。因此编码所述病毒RNA的DNA分子在所述polI启动子和所述终止序列之间的正确定位很重要，但该定位在反向遗传学系统操作人员的能力范围内。
为了生产重组病毒，细胞必须表达组装病毒粒子所需病毒基因组的所有区段。克隆到本发明表达构建体内的DNA优选提供所有病毒RNA和蛋白，但也可使用辅助病毒以提供一些RNA和蛋白，但优选不使用辅助病毒的系统。由于所述流感病毒是分区段病毒，本发明的方法中所述病毒基因组通常使用多于一种表达构建体来表达。然而，还考虑在单一表达构建体上组合所述病毒基因组的一种或多种区段或甚至所有区段。
一些实施方式中，也可包括导致宿主细胞内辅助蛋白表达的表达构建体。例如，作为反向遗传学系统一部分，表达非病毒丝氨酸蛋白酶(如胰蛋白酶)可具有优势。
表达构建体
用于本发明的表达系统的表达构建体可以是单向或双向表达构建体。所述方法中使用多于一种转基因时(不论在相同或不同表达构建体上)，可以使用单向和/或双向表达。
由于流感病毒的传染性需要蛋白质，通常优选使用双向表达构建体，因为这能减少所述宿主细胞需要的表达构建体总数。因此，本发明的方法可利用至少一种双向表达构建体，其中基因或cDNA位于上游polII启动子和下游非内源polI启动子之间。从所述polII启动子转录所述基因或cDNA产生可翻译为蛋白质的加帽正义病毒mRNA，而从所述非内源polI启动子转录产生负义vRNA。所述双向表达构建体可以是双向表达载体。
双向表达构建体含有从同一构建体中的不同方向(即5'到3'和3'到5')驱动表达的至少两种启动子。这两种启动子可操作连接同一双链DNA的不同链。优选该启动子之一是polI启动子且至少一种其他启动子为polII启动子。这是有利的，因为该polI启动子可用于表达非加帽的vRNA而该polII启动子可用于转录随后翻译为蛋白质的mRNA，因此能从同一构建体同时表达RNA和蛋白质。当表达系统中使用超过一种表达构建体时，该启动子可以是内源性和非内源性启动子的混合物。
表达构建体中使用的polI和polII启动子对于与宿主细胞来源具有相同分类学目的生物而言可以是内源的。或者，该启动子可来源于具有不同于宿主细胞的分类学目的生物体。术语“目”指常规分类学分级，目的示例为灵长目、啮齿目、食肉目、有袋目、鲸目等。人和黑猩猩在同一分类学目中(灵长目)，但人和狗在不同的目中(灵长目与食肉目)。例如，可以使用人polI启动子在犬细胞(如MDCK细胞)中表达病毒区段[16]。
该表达构建体通常包括RNA转录终止序列。该终止序列可为内源终止序列或对所述宿主细胞非内源的终止序列。合适的终止序列对本领域技术人员而言是显而易见的且包括但不限于RNA聚合酶I转录终止序列、RNA聚合酶II转录终止序列和核酶。此外，该表达构建体可含有mRNA的一种或多种聚腺苷酸化信号，尤其在表达受polII启动子控制的基因末端。
表达系统可包括至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种、至少11种或至少12种表达构建体。
表达构建体可为载体，如质粒或其他游离构建体。此类载体通常包括至少一个细菌和/或真核的复制起点。此外，该载体可包括能在原核和/或真核细胞中筛选的选择标记。此类选择标记的示例为赋予抗生素抗性的基因，如氨苄青霉素或卡那霉素。该载体还可包含一个或多个多克隆位点以促进DNA序列克隆。
或者，表达构建体可为线性表达构建体。这类线性表达构建体通常不含任何扩增和/或选择序列。但是，包含所述扩增和/或选择序列的线性构建体也在本发明的范围内。参考文献17描述了各病毒区段的单个线性表达构建体。也可能在相同线性表达构建体上包含多于一种，例如两种、三种、四种、五种或六种病毒区段。例如，参考文献18中描述了这类系统。还可以使用以下表达系统，其中一些病毒区段(例如HA和/或NA区段)在线性构建体上编码且剩余的病毒区段(例如主链区段)在非线性构建体(如载体、质粒或其他游离构建体)上编码。
表达构建体可用本领域已知方法产生。例如，参考文献19中描述了此类方法。当该表达构建体为线性表达构建体时，可在引入宿主细胞前利用单个限制性酶位点使之线性化。或者，可用至少两种限制性酶位点从载体中切下该表达构建体。此外，也可通过用核酸扩增技术(如用PCR)扩增获得线性表达构建体。
用于本发明的系统的表达构建体可以是非病毒表达构建体。这表示所述构建体可在真核细胞中驱动其内所编码病毒RNA区段的表达，但其不包括所述构建体在细菌中增殖所需的组分。因此所述构建体不含细菌复制起点(ori)，且通常不含细菌选择标记(如抗生素抗性标记)。这类表达构建体描述于参考文献20。
这些表达构建体可通过化学合成制备。这些表达构建体可完全或部分通过化学合成制备。例如，参考文献20中描述了用于通过化学合成制备表达构建体的合适方法。
可利用本领域技术人员已知的任何技术将本发明的表达构建体引入宿主细胞。例如，可通过使用电穿孔、DEAE-右旋糖苷、磷酸钙沉淀、脂质体、微注射或微粒轰击将表达构建体引入宿主细胞。可将表达构建体引入与随后用于重配乙型流感病毒的增殖的细胞类型相同的细胞类型。或者，其中引入表达构建体的细胞和用于增殖重配乙型流感病毒的细胞可以是不同的。在一些实施方式中，可将相同或不同细胞类型的未转染细胞添加至宿主细胞，随后使用表达构建体转染这些宿主细胞，如参考文献21中所述。
常规重配
传统上，通过用供体毒株和疫苗毒株共同感染培养宿主(通常是鸡蛋)来重配流感病毒。通过添加对所述供体毒株HA和/或NA蛋白特异的抗体来选择重配病毒，从而选择包含所述疫苗毒株的HA和/或NA蛋白的重配病毒。经过该处理的数次传代，可以选择包含所述疫苗毒株HA和/或NA区段的快速生长重配病毒。
还可通过添加抑制剂来选择重配流感病毒，所述抑制剂优先降低所需重配流感病毒中不存在的病毒区段的转录和/或翻译，如WO2011/145081中教导的那样。
本发明适于这些方法中的应用。相较于供体毒株，来自不同乙型流感谱系的疫苗毒株更易使用，因为这有利于重配病毒的选择。然而，也可能使用来自相同乙型流感谱系的疫苗毒株作为供体毒株，而这在本发明的一些方面中优选。在这种情况下，对所述供体毒株的HA和/或NA蛋白具有优先特异性的抗体或抑制剂应该是可获得的。
培养宿主
本发明所用的培养宿主可以是能产生感兴趣病毒的任何真核细胞。本发明通常使用细胞系，尽管例如原代细胞可用作替代。所述细胞通常是哺乳动物或鸟类。合适的哺乳动物细胞包括但不限于仓鼠、牛、灵长类(包括人类和猴)以及犬细胞。可以使用多种细胞类型，如肾细胞、成纤维细胞、视网膜细胞、肺细胞等。合适的仓鼠细胞的示例是名为BHK21或HKCC的细胞系。合适的猴细胞是例如非洲绿猴细胞，例如肾细胞，如Vero细胞系[22-24]。合适的犬细胞是(例如)肾细胞，例如CLDK和MDCK细胞系中。合适的禽胚胎干细胞包括来源于鸡胚胎干细胞的Ebx细胞系，EB45、EB14和EB14-074[25]。也可使用鸡胚成纤维细胞(CEF)。
其他合适的细胞包括但不限于：CHO；293T；BHK；MRC5；PER.C6[26]；FRhL2；WI-38；等。合适的细胞系可由各种来源获得，例如美国典型培养物保藏中心(ATCC)[27]、Coriell细胞库[28]或欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)。例如，ATCC提供各种不同Vero细胞，目录号为CCL81、CCL81.2、CRL1586和CRL-1587；并提供MDCK细胞，目录号为CCL34。PER.C6可获自ECACC，保藏号为96022940。
本发明使用的细胞优选源自马达二氏(MadinDarby)犬肾的MDCK细胞[29-31]。原始MDCK细胞可以CCL34获自ATCC。优选地，使用MDCK细胞的衍生物。这类衍生物描述于例如参考文献29中，其公开了适合悬浮培养的MDCK细胞('MDCK33016'或‘33016-PF’，保藏号DSMACC2219)。此外，参考文献32公开了在无血清培养基中悬浮培养的MDCK衍生细胞('B-702'，保藏号FERMBP-7449)。在一些实施方式中，所用MDCK细胞系可为致瘤性的。也考虑使用非致瘤性MDCK细胞。例如，参考文献33公开了非致瘤性MDCK细胞，包括'MDCK-S'(ATCCPTA-6500)、'MDCK-SF101'(ATCCPTA-6501)、'MDCK-SF102'(ATCCPTA-6502)和'MDCK-SF103'(PTA-6503)。参考文献34公开了对感染有高度易感性的MDCK细胞，包括‘MDCK.5F1’细胞(ATCCCRL12042)。
可使用多于一种细胞类型的混合物来实施本发明的方法。但本发明的方法优选用单一细胞类型如用单克隆细胞实施。本发明方法所用细胞优选来自单一细胞系。此外，同一细胞系可用于重配所述病毒和所述病毒的任何后续繁殖。
该细胞优选在无血清情况下培养以避免常见污染源。本领域技术人员已知用于真核细胞培养的各种无血清培养基(如伊可夫氏(Iscove's)培养基、超CHO培养基(BW公司(BioWhittaker))、EX-CELL(JRH生物科学公司(JRHBiosciences)))。此外，可用无蛋白培养基(如PF-CHO(JRH生物科学公司))。另外，用于复制的细胞也可在常规含血清培养基中(如含0.5％-10％胎牛血清的MEM或DMEM培养基)培养。
该细胞可贴壁培养或悬浮培养。
还可使用鸡蛋作为培养宿主来对本发明的重配乙型流感病毒进行增殖。目前培养流感病毒用于疫苗的标准方法采用含胚鸡蛋，从鸡蛋内容物(尿囊液)纯化病毒。也可通过鸡蛋对病毒传代并随后在细胞培养物中繁殖，反之亦然。
病毒制备
在一个实施方式中，本发明提供一种生产流感病毒的方法，所述方法包括以下步骤：(a)用本发明的重配病毒感染培养宿主；(b)培养来自步骤(a)的宿主以生产所述病毒；和可选地(c)纯化步骤(b)中生产的病毒。
步骤(b)中的培养宿主可以是细胞(如上文所述)或含胚鸡蛋。本发明此方面中用细胞作培养宿主时，已知细胞培养条件(如温度、细胞密度、pH值等)根据所用细胞系和病毒在较宽的范围内变化且可根据应用需求调整。因此下述信息仅代表指南。
细胞优选在无血清或无蛋白的培养基中培养。
细胞的繁殖可按照本领域技术人员已知的方法进行。例如，可在使用常规支持方法如离心或过滤的灌注系统中培养细胞。此外，可根据本发明于感染前在分批进料系统中繁殖细胞。在本发明的内容中，培养系统指分批进料系统，其中该细胞初始培养于分批系统中且通过控制浓缩营养的进料来补偿培养基中营养物(或部分营养物)的消耗。在感染前的细胞繁殖期间将培养基的pH值值调节为pH6.6-pH7.8，特别是pH7.2-pH7.3是有利的。细胞培养优选在30-40℃的温度进行。在培养受感染细胞(步骤b)时，所述细胞优选在30℃-36℃或32℃–34℃或33℃的温度下培养。这是特别优选的，因为已显示在该温度范围内孵育受感染细胞能生产配入疫苗时功效改善的病毒[35]。
感染前培养中的氧分压优选调节为25％-95％且特别为35％-60％的值。本发明内容中的氧分压值基于空气饱和度。在分批系统中细胞密度优选约8-25x105细胞/mL时或在灌注系统中优选约5-20x106细胞/mL时进行细胞感染。该细胞可用10-8至10，优选0.0001-0.5的病毒剂量(MOI值，“感染复数”，相当于感染时每细胞的病毒单位数量)感染。
可以在贴壁或悬浮培养的细胞中培养病毒。可采用微载体培养。在一些实施方式中，这些细胞可适用于悬浮培养。
本发明所述方法还包括收获和分离病毒或其产生的蛋白。分离病毒或蛋白期间，通过标准方法如分离、过滤或超滤从所述培养基中分离细胞。之后按照本领域技术人员充分已知的方法如梯度离心、过滤、沉淀、色谱等浓缩病毒或蛋白，然后纯化。根据本发明，优选在纯化期间或之后对病毒进行灭活。可在纯化过程中任何点用例如β-丙内酯或甲醛进行病毒灭活。
疫苗
疫苗(特别针对流感病毒)通常基于活病毒或灭活病毒。灭活疫苗可基于完整病毒颗粒、‘裂解’病毒颗粒或基于纯化的表面抗原。抗原也可以病毒体形式存在。可使用本发明制造任意这些类型的疫苗，但优选灭活疫苗。
采用灭活病毒时，该疫苗可包含完整的病毒颗粒、分裂病毒颗粒或纯化的表面抗原(对于流感，包括血凝素，通常也包括神经氨酸酶)。灭活病毒的化学方法包括用有效量的以下一种或多种试剂处理：去污剂、甲醛、β-丙内酯、亚甲基蓝、亚甲蓝、补骨脂素、羧基富勒烯(C60)、二元乙胺、乙酰基乙烯亚胺或其组合。本领域已知病毒灭活的非化学方法，例如UV射线或γ射线辐射。
可通过各种方法由含病毒液体(如尿囊液或细胞培养物上清)收获病毒颗粒。例如，纯化方法可包括用含有去污剂以破坏病毒颗粒的线性蔗糖梯度溶液进行区带离心。任选稀释后，可通过渗滤纯化抗原。
用去污剂(如乙醚、聚山梨醇酯80、脱氧胆酸盐、三正丁基磷酸盐、曲通X100、曲通N101、溴化十六烷基三甲铵、特吉托NP9等)处理纯化的病毒颗粒以获得裂解病毒颗粒，从而产生亚病毒颗粒制品，包括‘吐温-醚’裂解方法。裂解流感病毒的方法为本领域熟知，例如参见参考文献36-41等。一般使用破坏浓度的裂解剂破坏或片段化全病毒来裂解该病毒，无论该病毒有无感染性。这种破坏导致病毒蛋白的完全或部分溶解，改变病毒的完整性。优选的裂解剂是非离子型和离子型(例如阳离子)表面活性剂，如烷基糖苷、烷基硫苷、酰基糖、磺基甜菜碱、甜菜碱、聚氧乙烯烷基醚、N,N-二烷基-葡糖酰胺、6-O-(N-庚甲酰)-甲基-á-D-葡萄糖苷(Hecameg)、烷基苯氧基-聚乙氧基乙醇、NP9、季铵化合物、肌氨酰、CTAB(溴化十六烷基三甲铵)、三正丁基磷酸酯、塞弗伦(Cetavlon)、十四烷基三甲铵盐、脂质转染试剂(Lipofectin)、脂质体转染试剂(lipofectamine)和DOT-MA、辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇(如曲通表面活性剂，如曲通X100或曲通N101)、聚氧乙烯去水山梨糖醇酯(吐温表面活性剂)、聚氧乙烯醚、聚氧乙烯酯等。一种有用的裂解方法利用脱氧胆酸钠和甲醛的连续作用，并且裂解可在病毒颗粒初始纯化期间进行(例如在蔗糖密度梯度溶液中)。因此，裂解过程可包括：澄清含病毒颗粒的材料(以去除非病毒颗粒物质)，浓缩收获的病毒颗粒(例如使用吸附方法，如CaHPO4吸附)，从非病毒颗粒材料中分离全病毒颗粒，用裂解剂在密度梯度离心步骤中裂解病毒颗粒(例如，用含有裂解剂如脱氧胆酸钠的蔗糖梯度)，然后过滤(例如超滤)以去除不需要的物质。可将裂解病毒颗粒重悬于磷酸钠缓冲的等渗氯化钠溶液中。裂解流感疫苗的示例是BEGRIVACTM、FLUARIXTM、FLUZONETM和FLUSHIELDTM产品。
纯化的流感病毒表面抗原疫苗包含表面抗原血凝素，一般还包含神经氨酸酶。制备这些纯化形式的蛋白质的方法是本领域熟知的。FLUVIRINTM、AGRIPPALTM和INFLUVACTM产品是流感亚基疫苗。
另一种形式的灭活抗原是病毒体[42](不含核酸的病毒样脂质体颗粒)。其可通过使用去污剂溶解病毒，然后去除核衣壳和重建含病毒糖蛋白的膜来制备。一种用于制备病毒体的替代性方法包括将病毒膜糖蛋白加入过量磷脂中，得到膜中具有病毒蛋白质的脂质体。
本发明的方法还可用于生产活疫苗。通常通过从含病毒颗粒的流体中纯化病毒颗粒来制备这类疫苗。例如，该流体可通过离心澄清并用缓冲液(例如含蔗糖、磷酸钾和谷氨酸单钠)稳定。目前可以获得各种形式的流感病毒疫苗(例如参见参考文献43的第17和18章)。活病毒疫苗包括米迪缪尼公司(MedImmune)的FLUMISTTM产品。
该病毒可以是减毒的。该病毒可以是温度敏感型的。该病毒可以是冷适应性的。使用活病毒作为抗原时这三种特征特别有用。
HA是现有灭活流感疫苗中的主要免疫原，且参照一般由SRID测定的HA水平来标准化疫苗剂量。现有的疫苗一般含有约15μgHA/毒株，但也可使用更低的剂量，例如用于儿童或大流行情况下，或者是使用佐剂时。分数剂量如1/2(即7.5μgHA/毒株)、1/4和1/8已有应用，更高剂量的(如3x或9x剂量也有使用[44,45])。因此，疫苗可包含0.1-150μgHA/流感毒株，优选0.1-50μg，例如0.1-20μg、0.1-15μg、0.1-10μg、0.1-7.5μg、0.5-5μg等。具体剂量包括例如，约45、约30、约15、约10、约7.5、约5、约3.8、约3.75、约1.9、约1.5等/株。
对于活疫苗，利用组织培养感染剂量中值(TCID50)而非HA含量来衡量剂量，且TCID50一般为106至108(优选为106.5-107.5)/株。
本发明所用的流感株可以具有野生型病毒中的天然HA，或具有修饰HA。例如，已知修饰HA以去除使病毒在禽类物种中具有高致病性的决定簇(如HA1/HA2切割位点周围的超碱性区域(hyper-basicregion))。反向遗传学的使用促进了这类修饰。
除了适于针对大流行间期株系的免疫，本发明的疫苗特别适用于免疫抵御大流行或潜在大流行株系。本发明适用于免疫人以及非人动物。
本发明的疫苗可包含来自一种或多种(如1、2、3、4或更多)流感病毒株的抗原，包括甲型流感病毒和/或乙型流感病毒，前提是至少一种流感病毒是本发明的重配流感病毒。还考虑包括以下疫苗，其中两种抗原来自本发明的重配流感毒株。当疫苗包含超过一种流感的毒株时，一般单独培养不同毒株，收获病毒后将它们混合在一起，然后制备抗原。因此，本发明方法可包括混合超过一种流感毒株的抗原的步骤。三价疫苗是典型的，其包含来自两种甲型流感病毒株和一种乙型流感病毒株的抗原。也可用四价疫苗[46]，其包含来自两种甲型流感病毒毒株和两种乙型流感病毒毒株(优选不同谱系的两种乙型流感毒株)、或者三种甲型流感病毒毒株和一种乙型流感病毒毒株的抗原。当流感疫苗包含来自超过一种乙型流感毒株的抗原时，其中一种或多种可来源于本发明的重配乙型流感病毒。
本发明的疫苗优选为药学上可接受的组合物。它们通常还包含抗原外的其它组分，例如它们一般包含一种或多种药物载体和/或赋形剂。如下所述，也可包含佐剂。对这类组分的充分讨论参见参考文献47。
疫苗通常是水性形式。然而，一些疫苗可为干燥形式，如可注射固体或贴片上的干燥或聚合制品的形式。
疫苗可含有防腐剂，如硫柳汞或2-苯氧乙醇。然而，疫苗优选应基本不含(即小于5μg/ml)含汞物质，如不含硫柳汞[40,48]。更优选无汞的疫苗。可包含琥珀酸α-生育酚以替代含汞化合物[40]。特别优选不含防腐剂的疫苗。
为了控制张力，优选包含生理盐(如钠盐)。优选氯化钠(NaCl)，其浓度可以是1-20mg/ml。可以存在的其它盐，包括氯化钾、磷酸二氢钾、无水合磷酸氢二钠、氯化镁、氯化钙等。
疫苗的渗透压通常为200mOsm/kg-400mOsm/kg，优选为240-360mOsm/kg，更优选为290-310mOsm/kg。虽然以前报道过渗透压对疫苗接种引起的疼痛无影响[49]，但优选将渗透压保持在此范围内。
疫苗可含有一种或多种缓冲剂。典型的缓冲剂包括：磷酸盐缓冲剂；Tris缓冲剂；硼酸盐缓冲剂；琥珀酸盐缓冲剂；组氨酸缓冲剂(尤其是含氢氧化铝佐剂时)；或柠檬酸盐缓冲剂。包含的缓冲剂的浓度一般为5至20mM的范围。
疫苗的pH通常为5.0-8.1，更一般为6.0-8.0，例如6.5-7.5，或者7.0-7.8。因此，本发明方法可包括在包装前调整散装疫苗pH的步骤。
该疫苗优选是无菌的。该疫苗优选无热原，如小于1EU/剂量(内毒素单位，标准量度)，优选小于0.1EU/剂量。该疫苗优选不含谷蛋白。
本发明的疫苗可包含去污剂，如聚氧乙烯去水山梨糖醇酯表面活性剂(称为'吐温')、辛苯聚糖(如辛苯聚糖-9(曲通X100)或叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇)、溴化十六烷基三甲铵('CTAB')或脱氧胆酸钠，特别用于裂解疫苗或表面抗原疫苗。去污剂可仅以痕量存在。因此，疫苗中可包含各自的含量小于1mg/ml的辛苯聚醇-10和聚山梨醇酯80。其它痕量残留组分可以是抗生素(如新霉素、卡那霉素、多粘菌素B)。
疫苗可含有一次免疫的物质，或者可含有多次免疫的物质(即‘多剂量’药盒)。多剂量配置优选含有防腐剂。作为多剂量疫苗中包含防腐剂的替代方案(或补充方案)，这些疫苗可包含在装有无菌接头以取出物质的容器中。
流感疫苗的给药剂量体积一般为约0.5ml，但可将一半剂量(即约0.25ml)给予儿童。
疫苗和药盒优选储存于2℃-8℃。其不应冷冻。理想情况下应避直射光保存。
宿主细胞DNA
由细胞系分离和/或培养病毒时，标准实践是使最终疫苗中残留的细胞系DNA含量最小化，以最小化该DNA的潜在致癌活性。
因此，本发明的疫苗优选含有每剂量低于10ng(优选低于1ng，更优选低于100pg)的残留宿主细胞DNA，但可能存在痕量宿主细胞DNA。
任何残留宿主细胞DNA的平均长度优选小于500bp，例如小于400bp、小于300bp、小于200bp、小于100bp等。
在疫苗制备过程中可采用标准纯化方法，如色谱法等去除污染的DNA。可通过核酸酶处理，例如DNA酶处理来提高对残留宿主细胞DNA的去除。参考文献58和59公开了一种减少宿主细胞DNA污染的方便方法，该方法包括两步处理，先使用DNA酶(如Benzonase)处理，这一步可以在病毒生长过程中使用，然后使用阳离子去污剂(如CTAB)处理，这一步可以在病毒颗粒破坏过程中使用。也可利用烷化剂(如β-丙内酯)处理来去除宿主细胞DNA，该方法也宜用于灭活病毒颗粒[52]。
佐剂
本发明的疫苗宜包含佐剂，其作用是增强在接受疫苗的患者中引起的免疫应答(体液免疫和/或细胞免疫)。优选的佐剂包含水包油乳液。已知多种这类佐剂，它们通常包含至少一种油和至少一种表面活性剂，所述油和表面活性剂是可生物降解(可代谢)和生物相容的。乳液中的油滴直径通常小于5μm，理想情况下具有亚微米直径，通过微流化床实现这种小尺寸以提供稳定的乳液。优选尺寸小于220nm的液滴，因为其可进行过滤灭菌。
所述乳液可以包含如动物(如鱼)或植物来源的油。植物油的来源包括坚果、种籽和谷物。最常见的坚果油的示例有花生油、大豆油、椰子油和橄榄油。可以采用例如获自霍霍巴豆的霍霍巴油。种籽油包括红花油、棉花籽油、葵花籽油、芝麻籽油等。在谷物油中，最常见的是玉米油，但也可以使用其它谷类的油，如小麦、燕麦、黑麦、稻、画眉草、黑小麦等。甘油和1,2-丙二醇的6-10碳脂肪酸酯虽然不天然存在于种籽油中，但可从坚果和种籽油开始，通过水解、分离和酯化合适物质来制备。来源于哺乳动物乳汁的脂肪和油类是可代谢的，因此可以用于实施本发明。获得动物来源的纯油所必需的分离、纯化、皂化和其它方法的过程是本领域中熟知的。大多数鱼类含有容易回收的可代谢油。例如，可用于本文的鱼油的几种示例有鳕鱼肝油、鲨鱼肝油和鲸油(诸如鲸蜡)。通过生化途径以5-碳异戊二烯单位合成许多支链油，其总称为萜类。鲨鱼肝油含有称为角鲨烯的支链不饱和萜类化合物，2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，其是本文特别优选的。角鲨烯的饱和类似物角鲨烷也是优选的油。包括角鲨烯和角鲨烷在内的鱼油易于从市售来源获得，或可以通过本领域已知的方法获得。另一种优选的油是α-生育酚(参见下文)。
可以使用油的混合物。
表面活性剂可以按其“HLB”(亲水/亲脂平衡)分类。本发明优选的表面活性剂的HLB值为至少10，优选至少15，更优选至少16。可用于本发明的表面活性剂包括但不限于：聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯表面活性剂(通常称为吐温)，特别是聚山梨酯20和聚山梨酯80；以商品名DOWFAXTM出售的环氧乙烷(EO)、环氧丙烷(PO)和/或环氧丁烷(BO)的共聚物，如直链EP/PO嵌段共聚物；重复的乙氧基(氧-1,2-乙二基)数量不同的辛苯聚醇，特别感兴趣的是辛苯聚醇9(曲通X-100，或叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇)；(辛基苯氧基)聚乙氧基乙醇(IGEPALCA-630/NP-40)；磷脂，如磷脂酰胆碱(卵磷脂)；壬酚乙醇酯，如TergitolTMNP系列；衍生自月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇和油醇的聚氧乙烯脂肪醚(称为苄泽(Brij)表面活性剂)，如三甘醇单月桂基醚(苄泽30)；以及脱水山梨糖醇酯(通常称为司盘(SPAN))，如脱水山梨糖醇三油酸酯(司盘85)和脱水山梨糖醇单月桂酸酯。优选非离子型表面活性剂。乳液中包含的表面活性剂优选吐温80(聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯)、司盘85(去水山梨糖醇三油酸酯)、卵磷脂和曲通X-100。
可使用表面活性剂的混合物，如吐温80/司盘85混合物。聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯(吐温80))和辛苯聚醇(如叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(曲通X-100))的组合也是有用的。另一种有用的组合包括月桂醇聚醚-9加聚氧乙烯山梨糖醇酯和/或辛苯聚醇。
优选的表面活性剂含量(重量百分比)为：聚氧乙烯去水山梨糖醇酯(如吐温80)0.01-1％，特别是约0.1％；辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇(如曲通X-100或曲通系列的其它去污剂)0.001-0.1％，特别是0.005-0.02％；聚氧乙烯醚(如月桂醇聚醚9)0.1-20％，优选0.1-10％，特别是0.1-1％或约0.5％。
该疫苗含裂解病毒时，优选在水相中含有游离的表面活性剂。这是有利的，因为游离表面活性剂可在所述抗原上产生‘裂解效果’，因此破坏否则可能存在的任何未裂解病毒颗粒和/或病毒颗粒聚集体。这可改善裂解病毒疫苗的安全性[53]。
优选的乳液的平均液滴大小为小于1μm，例如小于等于750nm、小于等于500nm、小于等于400nm、小于等于300nm、小于等于250nm、小于等于220nm、小于等于200nm或更小。可通过某些技术(如微流化)方便地获得这些液滴尺寸。
本发明所用的具体水包油乳剂佐剂包括但不限于：
角鲨烯、吐温80和司盘85的亚微米乳液。所述乳液的体积组成可以是约5％角鲨烯、约0.5％聚山梨酯80和约0.5％司盘85。以重量计，这些比例为4.3％角鲨烯、0.5％聚山梨酯80和0.48％司盘85。这种佐剂称为‘MF59’[54-56]，参考文献57的第10章和参考文献58的第12章更详细地描述了该佐剂。.MF59乳液优选包含柠檬酸根离子，例如10mM柠檬酸钠缓冲液。
包含角鲨烯、α-生育酚和聚山梨酯80的乳液。该乳液可包含磷酸盐缓冲盐水。这些乳剂可含有(以体积计)2-10％角鲨烯、2-10％生育酚和0.3-3％聚山梨酯80，且角鲨烯:生育酚的重量比优选小于等于1(例如0.90)，因为这能提供更稳定的乳剂。角鲨烯和聚山梨酯80的体积比可以约为5:2，或者重量比约为11:5。因此这三种组分(角鲨烯、生育酚、聚山梨酯80)可以1068:1186:485或约55:61:25的重量比存在。可通过以下方法制备一种这样的乳液(“AS03”)：将吐温80溶解于PBS产生2％溶液，然后将90ml该溶液与5gDL-α-生育酚和5ml角鲨烯的混合物混合，然后使该混合物微流体化。所得乳液可含有如平均直径为100-250nm，优选约180nm的亚微米油滴。该乳液也可含有3-脱-O-酰化单磷酰脂质A(3d-MPL)。此种类型的另一有用乳液可包含(每人剂量)0.5-10mg角鲨烯、0.5-11mg生育酚和0.1-4mg聚山梨酯80[59]，例如，以上述比例。
角鲨烯、生育酚和曲通去污剂(如曲通X-100)的乳液。该乳液也可包含3d-MPL(见下文)。该乳液可包含磷酸盐缓冲液。
含有聚山梨酯(如聚山梨酯80)、曲通去污剂(如曲通X-100)和生育酚(如琥珀酸α-生育酚)的乳液。该乳液可包含这三种组分，其质量比约为75:11:10(例如，750μg/ml聚山梨酯80、110μg/ml曲通X-100和100μg/ml琥珀酸α-生育酚)，且这些浓度应包括来自抗原的这些组分的任何贡献。该乳液还可包含角鲨烯。该乳液也可包含3d-MPL(见下文)。水相可包含磷酸盐缓冲液。
角鲨烷、聚山梨酯80和泊洛沙姆401(“PluronicTML121”)的乳液。该乳液可用pH7.4的磷酸盐缓冲盐水配制。该乳液是一种有用的胞壁酰二肽递送载体，已与苏氨酰基-MDP一起用于“SAF-I”佐剂中[60](0.05-1％Thr-MDP、5％角鲨烷、2.5％PluronicL121和0.2％聚山梨酸酯80)。也可不与Thr-MDP一起使用，例如在“AF”佐剂中[61](5％角鲨烷、1.25％PluronicL121和0.2％聚山梨酸酯80)。优选微流体化。
含有角鲨烯、水溶剂、聚氧乙烯烷基醚亲水性非离子型表面活性剂(如聚氧乙烯(12)十六十八醚)和疏水性非离子型表面活性剂(如去水山梨糖醇酯或二缩甘露醇酯，如去水山梨糖醇单油酸酯或‘司盘80’)的乳液。所述乳液优选为热可逆的和/或其中至少90％油滴(以体积计)小于200nm[62]。该乳液也可含有一种或多种以下物质：糖醇；低温保护剂(例如糖，如十二烷基麦芽苷和/或蔗糖)；和/或烷基聚糖苷。所述乳液可包含TLR4激动剂[63]。可将这类乳液冻干。
角鲨烯、泊洛沙姆-105和Abil-Care的乳液[64]。含佐剂化疫苗中这些组分的终浓度(重量)是5％角鲨烯、4％泊洛沙姆-105(普流罗尼克多元醇)和2％Abil-Care85(双-PEG/PPG-16/16PEG/PPG-16/16二甲硅油；辛酸/癸酸甘油三酯)。
含有0.5-50％油、0.1-10％磷脂和0.05-5％非离子型表面活性剂的乳液。如参考文献65所述，优选的磷脂组分是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、鞘磷脂和心磷脂。优选亚微米液滴尺寸。
不可代谢油(如轻质矿物油)和至少一种表面活性剂(如卵磷脂、吐温80或司盘80)的亚微米水包油乳液。可包含添加剂，例如QuilA皂苷、胆固醇、皂苷-亲脂体偶联物(如通过葡糖醛酸的羧基将脂族胺加到脱酰基皂苷上而产生的GPI-0100，如参考文献66所述)、二甲基二-十八烷基溴化铵和/或N,N-二-十八烷基-N,N-双(2-羟乙基)丙二胺。
皂苷(如QuilA或QS21)和固醇(如胆固醇)结合成螺旋胶束的乳液[67]。
包含矿物油、非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇和非离子亲水性表面活性剂(例如，乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳液[68]。
包含矿物油、非离子亲脂水性乙氧基化脂肪醇和非离子亲脂性表面活性剂(例如，乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳液[68]。
在一些实施方式中，可在递送时临时将乳液与抗原混合，因此所述佐剂和抗原可单独地保存在包装或分销的疫苗中，以便在使用时配制成最终制剂。在其它实施方式中，在生产过程中将乳液与抗原混合，因此组合物以液体含佐剂形式包装。该抗原通常采用水性形式，从而最终通过混合两种液体来制备疫苗。待混合的两种液体的体积比可变(例如5:1-1:5)，但一般是约1:1。在上述具体乳液说明中给出组分浓度时，这些浓度通常用于非稀释组合物，因此所述浓度在混合抗原溶液后会降低。
疫苗的包装
适用于本发明的疫苗(或药盒组分)的容器包括药瓶、注射器(如一次性注射器)、鼻喷雾等。这些容器应无菌。
组合物/组分装在药瓶中时，药瓶优选由玻璃或塑料材料制成。在加入组合物之前，摇瓶优选已灭菌。为了避免胶乳过敏患者的问题，药瓶优选用无胶乳塞子密封，且优选所有包装材料均不含胶乳。该药瓶可包含单一剂量的疫苗，或者可以包含一个以上剂量(‘多剂量’药瓶)，如10个剂量。优选地，药瓶由无色玻璃制成。药瓶，特别是多剂量药瓶可装有允许无菌取出其内含物的瓶帽。
将某一组分包装到注射器中时，该注射器可连有针头。如果未连接针头，可随注射器提供单独的针头以便组装和使用。这种针头可装在护罩中。优选安全针头。一般是1-英寸23号、1-英寸25号和5/8-英寸25号针头。可提供有剥离标签的注射器，该标签上可打印上内含物的批号、流感季节和过期日期，以帮助记录保存。注射器中的活塞优选带有防脱装置，以防止活塞在吸出时意外脱出。注射器可以具有胶乳橡胶帽和/或活塞。一次性注射器含有单一剂量的疫苗。注射器通常带有顶帽，以在连接针头前密封顶端，且该顶帽优选由丁基橡胶制成。如果注射器和针头分开包装，则针头优选地装有丁基橡胶护罩。优选的注射器是以商品名“Tip-Lok”TM销售的注射器。
容器可标注显示半剂量体积，例如以利于递送给儿童。例如，含有0.5ml剂量的注射器可有显示0.25ml体积的标记。
在使用玻璃容器(如注射器或药瓶)时，优选采用由硼硅酸盐玻璃，而非钠钙玻璃制成的容器。
可将药盒或组合物与单页宣传品包装在一起(在同一个盒子中)，所述单页宣传品包括疫苗的详细情况如给药说明书、疫苗内所含抗原的详情等。说明书也可包含警示，例如准备好肾上腺素溶液以防疫苗接种后发生过敏反应等。
治疗方法和疫苗的给药
本发明提供了一种根据本发明生产的疫苗。这些疫苗适合给予人类或非人动物对象如猪或鸟类，且本发明提供了在对象中产生免疫应答的方法，该方法包括将本发明的疫苗给予所述对象的步骤。本发明还提供用作药物的本发明的疫苗，并提供本发明的疫苗在生产在对象中产生免疫应答的药物中的应用。
这些方法和应用产生的免疫应答通常包括抗体应答，优选保护性抗体应答。评价接种流感病毒疫苗后抗体应答、中和能力和保护水平的方法为本领域熟知。人类研究表明，对人流感病毒血凝素的抗体效价与保护作用相关联(约30-40的血清样品血凝反应-抑制效价给出对同源病毒感染产生约50％保护作用)[69]。一般通过血凝反应抑制、微量中和、单径向免疫扩散(SRID)和/或单径向溶血(SRH)来测定抗体应答。本领域熟知这些测定技术。
可以各种方式给予本发明的疫苗。最优选的免疫途径是肌肉内注射(如注射到上肢或下肢)，但其它可用的途径包括皮下注射、鼻内[70-72]、口服[73]、皮内[74,75]、经皮、透皮[76]等。
根据本发明制备的疫苗可用于治疗儿童和成人。目前，推荐将流感疫苗用于年龄大于6个月的儿童和成年人免疫。因此，人类对象可以小于1岁、1～5岁、5～15岁、15～55岁或至少55岁。接受该疫苗的优选对象是老年人(例如大于等于50岁、大于等于60岁，优选大于等于65岁)、年轻人(如小于等于5岁)、住院对象、健康护理工作人员、军队服务人员和军人、妊娠妇女、慢性疾病对象、免疫缺陷对象、在接受该疫苗7天前接受过抗病毒化合物(如奥塞米韦或扎那米韦化合物；见下)的对象、对鸡蛋过敏的人和出国旅行者。然而该疫苗不仅适用于这些人群，还可用于更广泛的群体。对于大流行毒株，优选给予所有年龄组。
本发明的优选疫苗满足1、2或3个CPMP功效标准。在成年人(18-60岁)中，这些标准是：(1)大于等于70％血清保护；(2)大于等于40％血清转化；和/或(3)GMT增加大于等于2.5倍。在老年人(大于60岁)中，这些标准是：(1)大于等于60％血清保护；(2)大于等于30％血清转化；和/或(3)GMT增加大于等于2倍。这些标准基于至少50位患者的开放标记研究。
可通过单剂量方案或多剂量方案进行治疗。多剂量可用于初次免疫方案和/或加强免疫方案。在多剂量方案中，可通过相同或不同的途径(如肠胃外初次和粘膜加强，粘膜初次和肠胃外加强等)给予多个剂量。给予一个以上剂量(一般是两个剂量)特别用于免疫未曾免疫接触的患者，例如从未接受过流感疫苗的人，或者用于免疫接种抵御新的HA亚型(如大流行爆发中的亚型)。一般以至少1周(例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周等)的间隔给予多个剂量。
可将本发明产生的疫苗与其它疫苗基本上同时(在健康护理专业人员或疫苗接种中心的同一医学咨询或就诊期间)给予患者，例如与麻疹疫苗、腮腺炎疫苗、风疹疫苗、MMR疫苗、水痘疫苗、MMRV疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗、DTP疫苗、偶联的B型流感嗜血杆菌(H.influenzae)疫苗、脊髓灰质炎病毒灭活疫苗、乙型肝炎病毒疫苗、脑膜炎球菌偶联疫苗(如四价A-C-W135-Y疫苗)、呼吸道合胞病毒疫苗、肺炎球菌偶联疫苗等基本同时给药。在老年患者中特别有用的是与肺炎球菌疫苗和/或脑膜炎球菌疫苗基本同时给药。
相似地，可将本发明疫苗与抗病毒化合物，具体是对流感病毒有活性的抗病毒化合物(如奥塞米韦和/或扎那米韦)基本上同时给予患者(在对健康护理专业人员进行的同一用药咨询或就诊期间)。这些抗病毒化合物包括神经氨酸酶抑制剂，如(3R,4R,5S)-4-乙酰基氨基-5-氨基-3(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸或5-(乙酰基氨基)-4-[(氨基亚氨基甲基)-氨基]-2,6-脱水-3,4,5-三脱氧-D-甘油-D-半乳糖壬-2-烯酮酸，包括它们的酯(如乙酯)和盐(如磷酸盐)。优选的抗病毒药物是(3R,4R,5S)-4-乙酰基氨基-5-氨基-3(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸，乙酯和磷酸盐(1:1)，也称为磷酸奥塞米韦(达菲(TAMIFLU)TM)。
概述
术语“包括”涵盖“包含”以及“由……组成”，例如，“包括”X的组合物可以仅由X组成或可以包括其它物质，例如X+Y。
词语“基本上”不排除“完全”，如“基本上不含”Y的组合物可能完全不含Y。需要时，词语“基本上”可从本发明的定义中略去。
与数值x相关的术语“约”是可任选的，并且表示，例如x±10％。
除非另有明确说明，包括混合两种或更多种组分的步骤的工艺不要求任何特定的混合顺序。因此，组分可以任何顺序混合。在有三种组分时，可将两种组分相互合并，然后可将组合与第三种组分合并等。
本方法的各步骤可在相同或不同时间、相同或不同地理位置如国家以及由相同或不同人或实体进行。
将动物(且特别是牛)材料用于培养细胞时，其应获自未患传染性海绵状脑病(TSE)，特别是未患牛海绵状脑病(BSE)的来源。总之，优选在完全不含动物来源物质的条件下培养细胞。
将化合物作为组合物的一部分给予机体时，该化合物或可由合适的前药替代。
两个氨基酸序列间的序列相同性百分数表示进行比对时所比较的两条序列中相同氨基酸的百分数。利用本领域所知软件程序，例如参考文献77的7.7.18部分所描述的软件程序，可进行比对并确定同源性百分数或序列相同性百分数。优选的比对通过史密斯-沃特曼(Smith-Waterman)同源性搜索算法使用仿射缺口搜索确定，其中缺口开放罚12分，缺口延伸罚2分，BLOSUM矩阵计62分。参考文献78中公开了史密斯-沃特曼同源性搜索算法。
两个核酸序列间的序列相同性百分数表示进行比对时所比较的两条序列中相同碱基的百分数。利用本领域所知软件程序，例如参考文献77的7.7.18部分所描述的软件程序，可进行比对并确定同源性百分数或序列相同性百分数。优选的比对程序是GCGGap(威斯康星州的遗传计算机组(GeneticsComputerGroup)，套件版本10.1)，优选使用以下默认参数：开放缺口＝3；延伸缺口＝1。
附图说明
图1比较相对于野生型(WT)或反向遗传学来源的(RG)B/Brisbane/60/08毒株，MDCK细胞中不同重配乙型流感毒株的HA产率。测试的乙型流感病毒的病毒区段示于表1。y轴显示HA产率(单位为μg/mL)。
图2比较相对于野生型(WT)或反向遗传学来源的(RG)B/Panama/45/90毒株，MDCK细胞中不同重配乙型流感毒株的HA产率。测试的乙型流感病毒的病毒区段示于表1。y轴显示HA产率(单位为μg/mL)。
图3比较包含B/Panama/45/90或B/Brisbane/60/08主链的重配乙型流感病毒的HA产率和使用相应野生型毒株获得的HA产率。使用以下区段进行不同的实验：B/Brisbane/60/08HA和NA区段(A)、B/Panama/45/90HA和NA区段(B)、B/Florida/4/06HA和NA区段(C)或者B/Lee/40HA和NA区段(D)。白色柱显示使用野生型毒株的结果，阴影线柱显示使用B/Panama/45/90主链的结果且格子花纹柱显示使用B/Brisbane/60/08主链的结果。图3(A)、3(B)和3(C)的y轴显示ELISA测定的HA产率(单位为μg/mL)且图3(D)的y轴显示HA试验测定的HA效价。
图4比较包含#2、#9、#32或#34杂交主链(如表1所示)的重配乙型流感病毒的HA产率和使用BX-35、B/Panama/45/90或B/Brisbane/60/08主链或者相应野生型病毒获得的HA产率。使用以下区段进行不同的实验：B/Brisbane/60/08HA和NA区段(A)、B/Panama/45/90HA和NA区段(B)、BX-35HA和NA区段(C)或者B/Florida/4/06HA和NA区段(D)。y轴显示HA产率(单位为μg/mL)。
图5比较包含#34或B/Brisbane/60/08主链的重配乙型流感病毒的HA产率和使用相应野生型毒株获得的HA产率。使用以下区段进行不同的实验：B/Panama/45/90HA和NA区段(A)、B/Brisbane/60/08HA和NA区段(B)、B/Florida/4/06HA和NA区段(C)、B/Brisbane/03/07HA和NA区段(D)、B/Brisbane/32/02HA和NA区段(E)、BX-35HA和NA区段(F)、B/Malaysia/2506/04HA和NA区段(G)，或B/Hubei-Wujiagang/159/08HA和NA区段(H)。白色柱显示使用B/Brisbane/60/08主链的结果，阴影线柱显示使用#34主链的结果且格子花纹柱显示使用野生型毒株的结果。y轴显示HA产率(单位为μg/mL)。
图6比较以下病毒在含胚鸡蛋中生长后的HA效价(A)和病毒生长(B)：包含来自B/Brisbane/60/08(#35)的所有主链区段和来自B/Wisconsin/1/10的HA和NA区段的反向遗传学衍生的重配乙型流感病毒，(b)包含来自B/Lee/40的PB2、NP和M区段和来自B/Wisconsin/1/10(#41)的所有其他基因的重配乙型流感病毒，以及(c)野生型B/Wisconsin/1/10毒株(WT)。各三角形代表单个鸡蛋且横线代表平均值。“280”和“2800”表示对这些鸡蛋接种的感染剂量(IU)。(A)中的y轴代表HA产率且(B)中的y轴代表IU/mL。
具体实施方式
新供体毒株的开发
为提供高生长供体毒株，发明人发现，包含来自B/Brisbane/60/08和B/Panama/45/90的主链区段的重配乙型流感病毒在鸡蛋和细胞(如MDCK细胞)中生长的特别好。为此，生产了包含来自这些病毒的主链区段的重配乙型流感病毒并使所得乙型流感病毒在MDCK细胞中生长。通过本领域已知的ELISA(如PCT/IB2012/057235所述)或HA试验测定病毒产率。
重配乙型流感病毒的生长特性
通过反向遗传学生产重配乙型流感病毒，其含有来自多种流感毒株的HA和NA蛋白以及来自B/Brisbane/60/08和/或B/Panama/45/90的其他病毒区段。作为对照，使用了相应的野生型乙型流感毒株。在含胚鸡蛋或MDCK细胞中培养这些病毒。使用了以下乙型流感毒株：
表1
结果显示，与相应的野生型毒株相比，重配病毒#2、#9、#22、#23、#29、#30、#31、#32、#33、#34和#35在培养宿主中生长的一样好或甚至更好(参见图1和2)。这些毒株中的大多数包含来自B/Brisbane/60/08的NP区段且一些(特别是生长得最好的那些)还含有来自B/Brisbane/60/08的PB2区段。所有这些病毒还以7:1、6:2、4:4、3:4或1:7的比例含有来自B/Victoria/2/87样毒株和B/Yamagata/16/88样毒株的病毒区段。
包含来自B/Brisbane/60/08的主链区段的重配乙型流感病毒的生长特性
为测试本发明的重配乙型流感病毒是否与来自不同毒株的HA和NA区段联用，生产了包含来自B/Panama/45/90、B/Lee/40或B/Florida/04/06的HA和NA区段以及来自B/Brisbane/60/08的主链区段的重配乙型流感病毒。将重配流感病毒在MDCK细胞中生长60小时并通过ELISA或HA试验测定HA产率。数据(参见图3)显示，与野生型乙型流感病毒相比，所有重配乙型流感病毒都生长至较高效价，这表明本发明的重配乙型流感病毒可用于多种不同的HA和NA区段。
包含杂交主链区段的重配乙型流感病毒的生长特性
还相对于野生型乙型流感病毒和已知的乙型流感病毒BX35(其包含来自B/Brisbane/60/08的HA、NA、PA、PBI和NS区段、来自B/Panama/45/90的PB2和M区段以及来自B/Lee/40的NP区段)测定包含本发明的主链区段的重配乙型流感病毒的生长特性。使用B/Brisbane/60/08、B/Panama/45/90、BX-35和B/Florida/04/06的HA和NA蛋白测试各主链。将重配流感病毒在MDCK细胞中生长60小时并通过ELISA或RP-HPLC试验测定HA产率。数据(参见图4)显示，与包含已知BX35主链的重配乙型流感病毒和野生型相比，包含本发明的主链的重配乙型流感病毒可生长至较高效价。
还使用了多种不同的HA和NA区段测试了使用#34和#35获得的HA产率。使用重配乙型流感病毒和相应的野生型乙型流感病毒感染MDCK细胞。数据(参见图5)显示，与相应的野生型毒株相比，所有包含本发明的主链的重配乙型流感病毒都生长得一样好或更好。
鸡蛋中重配乙型流感病毒的生长特性
使用以下病毒的280或2800感染性剂量(IU)接种含胚鸡蛋：包含来自B/Brisbane/60/08(#35主链)的所有主链区段和来自B/Wisconsin/1/10的HA和NA区段的反向遗传学衍生的重配乙型流感病毒，(b)包含来自B/Lee/40的PB2、NP和M区段和来自B/Wisconsin/1/10(BX-41)的所有其他基因的重配乙型流感病毒，以及(c)野生型B/Wisconsin/1/10毒株。在感染后72小时收获鸡蛋尿囊液，并通过HA试验测定HA效价或通过病灶形成试验测定病毒生长。数据(参见图6)显示，与对照毒株相比，本发明的重配乙型流感病毒可生长得一样好或更好。
应理解，仅以举例的方式描述了本发明，可对之进行修改而仍在本发明的范围和构思内。
参考文献
[1]WO2007/002008
[2]WO2007/124327
[3]Goodeve等(1985)ArchVirol.83(3-4):169-79.
[4]Audsley,J2007,AlternativeapproachesinthepreparationandgrowthofinfluenzaBvaccineviruses(乙型流感疫苗病毒的制备和生长的替代性方法)，博士论文，应用科学系，RMIT大学.
[5]http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/candidates_reagents/summary_b_cvv_20120621.pdf
[6]http://www.nibsc.ac.uk/documents/ifu/09-318.pdf
[7]http://www.nibsc.ac.uk/documents/ifu/12-202.pdf
[8]Rota等(1992)JGenVirol73:2737-42.
[9]GenBank序列GI:325176.
[10]McCullers等(1999)JVirol73:7343-8.
[11]GenBank序列GI:325237.
[12]Herlocher等(2004)JInfectDis190(9):1627-30.
[13]Le等(2005)Nature437(7062):1108.
[14]US6468544
[15]Neumann等(2005)ProcNatlAcadSciUSA102:16825-9
[16]WO2010/133964
[17]WO2009/000891
[18]美国临时申请号61/273,151
[19]Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual(《分子克隆：实验室手册》)，第2版，1989，冷泉港出版社(ColdSpringHarborPress)，纽约冷泉港
[20]WO2011/012999
[21]WO2011048560
[22]Kistner等(1998)Vaccine16:960-8.
[23]Kistner等(1999)DevBiolStand98:101-110.
[24]Bruhl等(2000)Vaccine19:1149-58.
[25]WO2006/108846.
[26]Pau等(2001)Vaccine19:2716-21.
[27]http://www.atcc.org/
[28]http://locus.umdnj.edu/
[29]WO97/37000.
[30]Brands等(1999)DevBiolStand98:93-100.
[31]Halperin等(2002)Vaccine20:1240-7.
[32]EP-A-1260581(WO01/64846)
[33]WO2006/071563
[34]WO2005/113758
[35]WO97/37001
[36]WO02/28422.
[37]WO02/067983.
[38]WO02/074336.
[39]WO01/21151.
[40]WO02/097072.
[41]WO2005/113756.
[42]Huckriede等(2003)MethodsEnzymol373:74-91.
[43]Vaccines(《疫苗》)(Plotkins和Orenstein编)第4版，2004,ISBN:0-7216-9688-0
[44]Treanor等(1996)JInfectDis173:1467-70.
[45]Keitel等(1996)ClinDiagnLabImmunol3:507-10.
[46]WO2008/068631.
[47]Gennaro(2000)Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(《雷明顿：药剂学科学和实践》)第20版，ISBN:0683306472.
[48]Banzhoff(2000)ImmunologyLetters71:91-96.
[49]Nony等(2001)Vaccine27:3645-51.
[50]EP-B-0870508.
[51]US5948410.
[52]WO2007/052163.
[53]WO2007/052061
[54]WO90/14837.
[55]Podda和DelGiudice(2003)ExpertRevVaccines2:197-203.
[56]Podda(2001)Vaccine19:2673-2680.
[57]VaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach(《疫苗设计：亚基和佐剂方法》)(Powell和Newman编)，普莱南出版社(PlenumPress)1995(ISBN0-306-44867-X).
[58]VaccineAdjuvants:PreparationMethodsandResearchProtocols(《疫苗佐剂：制备方法和研究方案》)(分子医学方法丛书第42卷)ISBN:1-59259-083-7.O’Hagan编.
[59]WO2008/043774.
[60]Allison和Byars(1992)ResImmunol143:519-25.
[61]Hariharan等(1995)CancerRes55:3486-9.
[62]US-2007/014805.
[63]US-2007/0191314.
[64]Suli等(2004)Vaccine22(25-26):3464-9.
[65]WO95/11700.
[66]美国专利6,080,725.
[67]WO2005/097181.
[68]WO2006/113373.
[69]Potter和Oxford(1979)BrMedBull35:69–75.
[70]Greenbaum等(2004)Vaccine22:2566-77.
[71]Zurbriggen等(2003)ExpertRevVaccines2:295-304.
[72]Piascik(2003)JAmPharmAssoc(WashDC).43:728-30.
[73]Mann等(2004)Vaccine22:2425-9.
[74]Halperin等(1979)AmJPublicHealth69:1247-50.
[75]Herbert等(1979)JInfectDis140:234-8.
[76]Chen等(2003)Vaccine21:2830-6.
[77]CurrentProtocolsinMolecularBiology(《新编分子生物学方法》)(F.M.Ausubel等编，1987)增刊30.
[78]Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2:482-489.
序列
SEQIDNO:1(PA,B/Brisbane/60/08)
MDTFITRNFQTTIIQKAKNTMAEFSEDPELQPAMLFNICVHLEVCYVISDMNFLDEEGKAYTALEGQGKEQNLRPQYEVIEGMPRTIAWMVQRSLAQEHGIETPKYLADLFDYKTKRFIEVGITKGLADDYFWKKKEKLGNSMELMIFSYNQDYSLSNESSLDEEGKGRVLSRLTELQAELSLKNLWQVLIGEEDVEKGIDFKLGQTISRLRDISVPAGFSNFEGMRSYIDNIDPKGAIERNLARMSPLVSVTPKKLTWEDLRPIGPHIYDHELPEVPYNAFLLMSDELGLANMTEGKSKKPKTLAKECLEKYSTLRDQTDPILIMKSEKANENFLWKLWRDCVNTISNEETSNELQKTNYAKWATGDGLTYQKIMKEVAIDDETMCQEEPKIPNKCRVAAWVQTEMNLLSTLTSKRALDLPEIGPDIAPVEHVGSERRKYFVNEINYCKASTVMMKYVLFHTSLLNESNASMGKYKVIPITNRVVNEKGESFDMLYGLAVKGQSHLRGDTDVVTVVTFEFSSTDPRVDSGKWPKYTVFRIGSLFVSGREKSVYLYCRVNGTNKIQMKWGMEARRCLLQSMQQMEAIVEQESSIQGYDMTKACFKGDRVNSPKTFSIGTQEGKLVKGSFGKALRVIFTKCLMHYVFGNAQLEGFSAESRRLLLLIQALKDRKGPWVFDLEGMYSGIEECISNNPWVIQSVYWFNEWLGFEKEGNKVLESVDEIMDE
SEQIDNO:2(PB1,B/Brisbane/60/08)
MNINPYFLFIDVPVQAAISTTFPYTGVPPYSHGTGTGYTIDTVIRTHEYSNKGKQYISDVTGCTMVDPTNGPLPEDNEPSAYAQLDCVLEALDRMDEEHPGLFQAASQNAMEALMVTTVDKLTQGRQTFDWTVCRNQPAATALNTTITSFRLNDLNGADKGGLIPFCQDIIDSLDRPEMTFFSVKNIKKKLPAKNRKGFLIKRIPMKVKDKITKVEYIKRALSLNTMTKDAERGKLKRRAIATAGIQIRGFVLVVENLAKNICENLEQSGLPVGGNEKKAKLSNAVAKMLSNCPPGGISMTVTGDNTKWNECLNPRIFLAMTERITRDSPVWFRDFCSIAPVLFSNKIARLGKGFMITSKTKRLKAQIPCPDLFSIPLERYNEETRAKLKKLKPFFNEEGTASLSPGMMMGMFNMLSTVLGVAALGIKNIGNKEYLWDGLQSSDDFALFVNAKDEETCMEGINDFYRTCKLLGVNMSKKKSYCNETGMFEFTSMFYRDGFVSNFAMELPSFGVAGVNESADMAIGMTIIKNNMINNGMGPATAQTAIQLFIADYRYTYKCHRGDSKVEGKRMKIIKELWENTKGRDGLLVADGGPNIYNLRNLHIPEIVLKYNLMDPEYKGRLLHPQNPFVGHLSIEGIKEADITPAHGPVKKMDYDAVSGTHSWRTKRNRSILNTDQRNMILEEQCYAKCCNLFEACFNSASYRKPVGQHSMLEAMAHRLRMDARLDYESGRMSKDDFEKAMAHLGEIGYI
SEQIDNO:3(PB2,B/Brisbane/60/08)
MTLAKIELLKQLLRDNEAKTVLKQTTVDQYNIIRKFNTSRIEKNPSLRMKWAMCSNFPLALTKGDMANRIPLEYKGIQLKTNAEDIGTKGQMCSIAAVTWWNTYGPIGDTEGFERVYESFFLRKMRLDNATWGRITFGPVERVRKRVLLNPLTKEMPPDEASNVIMEILFPKEAGIPRESTWIHRELIKEKREKLKGTMITPIVLAYMLERELVARRRFLPVAGATSAEFIEMLHCLQGENWRQIYHPGGNKLTESRSQSMIVACRKIIRRSIVASNPLELAVEIANKTVIDTEPLKSCLAAIDGGDVACDIIRAALGLKIRQRQRFGRLELKRISGRGFKNDEEILIGNGTIQKIGIWDGEEEFHVRCGECRGILKKSKMKLEKLLINSAKKEDMRDLIILCMVFSQDTRMFQGVRGEINFLNRAGQLLSPMYQLQRYFLNRSNDLFDQWGYEESPKASELHGINESMNASDYTLKGIVVTRNVIDDFSSIETEKVSITKNLSLIKRTGEVIMGANDVSELESQAQLMITYDTPKMWEMGTTKELVQNTYQWVLKNLVTLKAQFLLGKEDMFQWDAFEAFESIIPQKMAGQYSGFARAVLKQMRDQEVMKTDQFIKLLPFCFSPPKLRSNGEPYQFLKLVLKGGGENFIEVRKGSPLFSYNPQTEVLTICGRMMSLKGKIEDEERNRSMGNAVLAGFLVSGKYDPDLGDFKTIEELEKLKPGEKANILLYQGKPVKVVKRKRYSALSNDISQGIKRQRMTVESMGWALS
SEQIDNO:4(NP,B/Brisbane/60/08)
MSNMDIDGINTGTIDKTPEEITSGTSGTTRPIIRPATLAPPSNKRTRNPSPERATTSSEDDVGRKTQKKQTPTEIKKSVYNMVVKLGEFYNQMMVKAGLNDDMERNLIQNAHAVERILLAATDDKKTEFQKKKNARDVKEGKEEIDHNKTGGTFYKMVRDDKTIYFSPIRITFLKEEVKTMYKTTMGSDGFSGLNHIMIGHSQMNDVCFQRSKALKRVGLDPSLISTFAGSTVPRRSGATGVAIKGGGTLVAEAIRFIGRAMADRGLLRDIKAKTAYEKILLNLKNKCSAPQQKALVDQVIGSRNPGIADIEDLTLLARSMVVVRPSVASKVVLPISIYAKIPQLGFNVEEYSMVGYEAMALYNMATPVSILRMGDDAKDKSQLFFMSCFGAAYEDLRVLSALTGTEFKPRSALKCKGFHVPAKEQVEGMGAALMSIKLQFWAPMTRSGGNEVGGDGGSGQISCSPVFAVERPIALSKQAVRRMLSMNIEGRDADVKGNLLKMMNDSMAKKTSGNAFIGKKMFQISDKNKTNPIEIPIKQTIPNFFFGRDTAEDYDDLDY
SEQIDNO:5(M1,B/Brisbane/60/08)
MSLFGDTIAYLLSLTEDGEGKAELAEKLHCWFGGKEFDLDSALEWIKNKRCLTDIQKALIGASICFLKPKDQERKRRFITEPLSGMGTTATKKKGLILAERKMRRCVSFHEAFEIAEGHESSALLYCLMVMYLNPGNYSMQVKLGTLCALCEKQASHSHRAHSRAARSSVPGVRREMQMVSAMNTAKTMNGMGKGEDVQKLAEELQSNIGVLRSLGASQKNGEGIAKDVMEVLKQSSMGNSALVKKYL
SEQIDNO:6(M2,B/Brisbane/60/08)
MLEPFQILTICSFILSALHFMAWTIGHLNQIKRGINMKIRIKGPNKETINREVSILRHSYQKEIQAKETMKEVLSDNMEVLNDHIIIEGLSAEEIIKMGETVLEIEELH
SEQIDNO:7(NS1,B/Brisbane/60/08)
MANNNMTTTQIEVGPGATNATINFEAGILECYERLSWQRALDYPGQDRLNRLKRKLESRIKTHNKSEPESKRMSLEERKAIGVKMMKVLLFMNPSAGIEGFEPYCMKSSSNSNCTKYNWTDYPSTPERCLDDIEEEPEDVDGPTEIVLRDMNNKDARQKIKEEVNTQKEGKFRLTIKRDMRNVLSLRVLVNGTFLKHPNGHKSLSTLHRLNAYDQSGRLVAKLVATDDLTVEDEEDGHRILNSLFERLNEGHSKPIRAAETAVGVLSQFGQEHRLSPEEGDN
SEQIDNO:8(NS2,B/Brisbane/60/08)
MANNNMTTTQIEWRMKKMAIGSSTHSSSVLMKDIQSQFEQLKLRWESYPNLVKSTDYHQKRETIRLVTEELYLLSKRIDDNILFHKTVIANSSIIADMVVSLSLLETLYEMKDVVEVYSRQCL
SEQIDNO:9(HA,B/Brisbane/60/08)
MKAIIVLLMVVTSNADRICTGITSSNSPHVVKTATQGEVNVTGVIPLTTTPTKSHFANLKGTETRGKLCPKCLNCTDLDVALGRPKCTGKIPSARVSILHEVRPVTSGCFPIMHDRTKIRQLPNLLRGYEHIRLSTHNVINAENAPGGPYKIGTSGSCPNITNGNGFFATMAWAVPKNDKNKTATNPLTIEVPYICTEGEDQITVWGFHSDNEAQMAKLYGDSKPQKFTSSANGVTTHYVSQIGGFPNQTEDGGLPQSGRIVVDYMVQKSGKTGTITYQRGILLPQKVWCASGRSKVIKGSLPLIGEADCLHEKYGGLNKSKPYYTGEHAKAIGNCPIWVKTPLKLANGTKYRPPAKLLKERGFFGAIAGFLEGGWEGMIAGWHGYTSHGAHGVAVAADLKSTQEAINKITKNLNSLSELEVKNLQRLSGAMDELHNEILELDEKVDDLRADTISSQIELAVLLSNEGIINSEDEHLLALERKLKKMLGPSAVEIGNGCFETKHKCNQTCLDRIAAGTFDAGEFSLPTFDSLNITAASLNDDGLDNHTILLYYSTAASSLAVTLMIAIFVVYMVSRDNVSCSICL
SEQIDNO:10(NA,B/Brisbane/60/08)
MLPSTIQTLTLFLTSGGVLLSLYVSASLSYLLYSDILLKFSPTEITAPTMPLDCANASNVQAVNRSATKGVTLLLPEPEWTYPRLSCPGSTFQKALLISPHRFGETKGNSAPLIIREPFIACGPNECKHFALTHYAAQPGGYYNGTRGDRNKLRHLISVKLGKIPTVENSIFHMAAWSGSACHDGKEWTYIGVDGPDNNALLKVKYGEAYTDTYHSYANKILRTQESACNCIGGNCYLMITDGSASGVSECRFLKIREGRIIKEIFPTGRVKHTEECTCGFASNKTIECACRDNSYTAKRPFVKLNVETDTAEIRLMCTDTYLDTPRPNDGSITGPCESNGDKGSGGIKGGFVHQRMESKIGRWYSRTMSKTERMGMGLYVKYDGDPWADSDALAFSGVMVSMKEPGWYSFGFEIKDKKCDVPCIGIEMVHDGGKETWHSAATAIYCLMGSGQLLWDTVTGVDMAL
SEQIDNO:11(PA,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCGGTGCGTTTGATTTGTCATAATGGATACTTTTATTACAAGAAACTTCCAGACTACAATAATACAAAAGGCCAAAAACACAATGGCAGAATTTAGTGAAGATCCTGAATTGCAACCAGCAATGCTATTCAATATCTGCGTCCATCTAGAGGTTTGCTATGTAATAAGTGACATGAATTTTCTTGACGAAGAAGGAAAAGCATATACAGCATTAGAAGGACAAGGGAAAGAACAAAACTTGAGACCACAATATGAAGTAATTGAGGGAATGCCAAGAACCATAGCATGGATGGTCCAGAGATCCTTAGCTCAAGAGCATGGAATAGAGACTCCCAAGTATCTGGCTGATTTGTTTGATTATAAAACCAAAAGATTTATAGAAGTTGGAATAACAAAGGGATTGGCTGATGATTACTTTTGGAAAAAGAAAGAAAAGTTGGGAAATAGCATGGAACTGATGATATTCAGCTACAATCAAGACTACTCGTTAAGTAATGAATCCTCATTGGATGAGGAAGGGAAAGGGAGAGTGCTAAGCAGACTCACAGAACTTCAGGCTGAATTAAGTCTGAAAAATTTATGGCAAGTTCTCATAGGAGAAGAAGATGTTGAAAAGGGAATTGATTTTAAACTTGGACAAACAATATCTAGACTAAGGGATATATCTGTTCCAGCTGGTTTCTCCAATTTTGAAGGAATGAGGAGCTACATAGACAATATAGACCCAAAAGGAGCAATAGAGAGAAATCTAGCAAGGATGTCTCCCTTAGTATCAGTCACACCTAAAAAGTTAACATGGGAGGACCTAAGACCAATAGGGCCTCACATTTACGACCATGAGCTACCAGAAGTTCCATATAATGCCTTTCTTCTAATGTCTGATGAACTGGGATTGGCCAATATGACTGAGGGAAAGTCCAAAAAACCGAAGACATTAGCCAAAGAATGTCTAGAAAAGTACTCAACACTACGGGATCAAACTGACCCAATATTAATAATGAAAAGCGAAAAAGCTAACGAAAATTTCCTATGGAAGCTTTGGAGAGACTGTGTAAATACAATAAGTAATGAGGAAACGAGTAACGAGTTACAGAAAACCAATTATGCCAAATGGGCCACAGGGGATGGATTAACATACCAGAAAATAATGAAAGAAGTAGCAATAGATGACGAAACAATGTGCCAAGAAGAGCCTAAAATCCCTAACAAATGTAGAGTGGCTGCTTGGGTTCAAACAGAGATGAATCTATTGAGCACTCTGACAAGTAAAAGAGCTCTGGACCTACCAGAAATAGGGCCAGACATAGCACCCGTGGAGCATGTAGGAAGTGAAAGAAGGAAATACTTTGTTAATGAAATCAACTACTGTAAGGCCTCTACAGTTATGATGAAGTATGTGCTTTTTCACACTTCATTGTTGAATGAAAGCAATGCCAGCATGGGAAAATACAAAGTAATACCAATAACCAATAGAGTAGTAAATGAAAAAGGAGAAAGTTTCGACATGCTTTACGGTCTGGCGGTTAAAGGACAATCTCATCTGAGGGGAGATACTGATGTTGTAACAGTTGTAACTTTCGAATTTAGTAGTACAGATCCAAGAGTGGACTCAGGAAAGTGGCCAAAATATACTGTGTTTAGGATTGGCTCCCTATTTGTGAGTGGGAGGGAAAAATCTGTGTACTTGTATTGCCGAGTGAATGGCACAAATAAGATCCAAATGAAATGGGGAATGGAAGCTAGAAGATGTTTGCTTCAATCAATGCAACAAATGGAGGCAATTGTTGAACAGGAATCATCAATACAAGGATATGACATGACCAAAGCCTGTTTCAAGGGAGACAGAGTAAATAGCCCCAAAACTTTCAGTATTGGAACTCAAGAAGGAAAACTAGTAAAAGGATCCTTTGGAAAAGCACTAAGAGTAATATTTACTAAATGCTTGATGCACTATGTATTTGGAAATGCCCAATTGGAGGGGTTTAGTGCCGAGTCTAGGAGACTTCTACTGTTGATTCAAGCATTAAAGGACAGAAAGGGCCCTTGGGTGTTCGACTTAGAGGGAATGTATTCTGGAATAGAAGAATGTATTAGCAACAACCCTTGGGTAATACAGAGTGTATACTGGTTCAATGAATGGTTGGGCTTTGAAAAGGAGGGGAATAAAGTGTTGGAATCAGTGGATGAAATAATGGATGAATAAAAGGAAATGGTACTCAATTTGGTACTATTTTGTTCATTATGTATCTAAACATCCAATAAAAAGAACCAAGAATCAAAAATGCACGTGTTTCTACT
SEQIDNO:12(PB1,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCGGAGCCTTTAAGATGAATATAAATCCTTATTTTCTCTTCATAGATGTGCCCGTACAGGCAGCAATTTCAACAACATTCCCATACACTGGTGTTCCCCCTTATTCCCATGGAACAGGAACAGGCTACACAATAGACACCGTGATCAGAACGCATGAGTACTCAAACAAGGGGAAACAGTACATTTCTGATGTTACAGGATGCACAATGGTAGATCCAACAAATGGACCATTACCCGAAGATAATGAGCCGAGTGCCTATGCGCAATTAGATTGCGTTTTAGAGGCTTTGGATAGAATGGATGAAGAACACCCAGGTCTTTTTCAAGCAGCCTCACAGAATGCTATGGAGGCCCTAATGGTCACAACTGTAGACAAATTAACCCAGGGGAGACAGACTTTTGATTGGACAGTATGCAGAAACCAACCTGCTGCAACGGCACTGAACACAACAATAACCTCTTTTAGGTTGAATGATTTAAATGGAGCCGACAAAGGTGGATTAATACCTTTTTGCCAGGATATCATTGATTCATTAGACCGACCTGAAATGACTTTCTTCTCAGTAAAGAATATAAAGAAAAAATTGCCTGCCAAAAACAGAAAGGGTTTCCTCATAAAGAGGATACCAATGAAGGTAAAAGACAAAATAACCAAAGTGGAATACATCAAAAGAGCATTATCATTAAACACAATGACAAAAGACGCTGAAAGAGGCAAACTGAAAAGAAGAGCGATTGCCACTGCTGGAATACAAATCAGAGGGTTTGTATTAGTAGTTGAAAACTTGGCTAAAAATATATGTGAAAATCTAGAACAAAGTGGTTTACCAGTAGGTGGAAACGAGAAGAAAGCCAAACTGTCAAACGCAGTGGCCAAAATGCTCAGTAACTGCCCACCAGGAGGGATTAGCATGACAGTAACAGGAGACAATACAAAATGGAATGAATGTTTAAACCCAAGAATCTTTTTGGCTATGACTGAAAGAATAACCAGAGACAGCCCAGTTTGGTTCAGGGATTTTTGTAGTATAGCACCGGTCCTGTTCTCCAATAAGATAGCAAGATTGGGGAAAGGGTTTATGATAACAAGCAAAACAAAAAGACTGAAGGCTCAAATACCTTGTCCTGATCTGTTTAGTATACCGTTAGAAAGATATAATGAAGAAACAAGGGCAAAATTGAAAAAGCTAAAACCATTCTTCAATGAAGAAGGAACTGCATCTTTGTCGCCTGGGATGATGATGGGAATGTTTAATATGCTATCTACCGTGTTGGGAGTAGCTGCACTAGGTATCAAGAACATTGGAAACAAAGAATACTTATGGGATGGACTGCAATCTTCTGATGATTTTGCTCTGTTTGTTAATGCAAAGGATGAAGAAACATGTATGGAAGGAATAAACGACTTTTACCGAACATGTAAATTATTGGGAGTAAACATGAGCAAAAAGAAAAGTTACTGTAATGAGACTGGAATGTTTGAATTTACAAGCATGTTCTACAGAGATGGATTTGTATCTAATTTTGCAATGGAACTCCCTTCGTTTGGGGTTGCTGGAGTAAATGAATCAGCAGATATGGCAATAGGAATGACAATAATAAAGAACAACATGATCAACAATGGAATGGGTCCGGCAACAGCACAAACAGCCATACAGTTATTCATAGCTGATTATAGATACACCTACAAATGCCACAGGGGAGATTCCAAAGTAGAAGGAAAGAGAATGAAAATCATAAAGGAGTTATGGGAAAACACTAAAGGAAGAGATGGTCTATTAGTAGCAGATGGTGGGCCCAACATTTACAATTTGAGAAACCTGCATATCCCAGAAATAGTATTAAAGTATAATCTAATGGACCCTGAATACAAAGGGCGGTTACTTCATCCTCAAAATCCCTTTGTGGGACATTTGTCTATTGAGGGCATCAAAGAGGCAGACATAACCCCAGCACATGGTCCAGTAAAGAAAATGGACTACGATGCGGTGTCTGGAACTCATAGTTGGAGAACCAAAAGAAACAGATCTATACTAAACACTGATCAGAGGAACATGATTCTTGAGGAACAATGCTACGCTAAATGTTGCAACCTATTTGAGGCCTGTTTTAACAGTGCATCATACAGGAAGCCAGTGGGTCAACATAGCATGCTTGAGGCTATGGCCCACAGATTAAGAATGGATGCACGATTAGATTATGAATCAGGGAGAATGTCAAAGGATGATTTTGAGAAAGCAATGGCTCACCTTGGTGAGATTGGGTACATATAAGCTTCGAAGATGTTTATGGGGTTATTGGTCATCATTGAATACATGCGATACACAAATGATTAAAATGAAAAAAGGCTCGTGTTTCTACT
SEQIDNO:13(PB2,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCGGAGCGTTTTCAAGATGACATTGGCCAAAATTGAATTGTTAAAACAACTGCTAAGGGACAATGAAGCCAAAACAGTTTTGAAGCAAACAACGGTAGACCAATATAACATAATAAGAAAATTCAATACATCAAGGATTGAAAAGAATCCTTCACTAAGGATGAAGTGGGCCATGTGTTCTAATTTTCCCTTGGCTCTAACCAAGGGCGATATGGCAAACAGAATCCCCTTGGAATACAAAGGGATACAACTTAAAACAAATGCTGAAGACATAGGAACCAAAGGCCAAATGTGCTCAATAGCAGCAGTTACTTGGTGGAATACATATGGACCAATAGGAGATACTGAAGGTTTCGAAAGGGTCTACGAAAGCTTTTTTCTCAGAAAAATGAGACTTGACAACGCCACTTGGGGCCGAATAACTTTTGGCCCAGTTGAAAGAGTGAGAAAAAGGGTACTGCTAAACCCTCTCACCAAGGAAATGCCTCCGGATGAGGCGAGCAATGTGATAATGGAAATATTGTTCCCTAAAGAAGCAGGAATACCAAGAGAATCCACTTGGATACATAGGGAACTGATAAAAGAAAAAAGAGAAAAATTGAAAGGAACAATGATAACTCCAATCGTACTGGCATACATGCTTGAAAGAGAACTGGTTGCTCGAAGAAGATTCTTGCCAGTGGCAGGAGCAACATCAGCTGAGTTCATAGAAATGCTACACTGCTTACAAGGTGAAAATTGGAGACAAATATATCACCCAGGAGGGAATAAATTAACTGAGTCCAGGTCTCAATCAATGATAGTAGCTTGTAGAAAAATAATCAGAAGATCAATAGTCGCTTCAAACCCACTGGAGCTAGCTGTAGAAATTGCAAACAAGACTGTGATAGATACTGAACCTTTAAAGTCATGTCTGGCAGCCATAGACGGAGGTGATGTAGCTTGTGACATAATAAGAGCTGCATTAGGACTAAAGATCAGACAAAGACAAAGATTTGGACGGCTTGAGCTAAAAAGAATATCAGGAAGAGGATTCAAAAATGATGAAGAAATATTAATAGGGAACGGAACAATACAGAAGATTGGAATATGGGACGGGGAAGAGGAGTTCCATGTAAGATGTGGTGAATGCAGGGGAATATTAAAAAAGAGTAAAATGAAACTGGAAAAACTACTGATAAATTCAGCCAAAAAGGAGGATATGAGAGATTTAATAATCTTATGCATGGTATTTTCTCAAGACACTAGGATGTTCCAAGGAGTGAGAGGAGAAATAAATTTTCTTAATCGAGCAGGCCAACTTTTATCTCCAATGTACCAACTCCAACGATATTTTTTGAATAGAAGCAACGACCTTTTTGATCAATGGGGGTATGAGGAATCACCCAAAGCAAGTGAACTACATGGGATAAATGAATCAATGAATGCATCTGACTATACATTGAAAGGGATTGTAGTGACAAGAAATGTAATTGACGACTTTAGCTCTATTGAAACAGAAAAAGTATCCATAACAAAAAATCTTAGTTTAATAAAAAGGACTGGGGAAGTCATAATGGGAGCTAATGACGTGAGTGAATTAGAATCACAAGCACAGCTGATGATAACATATGATACACCTAAAATGTGGGAAATGGGAACAACCAAAGAACTGGTGCAAAACACTTATCAATGGGTGCTAAAAAACTTGGTGACACTGAAGGCTCAGTTTCTTCTAGGAAAAGAGGACATGTTCCAATGGGATGCATTTGAAGCATTTGAGAGCATAATTCCTCAGAAGATGGCTGGTCAGTACAGTGGATTTGCAAGAGCAGTGCTCAAACAAATGAGAGACCAGGAGGTTATGAAAACTGACCAGTTCATAAAGTTGTTGCCTTTTTGTTTCTCACCACCAAAATTAAGGAGCAATGGGGAGCCTTATCAATTCTTAAAACTTGTGTTGAAAGGAGGAGGGGAAAATTTCATCGAAGTAAGGAAAGGGTCCCCTCTATTTTCCTATAATCCACAAACAGAAGTCCTAACTATATGCGGCAGAATGATGTCATTAAAAGGGAAAATTGAAGATGAAGAAAGGAATAGATCAATGGGTAATGCAGTATTAGCAGGCTTTCTCGTTAGTGGCAAGTATGACCCAGATCTTGGAGATTTCAAAACTATTGAAGAACTTGAAAAGCTGAAACCGGGGGAAAAGGCAAACATCTTACTTTATCAAGGAAAACCAGTTAAAGTAGTTAAAAGGAAAAGGTATAGTGCTTTGTCCAATGACATTTCACAAGGAATTAAGAGACAAAGAATGACAGTTGAGTCTATGGGGTGGGCCTTGAGCTAATATAAATTTATCCATTAATTCAATGAACGCAATTGAGTGAAAAATGCTCGTGTTTCTACT
SEQIDNO:14(NP,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCACAGCATTTTCTTGTGAACTTCAAGCACCAGTAAAAGAACTGAAAATCAAAATGTCCAACATGGATATTGACGGTATAAACACTGGGACAATTGACAAAACACCGGAAGAAATAACTTCTGGAACCAGTGGGACAACCAGACCAATCATTAGACCAGCAACCCTTGCCCCACCAAGCAACAAACGAACCCGTAACCCATCCCCGGAAAGAGCAACCACAAGCAGTGAAGATGATGTCGGAAGGAAAACCCAAAAGAAACAGACCCCGACAGAGATAAAGAAGAGCGTCTACAACATGGTGGTGAAACTGGGCGAATTCTATAACCAGATGATGGTCAAAGCTGGACTCAATGATGACATGGAGAGAAATCTAATCCAAAATGCGCATGCCGTGGAAAGAATTCTATTGGCTGCCACTGATGACAAGAAAACCGAGTTCCAGAAGAAAAAGAATGCCAGAGATGTCAAAGAAGGGAAAGAAGAAATAGATCACAACAAAACAGGAGGCACCTTTTACAAGATGGTAAGAGATGATAAAACCATCTACTTCAGCCCTATAAGAATTACCTTTTTAAAAGAAGAGGTGAAAACAATGTACAAAACCACCATGGGGAGTGATGGCTTCAGTGGACTAAATCACATAATGATTGGGCATTCACAGATGAATGATGTCTGTTTCCAAAGATCAAAGGCACTAAAAAGAGTTGGACTTGATCCTTCATTAATCAGTACCTTTGCGGGAAGCACAGTCCCCAGAAGATCAGGTGCGACTGGTGTTGCAATCAAAGGAGGTGGAACCTTAGTGGCTGAAGCCATTCGATTTATAGGAAGAGCAATGGCAGACAGAGGGCTATTGAGAGACATCAAAGCCAAGACTGCCTATGAAAAGATTCTTCTGAATCTAAAAAACAAATGCTCTGCGCCCCAACAAAAGGCTCTAGTTGATCAAGTGATCGGAAGCAGAAATCCGGGGATTGCAGACATTGAAGATCTAACCCTGCTTGCTCGTAGTATGGTCGTTGTTAGGCCCTCTGTGGCAAGCAAAGTGGTGCTTCCCATAAGCATTTACGCCAAAATACCTCAACTAGGGTTCAATGTTGAAGAGTACTCTATGGTTGGGTACGAAGCCATGGCTCTTTACAATATGGCAACACCTGTGTCCATATTAAGAATGGGAGATGATGCAAAAGATAAATCGCAATTATTCTTCATGTCTTGCTTCGGAGCTGCCTATGAAGACCTGAGAGTTTTGTCTGCATTAACAGGCACAGAATTCAAGCCTAGATCAGCATTAAAATGCAAGGGTTTCCATGTTCCAGCAAAGGAACAGGTAGAAGGAATGGGAGCAGCTCTGATGTCCATCAAGCTCCAGTTTTGGGCTCCGATGACCAGATCTGGGGGGAACGAAGTAGGTGGAGACGGAGGGTCTGGCCAAATAAGCTGCAGCCCAGTGTTTGCAGTGGAAAGACCTATTGCTCTAAGCAAGCAAGCTGTAAGAAGAATGCTGTCAATGAATATTGAGGGACGTGATGCAGATGTCAAAGGAAATCTACTCAAGATGATGAATGACTCAATGGCTAAGAAAACCAGTGGAAATGCTTTCATTGGGAAGAAAATGTTTCAAATATCAGACAAAAACAAAACCAATCCCATTGAAATTCCAATTAAGCAGACCATCCCCAATTTCTTCTTTGGGAGGGACACAGCAGAGGATTATGATGACCTCGATTATTAAGGCAACAAAATAGACACTATGACTGTGATTGTTTCAATACGTTTGGAATGTGGGTGTTTATTCTTATTAAAATAAATATAAAAAATGCTGTTGTTTCTACT
SEQIDNO:15(M,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCACGCACTTTCTTAAAATGTCGCTGTTTGGAGACACAATTGCCTACCTGCTTTCATTGACAGAAGATGGAGAAGGCAAAGCAGAACTAGCAGAAAAATTACACTGTTGGTTTGGTGGGAAAGAATTTGACCTAGACTCTGCCTTGGAATGGATAAAAAACAAAAGATGCTTAACTGATATACAAAAAGCACTAATTGGTGCCTCTATATGCTTTTTAAAACCCAAAGACCAGGAAAGAAAAAGAAGATTCATCACAGAGCCCTTATCAGGAATGGGAACAACAGCAACAAAAAAGAAAGGCCTGATTCTGGCTGAGAGAAAAATGAGAAGATGTGTGAGCTTTCATGAAGCATTTGAAATAGCAGAAGGCCATGAAAGCTCAGCGCTACTATACTGTCTCATGGTCATGTACCTGAATCCTGGAAATTATTCAATGCAAGTAAAACTAGGAACGCTCTGTGCTTTATGCGAGAAACAAGCATCACATTCACACAGGGCTCATAGCAGAGCAGCGAGATCTTCAGTGCCTGGAGTGAGACGAGAAATGCAGATGGTCTCAGCTATGAACACAGCAAAAACAATGAATGGAATGGGAAAAGGAGAAGACGTCCAAAAGCTGGCAGAAGAGTTGCAAAGCAACATTGGAGTGCTGAGATCTCTTGGGGCAAGCCAAAAGAATGGGGAAGGGATTGCAAAGGATGTAATGGAAGTGCTAAAGCAGAGCTCCATGGGAAATTCAGCTCTTGTGAAGAAATATCTATAATGCTCGAACCATTTCAGATTCTTACAATTTGTTCTTTTATCTTATCAGCTCTCCATTTCATGGCTTGGACAATAGGGCATTTGAATCAAATAAAAAGAGGAATAAACATGAAAATACGAATAAAAGGTCCAAACAAAGAGACAATAAACAGAGAGGTATCAATTTTGAGACACAGTTACCAAAAAGAAATCCAGGCCAAAGAAACAATGAAGGAAGTACTCTCTGACAACATGGAGGTATTGAATGACCACATAATAATTGAGGGGCTTTCTGCCGAAGAGATAATAAAAATGGGTGAAACAGTTTTGGAGATAGAAGAATTGCATTAAATTCAATTTTACTGTATTTCTTACTATGCATTTAAGCAAATTGTAATCAATGTCAGCAAATAAACTGGAAAAAGTGCGTTGTTTCTACT
SEQIDNO:16(NS,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCAGAGGATTTGTTTAGTCACTGGCAAACAGGGAAAAATGGCGAACAACAACATGACCACAACACAAATTGAGGTGGGTCCGGGAGCAACCAATGCCACCATAAACTTTGAAGCAGGAATTCTAGAGTGCTATGAAAGGCTTTCATGGCAAAGAGCCCTTGACTACCCTGGTCAAGACCGCCTAAACAGACTAAAGAGAAAATTAGAGTCAAGAATAAAGACTCACAACAAAAGTGAGCCTGAAAGTAAAAGGATGTCCCTTGAAGAGAGAAAAGCAATTGGAGTAAAAATGATGAAAGTACTCCTATTTATGAATCCGTCTGCTGGAATTGAAGGGTTTGAGCCATACTGTATGAAAAGTTCCTCAAATAGCAACTGTACGAAATACAATTGGACTGATTACCCTTCAACACCAGAGAGGTGCCTTGATGACATAGAGGAAGAACCAGAGGATGTTGATGGCCCAACTGAAATAGTATTAAGGGACATGAACAACAAAGATGCAAGGCAAAAGATAAAGGAGGAAGTAAACACTCAGAAAGAAGGGAAGTTCCGTTTGACAATAAAAAGGGATATGCGTAATGTATTGTCCTTGAGAGTGTTGGTAAACGGAACATTCCTCAAACACCCCAATGGACACAAGTCCTTATCAACTCTGCATAGATTGAATGCATATGACCAGAGTGGAAGGCTTGTTGCTAAACTTGTTGCCACTGATGATCTTACAGTGGAGGATGAAGAAGATGGCCATCGGATCCTCAACTCACTCTTCGAGCGTCTTAATGAAGGACATTCAAAGCCAATTCGAGCAGCTGAAACTGCGGTGGGAGTCTTATCCCAATTTGGTCAAGAGCACCGATTATCACCAGAAGAGGGAGACAATTAGACTGGTCACGGAAGAACTTTATCTTTTAAGTAAAAGAATTGATGATAACATACTATTCCACAAAACAGTAATAGCTAACAGCTCCATAATAGCTGACATGGTTGTATCATTATCATTATTAGAAACATTGTATGAAATGAAGGATGTGGTTGAAGTGTACAGCAGGCAGTGCTTGTGAATTTAAAATAAAAATCCTCTTGTTACTACT
SEQIDNO:17(HA,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCAGAGCATTTTCTAATATCCACAAAATGAAGGCAATAATTGTACTACTCATGGTAGTAACATCCAATGCAGATCGAATCTGCACTGGGATAACATCGTCAAACTCACCACATGTCGTCAAAACTGCTACTCAAGGGGAGGTCAATGTGACTGGTGTAATACCACTGACAACAACACCCACCAAATCTCATTTTGCAAATCTCAAAGGAACAGAAACCAGGGGGAAACTATGCCCAAAATGCCTCAACTGCACAGATCTGGACGTAGCCTTGGGCAGACCAAAATGCACGGGGAAAATACCCTCGGCAAGAGTTTCAATACTCCATGAAGTCAGACCTGTTACATCTGGGTGCTTTCCTATAATGCACGACAGAACAAAAATTAGACAGCTGCCTAACCTTCTCCGAGGATACGAACATATCAGGTTATCAACCCATAACGTTATCAATGCAGAAAATGCACCAGGAGGACCCTACAAAATTGGAACCTCAGGGTCTTGCCCTAACATTACCAATGGAAACGGATTTTTCGCAACAATGGCTTGGGCCGTCCCAAAAAACGACAAAAACAAAACAGCAACAAATCCATTAACAATAGAAGTACCATACATTTGTACAGAAGGAGAAGACCAAATTACCGTTTGGGGGTTCCACTCTGACAACGAGGCCCAAATGGCAAAGCTCTATGGGGACTCAAAGCCCCAGAAGTTCACCTCATCTGCCAACGGAGTGACCACACATTACGTTTCACAGATTGGTGGCTTCCCAAATCAAACAGAAGACGGAGGACTACCACAAAGTGGTAGAATTGTTGTTGATTACATGGTGCAAAAATCTGGGAAAACAGGAACAATTACCTATCAAAGGGGTATTTTATTGCCTCAAAAGGTGTGGTGCGCAAGTGGCAGGAGCAAGGTAATAAAAGGATCCTTGCCTTTAATTGGAGAAGCAGATTGCCTCCACGAAAAATACGGTGGATTAAACAAAAGCAAGCCTTACTACACAGGGGAACATGCAAAGGCCATAGGAAATTGCCCAATATGGGTGAAAACACCCTTGAAGCTGGCCAATGGAACCAAATATAGACCTCCTGCAAAACTATTAAAGGAAAGGGGTTTCTTCGGAGCTATTGCTGGTTTCTTAGAAGGAGGATGGGAAGGAATGATTGCAGGTTGGCACGGATACACATCCCATGGGGCACATGGAGTAGCGGTGGCAGCAGACCTTAAGAGCACTCAAGAGGCCATAAACAAGATAACAAAAAATCTCAACTCTTTGAGTGAGCTGGAAGTAAAGAATCTTCAAAGACTAAGCGGTGCCATGGATGAACTCCACAACGAAATACTAGAACTAGATGAGAAAGTGGATGATCTCAGAGCTGATACAATAAGCTCACAAATAGAACTCGCAGTCCTGCTTTCCAATGAAGGAATAATAAACAGTGAAGATGAACATCTCTTGGCGCTTGAAAGAAAGCTGAAGAAAATGCTGGGCCCCTCTGCTGTAGAGATAGGGAATGGATGCTTTGAAACCAAACACAAGTGCAACCAGACCTGTCTCGACAGAATAGCTGCTGGTACCTTTGATGCAGGAGAATTTTCTCTCCCCACCTTTGATTCACTGAATATTACTGCTGCATCTTTAAATGACGATGGATTGGATAATCATACTATACTGCTTTACTACTCAACTGCTGCCTCCAGTTTGGCTGTAACACTGATGATAGCTATCTTTGTTGTTTATATGGTCTCCAGAGACAATGTTTCTTGCTCCATCTGTCTATAAGGGAAGTTAAGCCCTGTATTTTCCTTTATTGTAGTGCTTGTTTACTTGTTGTCATTACAAAGAAACGTTATTGAAAAATGCTCTTGTTACTACT
SEQIDNO:18(NA,B/Brisbane/60/08)
AGCAGAAGCAGAGCATCTTCTCAAAACTGAAGCAAATAGGCCAAAAATGAACAATGCTACCTTCAACTATACAAACGTTAACCCTATTTCTCACATCAGGGGGAGTATTATTATCACTATATGTGTCAGCTTCATTATCATACTTACTATATTCGGATATATTGCTAAAATTCTCACCAACAGAAATAACTGCACCAACAATGCCATTGGATTGTGCAAACGCATCAAATGTTCAGGCTGTGAACCGTTCTGCAACAAAAGGGGTGACACTTCTTCTCCCAGAACCGGAGTGGACATACCCGCGTTTATCTTGCCCGGGCTCAACCTTTCAGAAAGCACTCCTAATTAGCCCTCATAGATTCGGAGAAACCAAAGGAAACTCAGCTCCCTTGATAATAAGGGAACCTTTTATTGCTTGTGGACCAAATGAATGCAAACACTTTGCTCTAACCCATTATGCAGCCCAACCAGGGGGATACTACAATGGAACAAGAGGAGACAGAAACAAGCTGAGGCATCTAATTTCAGTCAAATTGGGCAAAATCCCAACAGTAGAAAACTCCATTTTCCACATGGCAGCATGGAGCGGGTCCGCGTGCCATGATGGTAAGGAATGGACATATATCGGAGTTGATGGCCCTGACAATAATGCATTGCTCAAAGTAAAATATGGAGAAGCATATACTGACACATACCATTCCTATGCAAACAAAATCCTAAGAACACAAGAAAGTGCCTGCAATTGCATCGGGGGAAATTGTTATCTTATGATAACTGATGGCTCAGCTTCAGGTGTTAGTGAATGCAGATTTCTTAAGATTCGAGAGGGCCGAATAATAAAAGAAATATTTCCAACAGGAAGAGTAAAACACACTGAGGAATGCACATGCGGATTTGCCAGCAATAAAACCATAGAATGTGCCTGTAGAGATAACAGTTACACAGCAAAAAGACCTTTTGTCAAATTAAACGTGGAGACTGATACAGCAGAAATAAGATTGATGTGCACAGATACTTATTTGGACACCCCCAGACCAAACGATGGAAGCATAACAGGCCCTTGTGAATCTAATGGGGACAAAGGGAGTGGAGGCATCAAGGGAGGATTTGTTCATCAAAGAATGGAATCCAAGATTGGAAGGTGGTACTCTCGAACGATGTCTAAAACTGAAAGGATGGGGATGGGACTGTATGTCAAGTATGATGGAGACCCATGGGCTGACAGTGATGCCCTAGCTTTTAGTGGAGTAATGGTTTCAATGAAAGAACCTGGTTGGTACTCCTTTGGCTTCGAAATAAAAGATAAGAAATGCGATGTCCCCTGTATTGGGATAGAGATGGTACATGATGGTGGAAAAGAGACTTGGCACTCAGCAGCAACAGCCATTTACTGTTTAATGGGCTCAGGACAGCTGCTGTGGGACACTGTCACAGGTGTTGACATGGCTCTGTAATGGAGGAATGGTTGAGTCTGTTCTAAACCCTTTGTTCCTGTTTTGTTTGAACAATTGTCCTTACTAAACTTAATTGTTTCTGAAAAATGCTCTTGTTACTACT
SEQIDNO:19(NP,B/Lee/40)
MSNMDIDSINTGTIDKKPEELTPGTSGATRPIIKPATLAPPSNKRTRNPSPERTTTSSETDIGRKIQKKQTPTEIKKSVYNMVVKLGEFYNQMMVKAGLNDDMERNLIQNAQAVERILLAATDDKKTEYQKKRNARDVKEGKEEIDHNKTGGTFYKMVRDDKTIYFSPIKITFLKEEVKTMYKTTMGSDGFSGLNHIMIGHSQMNDVCFQRSKALKRVGLDPSLISTFAGSTLPRRSGTTGVAIKGGGTLVAEAIRFIGRAMADRGLLRDIKAKTAYEKILLNLKNKCSAPQQKALVDQVIGSRNPGIADIEDLTLLARSMIVVRPSVASKVVLPISIYAKIPQLGFNIEEYSMVGYEAMALYNMATPVSILRMGDDAKDKSQLFFMSCFGAAYEDLRVLSALTGTEFKPRSALKCKGFHVPAKEQVEGMGAALMSIKLQFWAPMTRSGGNEVSGEGGSGQISCSPVFAVERPIALSKQAVRRMLSMNVEGRDADVKGNLLKMMNDSMAKKTSGNAFIGKKMFQISDKNKVNPIEIPIKQTIPSFFFGRDTAEDYDDLDY
SEQIDNO:20(PA,B/Panama/45/90)
MDTFITRNFQTTIIQKAKNTMAEFSEDPELQPAMLFNICVHLEVCYVISDMNFLDEEGKSYTALEGQGKEQNLRPQYEVIEGMPRTIAWMVQRSLAQEHGIETPKYLADLFDYKTKRFIEVGITKGLADDYFWKKKEKLGNSMELMIFSYNQDYSLSNESSLDEEGKGRVLSRLTELQAELSLKNLWQVLIGEEDVEKGIDFKLGQTISRLRDISVPAGFSNFEGMRSYIDNIDPKGAIERNLARMSPLVSATPKKLKWEDLRPIGPHIYNHELPEVPYNAFLLMSDELGLANMTEGKSKKPKTLAKECLEKYSTLRDQTDPILIMKSEKANENFLWKLWRDCVNTISNEEMSNELQKTNYAKWATGDGLTYQKIMKEVAIDDETMCQEEPKIPNKCRVAAWVQTEMNLLSTLTSKRALDLPEIGPDVAPVEHVGSERRKYFVNEINCCKASTVMMKYVLFHTSLLNESNASMGKYKVIPITNRVVNEKGESFDMLYGLAVKGQSHLRGDTDVVTVVTFEFSGTDPRVDSGKWPKYTVFRIGSLFVSGREKSVYLYCRVNGTNKIQMKWGMEARRCLLQSMQQMEAIVEQESSIQGYDMTKACFKGDRVNSPKTFSIGTQEGKLVKGSFGKALRVIFTKCLMHYVFGNAQLEGFSAESRRLLLLIQALKDRKGPWVFDLEGMYSGIEECISNNPWVIQSAYWFNEWLGFEKEGSKVLESVDEIMNE
SEQIDNO:21(PB1,B/Panama/45/90)
MNINPYFLFIDVPIQAAISTTFPYTGVPPYSHGTGTGHTIDTVIRTHEYSNKGKQYVSDITGCTMVDPTNGPLPEDNEPSAYAQLDCVLEALDRMDEEHPGLFQAASQNAMEALMVTTVDKLTQGRQTFDWTVCRNQPAATALNTTITSFRLNDLNGADKGGLVPFCQDIIDSLDKPEMTFFSVKNIKKKLPAKNRKGFLIKRIPMKVKDRITRVEYIKRALSLNTMTKDAERGKLKRRAIATAGIQIRGFVLVVENLAKNICENLEQSGLPVGGNEKKAKLSNAVAKMLSNCPPGGISMTVTGDNTKWNECLNPRIFLAMTERITRDSPIWFRDFCSIAPVLFSNKIARLGKGFMITSKTKRLKAQIPCPDLFSIPLERYNEETRAKLKKLKPFFNEEGTASLSPGMMMGMFNMLSTVLGVAALGIKNIGNKEYLWDGLQSSDDFALFVNAKDEETCMEGINDFYRTCKLLGINMSKKKSYCNETGMFEFTSMFYRDGFVSNFAMEIPSFGVAGVNESADMAIGMTIIKNNMINNGMGPATAQTAIQLFIADYRYTYKCHRGDSKVEGKRMKIIKELWENTKGRDGLLVADGGPNIYNLRNLHIPEIVLKYNLMDPEYKGRLLHPQNPFVGHLSIEGIKEADITPAHGPVKKMDYDAVSGTHSWRTKRNRSILNTDQRNMILEEQCYAKCCNLFEACFNSASYRKPVGQHSMLEAMAHRLRVDARLDYESGRMSKDDFEKAMAHLGEIGYI
SEQIDNO:22(PB2,B/Panama/45/90)
MTLAKIELLKQLLRDNEAKTVLKQTTVDQYNIIRKFNTSRIEKNPSLRMKWAMCSNFPLALTKGDMANRIPLEYKGIQLKTNAEDIGTKGQMCSIAAVTWWNTYGPIGDTEGFEKVYESFFLRKMRLDNATWGRITFGPVERVRKRVLLNPLTKEMPPDEASNVIMEILFPKEAGIPRESTWIHRELIKEKREKLKGTMITPIVLAYMLERELVARRRFLPVAGATSAEFIEMLHCLQGENWRQIYHPGGNKLTESRSQSMIVACRKIIRRSIVASNPLELAVEIANKTVIDTEPLKSCLTAIDGGDVACDIIRAALGLKIRQRQRFGRLELKRISGRGFKNDEEILIGNGTIQKIGIWDGEEEFHVRCGECRGILKKSKMRMEKLLINSAKKEDMKDLIILCMVFSQDTRMFQGVRGEINFLNRAGQLLSPMYQLQRYFLNRSNDLFDQWGYEESPKASELHGINELMNASDYTLKGVVVTKNVIDDFSSTETEKVSITKNLSLIKRTGEVIMGANDVSELESQAQLMITYDTPKMWEMGTTKELVQNTYQWVLKNLVTLKAQFLLGKEDMFQWDAFEAFESIIPQKMAGQYSGFARAVLKQMRDQEVMKTDQFIKLLPFCFSPPKLRRNGEPYQFLRLVLKGGGENFIEVRKGSPLFSYNPQTEVLTICGRMMSLKGKIEDEERNRSMGNAVLAGFLVSGKYDPDLGDFKTIEELEKLKPGEKANILLYQGKPVKVVKRKRYSALSNDISQGIKRQRMTVESMGWALS
SEQIDNO:23(NP,B/Panama/45/90)
MSNMDIDGINTGTIDKTPEEITSGTSGTTRPIIRPATLAPPSNKRTRNPSPERATTSSEADVGRKTQKKQTPTEIKKSVYNMVVKLGEFYNQMMVKAGLNDDMERNLIQNAHAVERILLAATDDKKTEFQRKKNARDVKEGKEEIDHNKTGGTFYKMVRDDKTIYFSPIRITFLKEEVKTMYKTTMGSDGFSGLNHIMIGHSQMNDVCFQRSKALKRVGLDPSLISTFAGSTLPRRSGATGVAIKGGGTLVAEAIRFIGRAMADRGLLRDIKAKTAYEKILLNLKNKCSAPQQKALVDQVIGSRNPGIADIEDLTLLARSMVVVRPSVASKVVLPISIYAKIPQLGFNVEEYSMVGYEAMALYNMATPVSILRMGDDAKDKSQLFFMSCFGAAYEDLRVLSALTGIEFKPRSALKCKGFHVPAKEQVEGMGAALMSIKLQFWAPMTRSGGNEVGGDGGSGQISCSPVFAVERPIALSKQAVRRMLSMNIEGRDADVKGNLLKMMNDSMAKKTNGNAFIGKKMFQISDKNKTNPVEIPIKQTIPNFFFGRDTAEDYDDLDY
SEQIDNO:24(M1,B/Panama/45/90)
MSLFGDTIAYLLSLTEDGEGKAELAEKLHCWFGGKEFDLDSALEWIKNKRCLTDIQKALIGASICFLKPKDQERKRRFITEPLSGMGTTATKKKGLILAERKMRRCVSFHEAFEIAEGHESSALLYCLMVMYLNPGNYSMQVKLGTLCALCEKQASHSHRAHSRAARSSVPGVRREMQMVSAMNTAKTMNGMGKGEDVQKLAEELQSNIGVLRSLGASQKNGEGIAKDVMEVLKQSSMGNSALVKKYL
SEQIDNO:25(M2,B/Panama/45/90)
MLEPFQILSICSFILSALHFMAWTIGHLNQIKRGVNMKIRIKNPNKETINREVSILRHSYQKEIQAKETMKEVLSDNMEVLSDHIVIEGLSAEEIIKMGETVLEVEELH
SEQIDNO:26(NS1,B/Panama/45/90)
MADNMTTTQIEVGPGATNATINFEAGILECYERLSWQRALDYPGQDRLNKLKRKLESRIKTHNKSEPESKRMSLEERKAIGVKMMKVLLFMNPSAGVEGFEPYCMKNPSNSNCPDCNWADYPPTPGKYLDGIEEEPENVGDSTEIVLRDMNNKDARQKIKEEVNTQKEGKFRLTIKRDIRNVLSLRVLVNGTFIKHPNGYKSLSTLHRLNAYDQSGRLVAKLVATDDLTVEDEEDGHRILNSLFERLNEGHSKPIRAAETAVGVLSQFGQEHRLSPEERDN
SEQIDNO:27(NS2,B/Panama/45/90)
MADNMTTTQIEWRMKKMAIGSSTHSSSVLMKDIQSQFEQLKLRWESYPNLVKSTDYHQKRETIRLVTEELYLLSKRIDDNILFHKTVIANSSIIADMIVSLSLLETLYEMKDVVEVYSRQCL
SEQIDNO:28(HA,B/Panama/45/90)
MKAIIVLLMVVTSNADRICTGITSSNSPHVVKTATQGEVNVTGVIPLTTTPTKSHFANLKGTKTRGKLCPNCLNCTDLDVALGRPMCVGTTPSAKASILHEVRPVTSGCFPIMHDRTKIRQLPNLLRGYENIRLSTQNVINAERAPGGPYRLGTSGSCPNVTSRDGFFATMAWAVPRDNKTATNPLTVEVPYICTKGEDQITVWGFHSDDKTQMKNLYGDSNPQKFTSSANGVTTHYVSQIGGFPNQTEDGGLPQSGRIVVDYMVQKPGKTGTIVYQRGVLLPQKVWCASGRSKVIKGSLPLIGEADCLHEKYGGLNKSKPYYTGEHAKAIGNCPIWVKTPLKLANGTKYRPPAKLLKERGFFGAIAGFLEGGWEGMIAGWHGYTSHGAHGVAVAADLKSTQEAINKITKNLNSLSELEVKNLQRLSGAMDELHNEILELDEKVDDLRADTISSQIELAVLLSNEGIINSEDEHLLALERKLKKMLGPSAVDIGNGCFETKHKCNQTCLDRIAAGTFNAGEFSLPTFDSLNITAASLNDDGLDNHTILLYYSTAASSLAVTLMIAIFIVYMVSRDNVSCSICL
SEQIDNO:29(NA,B/Panama/45/90)
MLPSTIQTLTLFLTSGGVLLSLYVSASLSYLLYSDILLKFSPTEITAPTMPLDCANASNVQAVNRSATKEMTLLLPEPEWTYPRLSCPGSTFQKALLISPHRFGETRGNSAPLTIREPFIACGPKECKHFALTHYAAQPGGYYNGTREDRNKLRHLISVKLGKIPTVENSIFHMAAWSGSACHDGREWTYIGVDGPDSNALIKIKYGEAYTDTYHSYANNILRTQESACNCIGGDCYLMITDGSASGISKCRFLKIREGRIIKEIFPTGRVEHTEECTCGFASNKTIECACRDNSYTAKRPFVKLNVETDTAEIRLMCTETYLDTPRPDDGSITGPCESNGDKGRGGIKGGFVHQRMASKIGRWYSRTMSKTERMGMELYVKYDGDPWTDSEALAPSGVMVSMEEPGWYSFGFEIKDKKCDVPCIGIEMVHDGGKKTWHSAATAIYCLMGSGQLLWDTVTGVDMAL
SEQIDNO:30(PA,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCGGTGCGTTTGATTTGCCATAATGGATACTTTTATTACAAGAAACTTCCAGACTACAATAATACAAAAGGCCAAAAACACAATGGCAGAATTTAGTGAAGATCCTGAATTACAACCAGCAATGCTATTCAACATCTGCGTCCATCTAGAGGTTTGCTATGTAATAAGTGACATGAATTTTCTTGACGAAGAAGGAAAATCATATACAGCATTAGAAGGACAAGGAAAAGAACAAAACTTGAGACCACAATATGAAGTAATTGAGGGAATGCCAAGAACCATAGCATGGATGGTCCAAAGATCCTTAGCTCAAGAGCATGGAATAGAGACTCCAAAGTATCTGGCTGATTTGTTTGATTATAAAACCAAGAGATTTATAGAAGTTGGAATAACAAAAGGATTGGCTGATGATTACTTTTGGAAAAAGAAAGAAAAGCTGGGAAATAGCATGGAACTGATGATATTCAGCTACAATCAAGACTATTCGTTAAGTAATGAATCCTCATTGGATGAGGAAGGGAAAGGGAGAGTGCTAAGCAGACTCACAGAACTTCAGGCTGAATTAAGTCTGAAAAACCTATGGCAAGTTCTCATAGGAGAAGAAGATGTTGAAAAGGGAATTGACTTTAAACTTGGACAAACAATATCTAGACTAAGGGATATATCTGTTCCAGCTGGTTTCTCCAATTTTGAAGGAATGAGGAGCTACATAGACAATATAGATCCTAAAGGAGCAATAGAAAGAAATCTAGCAAGGATGTCTCCCTTAGTATCAGCCACACCTAAAAAGTTGAAATGGGAGGACCTAAGACCAATAGGGCCTCACATTTACAACCATGAGTTACCAGAAGTTCCATATAATGCCTTTCTTCTAATGTCTGATGAATTGGGGCTGGCCAATATGACTGAGGGAAAGTCCAAAAAACCGAAGACATTAGCCAAAGAATGTCTAGAAAAGTACTCAACACTACGGGATCAAACTGACCCAATATTAATAATGAAAAGCGAAAAAGCTAACGAAAATTTCCTATGGAAGCTGTGGAGGGACTGTGTAAATACAATAAGTAATGAGGAAATGAGTAACGAGTTACAGAAAACCAATTATGCCAAGTGGGCCACAGGAGATGGATTAACATACCAGAAAATAATGAAAGAAGTAGCAATAGATGACGAAACAATGTGCCAAGAAGAGCCTAAAATCCCTAACAAATGTAGAGTGGCTGCTTGGGTTCAAACAGAGATGAATTTATTGAGCACTCTGACAAGTAAAAGAGCTCTGGACCTACCAGAAATAGGGCCAGACGTAGCACCCGTGGAGCATGTAGGGAGTGAAAGAAGGAAATACTTTGTTAATGAAATCAACTGCTGTAAGGCCTCTACAGTTATGATGAAGTATGTGCTTTTTCACACTTCATTATTGAATGAAAGCAATGCCAGCATGGGAAAATATAAAGTAATACCAATAACCAATAGAGTAGTAAATGAAAAAGGAGAAAGTTTCGACATGCTTTATGGTCTGGCGGTTAAAGGACAATCTCATCTGAGGGGAGATACTGATGTTGTAACAGTTGTGACTTTCGAATTTAGTGGTACAGATCCCAGAGTGGACTCAGGAAAGTGGCCAAAATATACTGTGTTTAGGATTGGCTCCCTATTTGTGAGTGGGAGGGAAAAATCTGTGTACCTATATTGCCGAGTGAATGGCACAAATAAGATCCAAATGAAATGGGGAATGGAAGCTAGAAGATGTCTGCTTCAATCAATGCAACAAATGGAAGCAATTGTTGAACAAGAATCATCGATACAAGGATATGACATGACCAAAGCTTGTTTCAAGGGAGACAGAGTAAATAGCCCCAAAACTTTTAGTATTGGGACTCAAGAAGGAAAACTAGTAAAAGGATCCTTTGGGAAAGCACTAAGAGTAATATTTACCAAATGTTTGATGCACTATGTATTTGGAAATGCCCAATTGGAGGGGTTTAGTGCCGAGTCTAGGAGACTTCTACTGTTAATTCAAGCACTAAAGGACAGAAAGGGCCCTTGGGTGTTCGACTTAGAGGGAATGTATTCTGGAATAGAAGAATGTATTAGTAACAACCCTTGGGTAATACAGAGTGCATACTGGTTCAATGAATGGTTGGGCTTTGAAAAGGAGGGGAGTAAAGTATTAGAATCAGTAGATGAAATAATGAATGAATGAAAAAACATAGTACTCAATTTGGTACTATTTTGTTCATTATGTATCTAAACATCCAATAAAAAGAATCGAGAATCAAAAATGCACGTGTTTCTACT
SEQIDNO:31(PB1,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCGGAGCCTTTAAGATGAATATAAATCCTTATTTTCTCTTCATAGATGTACCCATACAGGCAGCAATTTCAACAACATTCCCATACACCGGTGTTCCCCCTTACTCCCATGGAACGGGAACAGGCCACACAATAGACACCGTGATCAGAACACATGAGTACTCGAACAAGGGAAAACAGTATGTTTCTGACATCACAGGATGTACAATGGTAGATCCAACAAATGGGCCATTACCCGAAGACAATGAGCCGAGTGCCTATGCACAATTAGATTGCGTTCTGGAGGCTTTGGATAGAATGGATGAAGAACATCCAGGTTTGTTTCAAGCAGCCTCACAGAATGCCATGGAGGCACTAATGGTCACAACTGTAGACAAATTAACCCAGGGGAGACAGACTTTTGATTGGACAGTATGCAGAAACCAGCCTGCTGCAACGGCACTAAACACAACAATAACCTCCTTTAGGTTGAATGATTTGAATGGAGCTGACAAGGGTGGATTGGTACCCTTTTGCCAAGATATCATTGATTCATTGGACAAACCTGAAATGACTTTCTTCTCAGTAAAGAATATAAAGAAAAAATTGCCTGCTAAAAACAGAAAGGGTTTCCTCATAAAGAGAATACCAATGAAAGTAAAAGACAGGATAACCAGAGTGGAATACATCAAAAGAGCATTATCATTAAACACAATGACAAAAGATGCTGAAAGGGGCAAACTAAAAAGAAGAGCGATTGCAACCGCTGGAATACAAATCAGAGGGTTTGTATTAGTAGTTGAAAACTTGGCTAAAAATATCTGTGAAAATCTAGAACAAAGTGGTTTGCCCGTAGGTGGAAATGAAAAGAAGGCCAAACTGTCAAATGCAGTGGCCAAAATGCTCAGTAACTGCCCACCAGGAGGGATCAGCATGACAGTAACAGGAGACAATACTAAATGGAATGAATGCTTAAATCCAAGAATCTTTTTGGCTATGACTGAAAGGATAACAAGAGACAGCCCAATTTGGTTCCGGGATTTTTGTAGTATAGCACCGGTCTTGTTCTCCAATAAAATAGCCAGATTGGGAAAAGGATTTATGATAACAAGCAAAACAAAAAGACTGAAGGCTCAAATACCTTGTCCAGATCTGTTTAGCATACCATTAGAAAGATATAATGAAGAAACAAGGGCAAAATTAAAAAAGCTGAAACCATTCTTCAATGAAGAAGGAACGGCATCTTTGTCGCCTGGGATGATGATGGGAATGTTTAATATGCTATCTACCGTGTTGGGAGTAGCCGCACTAGGTATCAAAAACATTGGAAACAAAGAATATTTATGGGATGGACTGCAATCTTCTGATGATTTTGCTCTGTTTGTTAATGCAAAAGATGAAGAGACATGTATGGAAGGAATAAACGACTTTTACCGAACATGTAAATTATTGGGAATAAACATGAGCAAAAAGAAAAGTTACTGTAATGAAACTGGAATGTTTGAATTTACAAGCATGTTCTATAGAGATGGATTTGTATCTAATTTTGCAATGGAAATTCCTTCATTTGGAGTTGCTGGAGTAAATGAATCAGCAGATATGGCAATAGGAATGACAATAATAAAGAACAATATGATCAACAATGGGATGGGTCCAGCAACAGCACAAACAGCCATACAATTATTCATAGCTGATTATAGGTACACCTACAAATGCCACAGGGGAGATTCCAAAGTGGAAGGAAAAAGAATGAAAATTATAAAGGAGCTATGGGAAAACACTAAAGGAAGAGATGGTCTGTTAGTGGCAGATGGTGGGCCCAACATTTACAATTTGAGAAACTTACATATCCCAGAAATAGTATTGAAGTACAACCTAATGGACCCTGAATACAAAGGGCGGTTACTTCATCCTCAAAATCCATTTGTAGGACATTTATCTATTGAGGGCATCAAAGAAGCAGATATAACCCCAGCACATGGTCCCGTAAAGAAAATGGATTATGATGCAGTATCTGGAACTCATAGTTGGAGAACCAAAAGGAACAGATCTATACTAAATACTGACCAGAGGAACATGATTCTTGAGGAACAATGCTACGCTAAGTGTTGCAACCTTTTTGAGGCCTGTTTTAATAGTGCATCATACAGGAAACCAGTAGGTCAGCACAGCATGCTTGAGGCTATGGCCCACAGATTAAGAGTGGATGCACGACTAGATTATGAATCAGGAAGAATGTCAAAGGATGATTTTGAGAAAGCAATGGCTCACCTTGGTGAGATTGGGTACATATAAGCTCCGAAGATGTCTATGGGGTTATTGGTCATCATTGAATACATGTGATAAACAAATGATTAAAATGAAAAAAGGCTCGTGTTTCTACT
SEQIDNO:32(PB2,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCGGAGCGTTTTCAAGATGACATTGGCTAAAATTGAATTGTTAAAACAACTGTTAAGGGACAATGAAGCCAAAACAGTATTGAAACAAACAACGGTAGACCAATATAACATAATAAGAAAATTCAATACATCAAGAATTGAAAAGAACCCTTCATTGAGGATGAAGTGGGCAATGTGTTCTAATTTTCCCTTGGCTCTGACCAAGGGTGATATGGCAAACAGAATCCCCTTGGAATACAAGGGAATACAACTTAAAACAAATGCTGAAGACATAGGAACTAAAGGCCAAATGTGCTCAATAGCAGCAGTTACCTGGTGGAATACATATGGACCAATAGGAGATACTGAAGGTTTCGAAAAGGTCTACGAAAGCTTTTTTCTCAGAAAGATGAGACTTGACAATGCCACTTGGGGCCGAATAACTTTTGGCCCAGTTGAAAGAGTAAGAAAAAGGGTACTGCTAAACCCTCTCACCAAGGAAATGCCTCCAGATGAAGCAAGTAATGTGATAATGGAAATATTGTTCCCTAAGGAAGCAGGAATACCAAGAGAATCTACTTGGATACATAGGGAACTGATAAAAGAAAAAAGAGAAAAATTGAAAGGAACAATGATAACTCCCATTGTACTGGCATACATGCTTGAGAGAGAATTGGTTGCCAGAAGAAGGTTCCTGCCGGTGGCAGGAGCAACATCAGCTGAGTTCATAGAAATGCTACACTGCTTACAAGGTGAAAATTGGAGACAAATATATCACCCAGGAGGAAATAAACTAACTGAATCTAGGTCTCAATCGATGATTGTAGCTTGTAGAAAGATAATCAGAAGATCAATAGTCGCATCAAACCCATTAGAGCTAGCTGTAGAAATTGCAAACAAGACTGTGATAGATACTGAACCTTTAAAATCATGTCTGACAGCCATAGACGGAGGTGATGTAGCCTGTGACATAATAAGAGCTGCATTAGGACTAAAGATCAGACAAAGACAAAGATTTGGACGACTTGAACTAAAGAGAATATCAGGAAGAGGATTCAAAAATGATGAAGAAATATTAATCGGGAACGGAACAATACAGAAGATTGGAATATGGGACGGAGAAGAGGAGTTCCATGTAAGATGTGGTGAATGCAGGGGAATATTAAAAAAGAGCAAAATGAGAATGGAAAAACTACTAATAAATTCAGCTAAAAAGGAAGACATGAAAGATTTAATAATCTTGTGCATGGTATTTTCTCAAGACACTAGGATGTTCCAAGGAGTGAGAGGAGAAATAAATTTTCTTAATAGAGCAGGCCAACTTTTATCTCCAATGTACCAACTCCAAAGATATTTTTTGAATAGAAGCAACGATCTCTTTGATCAATGGGGGTATGAGGAATCACCCAAAGCAAGTGAGCTACATGGAATAAATGAATTAATGAATGCATCTGACTACACTTTGAAAGGGGTTGTAGTAACAAAAAATGTAATTGATGATTTTAGTTCTACTGAAACAGAAAAAGTATCTATAACAAAAAATCTTAGTTTAATAAAAAGGACTGGGGAAGTCATAATGGGGGCTAATGACGTAAGTGAATTAGAATCACAAGCTCAGCTAATGATAACATATGATACACCTAAGATGTGGGAGATGGGAACAACCAAAGAACTGGTGCAAAACACCTACCAATGGGTGCTGAAAAATTTGGTAACACTGAAGGCTCAGTTTCTTCTAGGAAAAGAAGACATGTTCCAATGGGATGCATTTGAAGCATTTGAAAGCATAATCCCCCAGAAGATGGCTGGCCAGTACAGTGGATTTGCAAGAGCAGTGCTCAAACAAATGAGAGACCAAGAGGTTATGAAAACTGACCAGTTCATAAAGTTGTTGCCCTTTTGTTTCTCACCACCAAAATTAAGGAGAAATGGGGAGCCTTATCAGTTCTTGAGGCTTGTATTGAAGGGAGGAGGAGAAAATTTCATCGAAGTAAGGAAAGGGTCCCCTCTATTCTCTTACAATCCACAAACAGAAGTCCTAACTATATGCGGCAGAATGATGTCATTAAAAGGGAAAATTGAAGATGAAGAAAGGAATAGATCAATGGGGAATGCAGTATTAGCGGGCTTTCTCGTTAGTGGCAAGTATGACCCAGATCTTGGAGATTTCAAAACTATTGAAGAACTTGAAAAGCTGAAACCGGGGGAGAAAGCAAACATCTTACTTTATCAAGGAAAGCCCGTTAAAGTAGTTAAAAGGAAAAGATATAGTGCTTTATCCAATGACATTTCACAAGGAATTAAGAGACAAAGAATGACAGTTGAGTCCATGGGGTGGGCCTTGAGCTAATATAAATTTATCCATTAATTCAATAAACACAATTGAGTGAAAAATGCTCGTGTTTCTACT
SEQIDNO:33(NP,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCACAGCATTTTCTTATTAACTTCAAGTACCAACAAAAGAACTGAAAATCAAAATGTCCAACATGGATATTGACGGTATCAACACTGGGACAATTGACAAAACACCGGAAGAAATAACTTCTGGAACCAGTGGGACAACCAGACCAATCATCAGACCAGCAACCCTTGCCCCACCAAGCAACAAACGAACCCGGAACCCATCCCCGGAAAGAGCAACCACAAGCAGTGAAGCTGATGTCGGAAGGAAAACCCAAAAGAAACAGACCCCGACAGAGATAAAGAAGAGCGTCTACAATATGGTAGTGAAACTGGGTGAATTCTATAACCAGATGATGGTCAAAGCTGGACTCAACGATGACATGGAGAGAAACCTAATCCAAAATGCGCATGCTGTGGAAAGAATTCTATTGGCTGCCACTGATGACAAGAAAACTGAATTCCAGAGGAAAAAGAATGCCAGAGATGTCAAAGAAGGAAAAGAAGAAATAGACCACAACAAAACAGGAGGCACCTTTTACAAGATGGTAAGAGATGATAAAACCATCTACTTCAGCCCTATAAGAATTACCTTTTTAAAAGAAGAGGTGAAAACAATGTACAAAACCACCATGGGGAGTGATGGCTTCAGTGGACTAAATCACATAATGATTGGGCATTCACAGATGAATGATGTCTGTTTCCAAAGATCAAAGGCCCTAAAAAGAGTTGGACTTGACCCTTCATTAATCAGTACCTTTGCAGGAAGCACACTCCCCAGAAGATCAGGTGCAACTGGTGTTGCAATCAAAGGAGGTGGAACTTTAGTGGCTGAAGCCATTCGATTTATAGGAAGAGCAATGGCAGACAGAGGGCTATTGAGAGACATCAAAGCCAAGACTGCCTATGAAAAGATTCTTCTGAATCTAAAAAACAAATGCTCTGCGCCCCAACAAAAGGCTCTAGTTGATCAAGTGATCGGAAGTAGAAATCCAGGGATTGCAGACATTGAAGACCTAACCCTGCTTGCTCGTAGTATGGTCGTTGTTAGGCCCTCTGTGGCGAGCAAAGTAGTGCTTCCCATAAGCATTTATGCTAAAATACCTCAACTAGGGTTCAATGTTGAAGAATACTCTATGGTTGGGTATGAAGCCATGGCTCTCTACAATATGGCAACACCTGTTTCCATATTAAGAATGGGAGATGATGCAAAAGATAAATCGCAATTATTCTTCATGTCTTGCTTCGGAGCTGCCTATGAAGACCTGAGAGTTTTGTCTGCATTAACAGGCATAGAATTCAAGCCTAGATCAGCATTAAAATGCAAGGGTTTCCATGTTCCAGCAAAGGAACAGGTGGAAGGAATGGGGGCAGCTCTGATGTCCATCAAGCTCCAGTTTTGGGCTCCAATGACCAGATCTGGAGGGAACGAAGTAGGTGGAGACGGAGGGTCTGGCCAAATAAGTTGCAGCCCAGTGTTTGCAGTAGAAAGACCTATTGCTCTAAGCAAGCAAGCTGTAAGAAGAATGCTTTCAATGAATATTGAGGGACGTGATGCAGATGTCAAAGGAAATCTACTCAAGATGATGAATGACTCAATGGCTAAGAAAACCAATGGAAATGCTTTCATTGGGAAGAAAATGTTTCAAATATCAGACAAAAACAAAACCAATCCCGTTGAAATTCCAATTAAGCAGACCATCCCCAATTTCTTCTTTGGGAGGGACACAGCAGAGGATTATGATGACCTCGATTATTAAAGCAACAAAATAGACACTATGACTGTGATTGTTTCAATACGTTTGGAATGTGGGTGTTTACTCTTATTGAAATAAATATAAAAAATGCTGTTGTTTCTACT
SEQIDNO:34(M,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCACGCACTTTCTTAAAATGTCGCTGTTTGGAGACACAATTGCCTACCTGCTTTCATTGACAGAAGATGGAGAAGGCAAAGCAGAACTAGCAGAAAAATTACACTGTTGGTTCGGTGGGAAAGAATTTGACCTAGACTCTGCCTTGGAATGGATAAAAAACAAAAGATGCTTAACTGATATACAGAAAGCACTAATTGGTGCCTCTATCTGCTTTTTAAAACCAAAAGACCAAGAAAGAAAAAGAAGATTCATCACAGAGCCCCTATCAGGAATGGGAACAACAGCAACAAAAAAGAAGGGCCTGATTCTAGCTGAGAGAAAAATGAGAAGATGTGTGAGTTTTCATGAAGCATTTGAAATAGCAGAAGGCCATGAAAGCTCAGCGCTACTATATTGTCTCATGGTCATGTACCTGAACCCTGGAAATTATTCAATGCAAGTAAAACTAGGAACGCTCTGTGCTTTGTGCGAGAAACAAGCATCACATTCACACAGGGCTCATAGCAGAGCAGCAAGATCTTCAGTGCCTGGAGTGAGGCGAGAAATGCAGATGGTCTCAGCTATGAACACAGCAAAAACAATGAATGGAATGGGAAAGGGAGAAGACGTCCAAAAACTGGCAGAAGAGCTGCAAAGCAACATTGGAGTATTGAGATCTCTTGGGGCAAGTCAAAAGAATGGGGAAGGAATTGCAAAGGATGTGATGGAAGTGCTAAAGCAGAGCTCTATGGGAAATTCAGCTCTTGTGAAGAAATACCTATAATGCTCGAACCATTTCAGATTCTTTCAATTTGTTCTTTCATCTTATCAGCTCTCCATTTCATGGCTTGGACAATAGGGCATTTGAATCAAATAAAAAGAGGAGTAAACATGAAAATACGAATAAAAAATCCAAATAAAGAGACAATAAACAGAGAGGTATCAATTTTGAGACACAGTTACCAAAAAGAAATCCAGGCCAAAGAAACAATGAAGGAAGTACTCTCTGACAACATGGAGGTATTGAGTGACCACATAGTAATTGAGGGGCTTTCTGCTGAAGAGATAATAAAAATGGGTGAAACAGTTTTGGAGGTAGAAGAATTGCATTAAATTCAATTTTTACTGTATTTCTTGCTATGCATTTAAGCAAATTGTAATCAATGTCAGCAAATAAACTGGAAAAAGTGCGTTGTTTCTACT
SEQIDNO:35(NS,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCAGAGGATTTGTTTAGTCACTGGCAAACGAAAAAATGGCGGACAACATGACCACAACACAAATTGAGGTGGGTCCGGGAGCAACCAATGCCACCATAAACTTTGAAGCAGGAATTTTGGAGTGCTATGAAAGGCTTTCATGGCAAAGAGCCCTTGACTACCCTGGTCAAGACCGCCTAAACAAACTAAAGAGAAAATTGGAATCAAGAATAAAGACTCACAACAAAAGTGAGCCAGAAAGTAAAAGGATGTCTCTTGAAGAGAGAAAAGCTATTGGGGTAAAAATGATGAAAGTGCTCCTATTTATGAACCCATCTGCTGGAGTTGAAGGGTTTGAGCCATATTGTATGAAAAATCCCTCCAATAGCAACTGTCCAGACTGCAATTGGGCTGATTACCCTCCAACACCAGGAAAGTACCTTGATGGCATAGAAGAAGAACCGGAGAATGTTGGTGACTCAACTGAAATAGTATTAAGGGACATGAACAACAAAGATGCAAGGCAAAAGATAAAAGAGGAAGTAAACACTCAGAAAGAAGGGAAATTCCGTTTGACAATAAAAAGGGATATACGTAATGTGTTGTCCTTGAGAGTGTTGGTAAACGGAACATTCATCAAGCACCCTAATGGATACAAGTCCTTATCAACTCTGCATAGATTGAATGCATATGACCAGAGTGGAAGACTTGTTGCTAAACTTGTTGCTACTGATGATCTTACAGTGGAGGATGAAGAAGATGGCCATCGGATCCTCAACTCACTCTTCGAGCGTCTTAATGAAGGACATTCAAAGCCAATTCGAGCAGCTGAAACTGCGGTGGGAGTCTTATCCCAATTTGGTCAAGAGCACCGATTATCACCAGAAGAGAGAGACAATTAGACTGGTTACGGAAGAACTTTATCTTTTAAGTAAAAGAATTGATGATAACATATTGTTCCACAAAACAGTAATAGCCAACAGCTCCATAATAGCTGACATGATTGTATCATTATCATTATTGGAAACATTGTATGAAATGAAGGATGTGGTTGAAGTGTACAGCAGGCAGTGCTTGTGAATTTAAAATAAAAATCCTCTTGTTACTACT
SEQIDNO:36(NA,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCAGAGCATCTTCTCAAAACTGAGGCAAATAGGCCAAAAATGAACAATGCTACCTTCAACTATACAAACGTTAACCCTATTTCTCACATCAGGGGGAGTGTTATTATCACTATATGTGTCAGCTTCACTATCATACTTACTGTATTCGGATATATTGCTAAAATTTTCACCAACAGAAATAACTGCACCAACAATGCCATTGGATTGTGCAAACGCATCAAATGTTCAGGCTGTGAACCGTTCTGCAACAAAAGAGATGACACTTCTTCTCCCAGAACCGGAGTGGACATACCCTCGTTTATCTTGCCCGGGCTCAACCTTTCAGAAAGCACTCCTAATTAGCCCTCATAGATTCGGAGAAACCAGAGGAAACTCAGCTCCCTTGACAATAAGGGAACCTTTTATTGCTTGTGGACCAAAGGAATGCAAACACTTTGCTCTAACCCATTATGCAGCTCAACCAGGGGGATACTACAATGGAACAAGAGAGGACAGAAACAAGCTGAGGCATCTGATTTCAGTCAAATTGGGCAAAATACCAACAGTAGAAAACTCCATTTTCCACATGGCAGCTTGGAGCGGGTCCGCATGCCATGATGGTAGAGAATGGACATATATCGGAGTTGATGGCCCTGACAGTAATGCATTGATCAAAATAAAATATGGAGAAGCATATACTGACACATACCATTCCTATGCAAACAACATCCTAAGAACACAAGAAAGTGCCTGCAATTGCATTGGGGGAGATTGTTATCTTATGATAACTGATGGCTCAGCTTCAGGAATTAGTAAATGCAGATTTCTTAAGATTCGAGAGGGTCGAATAATAAAAGAAATATTTCCAACAGGAAGAGTAGAACATACTGAAGAATGCACATGCGGATTTGCCAGCAACAAAACCATAGAATGTGCCTGTAGAGATAACAGTTACACAGCAAAAAGACCCTTTGTCAAATTAAATGTGGAGACTGATACAGCTGAAATAAGATTGATGTGCACAGAGACTTATTTGGACACCCCCAGACCAGATGATGGAAGCATAACAGGGCCTTGCGAATCTAATGGGGACAAAGGGCGTGGAGGCATCAAGGGAGGATTTGTTCATCAAAGAATGGCATCCAAGATTGGAAGATGGTACTCTCGAACGATGTCTAAAACTGAAAGAATGGGGATGGAACTGTATGTCAAGTATGATGGAGACCCATGGACTGACAGTGAAGCCCTTGCTCCTAGTGGAGTAATGGTTTCAATGGAAGAACCTGGTTGGTATTCTTTTGGCTTCGAAATAAAAGATAAGAAATGTGATGTCCCCTGTATTGGGATAGAGATGGTACACGATGGTGGAAAAAAGACTTGGCACTCAGCAGCAACAGCCATTTACTGTTTAATGGGCTCAGGACAATTGCTATGGGACACTGTCACAGGTGTTGATATGGCTCTGTAATGGAGGAATGGTTGAGTCTGTTCTAAACCCTTTGTTCCTATTTTGTTTGAATAATTGTCCTTACTGAACTTAATTGTTTCTGAAAAATGCTCTTGTTACTACT
SEQIDNO:37(HA,B/Panama/45/90)
AGCAGAAGCAGAGCATTTTCTAATATCCACAAAATGAAGGCAATAATTGTACTACTCATGGTAGTAACATCCAACGCAGATCGAATCTGCACTGGGATAACATCTTCAAACTCACCTCATGTGGTCAAAACAGCTACTCAAGGGGAAGTCAATGTGACTGGTGTGATACCACTGACAACAACACCAACAAAATCTCATTTTGCAAATCTAAAAGGAACAAAGACCAGAGGGAAACTATGCCCAAACTGTCTCAACTGCACAGATCTGGATGTGGCCTTGGGCAGACCAATGTGTGTGGGGACCACACCTTCGGCAAAAGCTTCAATACTCCACGAAGTCAGACCTGTTACATCCGGGTGCTTTCCTATAATGCACGACAGAACAAAAATCAGACAGCTACCCAATCTTCTCAGAGGATATGAAAATATCAGATTATCAACCCAAAACGTTATCAACGCAGAAAGAGCACCAGGAGGACCCTACAGACTTGGAACCTCAGGATCTTGCCCTAACGTTACCAGTAGAGACGGATTCTTCGCAACAATGGCTTGGGCTGTCCCAAGGGACAACAAAACAGCAACGAATCCACTAACAGTAGAAGTACCATACATTTGTACAAAAGGAGAAGACCAAATTACTGTTTGGGGGTTCCATTCTGATGACAAAACCCAAATGAAAAACCTCTATGGAGACTCAAATCCTCAAAAGTTCACCTCATCTGCCAATGGAGTAACCACACATTATGTTTCTCAGATTGGTGGCTTCCCAAATCAAACAGAAGACGGAGGGCTACCACAAAGCGGCAGAATTGTTGTTGATTACATGGTGCAAAAACCTGGGAAAACAGGAACAATTGTCTATCAAAGAGGTGTTTTGTTGCCTCAAAAGGTGTGGTGCGCAAGTGGCAGGAGCAAGGTAATAAAAGGGTCCTTGCCTTTAATTGGTGAAGCAGATTGCCTTCACGAAAAATACGGTGGATTAAACAAAAGCAAGCCTTACTACACAGGAGAACATGCAAAAGCCATAGGAAATTGCCCAATATGGGTGAAAACACCTTTGAAGCTTGCCAATGGAACCAAATATAGACCTCCTGCAAAACTATTAAAGGAAAGGGGTTTCTTCGGAGCTATTGCTGGTTTCTTAGAAGGAGGATGGGAAGGAATGATTGCAGGTTGGCACGGATACACATCTCATGGAGCACATGGAGTGGCAGTGGCAGCAGACCTTAAGAGTACGCAAGAAGCCATAAACAAGATAACAAAAAATCTCAATTCTTTGAGTGAGCTAGAAGTAAAGAATCTTCAAAGACTAAGTGGTGCCATGGATGAACTCCACAACGAAATACTCGAGCTGGATGAGAAAGTGGATGATCTCAGAGCTGACACAATAAGCTCGCAAATAGAGCTTGCAGTCTTGCTTTCCAACGAAGGAATAATAAACAGTGAAGATGAGCATCTATTGGCACTTGAGAGAAAACTAAAGAAAATGCTGGGTCCCTCTGCTGTAGACATAGGGAATGGATGCTTCGAAACCAAACACAAGTGCAACCAGACCTGCTTAGACAGAATAGCTGCTGGCACCTTTAATGCAGGAGAATTTTCTCTTCCCACTTTTGATTCACTGAATATTACTGCTGCATCTTTAAATGATGATGGATTGGATAATCATACTATACTGCTCTACTACTCAACTGCTGCTTCTAGTTTGGCTGTAACATTGATGATAGCTATTTTTATTGTTTATATGGTCTCCAGAGACAATGTTTCTTGCTCCATCTGTCTATAAGGAAAATTAAGCCCTGTATTTTCCTTTGTTGTAGTGCTTGTTTGCTTGTTACCATTACAAAGAAACGTTATTGAAAAATGCTCTTGTTACTACT
SEQIDNO:38(NP,B/AnnArbor/1/66)
AGCAGAAGCACAGCATTTTCTTGTGAACTTCAAGTACCAACAAAAACTGAAAATCAAAATGTCCAACATGGATATTGACGGCATCAACACTGGAACAATTGACAAAACACCAGAAGAAATAACTTCCGGAACCAGTGGGGCAACCAGACCAATCATCAAGCCAGCAACCCTTGCCCCACCAAGCAATAAACGAACCCGAAACCCATCCCCAGAAAGGGCAACCACAAGCAGCGAAGCGATTGTCGGAAGGAGAACCCAAAAGAAACAAACCCCGACAGAGATAAAGAAGAGCGTCTACAATATGGTAGTGAAACTGGGTGAATTCTACAACCAGATGATGGTCAAAGCTGGACTCAACGATGACATGGAGAGAAACCTAATCCAAAATGCACATGCTGTGGAAAGAATTCTATTGGCTGCTACTGATGACAAGAAAACTGAATACCAAAAGAAAAAGAATGCCAGAGATGTCAAAGAAGGGAAAGAAGAAATAGACCACAACAAAACAGGAGGCACCTTTTATAAGATGGTAAGAGATGATAAAACCATCTACTTCAGCCCTATAAGAATTACCTTTTTAAAAGAAGAGGTGAAAACAATGTACAAGACCACCATGGGGAGTGATGGTTTCAGTGGACTAAATCACATCATGATTGGGCATTCACAGATGAACGATGTCTGTTTCCAAAGATCAAAGGCACTAAAAAGAGTTGGACTTGACCCTTCATTAATCAGTACTTTTGCAGGAAGCACACTCCCCAGAAGATCAGGTGCAACTGGTGTTGCGATCAAAGGAGGTGGAACTTTAGTGGCAGAAGCCATTCGATTTATAGGAAGAGCAATGGCAGACAGAGGGCTATTGAGAGACATCAGAGCCAAGACGGCCTATGAAAAGATTCTTCTGAATCTGAAAAACAAGTGCTCTGCGCCCCAACAAAAGGCTCTAGTTGATCAAGTGATCGGAAGTAGAAACCCAGGGATTGCAGACATAGAAGACCTAACCCTGCTTGCCCGAAGCATGGTCGTTGTCAGGCCCTCTGTAGCGAGCAAAGTGGTGCTTCCCATAAGCATTAATGCTAAAATACCTCAACTAGGGTTCAATGTTGAAGAATACTCTATGGTTGGGTATGAAGCCATGGCTCTTTATAATATGGCAACACCTGTTTCCATATTAAGAATGGGAGACGATGCAAAAGATAAATCACAATTATTCTTCATGTCTTGCTTTGGAGCTGCCTATGAAGACCAAAGAGTTTTGTCTGCACTAACCGGCACAGAATTCAAGCCTAGGTCAGCATTAAAGTGCAAGGGTTTCCACGTTCCAGCAAAGGAGCAAGTGGAAGGAATGGGGGCAGCTCTGATGTCCATCAAGCTCCAGTTTTGGGCCCCAATGACCAGATCTGGGGGGAACGAAGTAGGTGGAGACGGAGGGTCTGGTCAAATAAGTTGCAGCCCCGTGTTTGCAGTAGAGAGACCTATTGCTCTAAGCAAGCAAGCTGTAAGAAGAATGCTGTCAATGAATATTGAGGGACGTGATGCAGATGTCAAAGGAAATCTACTCAAGATGATGAATGATTCAATGGCTAAGAAAACCAATGGAAATGCTTTCATTGGGAAGAAAATGTTTCAAATATCAGACAAAAACAAAATCAATCCCGTTGATATTCCAATTAAGCAGACCATCCCCAATTTCTTCTTTGGGAGGGACACAGCAGAGGATTATGATGACCTCGATTATTAAAGCAACAAAATAGACACTATGGCTGTGACTGTTTCAGTACGTTTGGAATGTGGGTGTTTACTCTTATTGAAATAAATGTAAAAAATGCTGTTGTTTCTACT
SEQIDNO:39(NP,B/AnnArbor/1/66–替代序列)
AGCAGAAGCACAGCATTTTCTTGTGAACTTCAAGTACCAACAAAAACTGAAAATCAAAATGTCCAACATGGATATTGACGGCATCAACACTGGAACAATTGACAAAACACCAGAAGAAATAACTTCCGGAACCAGTGGGGCAACCAGACCAATCATCAAGCCAGCAACCCTTGCCCCACCAAGCAATAAACGAACCCGAAACCCATCCCCAGAAAGGGCAACCACAAGCAGCGAAGCGATTGTCGGAAGGAGAACCCAAAAGAAACAAACCCCGACAGAGATAAAGAAGAGCGTCTACAATATGGTAGTGAAACTGGGTGAATTCTACAACCAGATGATGGTCAAAGCTGGACTCAACGATGACATGGAGAGAAACCTAATCCAAAATGCACATGCTGTGGAAAGAATTCTATTGGCTGCTACTGATGACAAGAAAACTGAATACCAAAAGAAAAAGAATGCCAGAGATGTCAAAGAAGGGAAAGAAGAAATAGACCACAACAAAACAGGAGGCACCTTTTATAAGATGGTAAGAGATGATAAAACCATCTACTTCAGCCCTATAAGAATTACCTTTTTAAAAGAAGAGGTGAAAACAATGTACAAGACCACCATGGGGAGTGATGGTTTCAGTGGACTAAATCACATCATGATTGGGCATTCACAGATGAACGATGTCTGTTTCCAAAGATCAAAGGCACTAAAAAGAGTTGGACTTGACCCTTCATTAATCAGTACTTTTGCAGGAAGCACACTCCCCAGAAGATCAGGTGCAACTGGTGTTGCGATCAAAGGAGGTGGAACTTTAGTGGCAGAAGCCATTCGATTTATAGGAAGAGCAATGGCAGACAGAGGGCTATTGAGAGACATCAGAGCCAAGACGGCCTATGAAAAGATTCTTCTGAATCTGAAAAACAAGTGCTCTGCGCCCCAACAAAAGGCTCTAGTTGATCAAGTGATCGGAAGTAGAAACCCAGGGATTGCAGACATAGAAGACCTAACCCTGCTTGCCCGAAGCATGGTCGTTGTCAGGCCCTCTGTAGCGAGCAAAGTGGTGCTTCCCATAAGCATTAATGCTAAAATACCTCAACTAGGGTTCAATGTTGAAGAATACTCTATGGTTGGGTATGAAGCCATGGCTCTTTATAATATGGCAACACCTGTTTCCATATTAAGAATGGGAGACGATGCAAAAGATAAATCACAATTATTCTTCATGTCTTGCTTTGGAGCTGCCTATGAAGACCAAAGAGTTTTGTCTGCACTAACCGGCACAGAATTCAAGCCTAGGTCAGCATTAAAGTGCAAGGGTTTCCACGTTCCAGCAAAGGAGCAAGTGGAAGGAATGGGGGCAGCTCTGATGTCCATCAAGCTCCAGTTTTGGGCCCCAATGACCAGATCTGGGGGGAACGAAGTAGGTGGAGACGGAGGGTCTGGTCAAATAAGTTGCAGCCCCGTGTTTGCAGTAGAGAGACCTATTGCTCTAAGCAAGCAAGCTGTAAGAAGAATGCTGTCAATGAATATTGAGGGACGTGATGCAGATGTCAAAGGAAATCTACTCAAGATGATGAATGATTCAATGGCTAAGAAAACCAATGGAAATGCTTTCATTGGGAAGAAAATGTTTCAAATATCAGACAAAAACAAAATCAATCCCGTTGATATTCCAATTAAGCAGACCATCCCCAATTTCTTCTTTGGGAGGGACACAGCAGAGGATTATGATGACCTCGATTATTAAAGCAACAAAATAGACACTATGGCTGTGACTGTTTCAGTACGTTTGGAATGTGGGTGTTTACTCTTATTGAAATAAATGTAAAAAATGCTGTTGTTTCTACT
SEQIDNO:40(PB2,A/NewCaledonia/20/1999)
ATGGAAAGAATAAAAGAGCTAAGGAATCTGATGTCACAATCTCGCACTCGCGAGATACTTACAAAAACTACTGTAGACCACATGGCCATAATCAAGAAATACACATCAGGAAGACAGGAGAAAAACCCATCACTTAGAATGAAATGGATGATGGCAATGAAATACCCAATTACAGCAGATAAAAGGATAACGGAAATGATTCCTGAAAGAAATGAGCAAGGACAGACATTATGGAGTAAAGTGAATGATGCCGGATCAGACCGAGTGATGATATCACCCCTGGCTGTGACATGGTGGAACAGAAATGGACCAGTGGCAAGTACTATTCACTATCCAAAAATCTACAAAACTTACTTTGAAAAGGTTGAAAGGTTAAAACATGGAACCTTTGGCCCTGTACACTTTAGAAACCAAGTCAAAATACGCCGAAGAGTCGACATAAATCCTGGTCATGCAGACCTCAGCGCCAAGGAGGCACAGGATGTAATTATGGAAGTTGTTTTCCCTAATGAAGTGGGAGCCAGAATACTAACATCAGAATCGCAATTAACGATAACCAAGGAGAAAAAAGAAGAACTCCAGAATTGCAAAATTTCCCCTTTGATGGTTGCATACATGTTAGAGAGGGAACTTGTCCGCAAAACGAGATTTCTCCCGGTTGCTGGTGGAACAAGCAGTGTGTACATTGAAGTTTTGCATTTAACACAGGGGACATGCTGGGAGCAGATGTACACTCCAGGTGGGGAGGTGAGGAATGATGATGTTGATCAAAGCCTAATTATTGCTGCTAGGAACATAGTGAGAAGAGCTGCAGTATCAGCAGATCCACTAGCATCTTTATTAGAAATGTGCCATAGCACACAGATTGGTGGGACAAGGATGGTGGATATTCTCAGGCAAAATCCAACAGAAGAACAAGCTGTGGATATATGCAAAGCAGCAATGGGGCTGAGAATCAGTTCATCCTTCAGTTTTGGCGGATTCACATTTAAGAGAACAAGTGGATCATCAGTCAAAAGGGAGGAAGAAGTGCTCACGGGCAATCTGCAAACATTGAAGCTAACTGTGCATGAGGGATATGAAGAGTTCACAATGGTTGGGAAAAGGGCAACAGCTATACTCAGAAAAGCAACCAGGAGATTGATTCAACTAATAGTGAGTGGAAGAGACGAACAGTCAATAGTCGAAGCAATAGTTGTAGCAATGGTATTCTCACAAGAAGATTGCATGGTAAAAGCAGTTAGAGGTGATCTGAATTTCGTTAATAGAGCGAATCAGCGGTTGAATCCCATGCATCAACTTTTGAGACATTTTCAGAAGGATGCTAAAGTACTTTTCTTAAATTGGGGAATTGAACCTATCGACAATGTGATGGGAATGATTGGGATATTACCTGATATGACTCCAAGTACCGAGATGTCAATGAGAGGAGTGAGAGTCAGCAAAATGGGTGTAGATGAATACTCCAATGCTGAAAGGGTAGTGGTGAGCATTGACCGTTTTTTGAGAGTCCGGGACCAAAGAGGAAATGTACTACTGTCTCCAGAGGAAGTCAGTGAAACACAGGGAACAGAGAAACTGACAATAACTTACTCTTCATCAATGATGTGGGAGATTAATGGCCCTGAGTCAGTGTTGATCAATACCTATCAGTGGATCATCAGAAACTGGGAGACTGTTAAAATTCAGTGGTCTCAGAACCCTACAATGCTATACAATAAAATGGAATTCGAGCCATTTCAGTCTCTAGTCCCTAAGGCCATTAGAGGCCAATACAGTGGGTTTGTTAGAACTCTATTTCAACAAATGAGGGATGTGCTTGGGACCTTTGACACAACTCAGATAATAAAACTTCTTCCCTTTGCAGCCGCTCCACCAAAGCAAAGTAGAATGCAATTCTCATCATTGACTGTGAATGTGAGGGGATCAGGAATGAGAATACTTGTAAGGGGTAATTCTCCAGTATTCAACTACAACAAGACCACTAAGAGACTCACAGTCCTCGGAAAGGATGCTGGCACTTTAACTGAAGACCCAGATGAAGGCACAGCTGGAGTGGAATCTGCTGTTCTAAGGGGATTCCTCATTCTAGGCAAAGAAGATAGAAGATATGGGCCAGCATTAAGCATCAATGAATTGAGCAACCTTGCGAAAGGGGAAAAAGCTAATGTGCTAATTGGGCAAGGGGACGTAGTGTTGGTAATGAAACGAAAACGGGACTCTAGCATACTTACTGACAGCCAGACAGCGACCAAAAGAATTCGGATGGCCATCAAT
SEQIDNO:41(编码与SEQIDNO:40相同的氨基酸序列)
ATGGAACGCATTAAAGAACTGCGCAACCTGATGAGCCAGAGCCGCACCCGCGAAATTCTGACCAAAACCACCGTGGATCATATGGCGATTATTAAAAAATATACCAGCGGCCGCCAGGAAAAAAACCCGAGCCTGCGCATGAAATGGATGATGGCGATGAAATATCCGATTACCGCGGATAAACGCATTACCGAAATGATTCCGGAACGCAACGAACAGGGCCAGACCCTGTGGAGCAAAGTGAACGATGCGGGCAGCGATCGCGTGATGATTAGCCCGCTGGCGGTGACCTGGTGGAACCGCAACGGCCCGGTGGCGAGCACCATTCATTATCCGAAAATTTATAAAACCTATTTTGAAAAAGTGGAACGCCTGAAACATGGCACCTTTGGCCCGGTGCATTTTCGCAACCAGGTGAAAATTCGCCGCCGCGTGGATATTAACCCGGGCCATGCGGATCTGAGCGCGAAAGAAGCGCAGGATGTGATTATGGAAGTGGTGTTTCCGAACGAAGTGGGCGCGCGCATTCTGACCAGCGAAAGCCAGCTGACCATTACCAAAGAAAAAAAAGAAGAACTGCAGAACTGCAAAATTAGCCCGCTGATGGTGGCGTATATGCTGGAACGCGAACTGGTGCGCAAAACCCGCTTTCTGCCGGTGGCGGGCGGCACCAGCAGCGTGTATATTGAAGTGCTGCATCTGACCCAGGGCACCTGCTGGGAACAGATGTATACCCCGGGCGGCGAAGTGCGCAACGATGATGTGGATCAGAGCCTGATTATTGCGGCGCGCAACATTGTGCGCCGCGCGGCGGTGAGCGCGGATCCGCTGGCGAGCCTGCTGGAAATGTGCCATAGCACCCAGATTGGCGGCACCCGCATGGTGGATATTCTGCGCCAGAACCCGACCGAAGAACAGGCGGTGGATATTTGCAAAGCGGCGATGGGCCTGCGCATTAGCAGCAGCTTTAGCTTTGGCGGCTTTACCTTTAAACGCACCAGCGGCAGCAGCGTGAAACGCGAAGAAGAAGTGCTGACCGGCAACCTGCAGACCCTGAAACTGACCGTGCATGAAGGCTATGAAGAATTTACCATGGTGGGCAAACGCGCGACCGCGATTCTGCGCAAAGCGACCCGCCGCCTGATTCAGCTGATTGTGAGCGGCCGCGATGAACAGAGCATTGTGGAAGCGATTGTGGTGGCGATGGTGTTTAGCCAGGAAGATTGCATGGTGAAAGCGGTGCGCGGCGATCTGAACTTTGTGAACCGCGCGAACCAGCGCCTGAACCCGATGCATCAGCTGCTGCGCCATTTTCAGAAAGATGCGAAAGTGCTGTTTCTGAACTGGGGCATTGAACCGATTGATAACGTGATGGGCATGATTGGCATTCTGCCGGATATGACCCCGAGCACCGAAATGAGCATGCGCGGCGTGCGCGTGAGCAAAATGGGCGTGGATGAATATAGCAACGCGGAACGCGTGGTGGTGAGCATTGATCGCTTTCTGCGCGTGCGCGATCAGCGCGGCAACGTGCTGCTGAGCCCGGAAGAAGTGAGCGAAACCCAGGGCACCGAAAAACTGACCATTACCTATAGCAGCAGCATGATGTGGGAAATTAACGGCCCGGAAAGCGTGCTGATTAACACCTATCAGTGGATTATTCGCAACTGGGAAACCGTGAAAATTCAGTGGAGCCAGAACCCGACCATGCTGTATAACAAAATGGAATTTGAACCGTTTCAGAGCCTGGTGCCGAAAGCGATTCGCGGCCAGTATAGCGGCTTTGTGCGCACCCTGTTTCAGCAGATGCGCGATGTGCTGGGCACCTTTGATACCACCCAGATTATTAAACTGCTGCCGTTTGCGGCGGCGCCGCCGAAACAGAGCCGCATGCAGTTTAGCAGCCTGACCGTGAACGTGCGCGGCAGCGGCATGCGCATTCTGGTGCGCGGCAACAGCCCGGTGTTTAACTATAACAAAACCACCAAACGCCTGACCGTGCTGGGCAAAGATGCGGGCACCCTGACCGAAGATCCGGATGAAGGCACCGCGGGCGTGGAAAGCGCGGTGCTGCGCGGCTTTCTGATTCTGGGCAAAGAAGATCGCCGCTATGGCCCGGCGCTGAGCATTAACGAACTGAGCAACCTGGCGAAAGGCGAAAAAGCGAACGTGCTGATTGGCCAGGGCGATGTGGTGCTGGTGATGAAACGCAAACGCGATAGCAGCATTCTGACCGATAGCCAGACCGCGACCAAACGCATTCGCATGGCGATTAAC
SEQIDNO:42(HA,BX-35)
MKAIIVLLMVVTSNADRICTGITSSNSPHVVKTATQGEVNVTGVIPLTTTPTKSHFANLKGTETRGKLCPKCLNCTDLDVALGRPKCTGKIPSARVSILHEVRPVTSGCFPIMHDRTKIRQLPNLLRGYEHIRLSTHNVINAENAPGGPYKIGTSGSCPNITNGNGFFATMAWAVPKNDKNKTATNPLTIEVPYICTEGEDQITVWGFHSDDETQMAKLYGDSKPQKFTSSANGVTTHYVSQIGGFPNQTEDGGLPQSGRIVVDYMVQKSGKTGTITYQRGILLPQKVWCASGRSKVIKGSLPLIGEADCLHEKYGGLNKSKPYYTGEHAKAIGNCPIWVKTPLKLANGTKYRPPAKLLKERGFFGAIAGFLEGGWEGMIAGWHGYTSHGAHGVAVAADLKSTQEAINKITKNLNSLSELEVKNLQRLSGAMDELHNEILELDEKVDDLRADTISSQIELAVLLSNEGIINSEDEHLLALERKLKKMLGPSAVEIGNGCFETKHKCNQTCLDRIAAGTFDAGEFSLPTFDSLNITAASLNDDGLDNHTILLYYSTAASSLAVTLMIAIFVVYMVSRDNVSCSICL
SEQIDNO:43(NP,B/Lee/40)
AGCATTTTCTTGTGAGCTTCGAGCACTAATAAAACTGAAAATCAAAATGTCCAACATGGATATTGACAGTATAAATACCGGAACAATCGATAAAAAACCAGAAGAACTGACTCCCGGAACCAGTGGGGCAACCAGACCAATCATCAAGCCAGCAACCCTTGCTCCGCCAAGCAACAAACGAACCCGAAATCCATCCCCAGAAAGGACAACCACAAGCAGTGAAACCGATATCGGAAGGAAAATCCAAAAGAAACAAACCCCAACAGAGATAAAGAAGAGCGTCTACAACATGGTGGTAAAGCTGGGTGAATTCTACAACCAGATGATGGTCAAAGCTGGACTTAATGATGACATGGAAAGGAATCTAATCCAAAATGCACAAGCTGTGGAGAGAATCCTATTGGCTGCAACTGATGACAAGAAAACTGAATACCAAAAGAAAAGGAATGCCAGAGATGTCAAAGAAGGGAAGGAAGAAATAGACCACAACAAGACAGGAGGCACCTTTTATAAGATGGTAAGAGATGATAAAACCATCTACTTCAGCCCTATAAAAATTACCTTTTTAAAAGAAGAGGTGAAAACAATGTACAAGACCACCATGGGGAGTGATGGTTTCAGTGGACTAAATCACATTATGATTGGACATTCACAGATGAACGATGTCTGTTTCCAAAGATCAAAGGCACTGAAAAGGGTTGGACTTGACCCTTCATTAATCAGTACTTTTGCCGGAAGCACACTACCCAGAAGATCAGGTACAACTGGTGTTGCAATCAAAGGAGGTGGAACTTTAGTGGCAGAAGCCATTCGATTTATAGGAAGAGCAATGGCAGACAGAGGGCTACTGAGAGACATCAAGGCCAAGACAGCCTATGAAAAGATTCTTCTGAATCTGAAAAACAAGTGCTCTGCGCCCCAACAAAAGGCTCTAGTTGATCAAGTGATCGGAAGTAGGAACCCAGGGATTGCAGACATAGAAGACCTAACTCTGCTTGCCAGAAGCATGATAGTTGTCAGACCCTCTGTAGCGAGCAAAGTGGTGCTTCCCATAAGCATTTATGCTAAAATACCTCAACTAGGATTCAATATCGAAGAATACTCTATGGTTGGGTATGAAGCCATGGCTCTTTATAATATGGCAACACCTGTTTCCATATTAAGAATGGGAGATGACGCAAAAGATAAATCTCAACTATTCTTCATGTCGTGCTTCGGAGCTGCCTATGAAGATCTAAGAGTGTTATCTGCACTAACGGGCACCGAATTTAAGCCTAGATCAGCACTAAAATGCAAGGGTTTCCATGTCCCGGCTAAGGAGCAAGTAGAAGGAATGGGGGCAGCTCTGATGTCCATCAAGCTTCAGTTCTGGGCCCCAATGACCAGATCTGGAGGGAATGAAGTAAGTGGAGAAGGAGGGTCTGGTCAAATAAGTTGCAGCCCTGTGTTTGCAGTAGAAAGACCTATTGCTCTAAGCAAGCAAGCTGTAAGAAGAATGCTGTCAATGAACGTTGAAGGACGTGATGCAGATGTCAAAGGAAATCTACTCAAAATGATGAATGATTCGATGGCAAAGAAAACCAGTGGAAATGCTTTCATTGGGAAGAAAATGTTTCAAATATCAGACAAAAACAAAGTCAATCCCATTGAGATTCCAATTAAGCAGACCATCCCCAGTTTCTTCTTTGGGAGGGACACAGCAGAGGATTATGATGACCTCGATTATTAAAGCAATAAAATAGACACTATGGCTGTGACTGTTTCAGTACGTTTGGGATGTGGGTGTTTACTCTTATTGAAATAAATGTAAAA
SEQIDNO:44(NP,B/AnnArbor/1/66)
MSNMDIDGINTGTIDKTPEEITSGTSGATRPIIKPATLAPPSNKRTRNPSPERATTSSEAIVGRRTQKKQTPTEIKKSVYNMVVKLGEFYNQMMVKAGLNDDMERNLIQNAHAVERILLAATDDKKTEYQKKKNARDVKEGKEEIDHNKTGGTFYKMVRDDKTIYFSPIRITFLKEEVKTMYKTTMGSDGFSGLNHIMIGHSQMNDVCFQRSKALKRVGLDPSLISTFAGSTLPRRSGATGVAIKGGGTLVAEAIRFIGRAMADRGLLRDIRAKTAYEKILLNLKNKCSAPQQKALVDQVIGSRNPGIADIEDLTLLARSMVVVRPSVASKVVLPISINAKIPQLGFNVEEYSMVGYEAMALYNMATPVSILRMGDDAKDKSQLFFMSCFGAAYEDQRVLSALTGTEFKPRSALKCKGFHVPAKEQVEGMGAALMSIKLQFWAPMTRSGGNEVGGDGGSGQISCSPVFAVERPIALSKQAVRRMLSMNIEGRDADVKGNLLKMMNDSMAKKTNGNAFIGKKMFQISDKNKINPVDIPIKQTIPNFFFGRDTAEDYDDLDY
SEQIDNO:45(NP,B/AnnArbor/1/66)
MSNMDIDGINTGTIDKTPEEITSGTSGATRPIIKPATLAPPSNKRTRNPSPERAATSSEADVGRRTQKKQTPTEIKKSVYNMVVKLGEFYNQMMVKAGLNDDMERNLIQNAHAAERILLAATDDKKTEFQKKKNARDVKEGKEEIDHNKTGGTFYKMVRDDKTIYFSPIRITFLKEEVKTMYKTTMGSDGFSGLNHIMIGHSQMNDVCFQRSKALKRVGLDPSLISTFAGSTLPRRSGATGVAIKGGGTLVAEAIRFIGRAMADRGLLRDIRAKTAYEKILLNLKNKCSAPQQKALVDQVIGSRNPGIADIEDLTLLARSMVVVRPSVASKVVLPISINAKIPQLGFNVEEYSMVGYEAMALYNMATPVSILRMGDDAKDKSQLFFMSCFGAAYEDQRVLSALTGTEFKHRSALKCKGFHVPAKEQVEGMGAALMSIKLQFWAPMTRSGGNEVGGDGGSGQISCSPVFAVERPIALSKQAVRRMLSMNIEGRDADVKGNLLKMMNDSMTKKTNGNAFIGKKMFQISDKNKTNPIEIPIKQTIPNFFFGRDTAEDYDDLDY

Claims (42)

1.一种制备重配乙型流感病毒的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)将一种或多种编码生产乙型流感病毒所需的病毒区段的表达构建体导入培养宿主，所述表达构建体编码来自第一乙型流感病毒的HA区段和来自第二乙型流感病毒的NP和/或PB2区段，所述第二乙型流感病毒是B/Victoria/2/87样毒株；以及
(ii)培养所述培养宿主以生产重配乙型流感病毒。
2.一种制备重配乙型流感病毒的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)将一种或多种编码生产乙型流感病毒所需的病毒区段的表达构建体导入培养宿主，所述表达构建体编码来自第一乙型流感病毒的HA区段和来自第二乙型流感病毒的NP区段，所述第二乙型流感病毒不是B/Lee/40或B/AnnArbor/1/66或B/Panama/45/90；以及
(ii)培养所述培养宿主以生产重配乙型流感病毒。
3.如权利要求2所述的方法，所述NP和PB2区段来自所述第二乙型流感病毒。
4.如权利要求2或3所述的方法，所述第二乙型流感病毒是B/Victoria/2/87样毒株。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，所述PA、PB1、PB2、NP、NS和M区段来自所述第二乙型流感病毒。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，所述重配乙型流感病毒包含来自两种或多种乙型流感毒株的主链区段。
7.如权利要求6所述的方法，其中，至少一种主链区段来自B/Yamagata/16/88样毒株。
8.一种制备重配乙型流感病毒的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)将一种或多种编码生产乙型流感病毒所需的病毒区段的表达构建体导入培养宿主，所述乙型流感病毒包含来自B/Yamagata/16/88样毒株的HA区段和至少一个来自B/Victoria/2/87样毒株的主链区段；以及
(ii)培养所述培养宿主以生产重配乙型流感病毒。
9.如权利要求8所述的方法，其中，两个、三个、四个、五个或六个主链区段来自B/Victoria/2/87样毒株。
10.如权利要求8所述的方法，其中，来自所述B/Victoria/2/87样毒株和所述B/Yamagata/16/88样毒株的区段的比例是7:1、6:2、4:4、3:5或1:7。
11.一种制备重配乙型流感病毒的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)将一种或多种编码生产乙型流感病毒所需的病毒区段的表达构建体导入培养宿主，所述乙型流感病毒包含来自B/Victoria/2/87样毒株和B/Yamagata/16/88样毒株的病毒区段，来自所述B/Victoria/2/87样毒株和所述B/Yamagata/16/88样毒株的区段的比例是1:7、2:6、3:5、4:4、5:3、6:2或7:1；以及
(ii)培养所述培养宿主以生产重配乙型流感病毒。
12.如权利要求10或11所述的方法，所述比例是7:1、6:2、4:4、3:5或1:7。
13.如权利要求1或4-12中任一项所述的方法，所述B/Victoria/2/87样毒株是B/Brisbane/60/08。
14.如权利要求7-13中任一项所述的方法，所述B/Yamagata/16/88样毒株是B/Panama/45/90。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述NP区段编码的蛋白质与SEQIDNO:4的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。
16.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述PB2区段编码的蛋白质与SEQIDNO:3的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述NS区段编码的蛋白质与SEQIDNO:35的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同和/或所述M1区段编码的蛋白质与SEQIDNO:34的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述重配乙型流感病毒包含：
a)与SEQIDNO:1的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的PA蛋白；和/或
b)与SEQIDNO:2的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的PB1蛋白；和/或
c)与SEQIDNO:5的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的M1蛋白；和/或
d)与SEQIDNO:6的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的M2蛋白；和/或
e)与SEQIDNO:7的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的NS1蛋白；和/或
f)与SEQIDNO:8的序列至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的NS2蛋白。
19.一种制备重配乙型流感病毒的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)将一种或多种编码生产乙型流感病毒所需的病毒区段的表达构建体导入培养宿主，所述乙型流感病毒包含:
a)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:16的NS区段和SEQIDNO:15的M区段；或
b)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；或
c)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:32的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:16的NS区段和SEQIDNO:15的M区段；或
d)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:16的NS区段和SEQIDNO:15的M区段，或
e)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；
f)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:33的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段，或
g)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:32的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段，或
h)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:33的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段，或
i)SEQIDNO:11的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:32的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段，或
j)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:12的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段，或
k)SEQIDNO:30的PA区段、SEQIDNO:31的PB1区段、SEQIDNO:13的PB2区段、SEQIDNO:14的NP区段、SEQIDNO:35的NS区段和SEQIDNO:34的M区段；以及
(ii)培养所述培养宿主以生产重配乙型流感病毒。
20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，所述方法还包括纯化步骤(ii)中所得重配病毒的步骤(iii)。
21.可通过权利要求1-20中任一项所述方法获得重配乙型流感病毒。
22.如权利要求1-20中任一项所述的方法，所述培养宿主是含胚鸡蛋。
23.如权利要求1-20中任一项所述的方法，所述培养宿主是细胞。
24.如权利要求23所述的方法，所述细胞是MDCK、Vero或PerC6细胞。
25.如权利要求23或24所述的方法，所述细胞贴壁生长。
26.如权利要求23或24所述的方法，所述细胞悬浮生长。
27.如权利要求26所述的方法，所述MDCK细胞为细胞系MDCK33016(DSMACC2219)。
28.一种制备疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(a)通过权利要求1-27中任一项所述的方法制备病毒以及(b)从所述病毒制备疫苗。
29.一种制备疫苗的方法，包括从权利要求21所述的病毒制备疫苗的步骤。
30.如权利要求28或29所述的方法，其中，步骤(b)涉及灭活所述病毒。
31.如权利要求28-30中任一项所述的方法，所述疫苗是全病毒颗粒疫苗。
32.如权利要求28-30中任一项所述的方法，所述疫苗是裂解病毒颗粒疫苗。
33.如权利要求28-30中任一项所述的方法，所述疫苗是表面抗原疫苗。
34.如权利要求28-30中任一项所述的方法，所述疫苗是病毒体疫苗。
35.如权利要求28-34中任一项所述的方法，所述疫苗含有每剂量少于10ng的残留宿主细胞DNA。
36.如权利要求28-35中任一项所述的方法，所述疫苗包含来自甲型流感毒株的抗原。
37.如权利要求36所述的方法，所述甲型流感毒株是H1、H2、H5、H7或H9亚型。
38.可通过权利要求28-37中任一项所述方法获得的疫苗。
39.一种包含一种或多种表达构建体的表达系统，所述表达构建体包含权利要求21所述乙型流感病毒的vRNA编码区段。
40.一种包含权利要求39所述表达系统的宿主细胞。
41.如权利要求40所述的宿主细胞，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
42.如权利要求41所述的宿主细胞，所述宿主细胞是MDCK、Vero或PerC6细胞。
CN201480027225.4A 2013-03-13 2014-03-13 乙型流感病毒重配 Active CN105338999B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010070674.4A CN111334530A (zh) 2013-03-13 2014-03-13 乙型流感病毒重配

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361779888P 2013-03-13 2013-03-13
US61/779,888 2013-03-13
PCT/IB2014/059729 WO2014141125A2 (en) 2013-03-13 2014-03-13 Influenza virus reassortment

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010070674.4A Division CN111334530A (zh) 2013-03-13 2014-03-13 乙型流感病毒重配

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105338999A true CN105338999A (zh) 2016-02-17
CN105338999B CN105338999B (zh) 2020-02-28

Family

ID=50440715

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010070674.4A Pending CN111334530A (zh) 2013-03-13 2014-03-13 乙型流感病毒重配
CN201480027225.4A Active CN105338999B (zh) 2013-03-13 2014-03-13 乙型流感病毒重配

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010070674.4A Pending CN111334530A (zh) 2013-03-13 2014-03-13 乙型流感病毒重配

Country Status (13)

Country Link
US (2) US10232031B2 (zh)
EP (1) EP2968512A2 (zh)
JP (1) JP6525469B2 (zh)
KR (1) KR20150130344A (zh)
CN (2) CN111334530A (zh)
AU (2) AU2014229255B2 (zh)
BR (1) BR112015021880A2 (zh)
CA (1) CA2905612A1 (zh)
HK (1) HK1218511A1 (zh)
IL (1) IL240936B (zh)
MX (1) MX2015011529A (zh)
SG (1) SG11201507454XA (zh)
WO (1) WO2014141125A2 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019100687A1 (zh) * 2017-11-21 2019-05-31 宋家升 区分免疫和感染动物h7亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用
CN116063409A (zh) * 2022-09-09 2023-05-05 中山大学·深圳 一种乙型流感Mosaic重组蛋白、重组质粒及其构建方法和应用

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102939103A (zh) 2010-03-30 2013-02-20 西奈山医学院 流感病毒疫苗及其应用
CA2849434A1 (en) 2011-09-20 2013-03-28 Mount Sinai School Of Medicine Influenza virus vaccines and uses thereof
US9968670B2 (en) 2012-12-18 2018-05-15 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Influenza virus vaccines and uses thereof
US9908930B2 (en) 2013-03-14 2018-03-06 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Antibodies against influenza virus hemagglutinin and uses thereof
EP3247389A4 (en) 2015-01-23 2019-10-30 Icahn School of Medicine at Mount Sinai INFLUENZAVIRUSSCHUTZIMPFPLÄNE
US11013795B2 (en) 2015-06-26 2021-05-25 Seqirus UK Limited Antigenically matched influenza vaccines
JP6830070B2 (ja) 2015-07-07 2021-02-17 セキラス ユーケー リミテッドＳｅｑｉｒｕｓ ＵＫ Ｌｉｍｉｔｅｄ インフルエンザ効力アッセイ
CN109641041A (zh) 2016-06-15 2019-04-16 西奈山伊坎医学院 流感病毒血细胞凝集素蛋白及其用途
US11254733B2 (en) 2017-04-07 2022-02-22 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Anti-influenza B virus neuraminidase antibodies and uses thereof
US11642407B2 (en) 2020-02-28 2023-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Identification of variable influenza residues and uses thereof
CN114262694B (zh) * 2021-12-06 2023-11-03 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 以B型流感病毒为载体的SARS-CoV-2疫苗候选株及其构建方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1266860A (zh) * 1999-01-26 2000-09-20 辛科研究有限公司 聚酯树脂的透明物件
CN102257135A (zh) * 2008-12-16 2011-11-23 巴克斯特国际公司 流感疫苗的生产

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU212924B (en) 1989-05-25 1996-12-30 Chiron Corp Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
AU5543294A (en) 1993-10-29 1995-05-22 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
DE19612967A1 (de) 1996-04-01 1997-10-02 Behringwerke Ag Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren in Zellkultur, sowie die durch das Verfahren erhältlichen Influenzaviren
DE19612966B4 (de) 1996-04-01 2009-12-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren
TW570803B (en) 1997-04-09 2004-01-11 Duphar Int Res Influenza vaccine
US6080725A (en) 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
DK1098961T3 (da) 1998-06-12 2008-05-26 Andrej Y Dr Egorov Gensplejsede svækkede vira, der inducerer interferon
ES2293923T3 (es) 1999-09-24 2008-04-01 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vacuna intranasal contra el virus influenza.
CA2401117C (en) 2000-03-03 2010-06-29 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Cell usable in serum-free culture and suspension culture and process for producing virus for vaccine by using the cell
AU2002221624A1 (en) 2000-09-25 2002-04-02 Bayer Aktiengesellschaft Human e3 ubiquitin protein ligase-like enzyme
ES2327103T3 (es) * 2000-09-25 2009-10-26 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung Gmbh Vacuna viva de influenzavirus y procedimiento de fabricacion.
GB0024089D0 (en) 2000-10-02 2000-11-15 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
US20040096463A1 (en) 2001-02-23 2004-05-20 Nathalie Garcon Novel vaccine
AU2002254901A1 (en) 2001-02-23 2002-10-03 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Influenza vaccine formulations for intradermal delivery
TWI228420B (en) 2001-05-30 2005-03-01 Smithkline Beecham Pharma Gmbh Novel vaccine composition
KR20110132416A (ko) 2004-04-05 2011-12-07 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 미세유체화된 수중유 유화액 및 백신 조성물
WO2005113756A1 (en) 2004-05-14 2005-12-01 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Method
RU2006145303A (ru) 2004-05-20 2008-06-27 АйДи БАЙОМЕДИКАЛ КОРПОРЕЙШН (CA) Способ получения противогриппозной вакцины
DK1748790T3 (en) * 2004-05-24 2015-10-19 Medimmune Llc Multiplasmidsystem for the production of influenza
AU2005322353B2 (en) 2004-12-23 2011-09-01 Medimmune, Llc Non-tumorigenic MDCK cell line for propagating viruses
CA2600730C (en) * 2005-03-08 2014-11-25 Medimmune, Inc. Influenza hemagglutinin and neuraminidase variants
FR2884255B1 (fr) 2005-04-11 2010-11-05 Vivalis Utilisation de lignees de cellules souches aviaires ebx pour la production de vaccin contre la grippe
US7691368B2 (en) 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
BRPI0612268A2 (pt) 2005-06-21 2009-01-27 Medimmune Vaccines Inc Ácido nucleico isolado, vetor de expressço, mÉtodos para produzir um rna genâmico da influenza, para produzir um vÍrus da influenza recombinante, para gerar um vÍrus de rna segmentado de filamento negativo recombinante nas cÉlulas caninas cultivadas e para gerar partÍculas virais da influenza infecciosa em cÉlulas caninas cultivadas, cÉlula, e, vÍrus
US8703095B2 (en) 2005-07-07 2014-04-22 Sanofi Pasteur S.A. Immuno-adjuvant emulsion
CN101365480B (zh) 2005-11-01 2014-11-05 诺华疫苗和诊断有限两合公司 经由β-丙内酯处理的残留细胞DNA水平降低的细胞衍生病毒疫苗
US20110180430A1 (en) * 2005-11-04 2011-07-28 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Adjuvanted influenza vaccines including cytokine-inducing agents
JP2009514844A (ja) 2005-11-04 2009-04-09 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル スプリットインフルエンザワクチン用のアジュバントとしての遊離水相界面活性剤を含むエマルション
FR2896162B1 (fr) 2006-01-13 2008-02-15 Sanofi Pasteur Sa Emulsion huile dans eau thermoreversible
CN1810961B (zh) * 2006-02-22 2010-05-12 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 一种重组流感病毒及其制备方法与应用
WO2007126810A2 (en) * 2006-03-31 2007-11-08 Warf - Wisconsin Alumni Research Foundation High titer recombinant influenza viruses for vaccines
RU2457250C2 (ru) 2006-04-19 2012-07-27 Медиммуне, Ллк Способы и композиции для экспрессии антисмысловой вирусной рнк в клетках собаки
US20100183667A1 (en) 2006-10-12 2010-07-22 Glaxo Smithkline Biologicals S.A. Vaccine Comprising an Oil in Water Emulsion Adjuvant
CA2671629C (en) 2006-12-06 2017-08-15 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus
EP2045323A1 (en) 2007-10-05 2009-04-08 Avir Green Hills Biotechnology Research Development Trade Ag Linear expression constructs for production of influenza virus particles
RU2523587C2 (ru) 2008-07-11 2014-07-20 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Варианты гемагглютинина и нейрамидазы вируса гриппа
US9072702B2 (en) 2009-05-21 2015-07-07 Novartis Ag Reverse genetics using non-endogenous pol I promoters
US9821052B2 (en) 2009-07-31 2017-11-21 Seqirus UK Limited Reverse genetics systems
US8883481B2 (en) 2009-10-20 2014-11-11 Novartis Ag Reverse genetics methods for virus rescue
WO2011145081A1 (en) 2010-05-21 2011-11-24 Novartis Ag Influenza virus reassortment method

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1266860A (zh) * 1999-01-26 2000-09-20 辛科研究有限公司 聚酯树脂的透明物件
CN102257135A (zh) * 2008-12-16 2011-11-23 巴克斯特国际公司 流感疫苗的生产

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YASUAKI HIROMOTO ET AL.: "Phylogenetic analysis of the three polymerase genes (PB1, PB2 and PA) of influenza B virus", 《JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019100687A1 (zh) * 2017-11-21 2019-05-31 宋家升 区分免疫和感染动物h7亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用
US11510976B2 (en) 2017-11-21 2022-11-29 Zhejiang Difference Biological Technology Co., Ltd H7 avian influenza vaccine strain which differentiates infected from vaccinated animals, preparation method therefor, and application
CN116063409A (zh) * 2022-09-09 2023-05-05 中山大学·深圳 一种乙型流感Mosaic重组蛋白、重组质粒及其构建方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20160038585A1 (en) 2016-02-11
IL240936B (en) 2019-11-28
WO2014141125A2 (en) 2014-09-18
JP6525469B2 (ja) 2019-06-05
MX2015011529A (es) 2016-02-05
AU2014229255A1 (en) 2015-09-24
US20200215184A1 (en) 2020-07-09
US10232031B2 (en) 2019-03-19
CN111334530A (zh) 2020-06-26
BR112015021880A2 (pt) 2017-09-26
AU2014229255B2 (en) 2018-12-13
EP2968512A2 (en) 2016-01-20
AU2019201704A1 (en) 2019-04-04
CA2905612A1 (en) 2014-09-18
IL240936A0 (en) 2015-11-30
US10864264B2 (en) 2020-12-15
CN105338999B (zh) 2020-02-28
HK1218511A1 (zh) 2017-02-24
KR20150130344A (ko) 2015-11-23
WO2014141125A3 (en) 2014-12-04
SG11201507454XA (en) 2015-10-29
JP2016509864A (ja) 2016-04-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105338999A (zh) 乙型流感病毒重配
CN103608453B (zh) 流感病毒重配
CN105722976A (zh) 流感病毒重配
CN103025350A (zh) 流感病毒的重配方法
CN105120893A (zh) 流感病毒重配
CN102597246B (zh) 使用非内源pol I启动子的反向遗传
CN102548577A (zh) 用于抵抗流感的佐剂疫苗
CN105142667A (zh) 流感病毒重配
AU2014203051B2 (en) Influenza Virus Reassortment
EP4061930A1 (en) Method for producing reassortant influenza viruses

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant