CN105326893A - 一种抗癌组合物及其制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗肿瘤药物研究领域，特别涉及一种抗癌组合物及其制剂。该组合物包括DC-CIK细胞和康艾注射液。本发明将DC-CIK细胞与康艾注射液联合使用时，在药物用量减少的情况下效果更好，可有效治疗癌症，增强机体免疫功能，同时大大减少了用药量，节省了治疗成本。

Description

一种抗癌组合物及其制剂
技术领域
本发明涉及抗肿瘤药物研究领域，特别涉及一种抗癌组合物及其制剂。
背景技术
肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致异常增生与分化而形成的新生物。新生物一旦形成，不因病因消除而停止生长，他的生长不受正常机体生理调节，而是破坏正常组织与器官，这一点在恶性肿瘤尤其明显。与良性肿瘤相比，恶性肿瘤生长速度快，呈浸润性生长，易发生出血、坏死、溃疡等，并常有远处转移，造成人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等，最终造成患者死亡。
恶性肿瘤是严重威胁人们生命健康的第一病害，在继切除手术、放疗、化疗之后，肿瘤免疫细胞治疗是临床用于肿瘤治疗的第四大疗法，它是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，来激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。
细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillers，CIK)是一类抗肿瘤抗病毒效应细胞，能在体外被诱导并大量增殖。树突状细胞(dendriticcell，DC)是有效的专职抗原提呈细胞，成熟的DC可以通过Ⅱ型组织相容性抗原(MHC-Ⅱ)等途径提呈肿瘤抗原，有效抵制肿瘤细胞的免疫逃逸机制。CIK细胞和DC细胞是细胞免疫治疗的两个重要组成部分，两者联合可确保高效的免疫反应。
随着细胞制备技术的日趋完善，DC-CIK细胞过继免疫治疗在临床逐渐开展，相关报道可见。实验研究方面，Marten实验研究表明：DC和CIK功培养可以同时促进CIK细胞和DC细胞的增殖和免疫功能。张嵩等的动物实验研究表明：化疗后应用DC-CIK细胞可有效抑制肿瘤细胞生长，甚至使肿瘤完全消失；而且DC-CIK细胞的抗肿瘤效应对集体免疫系统功能不产生危害，在当前对肿瘤特异性抗原了解相对较少的情况下，应用DC-CIK细胞作为肿瘤放化疗和手术后的辅助治疗有重要的临床意义。目前，DC-CIK疗法也常应用于临床治疗和科研，把扩增到一定数量的DC细胞和CIK细胞共培养，然后回输到患者体内，联合治疗肿瘤。
虽然目前DC-CIK治疗技术较为成熟，但DC-CIK细胞治疗效果仍需有待提高，对于治疗肿瘤效果更好的制剂或治疗方法仍有需求。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种抗癌组合物及其制剂。该组合物将DC-CIK细胞与康艾注射液联合使用时可起到显著的增效作用，可大大减少用药量，节省治疗成本。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种药物组合物，包括DC-CIK细胞和康艾注射液。
DC-CIK生物免疫疗法是在体外将单个核细胞诱导分化为树突状细胞(DC)，再用经抗原刺激的树突状细胞(DC)诱导CIK细胞产生特异性肿瘤杀伤作用的治疗技术，即将树突状细胞(DC)与CIK细胞进行共同培养而成的杀伤性细胞群体(DC-CIK)。
康艾注射液，由黄芪、人参、苦参素制成。益气扶正，增强机体免疫功能。用于原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤；各种原因引起的白细胞低下及减少症；慢性乙型肝炎的治疗。
本发明发现将DC-CIK细胞与康艾注射液联合使用时可起到显著的增效作用，可大大减少用药量，节省治疗成本。
作为优选，以cell/mL计，DC-CIK细胞与康艾注射液的用量比为(1～10)×108：(10～20)。
优选地，以cell/mL计，DC-CIK细胞与康艾注射液的用量比为4×108：(10～20)。
在本发明提供的一些实施例中，以cell/mL计，DC-CIK细胞与康艾注射液的用量比为4×108：10。
在本发明提供的另一些实施例中，以cell/mL计，DC-CIK细胞与康艾注射液的用量比为4×108：15。
在本发明提供的另一些实施例中，以cell/mL计，DC-CIK细胞与康艾注射液的用量比为4×108：20。
在本发明提供的一些实施例中，DC-CIK细胞的制备方法包括如下步骤：
步骤1：将PBMC进行细胞培养，获得贴壁细胞和悬浮细胞；
步骤2：取悬浮细胞，加入INF-γ培养1天后，加入IL-2、IL-1α和OKT-3继续培养6～10天，获得CIK细胞；
取贴壁细胞，加入GM-CSF、IL-4培养6天，加入肿瘤抗原和TNF-α继续培养1～5天，获得DC细胞；
步骤3：将DC细胞和CIK细胞混合共培养，获得DC-CIK细胞。
作为优选，INF-γ的终浓度为500～2000IU/mL，IL-2的终浓度为100～1000IU/mL，IL-1α的终浓度为100～1000IU/mL，OKT-3的终浓度为200～2000IU/mL，IL-4的终浓度为200～1000IU/mL，GM-CSF的终浓度为200～1000IU/mL，肿瘤抗原的用量为10～30μL/mL，TNF-α的终浓度为50～200ng/mL。
在本发明提供的一些实施例中，INF-γ的终浓度为500IU/mL，IL-2的终浓度为100IU/mL，IL-1α的终浓度为100IU/mL，OKT-3的终浓度为200IU/mL，IL-4的终浓度为200IU/mL，GM-CSF的终浓度为200IU/mL，肿瘤抗原的用量为10μL/mL，TNF-α的终浓度为50ng/mL。
在本发明提供的一些实施例中，INF-γ的终浓度为1000IU/mL，IL-2的终浓度为300IU/mL，IL-1α的终浓度为200IU/mL，OKT-3的终浓度为500IU/mL，IL-4的终浓度为500IU/mL，GM-CSF的终浓度为500IU/mL，肿瘤抗原的用量为20μL/mL，TNF-α的终浓度为100ng/mL。
在本发明提供的一些实施例中，INF-γ的终浓度为2000IU/mL，IL-2的终浓度为1000IU/mL，IL-1α的终浓度为1000IU/mL，OKT-3的终浓度为2000IU/mL，IL-4的终浓度为1000IU/mL，GM-CSF的终浓度为1000IU/mL，肿瘤抗原的用量为30μL/mL，TNF-α的终浓度为200ng/mL。
作为优选，共培养的时间为5～10天。
本发明还提供了该组合物在制备抗癌药物中的应用。
在本发明提供的一些实施例中，癌为肺癌、乳腺癌、胃肠癌、肝癌或子宫癌。
本发明还提供了一种DC-CIK细胞混合制剂，包括DC-CIK细胞、人血白蛋白、康艾注射液和氯化钠注射液。
作为优选，以cell/mL/mL/mL计，所述DC-CIK细胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射液与所述氯化钠注射液的用量比为(1～10)×108：(10～20)：(10～20)：(65～75)。
优选地，以cell/mL/mL/mL计，所述DC-CIK细胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射液与所述氯化钠注射液的用量比为4×108：15：(10～20)：(65～75)。
在本发明提供的一些实施例中，以cell/mL/mL/mL计，所述DC-CIK细胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射液与所述氯化钠注射液的用量比为4×108：15：10：75。
在本发明提供的另一些实施例中，以cell/mL/mL/mL计，所述DC-CIK细胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射液与所述氯化钠注射液的用量比为4×108：15：15：70。
在本发明提供的另一些实施例中，以cell/mL/mL/mL计，所述DC-CIK细胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射液与所述氯化钠注射液的用量比为4×108：15：20：65。
在本发明提供的一些实施例中，DC-CIK细胞的制备方法包括如下步骤：
步骤1：将PBMC进行细胞培养，获得贴壁细胞和悬浮细胞；
步骤2：取悬浮细胞，加入INF-γ培养1天后，加入IL-2、IL-1α和OKT-3继续培养6～10天，获得CIK细胞；
取贴壁细胞，加入GM-CSF、IL-4培养6天，加入肿瘤抗原和TNF-α继续培养1～5天，获得DC细胞；
步骤3：将DC细胞和CIK细胞混合共培养，获得DC-CIK细胞。
作为优选，INF-γ的终浓度为500～2000IU/mL，IL-2的终浓度为100～1000IU/mL，IL-1α的终浓度为100～1000IU/mL，OKT-3的终浓度为200～2000IU/mL，IL-4的终浓度为200～1000IU/mL，GM-CSF的终浓度为200～1000IU/mL，肿瘤抗原的用量为10～30μL/mL，TNF-α的终浓度为50～200ng/mL。
在本发明提供的一些实施例中，INF-γ的终浓度为1000IU/mL，IL-2的终浓度为300IU/mL，IL-1α的终浓度为200IU/mL，OKT-3的终浓度为500IU/mL，IL-4的终浓度为500IU/mL，GM-CSF的终浓度为500IU/mL，TNF-α的终浓度为100ng/mL。
作为优选，共培养的时间为5～10天。
在本发明提供的一些实施例中，人血白蛋白的浓度为200mg/mL。
本发明提供了一种抗癌组合物及其制剂。该组合物包括DC-CIK细胞和康艾注射液。本发明至少具有如下优势之一：
1、本发明将DC-CIK细胞与康艾注射液联合使用时，在药物用量减少的情况下效果更好，可有效治疗癌症，增强机体免疫功能，同时大大减少了用药量，节省了治疗成本；
2、本发明中DC-CIK细胞培养过程中添加的生长因子组合有利于CIK细胞的扩增；本发明培养方法可促进DC-CIK细胞CD3+CD56+的表达，培养得到的DC-CIK细胞对肿瘤细胞的毒性作用强；
3、本发明DC-CIK细胞混合制剂中加入人血白蛋白可有效防止细胞聚团，有利于细胞制剂的稳定性。
附图说明
图1示实施例1DC-CIK细胞的增殖曲线；
图2示实施例1CD3+CD56+流式检测结果；
图3示实施例1DC-CIK对A549的毒性效果；
图4示实施例2DC-CIK细胞的增殖曲线；
图5示实施例2CD3+CD56+流式检测结果；
图6示实施例2DC-CIK对A549的毒性效果；
图7示实施例3DC-CIK细胞的增殖曲线；
图8示实施例3CD3+CD56+流式检测结果；
图9示实施例3DC-CIK对A549的毒性效果。
具体实施方式
本发明公开了一种抗癌组合物及其制剂，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的抗癌组合物及其制剂中所用药物制剂、生物制品、试剂等均可由市场购得。康艾注射液购自长白山制药股份有限公司，人血白蛋白购自郑州莱士血液制品有限公司，规格为10g/50mL，蛋白质浓度为20％。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1DC-CIK细胞混合制剂的制备
1、PBMC的分离：
采集人外周血60mL，将血液转移至离心管中，2000rpm/min离心10min，离心结束后将上层血浆收集于另一离心管中，进一步将血浆高速离心后过滤，标记后置于4℃冰箱中备用。
剩余血细胞加入两倍体积的生理盐水，并吹打混匀。往新的离心管中加入淋巴细胞分离液(血液稀释液：淋巴分离液＝2:1)，用移液管将血液稀释液缓慢加至淋巴细胞分离液的表面，700g离心20min，升降速调为0。
离心结束后，离心管从下到上分为4层，分别为血细胞层和粒细胞层、淋巴分离液层、PBMC层、血浆层。用巴氏吸管将PBMC层吸出至新的离心管中，加入1640培养基至终体积40mL，轻轻吹打混匀后，500g离心5min。
离心结束后弃上清，加入1640培养基至终体积40mL，重悬细胞后，抽取20μL细胞悬液于EP管中，用细胞计数仪进行计数，其余细胞悬液400g离心5min。
去上清，根据计数结果，取6×107cells，用X-VIVO15培养基将细胞密度调整为1×106/mL，分别接种到3个细胞培养瓶中。
2、DC细胞和CIK细胞分离、诱导、增殖：
待细胞贴壁3h后，将悬浮细胞转移到另外的细胞培养瓶中，并标记培养CIK细胞，加入1％培养基体积的INF-γ，浓度为1000IU/mL，次日加入1％培养基体积的IL-2、IL-1α和OKT-3，其中IL-2浓度为300IU/mL，IL-1α浓度为200IU/mL，OKT-3浓度为500IU/mL。定期观察细胞生长情况，每隔2～3天进行补充培养基和IL-2，补液后细胞密度维持在5～10×105/mL。
添加X-VIVO15培养基和1％培养基体积的IL-4和GM-CSF到原来含有贴壁细胞的培养瓶中，诱导培养DC细胞，其中IL-4浓度为500IU/mL，GM-CSF浓度为500IU/mL。定期观察细胞生长情况，第三天或第四天根据细胞密度补加培养基和细胞因子。第7天，往DC细胞中相应的肿瘤抗原(肿瘤抗原为肺癌肿瘤抗原，加入20μL/mL)和TNF-α，浓度为100ng/mL，促进DC细胞的成熟。
第8天，将DC细胞铲下收集后与CIK细胞混合共培养。培养14天后，抽取培养的DC-CIK细胞进行流式检测和杀伤活性检测。
肺癌肿瘤抗原制备方法：
1)取手术切除的无菌肿瘤组织，用75％酒精漂洗两次；
2)用无菌PBS清洗3次；
3)用灭菌的组织剪剪碎，加入5mlRPMI培养基研磨，经200目滤网过滤后收集单细胞悬液；
4)用RPMI培养基重悬细胞，按每管1x107分装至EP管中，60℃水浴加热1小时；
5)将EP管迅速放入-40℃冰箱中，10分钟后取出，放入室温融化，反复冻融5次；
6)反复吹打肿瘤细胞以及肿瘤细胞裂解物，1000rpm/min离心10min，收集上清液，即为肿瘤抗原。
杀伤活性检测方法为：
取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比分别为40:1、20:1和10:1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40或2.5％Triton各100μL；上述各项均设三个复孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应3min，每孔加入1mol/L的HCl30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。
按下式计算DC-CIK细胞活性。
DC-CIK细胞杀伤活性(％)＝(反应孔OD－自然释放孔OD)/(最大释放孔OD－自然释放孔OD)×100％
DC-CIK细胞的增殖曲线见图1，流式检测结果见图2，DC-CIK毒性效果见图3。
由以上结果可以看出，本发明DC-CIK细胞增长较快，培养两周可以扩增100倍左右，而且有效抑制肿瘤因子(CD3+CD56+)表达水平较高，达到47.3％，细胞毒性作用较强，治疗肿瘤效果好。
3、DC-CIK细胞混合制剂的制备：
把上述制得的DC-CIK细胞悬液收集于离心管中，1000rpm/min离心5min，弃上清后加入40ml生理盐水重悬细胞，1000rpm/min离心5min，清洗3次。用15mL人血白蛋白、10mL康艾注射液以及75mL氯化钠注射液重悬细胞，细胞数量为4×108cell，收集于100mL输液袋中。
实施例2DC-CIK细胞混合制剂的制备
1、PBMC的分离：
采集人外周血60mL，将血液转移至离心管中，2000rpm/min离心10min，离心结束后将上层血浆收集于另一离心管中，进一步将血浆高速离心后过滤，标记后置于4℃冰箱中备用。
剩余血细胞加入两倍体积的生理盐水，并吹打混匀。往新的离心管中加入淋巴细胞分离液(血液稀释液：淋巴分离液＝2:1)，用移液管将血液稀释液缓慢加至淋巴细胞分离液的表面，700g离心20min，升降速调为0。
离心结束后，离心管从下到上分为4层，分别为血细胞层和粒细胞层、淋巴分离液层、PBMC层、血浆层。用巴氏吸管将PBMC层吸出至新的离心管中，加入1640培养基至终体积40mL，轻轻吹打混匀后，500g离心5min。
离心结束后弃上清，加入1640培养基至终体积40mL，重悬细胞后，抽取20μL细胞悬液于EP管中，用细胞计数仪进行计数，其余细胞悬液400g离心5min。
去上清，根据计数结果，取6×107cells，用X-VIVO15培养基将细胞密度调整为1×106/mL，分别接种到3个细胞培养瓶中。
2、DC细胞和CIK细胞分离、诱导、增殖：
待细胞贴壁3h后，将悬浮细胞转移到另外的细胞培养瓶中，并标记培养CIK细胞，加入1％培养基体积的INF-γ，浓度为500IU/mL，次日加入1％培养基体积的IL-2、IL-1α和OKT-3，其中IL-2浓度为100IU/mL，IL-1α浓度为100IU/mL，OKT-3浓度为200IU/mL。定期观察细胞生长情况，每隔2～3天进行补充培养基和IL-2，补液后细胞密度维持在5～10×105/mL。
添加X-VIVO15培养基和1％培养基体积的IL-4和GM-CSF到原来含有贴壁细胞的培养瓶中，诱导培养DC细胞，其中IL-4浓度为200IU/mL，GM-CSF浓度为200IU/mL。定期观察细胞生长情况，第三天或第四天根据细胞密度补加培养基和细胞因子。第7天，往DC细胞中相应的肿瘤抗原(肿瘤抗原为肺癌肿瘤抗原，加入10μL/mL)和TNF-α，浓度为50ng/mL，促进DC细胞的成熟。
第8天，将DC细胞铲下收集后与CIK细胞混合共培养。培养14天后，抽取培养的DC-CIK细胞进行流式检测和杀伤活性检测。
肺癌肿瘤抗原制备方法同实施例1制备方法。
杀伤活性检测方法同实施例1检测方法。
DC-CIK细胞的增殖曲线见图4，流式检测结果见图5，DC-CIK毒性效果见图6。
由以上结果可以看出，本发明DC-CIK细胞增长较快，培养两周可以扩增100倍左右，而且有效抑制肿瘤因子(CD3+CD56+)表达水平较高，达到40.8％，细胞毒性作用较强，治疗肿瘤效果好。
3、DC-CIK细胞混合制剂的制备：
把上述制得的DC-CIK细胞悬液收集于离心管中，1000rpm/min离心5min，弃上清后加入40ml生理盐水重悬细胞，1000rpm/min离心5min，清洗3次。用15mL人血白蛋白、15mL康艾注射液以及70mL氯化钠注射液重悬细胞，细胞数量为4×108cell，收集于100mL输液袋中。
实施例3DC-CIK细胞混合制剂的制备
1、PBMC的分离：
采集人外周血60mL，将血液转移至离心管中，2000rpm/min离心10min，离心结束后将上层血浆收集于另一离心管中，进一步将血浆高速离心后过滤，标记后置于4℃冰箱中备用。
剩余血细胞加入两倍体积的生理盐水，并吹打混匀。往新的离心管中加入淋巴细胞分离液(血液稀释液：淋巴分离液＝2:1)，用移液管将血液稀释液缓慢加至淋巴细胞分离液的表面，700g离心20min，升降速调为0。
离心结束后，离心管从下到上分为4层，分别为血细胞层和粒细胞层、淋巴分离液层、PBMC层、血浆层。用巴氏吸管将PBMC层吸出至新的离心管中，加入1640培养基至终体积40mL，轻轻吹打混匀后，500g离心5min。
离心结束后弃上清，加入1640培养基至终体积40mL，重悬细胞后，抽取20μL细胞悬液于EP管中，用细胞计数仪进行计数，其余细胞悬液400g离心5min。
去上清，根据计数结果，取6×107cells，用X-VIVO15培养基将细胞密度调整为1×106/mL，分别接种到3个细胞培养瓶中。
2、DC细胞和CIK细胞分离、诱导、增殖：
待细胞贴壁3h后，将悬浮细胞转移到另外的细胞培养瓶中，并标记培养CIK细胞，加入1％培养基体积的INF-γ，浓度为2000IU/mL，次日加入1％培养基体积的IL-2、IL-1α和OKT-3，其中IL-2浓度为1000IU/mL，IL-1α浓度为1000IU/mL，OKT-3浓度为2000IU/mL。定期观察细胞生长情况，每隔2～3天进行补充培养基和IL-2，补液后细胞密度维持在5～10×105/mL。
添加X-VIVO15培养基和1％培养基体积的IL-4和GM-CSF到原来含有贴壁细胞的培养瓶中，诱导培养DC细胞，其中IL-4浓度为1000IU/mL，GM-CSF浓度为1000IU/mL。定期观察细胞生长情况，第三天或第四天根据细胞密度补加培养基和细胞因子。第7天，往DC细胞中相应的肿瘤抗原(肿瘤抗原为肺癌肿瘤抗原，加入30μL/mL)和TNF-α，浓度为200ng/mL，促进DC细胞的成熟。
第8天，将DC细胞铲下收集后与CIK细胞混合共培养。培养14天后，抽取培养的DC-CIK细胞进行流式检测和杀伤活性检测。
肺癌肿瘤抗原制备方法同实施例1制备方法。
杀伤活性检测方法同实施例1检测方法。
DC-CIK细胞的增殖曲线见图7，流式检测结果见图8，DC-CIK毒性效果见图9。
由以上结果可以看出，本发明DC-CIK细胞增长较快，培养两周可以扩增100倍左右，而且有效抑制肿瘤因子(CD3+CD56+)表达水平较高，达到42.4％，细胞毒性作用较强，治疗肿瘤效果好。
3、DC-CIK细胞混合制剂的制备：
把上述制得的DC-CIK细胞悬液收集于离心管中，1000rpm/min离心5min，弃上清后加入40ml生理盐水重悬细胞，1000rpm/min离心5min，清洗3次。用15mL人血白蛋白、20mL康艾注射液以及65mL氯化钠注射液重悬细胞，细胞数量为4×108cell，收集于100mL输液袋中。
实施例4DC-CIK细胞混合制剂的效果测试
将实施例1～3制得的DC-CIK细胞混合制剂进行抑瘤效果试验，同时设置对比例1和对比例2，各实施例和对比例所用治疗肿瘤制剂的组成见下表：
表1实施例和对比例所用治疗肿瘤制剂的组成
组别 细胞量 人血白蛋白 康艾注射液 氯化钠注射液
实施例1 4×108 15ml 10ml 75ml
实施例2 4×108 15ml 15ml 70ml
实施例3 4×108 15ml 20ml 65ml
对比例1 6×108 15ml —— 85ml
对比例2 —— —— 70ml 30ml
各组对5位患有肺癌肿瘤患者进行治疗效果的测试，各组混合制剂连续3天静脉输注，每天输注量为100mL，两个月后通过CT结果观察肿瘤大小，计算抑瘤率来评价本发明混合制剂的治疗效果。抑瘤率的计算公式如下：
抑瘤率＝(C-T)/C×100％
其中，T为治疗两个月后肿瘤面积，C为治疗前肿瘤面积。
实施例1～3的抑瘤效果见表2～4，对比例1、2的抑瘤效果见表5、6。
表2实施例1混合制剂治疗效果
患者编号 治疗前肿瘤面积(cm2) 治疗两个月后肿瘤面积(cm2) 抑瘤率(％)
患者1 11.5 2.7 76.5％
患者2 7.8 1.8 76.9％
患者3 4.3 0 100％
患者4 5.6 0.5 73.2％
患者5 9.1 2.0 76.9％
表3实施例2混合制剂治疗效果
患者编号 治疗前肿瘤面积(cm2) 治疗两个月后肿瘤面积(cm2) 抑瘤率(％)
患者6 8.4 3.5 58.3％
患者7 12.2 6.3 48.3％
患者8 5.1 1.4 72.5％
患者9 9.5 2.8 70.5％
患者10 7.4 2.7 63.5
表4实施例3混合制剂治疗效果
患者编号 治疗前肿瘤面积(cm2) 治疗两个月后肿瘤面积(cm2) 抑瘤率(％)
患者11 2.3 1.1 52.2％
患者12 4.8 1.6 66.7％
患者13 6.6 2.4 63.6％
患者14 9.7 2.6 73.2％
患者15 11.2 4.5 59.8％
表5对比例1混合制剂治疗效果表
表6对比例2混合制剂治疗效果表
患者编号 治疗前肿瘤面积(cm2) 治疗两个月后肿瘤面积(cm2) 抑瘤率(％)
患者21 9.4 7.5 20.2％
患者22 10.6 8.8 17.0％
患者23 6.9 5.2 24.6％
患者24 4.8 3.6 25％
患者25 3.7 2.9 21.6％
由以上结果可以看出，本发明DC-CIK细胞混合制剂治疗肿瘤效果良好，抑瘤率在48.3％～100％之间；而相对于混合制剂中单组分用量大的多的情况下，使用DC-CIK细胞治疗的抑瘤率只有29.0％～39.0％，康艾注射液的抑瘤率只有17.0％～25.0％。可见，将DC-CIK细胞与康艾注射液联合使用时，在药物用量减少的情况下效果更好，可减少用药量，节省治疗成本。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于，包括DC-CIK细胞和康艾注射液。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，以cell/mL计，所述DC-CIK细胞与所述康艾注射液的用量比为(1～10)×108：(10～20)。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，以cell/mL计，所述DC-CIK细胞与所述康艾注射液的用量比为4×108：(10～20)。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述DC-CIK细胞的制备方法包括如下步骤：
步骤1：将PBMC进行细胞培养，获得贴壁细胞和悬浮细胞；
步骤2：取悬浮细胞，加入INF-γ培养1天后，加入IL-2、IL-1α和OKT-3继续培养6～10天，获得CIK细胞；
取贴壁细胞，加入GM-CSF、IL-4培养6天，加入肿瘤抗原和TNF-α继续培养1～5天，获得DC细胞；
步骤3：将DC细胞和CIK细胞混合共培养，获得DC-CIK细胞。
5.如权利要求1至4中任一项所述药物组合物在制备抗癌药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，癌为肺癌、乳腺癌、胃肠癌、肝癌或子宫癌。
7.一种DC-CIK细胞混合制剂，其特征在于，包括DC-CIK细胞、人血白蛋白、康艾注射液和氯化钠注射液。
8.根据权利要求7所述的DC-CIK细胞混合制剂，其特征在于，以cell/mL/mL/mL计，所述DC-CIK细胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射液与所述氯化钠注射液的用量比为(1～10)×108：(10～20)：(10～20)：(65～75)。
9.根据权利要求8所述的DC-CIK细胞混合制剂，其特征在于，以cell/mL/mL/mL计，所述DC-CIK细胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射液与所述氯化钠注射液的用量比为4×108：15：(10～20)：(65～75)。
10.根据权利要求7所述的DC-CIK细胞混合制剂，其特征在于，所述人血白蛋白的浓度为200mg/mL。
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